东方蜜蜂采集行为初步观察

 分析了东方蜜蜂发生采集行为的基本条件,研究了采集粉蜜的同一性,并初步测定了采集范围.结果表明:东方蜜蜂具有调整蜂群结构以最大生态效率来利用自然资源的特性.     

乌蒙山系东方蜜蜂的形态学及分类地位研究*

 从云南水富县太平乡（4群）和贵州六盘水市盘县（3群）共采集了7群东方蜜蜂Apis cerana样本,每群测定分析15只工蜂,每只工蜂总共有38个测定的形态特征。测定的性状特征数据进行主成分分析,聚类分析和因素分析,并与云南省内其它县东方蜜蜂A.cerana的相关数据进行比较。结果发现,水富东方蜜蜂A.cerana个体较大,体色较浅,贵州六盘水东方蜜蜂A.cerana个体较小, 体色较浅,与云南省内南部东方蜜蜂A.cerana分开,与德钦东方蜜蜂A.cerana形成一个类群。     

东方蜜蜂与西方蜜蜂酯酶同工酶的比较研究

酯酶（esterase）是一组多态性很高的同工酶，常用于昆虫种属鉴定和遗传变异研究。本试验采用薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳（IEF-PAGE）技术，分析了浙农大Ⅰ号意蜂（A.m. lingustica）、东北黑蜂（A.m.ssp）和卡尼鄂拉蜂（A.m.carnica）等西方蜜蜂与中华蜜蜂（A.cerana cermama）酯酶同工酶及蜜蜂不同发育阶段酯酶同工酶的变化，以便为酯酶同工酶在蜜蜂遗传变异、种属鉴定及品种选育研究中的应用，提供基础资料。 　　1　材料与方法 　　1.1　材　料　浙农大Ⅰ号意蜂和中华蜜蜂来自浙江大学实验蜂场，东北黑蜂和卡尼鄂拉蜂来自吉林省蜜蜂研究所种蜂场。 　　1.2　方　法　每种蜂各取外勤蜂、内勤蜂和幼蜂20只，剪取头部，以1∶2（W/V）加入提取液, 在1.5 mL Eppendrof 管中，用玻棒研磨（冰浴中），离心（4 ℃，12 000 r/min,10 min）,取上清用于电泳。参照Nunamaher等的方法，用IEF-PAGE技术在LKB多相电泳系统中检测酯酶同工酶，酶活性染色液为0.1 mol/L pH6.5的磷酸缓冲液，含33.33%α-乙酸萘酯，33.33%β-乙酸萘酯，66.67%坚牢兰RR。……     

云南省中西部地区东方蜜蜂形态特征研究

 为了研究不同地理环境下东方蜜蜂的特征规律,测定了云南省中西部的武定、永胜、大姚、祥云和姚安5个地区的16群东方蜜蜂(Apis cerana)的第6背板覆毛长度、第3背板长、翅钩数和小盾片颜色等38个形态特征指标,并同云南省其他地方的东方蜜蜂形态数据进行比较。结果表明,云南省中西部地区的东方蜜蜂为一个小类群,与德钦、宾川和丽江的亲缘关系较近。在云南省范围内,德钦的东方蜜蜂体型最大,云南省中西部地区的东方蜜蜂体型蜂次之,东南低纬区的东方蜜蜂体型最小。该地区的东方蜜蜂形态特征呈现广泛性,是云南省镜内两大东方蜜蜂类群的中间过渡带。     

云南东方蜜蜂Apis cerana Fabricius的研究

 本文通过对云南省17个地(州、市)92个县124个点的东方蜜蜂进行形态测定及生物学特性观察,论述了东方蜜蜂在云南的地理分布、形态分化、地理变异和生产性能等方面的问题,确立了云南省的东方蜜蜂有3个亚种:印度亚种Apis cerana indica Fabricius,西藏亚种Apis cerana skorikovi Maa和指名亚种Apis cerana cerana Fabricius,同时提出了资源的利用意见。     

