动物转基因的技术及其应用

动物转基因的技术及其应用韦平广西农业大学５３０００５转基因动物（Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃａｎｉｍａｌ）是体内细胞带有外源基因的动物。整入动物基因组的外源基因则称为转基因（Ｔｒａｎｓｇｅｎｅ）。严格地讲，只有部分组织细胞的基因组整合有外源基因的动物，称嵌合...     

转基因动物研究进展

转基因动物研究进展杜坚广西兽医研究所５３０００１转基因动物（Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃａｎｉｍａｌ）是以实验方法导入外源基因，在染色体组内稳定整合，并能遗传给后代的一类动物。利用这种方法，人们可以建立转基因动物模型，以研究外源基因在整体动物中的表达调控规律...     

核基质附着区(MAR)调控的人胰岛素样生长因子(hIGF-1)转基因兔的制备

用ＥｃｏＲＩ＋ＨｉｎｄⅢ双酶解含鸡α－珠蛋白基因５′端核基质附着区（ＭＡＲ）、小鼠金属硫蛋白基因启动子（ＭＴ－１）和人胰岛素样生长因子－１（ｈＩＧＦ－１）基因的ｐＭＴＳＭＣＡＧ质粒，０．６％琼脂糖凝胶电泳，玻璃乳回收纯化ＭＡＲ／ＭＴ／ｈＩＧＦ－１片段（３．９ｋｂ），用该片段制备转基因兔。利用水平显微注射系统注射１－细胞兔胚胎４６８枚，移植到３６只受体兔，有８只妊娠，共产下１９只活仔兔。采仔兔耳样提取基因组ＤＮＡ，应用ＰＣＲ技术分析其外源基因整合情况，获得８只阳性兔（显示出约６００ｂｐ外源ＤＮＡ条带）。再对８只阳性兔的ＰＣＲ产物进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，得到５只整合有ＭＡＲ／ＭＴ／ｈＩＧＦ－１外源基因的转基因兔，转基因整合率为２６．３％（５／１９）。用１只阳性转基因公兔（５０２号）繁殖了６窝，共获得４２只仔兔。采仔兔耳样提取基因组ＤＮＡ后，如上用ＰＣＲ分析和做Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，Ｆ１代中有５只整合有ＭＡＲ／ＭＴ／ｈＩＧＦ－１融合基因。     

快速生长转基因鲤鱼完成中试

专家们对“快速生长转基因鲤鱼的中试研究”进行了成果鉴定。筛选获得快速生长的转“全鱼”生长激素基因黄河鲤鱼核心群200尾,其生长速度比对照鱼快140％以上。转基因鱼怀卵量略低于普通黄河鲤鱼,受精率和孵化率与对照鱼无显著差异,转“全鱼”生长激素基因黄河鲤鱼具备大规模苗种繁育生产能力;转“全鱼”生长激素基因鲤鱼F1代的大规模养殖不仅增产,而且可降低养殖成本,并为转基因鱼的进一步选育提供材料;转“全鱼”生长激素基因三倍体鱼平均体     

转移抗猪瘟病毒核酶基因兔的研究

采用显微注射法，将构建的绵羊金属疏因（ｏＭＴ）基因启动子与抗猪瘟病毒核酶（ＨＣＶ－Ｒｉｂｏｚｙｍｅ．ＨＲ）基因融合的质粒ｐＭＨＲ＿（３２）线性ＤＮＡ分子约２００～４００个基因拷贝导入兔原核胚的雄原核中，１５９枚导入基因胚移植给９只受体兔，产仔２２只，移植成活率为１３．８％。２２只仔兔经聚合酶链式反应（ＰＣＲ）和核酸探针杂交检测，６只体内整合有外源目的基因，整合率为２７．３％。再用１００个半数反应量（ＲＩＤ＿（５０））的猪瘟病毒Ｃ系兔化弱毒兔体攻毒，４只外源基因整合的实验兔能完全或部分抵抗ＨＣＶ弱毒攻击，不产生或无明显发热反应；而对照兔和６只ＨＲ基因未整合的实验兔不能抵抗ＨＣＶ弱毒攻击，出现特征性的稽留热型。逆转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和ＲＮＡ探针杂交检测４只转基因兔，两只肝中表达出ｏＭＴ－ＨＲｍＲＮＡ。认为微注射导入的外源ＨＲ基因在兔体内得到了整合和表达     

用转染的胎儿成纤维细胞进行核移植产生表达人IX因子的转基因羊

自从１９８５年建立转基因方法以来，将外源性ＤＮＡ注射到受精卵的原核内是唯一可行的产生转基因家畜的方法。然而，仅有少部分动物（约５％）把注入的外源ＤＮＡ整合入基因组中。另外，由于整合时间和整合位点是随机的，许多转基因系不能高效表达外源基因或外源基因不能...     

