ELISA法检测犬腹泻粪样中的犬冠状病毒

用ＦＥ细胞增殖犬冠状病毒（ＣＣＶ）参考株，分别免疫家兔和ＢＡＬＢ／ｃ小鼠制备ＣＣＶ多抗和单抗，建立了夹心ＥＬＩＳＡ及Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ诊断方法。在检测的８４例犬腹泻粪样中，多抗、单抗夹心法显示ＣＣＶ阳性１６例，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ阳性１３例，后１３例包括在前１６例中。从８４例腹泻犬粪样中随机取３８例作ＣＣＶ、犬细小病毒（ＣＰＶ）双项检测，ＣＣＶ阳性１６例，ＣＰＶ阳性６例，ＣＣＶ、ＣＰＶ混合感染４例。结果显示，在南京地区流行的犬腹泻中，ＣＣＶ感染比例有超过ＣＰＶ的趋势。     

ELISA双抗体夹心法诊断犬冠状病毒肠炎

从冠状病毒（ＣＣＶ）阳性病犬粪便提取物中提纯抗原，制备豚鼠抗血清，用饱和硫酸铵盐析法粗提，再经ＱＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ５０离子柱层析，提取ＩｇＧ，以辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记，制备酶标抗体，按ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法操作术式，建立检测犬冠状病毒的ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法，诊断犬冠状病毒肠炎粪样，并以电镜检查比较，证明该法特异、敏感，可在４小时内报告结果。     

快速检测鸡新城疫病毒的聚乙二醇单抗夹心ELISA试验的建立和应用

以抗鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）单抗夹心ＥＬＩＳＡ试验为基础，在６０００，建立了ＰＥＧ－ＥＬＩＳＡ法，使用此法检测临诊样品，与单抗夹心ＥＬＩＳＡ相比，时间缩短７０分钟且提高了ＯＤ４９０值，易于识别。结果表明，ＰＥＧ－ＥＬＩＳＡＩ法具有实际应用价值。ＰＥＧ能加强抗原－抗体反应的速率和强度，这种效应在固相夹心ＥＬＩＳＡ第二步表现尤其明显。ＰＥＧ的这种非特异性效应对于检测其它抗原或抗体的ＥＬＩＳＡ试验可能具有     

抗原捕捉ELISA与常规方法滴定IBDV的比较

作者建立了两种抗原捕捉酶联免疫吸附试验方法（多抗和单抗ＡＣ－ＥＬＩＳＡ），用于滴定用不同宿主系统增殖的传染性氏囊毒病，这些宿主系统包括ＢＧＭ－７０传代细胞系。鸡胚成纤维细胞和鸡法氏囊，两种检测方法都有较高的特异性，但是多克隆ＡＣ－ＥＬＩＳＡ比单克ＡＣ－ＥＬＩＳＡ更加敏感（Ｐ〈０．０５），结果还表明，滴定ＩＢＤＶ抗原的常规方法（细胞培养物和鸡胚）比多抗ＡＣ－ＥＬＩＳＡ更敏感。     

单抗—ELISA一步法检测兔粪样中的轮状病毒

用单抗２Ｂ４包被ＥＬＩＳＡ微孔反应板，将处理后的粪样和酶标兔抗ＬａＲＶＩｇＧ同时加入包被孔内孵育，置微型振荡器上振摇，建立了检测粪样中兔轮状病毒抗原的单抗－ＥＬＩＳＡ一步法快速诊断技术，与常规ＥＬＩＳＡ，病毒分离培养，电镜，荧光抗体等作了实验室和临床应用比较，结果证明单抗－ＥＬＩＳＡ－一步法第三特异，快速，简便１，适于基层临床推广应用。     

