猪附红细胞体特异性PCR检测方法的建立

从猪血中分离附红细胞体,提取其基因组DNA,用EcoRI对基因组DNA进行酶切,将酶切片段进行琼脂糖电泳,得到一个1.8 kb的DNA片段,根据DNA序列分析与GenBank已知基因比较和PCR方法确定该片段具有特异性,以该片段为模板进行PCR,并将其扩增产物与其它猪的其他细菌DNA扩增产物相比较,建立一种检测猪外周血中附红细胞体的特异性PCR检测方法,并通过斑点杂交试验检测该产物特异性,通过临床应用检验该法的适用性。结果表明:扩增产物大小为782 bp,其序列与已知附红细胞体序列同源性为100%,斑点杂交试验证实该产物为附红细胞体特异性产物,将该方法应用于检测10头临床症状典型的感染猪和10头健康猪的血液,所有感染和隐性带菌猪的PCR检测结果为阳性,健康猪为阴性。猪外周血中附红细胞体的特异性PCR检测方法适用于检测无临床症状的隐性带菌动物。     

猪附红细胞体病诊治初探

根据临床经验,探讨了猪附红细胞体病诊治措施。     

猪附红细胞体病的防治

猪附红细胞体病是由附红细胞体寄生于猪红细胞和血浆中而引起的一种传染病,主要引起猪高热、贫血、黄疸和全身发红,腹部皮下和四肢末梢发紫,且多为隐性感染.猪、绵羊、牛、马、犬、猫和其它动物易感,主要由吸血昆虫如蚊、跳蚤、虱、疥螨、虻、蠓等传播,注射针头、交配、手术器械也可以传播本病.     

温氏附红细胞体病PCR诊断方法的建立及其应用

为建立特异、敏感、快速的温氏附红细胞体诊断方法,根据温氏附红细胞体16S rRNA基因序列(GenBank登录号为AY946266),设计1对种特异性引物,建立了温氏附红细胞体的PCR诊断方法。特异性试验和敏感性试验结果表明,该方法能特异性地扩增温氏附红细胞体16S rRNA基因序列的特异性片段,检测温氏附红细胞体最低DNA量为0.178 fg。利用该方法对湖北省、江苏省和黑龙江省温氏附红细胞体病感染情况进行了流行病学调查,结果显示阳性感染率分别为10.3%、5.3%、45.8%,说明温氏附红细胞体在湖北省、江苏省和黑龙江省均存在,流行病学调查显示湖北省感染率较高、流行较广。     

猪附红细胞体病的诊断与防治

综述了猪附红细胞病的历史与分布、病原学、流行病学和病理变化,阐述了该病的临床诊断与防治措施。     

猪附红细胞体病研究进展

猪附红细胞体病是一种发热性溶血性疫病,主要由吸血昆虫传播,特征是贫血、黄疸、发热。该病常与其它疫病混合感染,表现不同交叉症状。本文综述了猪附红细胞体病的病原学、流行病学、临床症状、发病机理、病理变化、诊断方法及其防治措施。     

猪附红细胞体病的防治

猪附红细胞体病是由附红体感染引起,呈世界流行,病原对人也有致病作用,危害较大;血液传播是本病的主要传播途径,应激对本病具有促发作用;病猪表现全身缺氧,黄疸和组织器官衰竭,耐过猪生长发育不良;消灭猪场的蚊虫,加强饲养管理可有效预防本病的发生,四环素类药物是治疗本病的极佳选择。     

羊附红细胞体病研究进展

羊附红细胞体病(Eperythrozoonosis)是由羊附红细胞体(Eperythrozoon)寄生于人及动物的红细胞表面、血浆及骨髓中引起的一种人畜共患传染病。主要特征为贫血、高热、黄疸、繁殖障碍。对该病病原学、发病机理、免疫应答、流行病学、临床症状、病理变化、诊断、预防和治疗等方面的研究进展进行了综述。     