河南东方蜜蜂形态多样性研究

从河南4个地区采集43群东方蜜蜂样本,按照国际蜜蜂研究者认可的蜜蜂形态测定指标对东方蜜蜂样本进行41个形态特征的系统测量和分析,利用SPSS10．0进行一系列因子分析、判别分析、聚类分析、变异分析以及与环境因子的相关分析。结果表明：河南省东方蜜蜂形态特征共提出6个主因子,与蜜蜂形态特征相关的第一主因子与海拔、纬度和年均降雨量呈显著正相关,与蜜蜂体色相关的第二主因子与经度、年均降雨量以及年均气温呈显著正相关,与纬度呈显著负相关,41项形态特征中有24项与环境因子以不同程度和不同形式相关。方差分析结果显示：胫节长等6个指标在河南四地区间差异显著（P〈0．05）;第三腹板蜡镜斜长等12项形态特征在四地区间差异极显著（P〈0．01）。Q型层次聚类分析结果是河南四地区东方蜜蜂聚为三类。河南东方蜜蜂与山东、河北、山西以及北京东方蜜蜂一同进行聚类分析发现河南东方蜜蜂与纬度相近的山西几个地区东方蜜蜂遗传距离较近,而与北京房山以及河北兴隆遗传距离较远。该研究为我国东方蜜蜂资源的研究提供科学的理论基础数据,并为开发和保护我国濒危的东方蜜蜂资源奠定坚实基础。     

四川平武地区东方蜜蜂形态特征研究

 测定四川平武地区5个不同样点的15群东方蜜蜂（Apis cerana）的38个形态特征。同该地区的四川九寨沟、冕宁、西昌、会理以及甘肃岷县、临潭的东方蜜蜂的形态数据进行因素分析、主成分分析、聚类分析以及相关性分析。结果表明：这些地区的东方蜜蜂呈现3个主要类群。该地区东方蜜蜂的个体大小与海拔和纬度相关性显著,喙的颜色、小盾片的颜色和绒毛覆毛长度与海拔相关性显著。     

山西东方蜜蜂形态类群的研究

研究从山西4个地区采集214群样本,按照国际蜜蜂研究者认可的蜜蜂形态测定指标对东方蜜蜂样本进行41个形态特征的系统测量和分析,利用SPSS10.0进行一系列因子分析、判别分析、聚类分析、变异分析以及与环境因子的相关分析。结果表明:山西东方蜜蜂形态特征呈现两个主因素,第一因素与经度和纬度呈显著正相关,与海拔呈极显著正相关,与年均气温呈显著负相关,与年均降雨量不呈相关关系;第二因素只与年均气温有显著正相关,与海拔、经度、纬度和年均降雨量没有明显相关关系,41项形态特征中有16项与环境因子以不同程度和不同形式相关。肘脉b、肘脉指数以及第三腹板蜡镜间距离在晋城、运城、长治和离石四地区间有显著差异,第一基跗节长、前翅长、前翅宽、第六腹板长、第六腹板宽、第三背板长、第四背板长、第四背板绒毛带宽度1、第四背板绒毛带宽度2、小盾片Sc区色度以及上唇色度在四地区间差异极显著。Q型层次聚类分析结果是山西四地区东方蜜蜂聚为三类,各地区间东方蜜蜂交叉聚类,晋城东方蜜蜂聚在同一类里,而长治、运城和离石东方蜜蜂却分散聚在三类里。山西东方蜜蜂与山东、河北、河南以及北京东方蜜蜂一同进行聚类分析发现山西东方蜜蜂与纬度相近的河南及山东几个地区东方蜜蜂遗传距离较近,而与北京房山以及河北兴隆遗传距离较远。为我国东方蜜蜂资源的研究提供科学的理论基础数据,并为开发和保护我国濒危的东方蜜蜂资源奠定坚实基础。     

