不同浓度钙离子对凝血Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ因子的作用

家兔血液与不同浓度ＣａＣｌ２溶液混合后，随着Ｃａ２＋浓度的增加血凝时间延长，当血中Ｃａ２＋浓度达０．０５４ｍｏｌ／Ｌ时，出现抗凝；０．７２ｍｏｌ／ＬＣａＣｌ２溶液抗凝兔血置３７℃水浴３０，１２０ｍｉｎ后，再以生理盐水稀释，血液仍能恢复凝固。表明ＣａＣｌ２抗凝血中的纤溶系统未被激活，其抗凝作用具有可逆性；其中的凝血Ⅲ因子无变性、降解、失活现象，对纤维蛋白原含量无影响，但可明显抑制４０００Ｕ／Ｌ凝血酶的活性     

大熊猫和小鼠精子在获能过程中各部元素相对含量的X射线微区分析

采用扫描电镜ｘ射线微区分析方法，对获能前、后大熊猫射出精子和小鼠附睾尾精子头前、后部和尾中段Ｃａ、Ｍｇ、Ｋ、Ｚｎ、Ｃｌ、Ｐ和Ｓ等７种元素的相对含量进行了测量。统计结果表明：（１）大熊猫精子获能前头前部Ｃａ相对含量较头后部高，但小鼠精子头后部较头前部高。获能后２种动物精子头前、后部Ｃａ相对含量无显著差异；（２）小鼠精子头前部Ｃａ相对含量在获能过程中升高，而大熊猫精子头前部Ｃａ相对含量无显著变化；（３）大熊猫和小鼠精子获能过程中头部Ｋ相对含量均显著增加；（４）小鼠精子获能过程中头部和尾中段Ｓ相对含量显著升高，而大熊猫精子无这种变化；（５）大熊猫和小鼠精子相比，Ｃａ、Ｐ相对含量较高，Ｃｌ、Ｓ和Ｋ相对含量较低。本文对这些统计结果进行了讨论。     

不同浓度钙离子对凝血I,Ⅱ及ⅩⅢ因子的作用

家兔血液与不同浓度ＣａＣｌ２溶液混合后，随着Ｃａ＾２＋浓度的增加血凝时间延长，当血中Ｃａ＾２＋浓度达０．０５４ｍｏｌ／Ｌ时，出现抗凝；０．７２ｍｏｌ／Ｌ ＣａＣｌ２溶液抗凝兔血置３７℃水浴３０，１２０ｍｉｎ后，再以生理盐水稀释，血液仍能恢复凝固。表明ＣａＣｌ２抗凝血中的纤溶系统未被激活，其抗凝作用具有可逆性；其中的凝血ⅩⅢ因子无变性、降解、失活现象，对纤维蛋白原含量无影响，但可明显抑制４０００Ｕ／     

透明质酸对猪精子活率,获能,顶体反应及体外受精穿透率的影响

采用具有高繁殖力的种公猪的新鲜精液及冷冻精液，加入不同获能剂咖啡因及透明质酸，在３９．５℃、５％ＣＯ２培养箱中孵化培养。结果表明，透明质酸能够在体外条件下保持精子的活率，并维持在稳定的水平，鲜精为４２．６％～４７．８％，冻精为２０．４％～２５．６％。荧光剂Ｈｏｅｃｈｓｔ染色表明，透明质酸能够显著增加培养３６０ｍｉｎ后的活精子率。在无蛋白来源的ｍＢＯ培养液中，培养０～６０ｍｉｎ，精子发生自发的获能和顶体反应，而受获能剂影响，精子发生获能的时间带在各处理组之间显著不同：咖啡因处理组的获能时间带是６０～３６０ｍｉｎ，透明质酸处理组则是６０～１８０ｍｉｎ。体外受精试验表明，去除卵母细胞周围卵丘细胞时，透明质酸和咖啡因对精子穿透率的影响没有区别；而在卵丘细胞存在的前提下，咖啡因处理组的穿透率显著高于透明质酸处理组。     

