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参考GenBank中伪狂犬病病毒(PRV)gE基因的序列设计了1对引物,对PRVMin—A株进行了PCR扩增,扩增产物克隆于pGEM—TEasy载体。对重组质粒进行限制性内切酶分析和基因测序,证实了克隆片段的可靠性。测序结果表明,目的片段包含1个1740bp的开放性阅读框(ORF),编码由579个氨基酸组成的多肽。同源性分析表明,PRVMin—A株与PRVEa株、SH株PE基因的核菩酸同源性分别为99.2%、98.7%;推导氨基酸的同源性分别为98.6%、97.2%。 相似文献
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伪狂犬病病毒鄂A株TK基因的克隆及其鉴定 总被引:6,自引:0,他引:6
合成了 1 对能对伪狂犬病病毒( Pseudorabies virus, P R V) T K(thym idine kinase)基因+ 119~+ 1 071区进行特异扩增的引物,用猪 P R V 鄂 A 株细胞培养物提取的基因组作模板,扩增出 953 bp 长的片段,用地高辛标记该片段作探针,通过 South ern 杂交,从克隆有 P R V 鄂 A 株的 Bam H I片段的重组质粒中钓出含 T K 基因的重组质粒 p S T K。对 p S T K 进行酶切分析,绘制了含 T K 基因的 Bam H I片段的图谱,通过测序得出了 T K 基因的全序列。将该序列与 P R V N I A3 株 T K 基因进行比较,发现鄂 A 株的 T K 基因存在变异。 相似文献
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参考GenBank中伪狂犬病病毒(PRV)gE基因的序列设计了1对引物,对PRV粤A株进行了PCR扩增,PCR产物克隆到pMD18-T载体。对重组质粒进行限制性内切酶分析和基因测序,证实已克隆到PRV粤A株的gE全基因。 相似文献
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根据已发表的基因序列设计了1对PCR引物,以伪狂犬病病毒Ea株(pseudorabies virus Ea,PRv Ea)基因组DNA为模板.扩增出一大小为511bp的片段。通过酶切和测序证实,该基因为伪狂犬病病毒Ea株的又一糖蛋白基因,即gL基因。Blast软件分析表明,该基因与Kaplan株核苷酸序列的同源性为94%,氨基酸序列的同源性为95%。将测序结果输入GenBank,获得登录号AF448456。 相似文献
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伪狂犬病病毒Ea株gD基因的克隆及序列分析 总被引:2,自引:0,他引:2
本研究从含有伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)Ea株gD基因BamHI 6.6Kb片段的重组质粒pUCB7中分别亚克隆gD基因的上,下游片段,并对上游片段进一步改造,去掉gD基因上游的非编码序列,构建了含完整gD基因编码区的重组质粒,pBRgDI,并利用基因内部的限制性内切酶位点,用内切酶KpnI和SalI酶切分析,证实了 gD基因的可靠性和完整性,同时构建了测序质粒pSKgDSB,pSKgDS,并用双脱氧终止法进行测序,将测序结果与国外的Rice毒株进行比较,发现Ea株gD基因核苷酸序列有多处点突变和一处插入突变,在编码氨基酸残苦水平上也有差异。 相似文献
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伪狂犬病病毒毒力基因研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
阎高峰 《青海畜牧兽医杂志》1998,28(5):23-26
本文综述了伪狂犬病病毒(PrV)基因组的基本结构与PrV毒力有关的基因和PrV潜伏机制的最新研究进展。详细分析了PrV基因组UL、US和IR区的毒力基因,并介绍了毒力的多基因调控研究进展。 相似文献
