底物浓度对饲用木聚糖酶酶活测定的影晌

针对运用终点法以DNS还原糖法测定木聚糖酶活力过程中,底物浓度对测定结果的影响进行了试验分析,并结合实际和理论意义进行综合考虑,提出了在测定过程中对试验结果影响较小的适宜底物浓度,提高准确性和可重复性.     

木聚糖酶酶活测定方法的研究

本试验研究了影响木聚糖酶测定的因素.结果表明不同底物、不同底物浓度、酶的稀释度和提取时间都会影响到酶活的测定结果,但蒸馏水及缓冲液作为提取液对酶活无显著影响.测定的吸光度在0.3左右(即0.25～0.5)时酶活的变异较小.     

角蛋白酶酶活测定条件的研究

以提高羽毛粉做底物测定角蛋白酶酶活方法的准确性,试验研究了酶的制备方式、测定波长、试剂添加顺序、底物粒度大小、反应体系振荡频率、底物浓度、酶促反应温度、时间和pH值等因素对酶活的影响。结果表明:传统测定方法中使用的底物量并不符合酶促反应动力学中底物要饱和的要求,试剂添加顺序和底物粒度对酶活测定结果也有很大影响;羽毛粉测定角蛋白酶活性的最佳方法为:40 W超声波处理30 s的发酵液直接离心制取粗酶液,以45 mg过40目筛的羽毛粉做底物,按缓冲液(pH值8.8)、底物、酶的顺序加入试剂,于45℃水浴中反应,每隔15 min振荡一次,反应1 h后加入2 ml10%的终止剂TCA,于波长280 nm处进行测定。优化后条件下测得的角蛋白酶活性较优化前提高了约2.1倍。     

中华蜜蜂头部乙酰胆碱酯酶最佳反应体系的建立

乙酰胆碱酯酶是昆虫体内重要的生化标记物,利用其活性的变化可以监测农药对昆虫的亚致死效应。乙酰胆碱酯酶活性测定的条件会因为来源于不同的物种甚至同一物种不同部位而改变。本文采用正交试验排列的25个组合试验探究了酶浓度、底物浓度、pH、反应温度及反应时间5个因素对测定中华蜜蜂头部乙酰胆碱酯酶比活力的影响,并从中选择出最佳测定组合。试验结果表明,5个因素对中华蜜蜂头部乙酰胆碱酯酶比活力影响的大小顺序为酶浓度反应温度pH反应时间底物浓度,各因素最佳组合为酶浓度0.25g/L、底物浓度0.8mmol/L、pH值7.5、反应温度40℃及反应时间5min。本文优化了中华蜜蜂头部乙酰胆碱酯酶测定条件,为今后评估有机磷类、氨基甲酸类和新烟碱类杀虫剂提供条件。     

复合发酵对棉籽饼混合底物中FG和BG含量的影响

试验通过测定棉籽饼混合底物在微生物固体发酵过程中棉酚含量的变化,以研究复合发酵对棉籽饼混合底物中棉酚含量的影响。试验采用添加不同比例的ZD-3与ZD-5和ZD-3与ZD-8对棉籽饼混合底物进行二元复合发酵,然后测定发酵产物中TG、FG、BG含量。试验结果表明:棉籽饼混合底物经复合发酵处理后,均可极显著降低发酵底物中TGF、G和BG含量(P<0.01),并且FG和BG的减少部分均被降解消除;同时发现,ZD-3与ZD-5的复合发酵效果优于ZD-3与ZD-8的发酵效果,并且菌种比例对发酵结果有显著影响。当ZD-3与ZD-5的比例为3:1时,脱毒效果最好,脱毒率可达90.82%。     

木聚糖酶酶活测定的几点体会

本文总结了在木聚糖酶(制剂)酶活实际测定过程中底物种类、底物配制方式和酶液稀释倍数对测定结果的影响.     

超声波预处理蚕蛹蛋白的酶解动力学研究

为了预测和控制用超声波辅助酶解蚕蛹蛋白过程中的蛋白质酶解程度,应用数学推导方法并结合酶解试验对超声波处理前后蚕蛹蛋白的酶解动力学进行研究。首先分析了初始底物浓度和蛋白酶浓度对蚕蛹蛋白水解度的影响,表明超声波预处理和未处理的蚕蛹蛋白水解度均随着水解蛋白酶Alcalase初始浓度的增加而增大,随着初始底物浓度的增加而减小。基于蚕蛹蛋白水解度与酶解时间的关系构建的酶解动力学模型显示:超声波预处理改变了蚕蛹蛋白的酶解动力学参数,提高了蚕蛹蛋白酶解反应的最大临界初始底物浓度。验证试验表明建立的酶解动力学模型与实际酶解过程基本吻合,确证经超声波预处理后蚕蛹蛋白更易被Alcalase酶酶解。     