精子载体法获得转人her2基因猪

将带有外源基因的载体酶切纯化后与去精清的猪新鲜精液按比例混合，17℃静置处理使外源DNA进入精子头部，通过人工授精使受体母猪怀孕后产下20头仔猪，经PCR特异性片段扩增，特异片段序列测定和比对，共4头PCR结果为阳性。初步证明人her2基因已在猪染色体上整合，其整合率约为20％。本研究利用精子载体法成功获得了转基因阳性猪，为大动物的转基因研究提供了理论与实践的参考。     

转基因动物研究进展

Ｇｏｒｄｏｎ等（１９８０）将重组ＤＮＡ用显微注射法导入小鼠受精卵原核，首次获得了整合有外源基因的转基因小鼠，此后的十几年中，建立了许多整合有外源基因的转基因小鼠和大鼠、转基因兔、猪、羊、牛，使得转基因动物这一技术在基础研究和实际应用方面展示出良好的前...     

外源基因在甲醇酵母Pichia pastoris中的表达策略

甲醇酵母 Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ表达系统是近几年发展起来的一个真核表达系统,在其乙醇氧化酶 ＡＯＸ１基因启动子的控制下,某些外源基因（如 ＴＮＦ、ＥＧＦ等）的表达量可达克每升以上。虽然该系统是一种优良的表达系统,但有许多因素影响外源基因在其中的表达,包括外源基因的拷贝数及整合到酵母染色体的位置和方式、ｍＲＮＡ的５’和３’非翻译区（ＵＴＲ）、转录起始密码子的上下文、外源基因Ａ＋Ｔ的组成与转录和翻译的阻断、密码子的偏爱性、信号肽的特性、产物的稳定性、宿主菌的生理特性、培养基成分和培养条件等。在应用该表达系统过程中,这些因素都需加以考虑。本文将就这些因素作一概述和讨论,以有利于提高外原基因在该系统中的表达水平。     

家蚕sch基因的导入对杂交后代孵化蚕性别的控制

以家蚕ｓｃｈ基因为选择性标志基因，将温敏性特性导入蚕品种７８２内，育成７８２Ｓ赤系，７８２Ｓ黑系。并以７８２Ｓ赤系Ｆ４、７８２Ｓ黑系Ｆ４和（黑蚁雌×ｓｃｈ雄）Ｆ１为材料，分设３０℃ＲＨ　６０％恒温催青和催青前期常规条件己４胚子期４２℃处理２ｄ这两种处理。结果表明，杂交后代带有ｓｃｈ基因的雌性和ｓｃｈ基因的雄性纯合体，胚胎期均表现对高温干燥的敏感性，而不带ｓｃｈ基因的个体则不表现敏感性。说明ｓｃｈ基因与高温干燥敏感性存在着密切关系，可以用ｓｃｈ为标志基因将温敏性性状导入其他实用品种，达到控制孵化蚕的性别的目的。     

氨基酸微量元素螯合物对异育银鲫生长及其品质的影响

试验研究了氨基酸微量元素螯合物对异育银鲫生长及其品质的影响。结果表明,①氨基酸微量元素螯合物替代无机微量元素能显著促进异育银鲫生长,提高饲料利用效率,其中,以65%替代无机微量元素的促生长效果最好,饲料利用效率最高,日特定生长率和饲料利用效率分别增加25.37%和26.32%。②用氨基酸微量元素螯合物替代无机微量元素后,鱼体水分、灰分含量无显著差异,以65%替代无机微量元素后,鱼体蛋白含量提高1.75%;鱼体脂肪含量在35%、50%、65%替代无机微量元素后,均有增加。③氨基酸微量元素螯合物35%、50%、65%替代无机微量元素,对鱼体肥满度没有产生影响,但内脏比均增加。④氨基酸微量元素螯合物以35%、50%、65%替代无机微量元素后,提高了成活率、降低了养殖饲料成本。⑤在氨基酸微量元素螯合物基础上再添加黄霉素,具有更好的促生长效果和更高的饲料利用效率。     