不同浓度肝素对塔里木马鹿精子体外获能效果的影响

为了探讨不同浓度肝素对塔里木马鹿精子体外获能的影响,试验随机取塔里木马鹿冻融精子,添加到SP-TALIP获能液中并添加不同浓度(0,10,20,50,100μg/m L)的肝素,在显微镜下检测0,2,4,6,8小时时的精子活力,试验采用金霉素(CTC)染色法检测精子获能率及顶体反应率等指标,探讨不同浓度肝素对塔里木马鹿精子活力、存活时间、获能率、顶体反应率的影响。结果表明:精子活力随肝素浓度升高而呈下降趋势,4 h后10μg/m L和20μg/m L肝素组精子活力显著高于其他组(P0.05),其中20μg/m L肝素组精子存活时间最长,显著高于其他组(P0.05)。随着培养时间的延长,各试验组精子获能率与对照组相比明显提高,2小时、4小时时20μg/m L肝素组精子获能率显著高于其他组(P0.05);各试验组精子顶体反应率与对照组相比有升高趋势。说明获能液中添加20μg/m L肝素可有效诱导塔里木马鹿精子体外获能。     

水貂银狐精子体外获能前后表面元素变化的研究

哺乳动物精子的体外获能是体外受精中的一个关键问题,而元素成分又在精子获能中发挥着极其重要的作用。Yanagimachi(1982)提出仓鼠精子的体外获能与钙元素有关;Mrsny等(1987)发现钾、镁元素是仓鼠精子获能和顶体反应所必需的;Hyne(1984)又证实钠也是豚鼠精子体外获能或顶体反应最重要的元素。然而,在野生动物水貂和银狐精子获能前后元素成分的变化,至今国内外尚     

孕酮对牛精子体外受精及胚胎发育的影响

通过在牛精子获能液中添加不同浓度的孕酮,应用体外培养技术对牛精子体外获能及早期胚胎发育进行了研究。通过对顶体反应、超激活、早期胚胎发育率及其与精子孵育时间对精子活率的观察,筛选出获能液中最适孕酮浓度及其有利于牛早期胚胎发育的最佳浓度。结果表明,单独添加孕酮不能诱导牛精子体外获能;孕酮只能诱导获能精子发生顶体反应,而且有一个剂量依赖关系,以1μg/mL的添加效果最好。当浓度超过1μg/mL、作用时间超过4h时,精子活率下降;获能液中添加孕酮,无论剂量多少,对胚胎体外发育无明显的促进作用。     

牛精子染色体制备及影响因素探讨

用去透明带金黄地鼠卵异种体外受精技术制备了牛精子单倍染色体。冻精复苏、洗涤、获能用 Ｈａｍ  Ｆ１０ 和 Ｒ Ｐ Ｍ Ｉ１６４０ 为主的混合培养基，辅以亚牛磺酸、肾上腺素，１０ μｍ ｏｌ／ Ｌ 钙离子载体（ Ｉ Ａ）处理牛精子 １２～１５ ｍ ｉｎ，诱导获能。异合卵用 Ｔ Ｃ１９９ 培养，以鬼臼毒素和长春花碱阻断原核融合和纺锤体形成，其浓度为常规浓度的 ２ 倍，在第 １ 次卵裂中期制备染色体。结果显示穿卵率达 ８３８％ ，可分析精子染色体核型成功率为 ４２４％ 。认为这是一种有效制备牛精子染色体的方法，并对其影响因素进行了探讨。     

孕酮和雌二醇对绵羊精子体外获能的影响

试验探讨孕酮和雌二醇对绵羊精子体外获能和顶体反应的影响。将绵羊精子分别加到含不同浓度孕酮(1、10和100μmol/L)和雌二醇(1、10、和100μmol/L)的输卵管合成液(SOF)中,作用不同时间后分别取出部分精子样本进行金霉素荧光染色(chlortetracycline,CTC),通过精子与CTC结合染色的不同类型来评定孕酮和雌二醇对绵羊精子的作用。结果表明:雌二醇对绵羊精子体外获能和顶体反应都没有显著的促进作用(P>0.05);一定浓度的孕酮和雌激素组合抑制绵羊精子体外获能和顶体反应的发生(P<0.05)。     