还原糖法测定饲用非淀粉多糖酶的分析

本文分析了影响还原糖法测定非淀粉多糖酶活力的因素。重点讨论了底物及其浓度的选择和样品酶的稀释度对最终测定结果的影响。指出,除了pH值和温度以外,具有特异性和高灵敏度的底物、样品酶的适当稀释度也是获得准确结果的关键因素。     

酶解螺旋藻藻胆蛋白制备抗氧化活性肽的研究

为了探索酶解螺旋藻藻胆蛋白制备抗氧化活性肽的最佳工艺,从新鲜螺旋藻藻泥中提取藻胆蛋白作为原料,使用中性蛋白酶对其进行酶解,制备抗氧化活性肽。以·OH清除率为指标,采用正交试验的方法,测定了底物浓度、酶与底物比、p H值、酶解温度和酶解时间对酶解产物的影响。结果表明:最佳酶解工艺为底物浓度15 g/L,酶与底物比2%,温度45℃,p H值7.0,酶解4 h;在该条件下,·OH清除率为61.89%。     

谷朊粉的胰蛋白酶水解工艺研究

选用胰蛋白酶水解谷朊粉,用甲醛滴定法测定其水解度。在对温度、时间、pH值、底物浓度(固液比)和酶浓度(酶与底物的比值)等单因素试验的基础上做4因素3水平正交试验。试验结果表明:胰蛋白酶水解谷朊粉的最佳条件为温度40℃、时间4h、pH值8.5、底物浓度(固液比)1.5%、酶浓度8%(酶与底物的比值),得到的水解度为15.34%。     

还原糖地测定饲用非淀粉多糖酶的分析

本文分析了影响还原糖法测定非淀粉多糖酶活力的因素。重点讨论了底物及其浓度的选择和样品酶的释度对最终测定结果的影响，指出，除了pH值和温度以外，具有特异性和高灵敏度的底物、样品酶的适当稀释度也是获得准确结果的关键因素。     

羊进行性肺炎诊断的微量免疫扩散试验

本文论述检查和测定羊进行性肺炎抗体的二种微量免疫扩散试验(MIDT)、用含有各种盐的浓度和不同 pH 值的底物来测定本试验的最适条件。应用淘汰母羊血清,将两种微量免疫扩散试验和一种宏量免疫扩散试验进行比较。微量免疫扩散试验比宏量免疫扩散试验所需试剂少且反应敏感。延长试验物感作时间后,三种试验结果相近。     

体外法评价不同酵母菌发酵液对瘤胃发酵功能的影响

本试验意在研究不同酵母菌发酵液对人工模拟瘤胃发酵的影响。试验采用体外法进行,以奶山羊提供瘤胃液,对照组只含有底物,试验组在培养底物的基础上分别添加8种不同的酵母菌发酵液。通过对培养液p H值、氨态氮(NH3-N)浓度、菌体蛋白(BCP)浓度、挥发性脂肪酸(VFA)含量的测定,比较分析8株酵母菌对瘤胃发酵功能的影响。结果表明:与对照组相比,XR4、SC18和YJ2显著降低了NH3-N浓度(P0.05),SC18、YN7和YJ2使BCP浓度显著增加(P0.05),YJ2和YL5使TVFA浓度大幅增加,同时能够稳定培养液p H值。综合分析表明,酵母菌SC18、YJ2和YN7对体外发酵具有明显的促进作用。     

使用一种新底物优化角蛋白酶活性检测方法的研究

研究旨在优化角蛋白酶活性测定方法,使其更可靠和简便。选用液体角蛋白作为底物,以碱性蛋白酶检测方法作为参考,分别从底物浓度、反应时间、吸光值范围和底物专一性四个方面设计了四组试验,来研究此底物的适用性和可行性,同时优化检测方法。研究结果表明,当底物浓度为1%,反应时间10 min,净吸光值范围控制在0.2~0.45时测定出的角蛋白酶活性结果较为稳定,方法的重现性也较好。此底物较适合用于角蛋白酶活性的检测,优化后的方法较传统方法简便可靠,为工业生产中角蛋白酶活性的研究提供一定的帮助,改进生产技术。     