中国东方蜜蜂的形态学及生物地理学研究

 用形态学研究方法对中国的东方蜜蜂(Apis cerana)的形态特征进行研究。东方蜜蜂的标本从中国大陆的34个样点采集而来，这些样点代表了东方蜜蜂在中国大陆不同气候带或地理区域分布的不同类型。 34个点共采集了220群蜜蜂的样，每群蜂测定分析15只工蜂，形态的测定特征参照Ruttner 1988年提出的测定标准进行。每只蜂总共有38个测定的形态特征。测定的性状特征的数据进行因素分析，集合分析和区辨分析；形态性状与生态环境因子相关性分析；并与周边国家东方蜜蜂的相关数据进行比较，发现:生活在吉林长白山温带阔叶林的东方蜜蜂个体较大、体色较黑，与日本、韩国的东方蜜蜂较为相似；来自亚热带常绿阔叶林的东方蜜蜂（甘肃天水、湖北和湖南）与云南北部、北京、尼泊尔的东方蜜蜂聚集为一类；而居住在南方热带季雨林如：福建、广东、广西和云南部分南方的东方蜜蜂与低海拔亚热带常绿阔叶林的东方蜜蜂（越南、中国四川和安徽黄山）聚集为另一类； 云南南方如：景洪、思茅、河口、镇康、元江、屏边、蒙自草坝和开远的东方蜜蜂形成独特的一个分枝，与泰国和缅甸的东方蜜蜂非常接近，同时与亚热带常绿阔叶林的东方蜜蜂相邻；值得关注的是，来自高寒湿地的东方蜜蜂（甘肃岷县）是目前在亚洲已经发现的东方蜜蜂中，其个体最大、颜色最深。在因素分析和集合分析里，它具有独特的位置。     

河南东方蜜蜂的形态特征研究*

 通过测定河南8个不同样点的20群东方蜜蜂,每群15只工蜂,每只工蜂共有38个形态特征,测定的性状特征数据进行因素分析、聚类分析和区辨分析;形态性状与环境因子相关性分析;并与其它省份的相关数据进行比较,发现:河南东方蜜蜂种群内遗传变异较为丰富,其形态性状特征表现出较明显的地理变异性。河南东方蜜蜂种群形态性状的多态性、多型性及其地理变异式样,均具有生态适应意义。     

亚洲部分地区东方蜜蜂mtDNA多态性研究

 就云南省7个不同样点共7群东方蜜蜂蜂群开展mtDNA内切酶位点测试和分析研究,并与菲律宾的东方蜜蜂作对比分析。内切酶DraI分析7个蜂群,共发现4个内切酶位点;云南东方蜜蜂mtDNA的tRNAleu-COII基因的序列没有长度多态性,EcoRI内切酶位点共有4个,与菲律宾的吕宋岛的东方蜜蜂属于同一单倍型。另外,对来自尼泊尔、泰国、越南、老挝以及我国北京、云南等地的共13群蜜蜂mtDNA COII基因的420个碱基对进行测序分析,发现13群东方蜜蜂分析的420个碱基序列里,位点变异从0个到5个不等,变异率从0到1.19％. 用邻接法(neighbor-joining)构建的分子系统树可以看出分枝树主要分为两个类群:高纬度或高海拔的蜂群为一个类群,它们主要来自撒营盘（2）（China 4）、丽江(China 7)、北京(1)（China 1）、尼泊尔（Nepal）、北京（2）（China 2）、河口（1）（China 8）和越南（2）（Vietnam 2）。另一个类群的主要来自低纬度或低海拔的蜂群,它们主要来自撒营盘（1）（China 3）、景洪（China 5）、越南（1）（Vietnam 1）、泰国（Thailand）、河口(2) (China 6)和老挝(Laos)。该实验为我国东方蜜蜂资源的保护和开发研究提供了重要的信息和手段。     

金华地区东方蜜蜂的形态特征

从浙江金华8个样点采集40群东方蜜蜂样本进行16个形态特征的系统测量,同时采集吉林和广东东方蜜蜂做对照,利用SPSS 23.0进行因子分析、判别分析、聚类分析以及与环境因子的相关分析。结果表明:金华东方蜜蜂16个形态特征之间均存在极显著的变异性;16个形态指标均极显著小于吉林样本;除翅长、翅宽、基跗节宽和第三背板长与广东样本差异不显著外,其他形态指标与广东样本显著差异。与外群东方蜜蜂遗传分析表明,金华东方蜜蜂和广东样本为1个地理种群,吉林样本单独为1个种群,群体距离与地理距离相符。金华东方蜜蜂内部遗传分化成2个种群,武义新宅、磐安方前、婺城北山、兰溪马涧为1个种群,婺城长山、武义宣平、婺城塔石、永康方岩为1个种群。金华地区东方蜜蜂种群内遗传变异丰富,且变异可能与海拔和温度相关。     

