同位素内标GC/MS法测定猪尿和猪肝中克伦特罗

建立了同位素内标法定量测定猪尿和猪肝中克伦特罗的方法。猪尿和猪肝用乙酸乙酯、盐酸溶液提取，再经SCX固相萃取柱净化、N，O-双三甲基硅基-三氟乙酰胺（BSTFA）衍生化，定容后用气相色谱-质谱（GC／MS）测定，并以D9一克伦特罗为内标定量。猪尿和猪肝中克伦特罗的检出限分别为0．3ng／mL和0．3ng／g，克伦特罗的测定在5．0～400ng／mL范围内具有良好的线性关系，猪尿和猪肝中的平均回收率分别为100．3％和97．2％，批内变异系数分别为2．1％～4．8％，3．4％～6．4％，批间变异系数分别为2．5％～5．1％，2．7％～6．0％。通过与外标法比较，该方法定量准确可靠，更加适宜用作猪尿和猪肝中克伦特罗的定量测定。     

高效液相色谱-串联质谱法测定莱芜香肠中3种β-受体激动剂残留

为建立一种快速测定莱芜香肠中盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇等3种β-受体激动剂残留量的液质联用检测方法,将样品加入乙酸铵溶液,经β-葡糖醛酸苷肽酶/芳基磺酸酯酶水解以及固相萃取柱净化后,以甲醇-0.1%甲酸水溶液作为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾离子源,以多反应监测方式进行采集,外标法定量。结果显示,3种β-受体激动剂在0.5～50.0 ng/mL范围内线性关系良好(R2≥0.999 6);该方法检出限均为0.25μg/kg,平均回收率为90%～110%,相对标准偏差为0.1%～2.0%。该方法优化了盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇的仪器分析条件,操作方便、结果准确、重现性好、回收率高,能满足莱芜香肠中食品安全控制检测的需要。     

猪肝和猪尿中沙丁胺醇和克伦特罗残留的酶联免疫吸附检测法研究

采用混合酸酐法将沙丁胺醇与牛血清白蛋白偶联，并免疫家兔制备抗沙丁胺醇抗血清。以间接ELISA法测定血清效价，测得抗血清最佳工作浓度为1：6400，该抗沙丁胺醇抗血清对克伦特罗有110％的交叉反应性。建立了能够同时检测SAL和CL的间接竞争ELISA方法，该方法对沙丁胺醇的检测范围为0．48ng／mL～8．0μg／mL，对克伦特罗的检测范围为0．43ng／mL～7．3μg／mL，对沙丁胺醇的检测灵敏度为o．48ng／mL，对克伦特罗的检测灵敏度为0．43ng／mL。在猪肝和猪尿中添加1～50ng／g(ng／mL)的沙丁胺醇，添加回收率为72．2％～84．8％，变异系数为4．2％～28．3％，在猪肝脏和猪尿中添加1～50ng／g(ng／mL)的克伦特罗，添加回收率为84．3％～103．4％，变异系数为O．3％～35．5％。     

GC/MS离子法测定猪尿中瘦肉精残留的研究及应用

GC／MS离子法测定猪尿中盐酸克伦特罗的残留，具有很好的分离度，特征离子与谱库检索一致，匹配度高。浓度10-200ng／mL范围呈良好的线性关系（R=0．9947）；仪器检出限为5—10ng／mL；回收率范围为69．7％-97．6％；批内变异系数≤6．1％。批间变异系数≤3．2％。检测60批猪尿中盐酸克伦特罗的残留。检出率为0。本方法对确证猪尿中盐酸克伦特罗残留具有重要意义。     

猪尿中6种β-受体激动剂残留的超高效液相色谱-串联质谱法同时测定

建立了猪尿中苯乙醇胺A、莱克多巴胺、克仑特罗、西马特罗、特布他林、沙丁胺醇等6种β-受体激动剂在多反应监测模式下超高效液相色谱．串联质谱同时检测的方法。尿样经酶解,调至酸性,经固相萃取技术（SPE）净化富集。6种受体激动剂在0．2-5ng／mL的浓度范围内线性关系良好。方法的检出限和定量限分别为0．2ng／mL和0．5ng／mL。考察了0．5ng／mL、1ng／mL和2ng／mL三个添加浓度的回收率。6种化合物的加标回收率为87．2％-106．6％：RSD为1．2％-13．8％。该方法精密度好,灵敏度高,重现性好,能简便、快速、准确地测定猪尿中六种β-受体激动剂。     