体外法研究延胡索酸对瘤胃甲烷、氢气产量和挥发性脂肪酸组成的影响

本试验旨在研究不同添加水平的延胡索酸对体外发酵甲烷、氢气产量、挥发性脂肪酸组成以及微生物数量的影响。选用3只装有永久性瘤胃瘘管的成年湘东黑山羊作为瘤胃液供体。试验采用2×4双因子试验设计,以发酵底物和延胡索酸作为影响因素,其中发酵底物分别是菊苣和玉米粉,延胡索酸设定0、3、6和12 mmol/L 4个添加水平,另外设空白组,即发酵瓶中不添加发酵底物,仅添加0、3、6和12 mmol/L延胡索酸用来矫正数据,每组2个平行,重复测定3次。采用全自动体外模拟瘤胃发酵设备,进行72 h体外模拟瘤胃发酵试验。结果表明:1)玉米粉的72 h产气量、干物质消失率均显著高于菊苣(P0.05)。延胡索酸显著增加了72 h产气量(P0.05),但对72 h矫正产气量(去除各个添加水平延胡索酸自身的产气量)、干物质消失率无显著影响(P0.05)。发酵底物和延胡索酸对72 h产气量和干物质消化率不存在显著交互作用(P0.05)。2)玉米粉的氢气产量和矫正氢气产量只有在12 h显著高于菊苣(P0.05),而2种底物在其他时间点的氢气产量和矫正氢气产量无显著差异(P0.05);玉米粉不同时间点甲烷产量和矫正甲烷产量均显著高于菊苣(P0.05)。延胡索酸对不同时间点甲烷产量、矫正甲烷产量和氢气产量、氢气矫正产量均无显著影响(P0.05)。延胡索酸和底物对不同时间点的氢气和甲烷产量不存在显著交互作用(P0.05)。3)延胡索酸显著增加了乙酸、丙酸和总挥发性脂肪酸浓度(P0.05),显著降低了乙丙比和pH(P0.05)。但是,延胡索酸对矫正总挥发性脂肪酸浓度没有显著影响(P0.05)。4)延胡索酸对微生物数量均没有显著影响(P0.05)。结果提示,和菊苣相比,玉米粉富含更多易发酵碳水化合物,这有助于产生更多的气体和挥发性脂肪酸。延胡索酸可以增加体外产气量和挥发性脂肪酸浓度主要因为延胡索酸在发酵过程中自身可以代谢产生额外的气体和挥发性脂肪酸,这会使产气量和挥发性脂肪酸浓度增加,而对于发酵底物自身的降解和微生物数量没有显著影响。     

添加活性酵母和莫能菌素对蒸汽压片玉米活体外产气量及瘤胃发酵参数的影响

本试验采用活体外人工瘤胃发酵法,研究了添加活性酵母和莫能菌素对蒸汽压片玉米为底物的活体外产气量及瘤胃发酵参数的影响。试验设3个处理,分别为对照组(CK组)、活性酵母组(LY组;添加3.3×108cfu/L发酵培养液)和莫能菌素组(MO组;添加3.3 mg/L莫能菌素),每个处理设3个重复。分别在体外模拟瘤胃培养24 h和72 h,测定24 h产气量和发酵液的pH、挥发性脂肪酸(VFA)和氨态氮(NH_3-N)浓度,以及底物干物质(DM)消化率,并测定72 h产气参数。结果表明:添加活性酵母(LY组)可显著降低蒸汽压片玉米的产气速度(P 0.05),对产气量无显著影响;添加莫能菌素(MO组)可显著提高底物产气速度,显著降低24、72 h产气量及理论最大产气量(P 0.05)。LY和MO对pH、总VFA均无显著影响。LY显著提高了发酵液中NH_3-N浓度(P 0.05),对各VFA的摩尔比例无显著影响;MO显著降低发酵液中NH_3-N浓度和乙酸、丁酸、异丁酸、戊酸、异戊酸的摩尔百分比,提高丙酸摩尔百分比,从而显著降低了乙:丙比(P 0.05);LY和MO对底物DM消化率无显著影响。     

绵羊瘤胃微生物胞外蛋白酶性质的研究

本试验测定了pH、温度和EDTA对纯化的绵羊的瘤胃微生物胞外蛋白酶活性的影响,并用一已知氨基酸排列顺序的肽段(由15个氨基酸组成)作为底物,进一步测定了蛋白酶的酶切位点。结果表明,(1)纯化蛋白酶的最适pH在6.0～6.5之间,最适温度为40℃左右。(2)不同浓度的EDTA(浓度分别为1,10,25,50,75和100mM)对蛋白酶活性没有影响,因而该酶属于丝氨酸蛋白酶类。(3)纯化蛋白酶是一种内肽酶,其酶切位点在组氨酸—酪氨酸(?)、天冬氨酸—丙氨酸(?)、亮氨酸—赖氨酸(?)和(或)缬氨酸—赖氨酸(?)相连的肽键。(4)胰蛋白酶和纯化的蛋白酶虽同属丝氨酸蛋白酶类,但前者对底物具有高度的专一性,后者对底物的专一性不强,这是瘤胃内饲料蛋白质强烈降解的主要原因之     