鲫鱼鳃中沙门氏菌的分离与鉴定

应用常规细菌分离对西宁市某市场60份鲫鱼鳃样品进行了沙门氏菌的分离与鉴定。结果显示,在60份鲫鱼鳃样品中共检出沙门氏菌阳性菌株13份,阳性率21．7％（13／60）。表明：此批鲫鱼鳃样品污染沙门氏菌的情况比较严重,应该引起有关部门和消费者的重视。     

Cytochemical characterization of peripheral blood cell populations of two Cyprinidae,Carassius auratus and Ctenopharyngodon idellus

Fish are the most diverse species of all vertebrate groups, and their blood cells have shown variable characteristics in terms of morphology. Cytochemical staining for enzyme activity in blood leukocytes will help assess the immune function of fish. We characterize blood cells from crucian carp (Carassius auratus) and grass carp (Ctenopharyngodon idellus) by using a Diff‐Quick stain as well as different cytochemical methods. Blood specimens obtained from crucian carp and grass carp were evaluated after cytochemical staining for acid phosphatase (ACP), alkaline phosphatase (ALP), naphthol AS chloroacetate esterase (AS‐DNCE), naphthyl acetate esterase (NAE), α‐naphthyl butyrate esterase (NBE), peroxidase (MPO) and periodic acid–Schiff's reaction (PAS) using commercial kits. Blood cell types were evaluated based on their morphological characteristics and the presence or absence of specific chromogen. The expression pattern of enzymes was similar between the two Cyprinidae and was also broadly consistent with other fish species. However, there were some interesting differences detected between crucian carp and grass carp, including naphthol AS chloroacetate esterase activity in monocytes, peroxidase activity and location in thrombocytes. The ACP, ALP and MPO expressions of different leukocytes of the two Cyprinidae were evaluated by Image Pro Plus and were analysed for statistical significant differences. This investigation provides basic haematology and enzyme activity analyses for crucian carp and grass carp and serves as an approach to evaluating the immune response of fish.     

复合酶制剂对异育银鲫生长和饲料表观消化率的影响

选择360条体重6.71g左右的健康异育银鲫研究在基础饲料中分别添加0、100、200mg/kg和400mg/kg的复合酶制剂对异育银鲫生长和营养物质表观消化率的影响。试验期为56d。试验结果表明,添加200mg/kg复合酶制剂组异育银鲫的增重率和特定生长率最大,显著高于对照(P<0.05);且该组异育银鲫对饲料粗蛋白质、磷及能量表观消化率最高,饲料系数最低,显著低于对照组(P<0.05)。说明添加200mg/kg复合酶制剂可显著提高异育银鲫对饲料的表观消化率,促进异育银鲫的生长,同时有效降低饲料系数。     

黄霉素对异育银鲫生长和粗蛋白质消化率影响

试验一采用平均体重为6.5g的异育银鲫鱼种315尾,在基础饲料(对照组)中分别添加4、8m g/kg黄霉素,经饲养21d后,各组异育银鲫增重率分别为49.4%、53.1%、56.9%,其中添加8m g/kg黄霉素显著提高了增重率(P<0.05);试验二采用平均体重为100g的鲫鱼45尾,以三氧化二铬作指示剂进行消化试验,各组干物质消化率分别为64.4%、66.8%、66.5%,粗蛋白质消化率分别为79.5%、82.5%、83.3%,添加4、8m g/kg黄霉素均显著提高了粗蛋白质消化率(P<0.05),有提高干物质消化率的趋势(P<0.10)。     

投饲蚕豆对异育银鲫生长、肉质及肠道蛋白酶活力的影响

分别以配合饲料、浸泡蚕豆和发芽蚕豆饲喂平均体重23.7 g的异育鲫鱼(Allogynogenetic crucian carp),观察对其生长性能、肌肉品质和前肠蛋白酶活力的影响。经44 d养殖实验后,配合饲料组,浸泡蚕豆组和发芽蚕豆组的鱼体增重率分别为95.64%、33.54%和42.62%,饵料系数为1.97、5.09和4.15,投饲蚕豆显著降低了异育银鲫的增重率,提高了饵料系数(P<0.01);对肉质的分析表明,浸泡蚕豆组和发芽蚕豆组的肌肉失水率,肌原纤维耐折力和肌纤维直径显著提高(P<0.01),肌肉粗脂肪含量由1.92%(配合饲料组)降至1.05%和1.14%(P<0.01)。对肠道蛋白酶活力的分析表明,投饲蚕豆显著降低了前肠蛋白酶的活性(P<0.01)。上述研究表明,饲喂蚕豆可改善异育银鲫的肉质,但对其生长有抑制作用。     