ABC—Dot—ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒

建立了ＡＢＣ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）的方法,其最佳反应条件是：包被液为０．０５ｍｏｌ／ＬｐＨ９．６的碳酸钠－碳酸氢钠缓冲液（ＣＢＳ）,免疫ＩＢＶ ＩｇＧ的最佳工作浓度为１：８０;抗原的最佳浓度为１：８００;封闭剂选用０．０１ｍｏｌ／Ｌ ｐＨ７．４含３０ｍＬ／Ｌ白明胶的ＰＢＳ,Ｂ－ＡｇＧ和ＡＢＣ－ＨＥＰ的最佳工作浓度为１：２００。用ＡＢＣ－ＨＥＰ的最佳工作浓度为１：２０     

间接Dot－ELISA检测猪细小病毒抗原的研究

本文成功地建立了间接斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）用于检测ＰＰＶ抗原对纯化ＰＰＶ抗原的最低检出量为２．５ｎｇ／点。ＰＰＶ阳性猪血清的特异性阻断试验及交叉反应试验证明，该方法对ＰＰＶ抗原的检测具有特异性。以该方法检测ＰＰＶ人工感染兔样本和自然染猪样本，ＰＰＶ抗原的阳性检出率分别为肾样本１００％（１７／１７）、８１．８２％（９１／１１），肝样本１００％（１６／１６）、５６．５２％（１３／２３）。２０份随机样本的间接Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测结果与病毒分离和鉴定结果相符。     

用抗传染性氏囊病毒单克隆抗体建立夹心阻断ELISA检测鸡血清抗体及 …

用酶标记抗传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体，建立夹心阻断ＥＬＩＳＡ，检测ＩＢＤＶ鸡血清抗体。用Ｄ７８细胞毒免疫２４日龄的雏鸡，每周采血一次，共４次，用夹心阻断ＥＬＩＳＡ、微量细胞中和试验（ＶＮ）、琼脂扩散试验（ＮＧＰ）检测鸡血清抗体，结果表明：夹心阻断ＥＬＩＳＡ同ＶＮ之间具有较高的相关性（ｒ＝０．８１２６），与ＡＧＰ的相关性较低（ｒ＝０Ｘ．７５７５）。     

RT—PCR与夹心ELISA检测粪便及饲料中IBDV的研究

将ＩＢＤ病鸡粪便及饲料经ＰＥＧ浓缩处理后用ＲＴＰＣＲ与单克隆抗体夹心ＥＬＩＳＡ进行ＩＢＤＶ检测。在ＲＴＰＣＲ试验中，粪便和饲料的阳性检出率均为１００％（８／８）；在夹心ＥＬＩＳＡ试验中，粪便的阳性检出率为１００％（８／８），而在饲料中末检出ＩＢＤＶ（８／８％。试验结果证明，ＲＴＰＣＲ是ＩＢＤＶ流行病学特别是传播途径研究的首选方法。     

应用Dot—ELISA检测鸡白血病病毒群特异性抗体

利用斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）的基本原理,根据蛋清可以直接吸附在硝酸纤维素（ＮＣ）膜上的特点,建立了Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测鸡白血病病毒（ＡＬＶ）群特异性抗原的方法,并与双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ）进行比较,两种方法具有相同的特异性和敏感性。     

用ELISA法检测犬细小病毒抗体

本文采用吸附豚鼠犬细小病毒（ＣＰＶ）多克隆抗体的微量板，进行间接酶免疫测定（ＥＬＩＳＡ）检测犬血清中的ＣＰＶ抗体。结果，ＥＬＩＳＡ抗体效价比血凝抑制抗体（ＨＩ）效价高，与ＨＩ效价的相关系数ｒ＝０．７８。     

