旋毛虫各隔离种快速诊断方法的研究

提取４个旋毛虫隔离种的ＤＮＡ，应用Ｊｅａｎ设计的引物序列进行了ＰＣＲ扩增。结果黑龙江猪旋毛虫和Ｔ．ｓｐｉｒａｌｉｓ均显示出家畜型旋毛虫特异的６０２ｂｐ目的ＤＮＡ基因片段，而犬旋毛虫和Ｔ．ｎａｔｉｖａ未见此片段。扩增结果显示，黑龙江猪旋毛虫相当于Ｔ．ｓｐｉｒａｌｉｓ，犬旋毛虫相当于Ｔ．ｎａｔｉｖａ。     

应用特异性引物检测中国不同地区旋毛虫DNA

根据Ｊｅａｎ－Ｄｕｐｏｕｙ－Ｃａｍｅｒ所报道１．７ｋｂ基因序列而设计合成的引物,对中国九个地区的旋毛虫株的肌组织旋毛虫ＤＮＡ进行了聚合酶链反应（ＰＣＲ）。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分析,可见中国猪源旋毛虫均扩增出特异性的６０２ｂｐ和２３０ｂｐ大小的ＤＮＡ条带,而中国犬源和猫源以及正常对照肌组织ＤＮＡ均未扩增出特异性片段。本法对中国猪源旋毛虫可检测到０．０２条旋毛虫ＤＮＡ,具有高度的特异性和敏感性。     

中国旋毛虫形态度量学分析

旋毛形线虫（Trichinella,spiralisowen1855）简称旋毛虫。其种属的分类学问题,较为复杂[1,2]。目前尚无统一的分类标准。形态是物种的重要的外部特征,也是物种分类的重要参数[3]。本文收集了中国八个地区,来源于不同宿主的旋毛虫虫株,进行了形态度量学分析,以期为中国旋毛虫种株的分类提供依据。1材料和方法1．1旋毛虫虫株的来源哈尔滨海伦猪株、哈尔滨五常犬株（来源于哈尔滨东北农学院寄生虫教研室）、长春犬株、沈阳猪株、云南大理猪株、湖北十堰猪株（来源于中国医科大学寄生虫教研室）、西安猪株（来源于兰州兽医研究所）、河…     

中国旋毛虫形态度量学分析

对来自中国８个地区的猪、犬源旋毛虫（哈尔滨海伦猪株、哈尔滨五常犬株、长春犬株、沈阳猪株、河南南阳猪株、湖北十堰猪株、西安猪株、云南大理猪株）,系统测量了其不同发育阶段,包括包囊、肌幼虫、成虫（、♀）的长度、宽度,包囊形态学指数,肌幼虫和成虫体部大小。旋毛虫各发育阶段之间形态学变化缺乏规律性,表现在包囊大,幼虫和成虫不一定大,反之亦然;各地虫株长宽度间虽然也有差异,但也缺乏一定的规律性。因此,旋毛虫形态学在种株分类研究中不能作为依据。     

旋毛虫不同株同工酶比较的研究

本文对７株旋毛虫６种同工酶进行了分析比较，各株旋毛虫原始虫科分别来自哈尔滨，长春，天津，河南邓县，新野，云南保山及西安。除长春株畜主为犬外，其余均为猪。采用ＩＥＦ电泳，分别显示６种酶：ＧＰＩ，ＰＧＭ，Ｇ６ＰＤＨ，ＭＤＨ，ＡＬＡＴ及ＡＳＡＴ。结果长春犬株与哈尔滨猪株在ＧＰＩ，ＰＧＭ，Ｇ６ＰＤＨ，ＭＤＨ，ＡＳＡＴ５种酶的同工酶谱均有差异。同工酶分析及长春犬与哈尔滨猪株在其它生物学特征方面的差异提示它们     