三味中药水煎液单用及联用对鲫鱼免疫保护作用的研究

试验旨在探讨黄芪、地榆、五倍子三味中药水煎液单用及联用对鲫鱼的免疫保护作用.选取200尾鲫鱼,随机为5组,每组40尾.对照组鲫鱼饲喂基础饵料,试验组鲫鱼饲喂中药包被的饵料,黄芪、地榆、五倍子、联用浓度分别为2.500、2.500、1.250、0.625 g/mL,中药水煎液与饵料按1∶1比例混合,对鲫鱼进行定时定量饲喂...     

Comparative pharmacokinetics and tissue distribution of quinocetone in crucian carp (Carassius auratus), common carp (Cyprinus carpio L.), and grass carp (Ctenopharyngodon idella) following the same experimental conditions

The pharmacokinetics and tissue distribution of quinocetone (QCT) in crucian carp (Carassius auratus), common carp (Cyprinus carpio L.), and grass carp (Ctenopharyngodon idella) were compared after oral administration of QCT (50 mg/kg body weight) at water temperature of 24 ± 1 °C. Similar QCT plasma concentration–time profiles were found in the three species of cyprinid fish at the same dosage regimen and water temperature, which were all fitted two‐compartment open pharmacokinetic model. However, different pharmacokinetic parameters were observed in crucian carp, common carp, and grass carp. The absorption rate constants (K_a) of QCT were 1.65, 1.40 and 1.74/h, respectively and absorption half‐lives (t_1/2kα) were 0.42, 0.49, and 0.40/h, respectively. The distribution half‐life (t_1/2α) was 2.83, 0.67, and 0.88 h, respectively, and elimination half‐lives (t_1/2β) of QCT were 133.97, 63.55, and 40.76 h, respectively. The maximum concentrations (C_max) of QCT in plasma were 0.315, 0.182, and 0.139 μg/mL and the time to peak concentrations (T_p) were 1.45, 0.96, and 1.08 h, respectively. The area under the plasma concentration‐time curves (AUC) were 12.35, 5.99, and 4.52 μg·h/mL, respectively. The distribution volumes (V_d/F) of QCT were calculated as 117.81, 128.71, and 220.10 L/kg, respectively. The tissue analysis showed that a similar regularity was obtained in the three species of cyprinids with a single dose of 50 mg/kg body weight after oral administration at the same water temperature. The tissue concentration of QCT in each fish was in order of liver>kidney>muscle, while the residues of QCT in the three species of cyprinid fish were in order of crucian carp>common carp>grass carp.     

外源酶对异育银鲫鱼种生长及表观消化率的影响研究

均重60.0g的异育银鲫鱼种300尾随机分为5组,即Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组,每组设3个重复。Ⅰ为对照组,饲喂基础日粮,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ为试验组,分别在基础日粮中添加复合酶制剂250、500、750、1000mg/kg,饲喂60d。试验结果表明:添加外源酶能有效地改善异育银鲫对干物质、蛋白质及磷的消化吸收,其中以对改善磷的利用率最显著,以添加500～750mg/kg为佳,但超过750mg/kg时消化率有下降趋势;在异育银鲫饲料中添加500～750mg/kg外源酶制剂显著促进了异育银鲫的生长。而过量添加时,外源酶则会抑制异育银鲫生长。     

蚯蚓粪营养组成及其对异育银鲫增重率的影响

本试验将120尾异育银鲫随机分成2组:对照组投喂基础日粮,试验组在基础日粮中添加5%蚯蚓粪。连续投喂60d后,测定蚯蚓粪营养成分、氨基酸含量及鱼体增重率。结果表明,蚯蚓粪中含水分22.6%、粗蛋白质12.44%、粗脂肪0.86%、灰分35.88%、碳水化合物27.74%、总氨基酸6.06%、必需氨基酸为2.48%(占总氨基酸的39.81%),其中可提高适口性的天门冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸及甘氨酸等含量也相对较多。生长试验表明:与对照组相比,饲喂5%蚯蚓粪异育银鲫增重率比对照组显著提高29.75%(P<0.05)、饵料系数显著降低23.77%(P<0.05),并降低了死亡率。