逆转录—聚合酶链反应（RT—PCR）检测轮状病毒

为了给轮状病毒感染的诊断和流行病学研究提供更为敏感和可靠的手段,选取Ａ组轮状病毒ＶＰ７基因上的２段高度保守序列作为引物,在优化逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）条件的基础上,建立了检测轮状病毒的ＲＴ－ＰＣＲ方法。通过对比试验,确定了ＰＣＲ的最优模式：９４℃变性１ｍｉｎ→５５℃退火１ｍｉｎ→７２℃延伸２ｍｉｎ,３０个循环后再在７２℃下延伸１０ｍｉｎ。用此模式进行了ＲＴ－ＰＣＲ的特异性和敏感性试验。检测的６株轮状病毒分离株（牛ＨＮ－７、ＢＲＶ００７、ＢＲＶ０１４、ＢＲＶ６５５５、猪Ｌｉ９９、Ｎａｎ８６）及２株参考株（牛ＮＣＤＶ、猴ＳＡ１１）,都能扩增出唯一的３４２ｂｐ的目的条带;对猪流行性腹泻病毒（ＰＥＤＶ）及传染性胃肠炎病毒（ＴＧＥＶ）感染猪的粪样、正常ＭＡ１０４细胞检测结果均呈阴性;检测的敏感度可达１ｐｇ水平。对４０份猪、牛、兔的腹泻粪样检测,３０份呈阳性,而用作平行对照的夹心ＥＬＩＳＡ法检测,有２５份呈阳性,两者符合率为８７．５％。两法检测不符的５份粪样的ＰＣＲ扩增产物,用地高辛标记探针进行了斑点杂交,结果均呈阳性,表明ＲＴ－ＰＣＲ法比ＥＬＩＳＡ法敏感性高。     

VP7—ELISA检测牛,羊血清蓝舌病抗体的研究Ⅱ应用VP7—ELISA检 …

蓝舌病ＶＰ７抗原包被板在－２０℃保存期为６个月,４℃保存１个月。抗原批内重复性试验ＣＶ＜１０％,批间重复性试验ＣＶ＜１０％。ＶＰ７－ＥＬＩＳＡ与ＡＧＩＤ对４２０份血清平行检测结果：ＶＰ７－ＥＬＩＳＡ较ＡＧＩＤ试验多检出了１３份阳性样品,ＶＰ７－ＥＬＩＳＡ检出的阳性样品对ＡＧＩＤ阳性样品的覆盖率为９７．４％,对采自陕西等省１８１６份牛、羊血清样品进行检测,检出阳性样品数为２５７份,阳性检出率为１４．     

双抗体夹心ELISA检测牛病毒性腹泻病毒的研究

建立了从粪便中检测牛病毒性腹泻（ＢＶＤ）病毒抗原的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ。试验方法的最佳工作条件为，抗体包被量为１００μｇ／孔，酶标抗体的浓度为１：４００。对不同地区牛、羊、鹿粪样检测结果，牛的ＢＶＤＶ感染率为１６．５％￣８９．０％，羊为１４．６％￣８３．３％，鹿为１９．６％￣４４．４％，并且从许多地区的牛、羊同时检测到ＢＶＤＶ，表明本病在国内某些地区存在着严重的感染。     

用ELISA和PCR对猪,牛血清中HBV抗原,抗体及DNA的检测

用三个家生产的乙型肝炎（ＨＢ）ＥＬＩＳＡ试剂盒及聚合酶反应（ＰＣＲ）对牛、猪和羊血清分别进行了乙型肝炎病毒抗原（ＨＢＶ－Ａｇ）、抗体（Ａｎｔｉ－ＨＢＶ－Ａｂ）及ＤＮＡ的检测。ＥＬＩＳＡ共检出阳性牛血清１３份（１３／１３６），其中ＨＢ４Ａｇ阳性８份，ＨＢｅＡｇ阳性５份；阳性猪血清４份（４／３６），其中有ＨＢｅＡｇ阳性３份，ＨＢｅＡｇ阳性１份。全部阳性血清和部分阴性血清共１２０份经用ＰＣＲ检测ＨＢＶＤ     