东北地区东方蜜蜂遗传分化和多样性分析

调查我国东北地区东方蜜蜂Apis cerana,分析其遗传分化并探讨隔离机制,明确东北东方蜜蜂种群遗传特征和多样性水平,探究蜜蜂种群遗传分化和遗传多样性相关规律,建立并完善东方蜜蜂种群遗传学。利用33个形态标记和38个微卫星DNA标记,对东北7个样点共461群东方蜜蜂及北京平谷、浙江金华、四川平昌、海南儋州外群作遗传分化、遗传特征和遗传多样性分析。形态标记、微卫星DNA标记分析结果均显示,分布于长白山山脉抚松、安图、敦化、本溪、宽甸东方蜜蜂聚为同一种群。长白山种群肘脉指数、翅长、第五背板绒毛带长、第四腹板长等形态指标数值较高。微卫星各位点等位基因以1、2种为主,频率达80%以上的21个。遗传多样性结果显示,长白山种群的观察杂合度、有效等位基因数、多态信息含量等数值较低。东北地区东方蜜蜂主要分布在吉林、辽宁长白山山区,形成长白山东方蜜蜂种群。该种群与北京、四川、浙江、海南东方蜜蜂发生明显遗传分化,遗传多样性水平较低。分化主要原因为辽宁省长白山以西平原地区,东方蜜蜂逐渐消失,基因流阻断。长白山东方蜜蜂种群遗传多样性水平较低,环境和人为因素导致种群数量减少。     

意大利蜜蜂幼虫响应东方蜜蜂微孢子虫胁迫的高表达基因分析

为探究意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica,简称意蜂)幼虫响应东方蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)胁迫的高表达基因(HEG)的作用,利用RNA-seq技术对正常的意蜂4、5和6日龄幼虫(Am4CK、Am5CK和Am6CK)及N.ceranae胁迫的意蜂4、5和6日龄幼虫(Am4T、Am5T和Am6T)进行测序。共得到268 765 544条原始读段,经过滤得到的有效读段数为266 318 442条,各样品的Q30均在92.42%及以上。根据FPKM值≥15的标准从上述6个样品中分别筛选出2 460、2 692、2 908、2 367、2 549和2 270个HEG。Venn分析结果显示,去除与对照组共有的HEG,Am4T、Am5T和Am6T的共有HEG数为3个,特有HEG数分别为373、210和79个。GO分类结果显示,Am4T、Am5T和Am6T的特有HEG分别能够注释26、27和16个GO条目,注释基因数最多的分别是代谢进程、结合和结合。KEGG分析结果显示这些特有HEG可分别富集在145、138和68条代谢通路,富集基因数最多的分别是过氧化物酶体、碳代谢和内质网蛋白加工。进一步分析结果表明N.ceranae胁迫可导致宿主的部分物质代谢、能量代谢和免疫代谢通路水平提高。从6个样品的共有HEG中随机选取10个进行RT-PCR验证,均能成功扩增出目的条带,说明本研究中的HEG真实存在。研究结果揭示了意蜂幼虫响应N.ceranae胁迫的HEG表达谱及作用,为深入解析宿主的胁迫应答机制提供了重要信息。     