谷朊粉的风味蛋白酶水解工艺研究

开发谷朊粉水解蛋白饲料有着重要的营养学价值和经济意义。试验选用风味蛋白酶水解谷朊粉,在单因素的基础上做5因素3水平正交试验,5因素分别为温度、时间、pH、底物浓度（固液比）和酶浓度（酶与底物的比值）。用甲醛滴定法测定其水解度,试验结果表明,风味蛋白酶最佳反应条件为酶浓度[E]1.5%,底物浓度[S]2%,pH6.5,温度55℃,时间8h,水解度18.26%。     

瘤胃源酵母的分离筛选及对不同底物发酵能力影响

本实验旨在分离筛选瘤胃源酵母,研究其对不同饲料底物的发酵特性。实验以山羊及奶牛瘤胃液为菌源,利用酵母选择性培养基,通过分离筛选、生长曲线测定和26S rDNA鉴定,获得1株生长速度较快的Meyerozyma属酵母菌株。在此基础上,采用体外发酵技术,分别以羊草与精料混合物、马铃薯淀粉和玉米淀粉为底物,以奶牛瘤胃液为接种物,研究该酵母菌株对瘤胃微生物体外发酵参数的影响。结果表明,在以羊草和精料混合物为底物时,添加瘤胃源酵母显著降低了发酵液pH和乳酸浓度(P<0.001),显著提高了丙酸浓度和干物质消失率(P<0.05);以玉米淀粉为底物时,添加该酵母菌显著降低了发酵液pH和乳酸浓度(P<0.001);以马铃薯淀粉为底物时,显著降低了pH(P<0.05),提高了丙酸浓度(P<0.05);但在上述3种底物条件下,添加酵母菌对发酵液中总产气量、氨态氮、乙酸、丁酸、异丁酸、戊酸和异戊酸浓度无显著影响(P>0.05)。采用Real-time PCR测定结果表明,添加该酵母菌可显著提高以羊草和马铃薯淀粉为底物时发酵液中总菌16S rDNA的挎贝数(P<0.05)。结果说明,本研究分离获取的瘤胃源酵母可提高瘤胃微生物对羊草精料混合物的降解能力,降低羊草精料混合物组和玉米淀粉组发酵液中乳酸浓度,提示该菌株可能具有提高日粮消化利用效率、促进丙酸生成和瘤胃细菌生长的作用。     

沙葱精油对肉羊体外瘤胃发酵和底物干物质降解率的影响

本试验旨在研究沙葱精油对肉羊体外瘤胃发酵和底物干物质(DM)降解率的影响,以期为沙葱精油在肉羊体内试验提供参考。试验采取单因素完全随机试验设计,在发酵瓶(100 mL)中添加2 g底物,并分别添加0(对照组)、0.02(T1组)、0.04(T2组)、0.06(T3组)、0.08(T4组)、0.10(T5组)和0.12 mg(T6组)的沙葱精油。每个培养瓶中加入10 mL瘤胃液和20 mL瘤胃缓冲液,体外培养24 h,每组设3个重复。发酵完成后,测定发酵液pH和氨态氮(NH3-N)、微生物蛋白(MCP)、挥发性脂肪酸(VFA)浓度及底物DM降解率。结果表明:在体外培养24 h后,T2、T3、T4、T6组的发酵液pH显著低于对照组(P0.05);T1、T2、T3组的发酵液NH3-N浓度显著高于对照组(P 0.05),T4组的发酵液NH3-N浓度显著低于对照组(P 0.05);T4组的发酵液MCP浓度显著高于对照组(P0.05);T4组的发酵液丁酸和戊酸浓度显著高于对照组(P0.05),T1、T2、T3、T4、T5、T6组的发酵液总挥发性脂肪酸(TVFA)浓度显著高于对照组(P0.05);T4和T5组的底物DM降解率显著高于对照组(P0.05)。由此可见,沙葱精油对肉羊体外瘤胃发酵有积极影响,添加0.08 mg沙葱精油显著减低了发酵液pH和NH3-N浓度,显著提高了发酵液MCP、丁酸、戊酸、TVFA浓度以及底物DM降解率。。