猪精子获能、顶体反应及冷休克对顶体酶抑制剂的影响

为了探究猪精子在获能、顶体反应及冷休克处理后对精子顶体酶抑制剂表达量的影响,以及顶体酶抑制剂在精子中何时被降解,低温是否会损伤顶体酶抑制剂,利用SDS-PAGE、Western blot分析射精精子、获能精子、顶体反应精子和冷休克精子组的总蛋白种类及猪精子顶体酶抑制剂表达量的变化。结果显示:射精精子处理组与获能精子、顶体反应精子处理组的顶体酶抑制剂表达量差异显著(P<0.05),且获能和顶体反应处理组间的差异不明显(P>0.05);射精精子与冷休克精子处理组的顶体酶抑制剂表达量差异极显著(P<0.01),且冷休克处理组的顶体酶抑制剂出现异常表达。推测:精子在获能或顶体反应期间,顶体酶抑制剂可能通过泛素-蛋白酶体途径被降解,释放出有活性的顶体酶;低温可能导致顶体酶抑制剂蛋白结构的改变或损坏,导致其表达量异常。     

钙离子载体及咖啡因对绵羊精子获能的影响

通过添加不同浓度(0.05、0.1、0.2、0.5、1、5、10μmol/L)的钙离子载体(A23187,IA)及2 mmol/L咖啡因,探讨不同作用时间其对绵羊精子体外获能的影响。结果发现,IA浓度越高,精子的体外获能率越高,顶体反应率越低,活力越低,死精子就越多;而延长作用时间对获能、顶体反应的影响不明显。IA和咖啡因共同作用后,咖啡因能够促进IA诱导顶体反应的发生。建议用IA诱导绵羊精子获能时,其浓度以0.05~0.2μmol/L为宜,作用时间1 min。     

乳类动物精子的获能和顶体反应

介绍了在生殖过程中的2个重要的生理变化－获能和顶体反应，并综述了最近几年来在生殖生物学领域关于获能与顶体反应机制方面的最新成果，结果显示，cAMP,Ca^2 ，咖啡因等因素对精子获能有促进作用，ZP3，Ca^2 ,cAMP、肝素等因素对顶体反应有促进作用。所有研究成果表明，精子和获能和顶体反应与精了原生理变化有着密切关系。     

钙离子浓度对绵羊精子获能的影响

为探讨钙离子浓度对绵羊精子获能的影响,将绵羊精子在不同钙离子浓度的绵羊输卵管合成液（SOF液）中培养,并用钙离子载体A23187进行诱导。结果发现,不同钙离子浓度对绵羊精子的影响差别不明显,经A23187诱导后,1.7 mmol/L组和2 mmol/L组的顶体反应率（AR）与其他组有显著差异（P<0.05）,1.7 mmol/L浓度中,绵羊精子存活时间为16 h,2 mmol/L浓度中的存活时间为10 h,因此认为绵羊精子获能的适宜钙离子浓度为1.7 mmol/L,且获能过程中钙离子的存在是必要的。     

钙离子载体对牛精子体外受精及胚胎发育的影响

在牛精子获能液中添加不同浓度的钙离子载体,应用体外培养技术对牛精子体外获能及早期胚胎发育作了研究。通过对顶体反应、超激活、活率和早期胚胎发育率的观察,筛选出获能液中最适的钙离子载体浓度,作用时间及其有利于早期胚胎发育的最佳浓度。结果表明:钙离子载体在诱导牛精子获能上存在一个浓度-时间阈值,其最佳浓度和时间组合是0.1μM处理2min或者0.15μM处理0.5min,此时的囊胚率最高;钙离子载体的添加不能诱导牛精子获能的发生。     