意大利蜜蜂响应东方蜜蜂微孢子虫胁迫的免疫应答

【目的】通过对意大利蜜蜂（Apis mellifera ligustica,简称意蜂）工蜂中肠响应东方蜜蜂微孢子虫（Nosema ceranae）胁迫的差异表达基因（differentially expressed gene,DEG）及免疫通路进行深入细致的分析,揭示宿主的细胞和体液免疫应答,为关键免疫应答基因的筛选及功能研究打下基础。【方法】基于前期获得的正常及东方蜜蜂微孢子虫胁迫的意蜂7日龄和10日龄工蜂中肠（Am7CK、Am7T、Am10CK、Am10T）转录组数据,按照FDR≤1,P≤0.05和|log₂ fold change|≥1的标准筛选出各组的DEG,利用相关生物信息学软件对DEG进行Pearson相关性分析、Venn分析、GO分类和KEGG代谢通路富集分析,进而对免疫通路富集基因进行统计和分析,利用实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR,RT-qPCR）验证转录组数据的可靠性。【结果】 差异分析结果显示,Am7CK vs Am7T比较组包含472个上调基因和385个下调基因;Am10CK vs Am10T比较组包含611个上调基因和360个下调基因。Venn分析结果显示,两个比较组特有的DEG分别为739和853个,共有的DEG为118个。GO分类结果显示,Am7CK vs Am7T比较组中上调和下调基因分别涉及23和29个功能条目,其中富集上调基因数最多的前5位分别为结合、催化活性、代谢进程、细胞进程和单组织进程;富集下调基因数最多的前5位分别为代谢进程、单组织进程、催化活性、细胞进程和结合。Am10CK vs Am10T比较组中上调和下调基因分别涉及36和26个功能条目,其中富集上调基因数最多的前5位分别为单组织进程、结合、细胞进程、催化活性和代谢活性;富集下调基因数最多的前5位分别为结合、细胞进程、催化活性、代谢进程和单组织进程。KEGG代谢通路富集分析结果显示,Am7CK vs Am7T比较组中上调和下调基因分别富集在38和33条代谢通路,富集上调基因数最多的前5条分别为胆汁分泌、内质网蛋白加工、泛素介导的蛋白水解、PI3K-Akt信号通路和神经营养因子信号通路;富集下调基因数最多的前5条分别为胞质DNA传感通路、嘌呤代谢、嘧啶代谢、RNA聚合酶和核糖体;涉及泛素介导的蛋白水解等3条细胞免疫通路,以及PI3K-Akt信号通路等7条体液免疫通路。Am10CK vs Am10T比较组中上调和下调基因分别富集在54和43条代谢通路,富集上调基因数最多的前5条分别为Hippo信号通路、药物代谢-细胞色素P450、P450对外源物质的代谢、泛素介导的蛋白水解和鞘脂类代谢;富集下调基因数最多的前5条分别为mRNA监测、鞘脂类信号通路、果糖和甘露糖代谢、半乳糖代谢和鞘脂类代谢;涉及泛素介导的蛋白水解等7条细胞免疫通路,以及NF-κB信号通路等2条体液免疫通路。RT-qPCR验证结果显示6个随机挑选的DEG的表达量变化趋势与测序结果一致,证实了本研究中测序数据的可靠性。进一步分析发现意蜂7日龄和10日龄工蜂中肠的NF-κB信号通路均被东方蜜蜂微孢子虫激活,随即启动了3种抗菌肽apidaecin、defensin-1和hymenoptaecin的合成,体现了它们在宿主抵御东方蜜蜂微孢子虫入侵中的重要性。【结论】在转录组水平解析了意蜂工蜂中肠对东方蜜蜂微孢子虫的免疫应答,揭示宿主在胁迫前期同时作出细胞和体液免疫应答,前者可能在抵御病原入侵方面发挥主要作用;宿主的细胞免疫在胁迫后期持续增强,但体液免疫较大程度地减弱;泛素介导的蛋白水解通路及富集DEG,NF-κB信号通路及富集DEG,以及抗菌肽编码基因apidaecin、defensin-1和hymenoptaecin可能在意蜂工蜂对东方蜜蜂微孢子虫的免疫应答中起到关键作用。     

云南德钦东方蜜蜂形态学及分类地位研究*

 从云南德钦县的霞若、托顶两个乡镇共采集了8群东方蜜蜂的样蜂，每群测定分析15只工蜂，每只工蜂总共有38个测定的形态特征。测定的性状特征数据进行因素分析、主成分分析和聚类分析,并与云南省内其它县东方蜜蜂的相关数据进行比较。结果表明，德钦东方蜜蜂个体较大，身上的绒毛较长，与云南省内其它东方蜜蜂分开，独自形成一个类群。     