双抗夹心——ELISA诊断兔隐孢子虫病初步研究

本文报道了应用双抗夹心－ＥＬＩＳＡ检测兔粪便中隐孢子虫卵囊抗原方法的建立，试验所用抗体为抗小球隐孢子虫（Ｃ．ｐａｒｖｕｍ）卵囊壁的单克隆抗体，经过２０头份兔粪便样本分别进行抗酸染色和双抗夹心－ＥＬＩＳＡ试验，结果抗酸染色法检出８份有隐孢子虫卵囊，而ＥＬＩＳＡ法除对抗酸染色阳性的８份粪样判为阳性外，还对抗酸染色阴性外，还对抗酸染色阴性的１份粪样判为阳性，并不与兔球虫粪便发生类属反应，此外，本试验还在     

斑点酶联免疫吸附试验检测牛羊捻转血矛线虫病的研究

应用斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测牛羊捻转血矛线虫病抗体，经对３９头剖检羊血纸检测，结果表明该法与剖检法的阳性符合率达１００％（２７／２７），阴性符合率也达１００％（１２／１２）。Ｄｏｔ＝ＥＬＩＳＡ能检出第四胃寄生１＝３３８条捻转血矛线虫羊的血清或血纸抗体；应用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ对５９９份牛、羊血纸的测定结果，与粪检地的阳性符合率达９５．５８％，阴性符合率达９１．４３％。初步认为Ｄ     

应用单抗间接ELISA检测兔出血症病毒的研究

建立了用于检测脏器组织中兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）抗原的单抗间接ＥＬＩＳＡ法，并与血凝试验（ＨＡＴ）和多克降双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法进行比较，在被检的７８９份样品中，种方法检测结果皆为阴性的有５５１份，皆为阳性者１７３份；单抗间接ＥＬＩＳＡ和多克隆双体夹心ＥＬＩＳＡ均为阳性者３１份；公多克隆双抗体夹心ＥＬＩＳ为阳性者３１份；仅ＨＡＴ为阳性者２份；仅单抗间接ＥＬＩＳＡ为阳性者１份。实验结果证实，单抗间接     

非洲猪瘟间接ELISA诊断试剂盒的研究

用带有编码非洲猪瘟病毒衣壳蛋白Ｐ７２ 基因的重组杆状病毒（Ｂａｃｐ７２）作载体,在ｓｆ９细胞中表达并得到重组Ｐ７２蛋白,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ可得到分子量在 ７２ｋＤａ左右的电泳带。用标准阳性非洲猪瘟血清对 Ｐ７２蛋白进行 ＥＬＩＳＡ检测,证明该蛋白具有生物学活性。用Ｐ７２作为间接法的包被抗原,对ＥＬＩＳＡ反应条件进行了优化。确定最佳包被液为ＰＢＳ（ｐＨ７．２）、最佳封闭液为１％ＰＣＴ、最佳血清稀释液为４％ＰＥＧ６０００／ＰＢＳ、最佳冲洗液为０．５Ｍ ＮａＣｌ／０．５％Ｔｗｅｅｎ－２０／ＰＢＳ（ｐＨ７．２）。本实验反应体系采用５０μｌ的微量法,可节约试剂及抗原。反应在２小时内即可完成,达到了快速诊断的目的。包被了抗原并用封闭液封闭后的酶标板密封后保存于－２０℃的冰箱中,至少可以保存５个月。阻断试验和交叉试验表明ＥＬＩＳＡ法有良好的特异性。间接ＥＬＩＳＡ比Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法具有更高的灵敏性。血清学调查没有得到阳性结果,与我国实际情况相符。用Ｂａｃｐ７２表达的非洲猪瘟病毒Ｐ７２蛋白抗原作为间接ＥＬＩＳＡ的检测抗原来检测非洲猪瘟血清具有快速、简单、无感染的特点。本实验为非洲猪瘟ＥＬＩＳＡ检测试剂盒的最终组装提供了实验依据。     

应用Dot－ELISA快速检测传染性法氏囊病病毒

本文成功建立了斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ），应用于传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）的快速检测。该方法操作简便快速、特异性好、灵敏度高。同时对深圳某鸡场发生ＩＢＤ病料进行了病毒分离，用Ｄｏｒ－ＥＬＩＳＡ检测接种鸡胚的绒毛尿囊膜裂解上清呈强阳性反应。