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采用PCR方法扩增出12株伪狂犬病病毒(PRV)的蛋白激酶(Protein Kinase,PK)基因全序列,并测序,使用生物信息学软件对这12株PRV的PK基因序列以及GenBank登录的6条PK基因序列进行了生物信息学分析和预测。结果显示,PRV PK基因开放阅读框的核苷酸长度为1 107~1 170 bp,氨基酸长度为368~389个;核酸和氨基酸的同源性分别为96.7%~100%和73.9%~100%;在PK基因核酸序列1 079~1 099 bp和240~250 bp处有2个高变重复区;蛋白质疏水性、抗原表位的分析结果十分相似,而且PK基因编码的蛋白质均具有真核细胞丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化结构域的保守氨基酸共有序列和亚结构域特征序列。结果表明,PRV PK基因在大部分毒株具有较高的保守性。 相似文献
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伪狂犬病病毒Ea株糖蛋白gD基因的表达及基因免疫 总被引:2,自引:0,他引:2
构建了2个利用人类巨细胞病毒(HCMV)的启动子启动表达伪狂犬病病毒Ea株糖蛋白gD基因的真核表达质粒pCIDI和pcDDI,体外转染BHK-21细胞,用间接免疫荧光法检测,证实糖蛋白gD在细胞中得到表达。用表达质粒pCIDI和pcDDI作为核酸疫苗免疫BALB/c小鼠,ELISA检测小鼠血清中抗伪狂犬病病毒的抗体,结果其滴度为1:128-1:1512。初步证实,用gD基因作为核酸疫苗免疫动物,可以激活机体的免疫应答反应。 相似文献
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伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)是疱疹病毒科a疱疹病毒亚科的成员,临床上引起Aujeszky氏病(Aujeszky's disease,AD)。根据该病毒感染细胞后DNA转录、表达时间的先后可将PRV基因分为立即早期基因(immediate—early gene,IE),早期基因(earlygene)和晚期基因(late gene),这3种基因产物以瀑布方式调节。现已证实伪狂犬病病毒只含一个立即早期基因——IE180基因,该基因对病毒在动物体内的复制至关重要,只有IE180基因开放转录、并翻译成IE180蛋白,其下游的基因才能在IE180蛋白的激活作用下得以完全开放转录,否则病毒复制将不能完成。IE180基因的表达产物IE180蛋白是一个多功能蛋白,不仅能激活同源蛋白基因启动子,而且能激活某些异源蛋白基因启动子。此外,IE180蛋白还具有诱导机体产生免疫保护的功能。IE180的转基因小鼠能够抵抗PRV的攻击,但最近发现IE180在小鼠体内的表达会导致小鼠小脑发育异常,表现出共济失调、震颤等症状。 相似文献
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伪狂犬病病毒闽A株gE基因去信号肽片段的克隆与序列测定 总被引:1,自引:0,他引:1
根据已经发表的伪狂犬病病毒(PRV)Rice株的gE基因序列,设计并合成了1对引物,通过PCR方法扩增到了PRV闽A株糖蛋白gE基因除信号肽以外的全部编码区段,并克隆到pMD18-T载体中,转化大肠杆菌XL1-blue菌株,重组质粒pMD18-T-FL经酶切和PCR鉴定证实后,进行了序列测定。结果表明,重组质粒pMD18-T-FL含有PRV闽A株糖蛋白gE基因除信号除信号肽以外的全部编码区段,长1674bp。序列比较分析表明,此区段与PRV Rice株相应区段的核苷酸序列同源性为97.5%,氨基酸序列同源性为94.8%。 相似文献
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乙脑病毒prM/E基因重组伪狂犬病病毒的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
以乙型脑炎病毒SA14-14-2株基因组RNA为模板,采用RT—PCR一步法扩增prM/E基因的全长cDNA(约2kb),将其克隆至pMDl8一T栽体,获得了克隆质粒pTprM/E,并对其进行了测序。序列分析结果表明,与已报道的SA14强毒株和SA14-14-2疫苗株的核苷酸比较,prM基因的序列同源性为100%,E发生了4个点突变,其中1个为回复突变,并导致了3个氨基酸的改变。以伪狂犬病病毒Ea株TK^-/gG^-/LacZ^ 突变株为栽体,构建了1株乙脑病毒prM/E基因的重组伪狂犬病病毒TK/gG^-/ΓrM/E^ 。乙脑病毒prM/E基因的克隆及重组伪狂犬病病毒的成功构建,为开展乙脑病毒分子生物学及猪伪狂犬病-乙脑二价基因工程疫苗的研究打下了坚实基础。 相似文献
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