猪附红细胞体PCR检测方法的建立

 根据已发表的部分猪附红细胞体序列设计了一对特异性引物，通过聚合酶链式反应（PCR）扩增出了一条约936 bp的基因片段，并成功地将该基因克隆于克隆载体PMD18-T，经酶切分析和PCR进一步鉴定后进行序列测定，结果表明，所克隆的目的基因与GenBank中发表的序列一致。并利用特异性引物初步建立了猪附红细胞体病PCR检测技术。     

猪附红细胞体病治疗试验

[目的]探讨猪附红细胞体病主要特征及治疗方法,为该病防治提供参考依据。[方法]共分为3个试验组和1个对照组,猪舍之间完全隔开,30头/组,对发病和对照组红细胞进行镜检,并进行胆红素代谢试验以及三氮脒和强力霉素治疗对比试验。[结果]发病猪红细胞周围呈刺状或无规则形状,可不规则移动,在血浆中可见到游离活附红细胞体。治疗后,血浆中游离的附红细胞体消失。发病猪血清TBIL和IBIL明显升高,治疗后,治疗组和对照组有显著差异（P〈0.05）,三氮脒组和强力霉素组之间TBIL存在显著差异（P〈0.05）,并且强力霉素组IBIL降低至正常范围内（3.51μmol/L）。[结论]附红细胞体病可引起发病猪只IBIL显著升高,临床上使用三氮脒或强力霉素均有较好的治疗效果。     

猪附红细胞体快速诊断方法的研究

根据GenBank上已报道的猪附红细胞体16S rRNA的序列设计一对特异性引物,进行PCR扩增并将产物克隆到T-vector后测序.结果表明扩增到的目的基因片段为404 bp,与GenBank上Mycoplasma suis序列同源性为97%.试验建立的PCR诊断方法特异性强,与健康猪血液、猪链球菌、副猪嗜血杆菌、多杀性巴氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、弓形虫、猪圆环病毒DNA无交叉反应,能检测出的最低DNA浓度是8.6 fg·μL-1.该方法具有快速、准确、敏感等特点,为浙江地区猪附红细胞体病的诊断及分子流行病学的调查提供了新的手段.     

牛传染性鼻气管炎病毒PCR检测方法的建立及初步应用

为建立一种快速诊断牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)病的方法,根据GenBank中登录的IBRV保守基因gB序列,利用分子生物学软件Primer5.0设计1对特异引物,优化反应体系后,建立了IBRV PCR检测方法。特异性试验结果显示该方法可从IBRV DQ株中扩增出398 bp的特异性片段,而对牛呼吸道合胞体病毒、牛副流感病毒、MDBK细胞的扩增结果均为阴性。该方法检测IBRV的敏感性可达10-3 TCID50·mL-1。应用建立的PCR方法能够从发病的临床样品中检测出IBRV且比病毒分离方法更为敏感,操作简便。结果表明建立的PCR方法具有特异、敏感、快速的特点,可用于IBRV的临床检测。     

猪附红细胞体PCR诊断方法的建立

据猪附红细胞体重庆株16S rRNA基因的序列特点设计合成种特异性引物,建立了猪附红细胞体PCR诊断方法.该方法能特异性扩增840 bp的猪附红细胞体16S rRNA基因片段,而对牛温氏附红细胞体、羊附红细胞体、猫血巴尔通氏体CA株、绵羊肺炎支原体、猪肺炎支原体、假单孢茵、大肠杆茵、沙门氏茵、肝片吸虫、葡萄球菌等的基因组DNA没有扩增条带出现.对猪附红细胞体基因组DNA的最小检测量为0.16 fg.通过对30份临床样品的检测,21份猪附红细胞体感染为阳性,其余为阴性.结果表明:建立的PCR诊断方法具有很高的敏感性和特异性,可用于猪附红细胞体的临床诊断和流行病学调查.     

羊口疮病毒PCR检测方法的建立与应用

根据羊口疮病毒(ORFV)H2L基因序列,设计合成1对引物,通过确定最佳的PCR反应条件,建立了检测羊口疮病毒DNA的PCR检测方法.结果显示,用这1对引物均能扩增出羊口疮病毒507 bp的特异性片段,同时检测口蹄疫病毒和山羊痘病毒,结果均为阴性,最小检出量为5 pg.该方法具有良好的特异性和敏感性,可对临床组织病料中的ORFV进行快速检测.     