云南省东方蜜蜂线粒体16S rRNA基因的扩增及序列分析*

 扩增、测定和分析了云南省东方蜜蜂16个地理居群线粒体16S rRNA基因部分序列,并结合从GenBank获得的蜜蜂科3个其它种的16S rRNA序列,以离颚细蜂科的Vanhornia eucnemidarum为外群,利用邻接法、最大简约法和最大似然法重构了它们的种系发生关系。结果显示,云南省东方蜜蜂16S RNA基因部分序列很保守,不同地理居群均得到435bp完全一致的基因序列;通过对蜜蜂科4个种的种系发生关系分析发现,东方蜜蜂与西方蜜蜂位于一个姊妹枝,而熊蜂与无刺蜂位于一个进化枝,4个种得到了有效的区分。因此,16S rRNA可以作为一个理想的分子遗传标记用于蜜蜂科种间鉴定和种系发生关系分析。     

感染意大利蜜蜂工蜂的东方蜜蜂微孢子虫及其纯化孢子的高表达基因分析

为探究东方蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)在侵染意大利蜜蜂(Aips mellifera ligustica)过程的基因表达谱及高表基因(highly expressed gene,HEG)的功能,本研究利用RNA-seq技术对N.ceranae感染的意蜂工蜂7和10 d工蜂中肠(NcT1和NcT2)及其纯化孢子(NcCK)进行高通量测序。根据FPKM值≧15的标准筛选出各组的HEG并进行Venn分析,进而通过GO分类和KEGG代谢通路富集分析对各组的共有HEG进行功能注释。测序得到的原始读段经严格质控后分别得到5 816 465、28 501 225和210 824 312条高质量的有效读段,分别从NcT1、NcT2和NcCK中筛选出1 263、1 233和1 511个HEG,其中有1 079个基因在各组均高量表达,分别有15和7个基因仅在NcT1和NcT2中高量表达。GO分类结果显示,共有HEG涉及9个生物学进程相关条目,10个细胞组分相关条目,以及5个分子功能相关条目。KEGG代谢通路富集分析结果表明,共有HEG富集在218条代谢通路,富集基因数最多的是核糖体、Epstein-Barr病毒感染、细胞周期、内质网蛋白加工和真菌核糖体生物合成。深入分析结果显示分别有5和5个共有HEG富集在MAPK和cAMP信号通路,表明此2条信号通路及富集的HEG可能在N.ceranae的环境应激和侵染过程中发挥重要作用。研究结果提供了N.ceranae感染意蜂工蜂过程中的基因表达谱,揭示了HEG的作用,为深入解析N.ceranae的侵染机制打下了初步基础。     

电取蜂毒对蜜蜂群势和蜂王浆、蜂蜜生产的影响

 电取蜂毒不利于蜜蜂群势发展和养蜂生产。电取蜂毒 3d 1次 ,连续 10次 ,可使蜂蜜减产 4 5 .6 4 %～4 9.90 % ,差异显著 (P <0 .0 5 ) ;蜂王浆产量平均降低 4 6 .17% ,差异极显著 (P <0 .0 1) ;移虫接受率平均降低31.0 5 % ,差异极显著 (P <0 .0 1) ;但对单台产浆量、饲料消耗量、蜂王有效产卵量等影响不大。连续取毒后 11d ,对蜜蜂群势的发展影响不大 ,而 2 3d后蜜蜂群势比对照组低 12 .87% ,35d后低 2 8.81% ,差异均极显著 (P <0 .0 1)。     

云南威信、镇雄与蒙自东方蜜蜂形态对比分析

威信、镇雄年均日照时间较少,降水量较多,采集威信东方蜜蜂3群蜂群蜜蜂样本和镇雄东方蜜蜂1群蜂群样本,与蒙自东方蜜蜂6群蜂群样本进行对比分析,每群测定分析15只,每只工蜂共有38个测定的形态指标。结果表明,镇雄东方蜜蜂形态特征上与威信和蒙自东方蜜蜂存在显著性差异,这对进一步揭示威信、镇雄东方蜜蜂的生物学特性具有重要价值,为建立保种区域奠定基础。