鸡肝脏β—羟—β—甲戊二酸单酰辅酶A还原酶的提纯和性质

采用超速离心、热变性处理、硫酸铵沉淀和亲和层析方法，从鸡肝脏中分离提纯了β－羟－β－甲戊二酸单酰辅酶Ａ（ＨＭＧ－ＣｏＡ）还原酶。提纯倍数为２０９倍，比活力１８８．５Ｕ／ｍｇ，Ｋｍ值１．８×１０－４ｍｏｌ／Ｌ。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得分子量为３．２×１０４。温度对该酶活性影响较大，３７℃时活性最高。最适反应ｐＨ为７．２。甘氨酸在１０ｍｍｏｌ／Ｌ浓度以上时对该酶呈现明显抑制作用，ｌ－组氨酸、ｌ－精氨酸则无明显抑制作用。Ｚｎ２＋、Ｍｇ２＋、Ｃｕ２＋离子对该酶有明显抑制作用，Ｚｎ２＋在１．５ｍｍｏｌ／Ｌ、Ｃｕ２＋和Ｍｇ２＋在２．０ｍｍｏｌ／Ｌ浓度以上时抑制作用明显。中药山楂（ＣＨＳ）和决明子（ＣＨＺ）的水煎液对酶的抑制作用明显     

培养液中不同浓度肝素对蓝狐精子体外获能的影响

采用上游法分离优化精子,以mTyrod's液作为基础培养液检测培养液中不同质量浓度肝素对蓝狐精子体外获能的影响,试验设4个肝素质量浓度:0,10,20,50 μg/mL,38.5℃、5%C02培养箱进行孵育,获能培养时间为6h.利用考马斯亮蓝染色法检测精子顶体反应率,伊红-苯胺黑染色法检测活精子比率,观测法检测精子活力...     

葡萄糖在牛体外受精及胚胎发育中的影响

在牛精子获能液中添加不同浓度的葡萄糖,应用体外培养技术对牛精子体外获能及早期胚胎发育进行研究,通过观察顶体反应、超激活、活率和早期胚胎发育率,筛选出获能液中最适葡萄糖浓度及其有利于牛早期胚胎发育的最佳浓度.结果表明:葡萄糖是精子获能和维持超激活运动的主要能源物质,其代谢过程中产生的活性氧在牛精子体外获能、受精过程中起重要作用,高浓度(超过9.15 mM)葡萄糖有利于获能的完成;但是对早期胚胎发育不利,对早期胚胎发育来说其最适添加量为6.10 mM,此时的囊胚率最高.     

青海（黑）牦牛的血清钙指标分析

对１０６头青海黑牦牛的血清钙分析结果表明：①ＳＴＣａ、ＳＢＣａ和ＳＦＣａ％分别为２．５５±０．２２ｍ ｍｏｌ／Ｌ、０．９７±０．２５ｍ ｍｏｌ／Ｌ、１．６０±０．１６ｍｍｏｌ／Ｌ和３７．２２％。②ＳＴＣａ和ＳＦＣａ间，ＳＴＰ和ＳＢＣａ间，均呈极显著正相关（Ｐ〈０．０１），回归方程分别为ｙ＝－１．２５６１＋０．８７１９ｘ。     

谷胱甘肽对兔精液获能作用及获能相关基因表达的影响

笔者通过试验研究不同浓度还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)对精子获能的影响,以及与获能有关的关键基因在获能后相对表达量的差异。笔者在获能液中加入不同浓度GSH(0 mg/m L、5 mg/m L、10 mg/m L、15 mg/m L、20 mg/m L),并将其分别与精子悬液一同培养,以孕酮诱导顶体反应,通过涂片染色镜检得到顶体发生率;另外,试验中采用实时荧光定量PCR来得到获能相关基因蛋白激酶A催化亚单位β(PRKACB)和ACP6(acid phosphatase 6,lysophosphatidic)在获能后的表达。结果表明,获能液中添加GSH对兔精子获能有一定的影响。     

不同获能条件对猪精子体外获能和体外受精的影响

探讨猪精子在mTBM和TALP中分别获能2、3、4、5h和6h对体外获能的影响,并研究最适获能时间的精子体外受精的效果。结果表明:随着获能时间的延长,猪精子顶体反应率逐渐升高、质膜完整性逐渐下降,获能6h时的顶体反应率显著高于其他时间组,分别为52.5%和50.8%(P<0.05);质膜完整性显著低于其他时间组,分别为30.5%和31.4%(P<0.05);可获能4h的超激活运动率显著高于其他时间组,分别为56.6%和54.5%。将鲜精与冻融的精子获能4h后与成熟的猪卵母细胞进行体外受精,mTBM处理组的卵裂率显著高于TALP,分别为42.7%与40.2%和35.9%与33.4%,但鲜精与冷冻精液组间差异不显著。