聚合酶链反应检测猪细小病毒的研究

本研究成功地建立了检测猪细小病毒（ＰＰＶ）的聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术。以１６个核苷酸引物对首次完成了ＰＰＶＤＮＡ结构蛋白ＶＰ１编码区２２８ｂｐ片段的扩增。同样数目的另一引物对，也成功扩增了Ｖｐ２编码区１５８ｂｐＤＮＡ片段。ＰＰＶＢＭ－１株与其它国内分离株（广西株、天津株和哈尔滨株）均出现相同扩增结果。琼脂糖凝胶电泳显示了特异条带（ＶＰ１２２８ｂｐ．Ｖｐ２１５８ｂｐ），而伪狂犬病病毒、犬细小病毒均未扩增，表明了本方法的特异性。同时，限制性内切酶分析（Ｖｐ１２２８ｂｐ及Ｖｐ２１５８ｂｐ分别含单一ＰｖｕⅡ、ＥｃｏＲⅠ位点），也证实了特异性。本方法敏感性高，可检出１０ｆｇ模板ＤＮＡ。既可作样品的快速检测，又能检查细胞系的污染。具有特异、简便、快速的优点。     

七株旋毛虫几项生物学特性的比较研究

对采自我国哈尔滨、长春、天津、西安、河南邓县、新野及云南保山的７株旋毛虫的成虫形态及幼虫在肌组织中寄生、成囊等作了比较研究。原始虫株除长春株采自犬外，其余６林原始宿主均为猪。虫株用大白鼠及小白鼠继代。结果表明，７个虫株在光镜形态学上无差异，但长春犬株３日龄及７日龄成虫的大小明显小于其它６个虫株，对小白鼠的感染性较低，幼虫卷曲、成囊均较晚，而且幼虫有钙化、死亡现象。     

旋毛虫各隔离种对低温耐受性的研究

用来自哈尔滨地区猪、犬体内的旋毛虫和国际标准虫株旋毛形线虫（Trichinella spiralis)、本地毛形线虫（Trichinella nativa)同时感染猪，在－22℃和－32℃条件下对感染了各旋毛虫的猪肉进行冷冻性试验，结果表明：哈尔滨地区猪旋毛虫和T.spiralis不耐低温，－32℃冷冻12h，－22℃冷冻48h全部死亡；而犬旋毛和T.nativa对低温抵抗力较强，－32℃、72h，－22℃、168h才全部死亡。     

东北地区4株猪、犬旋毛虫间及与国际标准虫株间的杂交试

为了给中国旋毛虫虫株的分类提供依据,将分离自中国东北地区的4株猪、犬源旋毛虫虫株(猪2,犬2)分别接种于小鼠,按常规分离出肌幼虫,纯化后,设8个杂交试验组,将每2个虫株的雌、雄幼虫体各5条混合,以食管灌注法接种于小鼠,42 d后扑杀,消化、集虫、计数回收肌幼虫数.同法进行了哈尔滨猪株、犬株与国际标准虫株Trichinella spiralis(T.s)、T.nativa(T.na)之间的杂交试验.结果:猪株间、犬株间杂交结果与对照无差异(P>0.05),而猪、犬株间杂交结果与对照差异极显著(P<0.01);哈尔滨猪株与T.s、犬株与T.na杂交结果与对照无差异(P>0.05),而猪株与T.na、犬株与T.s杂交结果与T.s对照差异极显著(P<0.01),表明哈尔滨猪源旋毛虫为T.s,犬源旋毛虫为T.na.     

旋毛虫感染猪肉的冷冻无害化实验报告

用哈尔滨地区猪、犬旋毛虫人工感染猪，在－22℃和－32℃对感染不同旋毛虫的猪肉进行冷冻无害化处理实验。结果表明：感染猪旋毛虫的肉样的中心温度达到－32℃经过12h，或－22℃经过48h，旋毛虫即失去活性；感染犬旋毛虫的肉样中心温度达到－32℃经过72h，或－22℃经过168h，旋毛虫失去活性。