链球菌通用PCR检测方法的建立及应用

为建立链球菌快速检测方法,根据链球菌延伸因子EF-Tu基因设计合成1对通用引物,对链球菌属及其他属细菌进行PCR检测.结果表明,所设计的通用引物对猪链球菌2型和无乳链球菌均能扩增出1条大小为197 bp的特异性DNA条带,而对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌、大肠埃希氏菌、枯草芽孢杆菌、绿脓杆菌、都柏林沙门氏菌和多杀性巴氏杆菌均呈阴性反应;经对PCR产物进行测序分析表明,扩增片段与GenBank上链球菌相应序列的同源性达90%～98%;对链球菌DNA样本不同稀释度的检测显示,该PCR的最低检出量可达0.1 ng/mL;利用PCR检测方法对11株链球菌分离物进行检测,结果均能扩增出与预期大小相一致的目的条带,与传统生化鉴定结果符合率达到100%.这些结果表明,已成功建立了链球菌PCR检测方法,并可应用于临床链球菌的鉴定.     

猪附红细胞体生物学特性的研究

采取新鲜血液压片相衬观察和末梢血液涂片染色镜检法,对河南省新乡地区3000头猪附红细胞体病发病情况进行了调查;并且对体温升高、镜检附红细胞体感染强度为 病猪的血液,分别用光学显微镜、扫描电子显微镜进行形态观察和血液生化指标检测.结果表明:猪附红细胞体病的发病率为46.33%,死亡率为13.88%,隐性感染率为55.93%(755/1350).在光学显微镜下观察,红细胞呈现菠萝样;染色血片观察附红体在红细胞表面及边缘呈各种形式排列,可见强折光性发亮的圆形小体;扫描电子显微镜观察.附红体寄生的红细胞凹陷区,有大、小球体,有的小球体与大球体相连.血清胆红素、白蛋白、尿素氮、谷丙转氨酶、谷草转氨酶增加,血糖、血清总蛋白、超氧化物歧化酶活性下降.     

鹅细小病毒PCR诊断方法的初步建立

根据GeneBank上已发表的鹅细小病毒(GPV)基因序列,设计合成1对引物,以GPV阳性毒株鹅胚尿囊液及攻毒后死亡的雏鹅组织,提取DNA并进行PCR,结果产物扩增出的片段与预期片段440 bp大小相符,测定序列与GeneBank上GPV B株同源性达99%。试验结果显示用该方法可以特异性地诊断出GPV,比琼脂扩散试验(AGP)敏感性高,可检测最低浓度为102.5GELD50/0.2mL;检测攻毒后死亡的雏鹅组织,在脑、肝、肺、肾、肠等组织中均有GPV的存在,可以用于临床可疑病毒的分离鉴定。所建立的PCR方法具有高度的特异性、敏感性和可重复性。     

Detection of Eperythrozoon wenyoni by PCR assay

The objective of this research was to develop a detection method for Eperythrozoon wenyoni infection using polymerase chain reaction (PCR) assay technique. A pair of primers was designed and synthesized according to the conservative sequence 16S rRNA. The PCR assay was performed with the primers. A 985-bp fragment was amplified by using PCR. The amplified fragments with the expected size were identified by EcoR I restriction digestion. The crossing-reaction, specific-reaction and duplicate-reaction indicated that the PCR method is a specific, sensitive, fast and effective method for diagnosing E. wenyoni infection at group level.     

奶牛混合感染附红细胞体的诊断与分析

奶牛附红细胞体病多为混合感染。通过对宁夏某奶牛场送检的发病犊牛的各种脏器组织及粪样进行病原体的分离培养、分离菌的药敏试验等检测,并对发病犊牛和同群犊牛的血样进行附红体检测。结果表明,该场发病犊牛存在附红细胞体、致病性大肠杆菌、巴氏杆菌、沙门氏菌和链球菌的混合感染,且附红细胞体感染为主要发病原因;未发病的犊牛存在着附红细胞体隐性感染。对发病犊牛使用血虫净（贝尼尔）进行治疗的同时,使用氧氟沙星全身给药,病牛发生明显好转。