免疫亲和色谱-气相色谱/质谱法(IAC-GC/MS)检测猪肝中的沙丁胺醇与克伦特罗

制备出抗沙丁胺醇的抗血清，提取、纯化IgG制备免疫亲和色谱柱，针对沙丁胺醇与克伦特罗的动态柱容量分别为400ng／mL基质和416ng／mL基质。猪肝样品匀浆后用稀盐酸提取，经免疫亲和色谱柱纯化，再用GC／MS检测，即为IAC-GC／MS法。对沙丁胺醇的检测限为0．5ng／g，定量限为2ng／g，对克伦特罗的检测限为0．8ng／g，定量限为2．5ng／g。空白组织按照1、5、10、20ng／g的浓度添加药物，沙丁胺醇在空白肝中的添加回收率为78．4％～106．9％，克伦特罗的添加回收率为77．1％～102．9％。本研究建立的检测猪肝中沙丁胺醇与克伦特罗的IAC-GC／MS法乃国内首次报道。     

莱克多巴胺多克隆抗体的制备

采用多元酸酐法活化盐酸莱克多巴胺，用混合酸酐法将活化的莱克多巴胺与载体蛋白（KLH，BSA）偶联，制备了莱克多巴胺免疫原KLH-Rac和包被抗原BSA-Rac。以KLH-Rac免疫新西兰白兔获得了莱克多巴胺多克隆抗体，以BSA-Rac为包被抗原，采用间接ELISA检测抗血清，其效价达到1：6000，间接竞争ELISA测得抗血清的IC50值约为5ng／mL，其与克伦特罗、沙丁胺醇、特布它林的交叉反应性小于0．01％。     

气相色谱-质谱法测定猪肉中的莱克多巴胺

建立了气相色谱-质谱法（GC-MS）测定猪肉中莱克多巴胺残留的方法.用乙腈提取试样中的莱克多巴胺,经SLH固相萃取柱净化,氮气吹干,衍生化后进行气相色谱-质谱法测定.猪肉中莱克多巴胺的检出限为0.5μg/kg,定量限为2.0μg/kg.溶液中莱克多巴胺浓度在0.02～1.0μg/mL范围内,峰面积与之呈良好的线性关系.平均回收率在81.4%以上,批内相对标准偏差小于8.4%.     

牛奶中残留的盐酸克伦特罗GC/MS测定

本文研究了牛奶中残留的盐酸克伦特罗的确证检测方法。残留的盐酸克伦特罗用乙腈、无水硫酸钠提取,提取液旋转蒸发干后,用pH5．2的乙酸胺缓冲液溶解。萃取的样液用C18和SCX小柱固相萃取净化,分离的残留药物经过双三甲基三氟乙酰胺（BSTFA）衍生后用带有质量选择检测器的气相色谱-质谱联用仪测定。该方法在0．005-0．2μg／mL内线性关系良好（r=0．999812）,3个浓度水平（0．005、0．01和0．02μg／mL）的平均回收率为70％～110％,变异系数为30％。     

氢化物发生－原子荧光光谱法测定止痢散中三氧化二砷的含量

为完善止痢散质量标准,采用氢化物发生-原子荧光光谱法对止痢散中三氧化二砷的含量测定进行了研究。载流为3．0％盐酸溶液,还原剂为含0．5％氢氧化钾的1％硼氢化钾溶液,氩气载气流量为600mL／mL,砷空心阴极灯电流为60mA。砷元素进样浓度在0～100ng／mL范围内与荧光强度值呈良好的线性关系（r=0．9999）;样品平均回收率为95．3％（n=6）,RSD为1．9％。本方法简便、准确度高、重复性好,为进一步控制止痢散的质量提供了依据。     

高效液相色谱-串联质谱法研究猪毛发中克仑特罗和莱克多巴胺的残留及代谢规律

建立了高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)同时检测猪毛发中克仑特罗和莱克多巴胺残留的方法。猪毛发经1 mol/L氢氧化钠溶液水解、乙酸乙酯萃取、MCX固相萃取柱净化,流动相溶解后用HPLC-MS/MS进行检测。克仑特罗在1.9～463.2 ng/mL浓度范围内线性关系良好(R2=0.999 0);回收率为83.3%～86.6%,相对标准偏差为6.7%～9.2%;检出限为0.3μg/kg,定量限为0.8μg/kg。莱克多巴胺在2.8～562.9 ng/mL浓度范围内线性关系良好(R2=0.999 2);回收率为83.4%～88.4%,相对标准偏差为7.2%～9.6%;检出限为0.4μg/kg,定量限为1.2μg/kg。应用该方法研究了克仑特罗、莱克多巴胺在猪毛发中的代谢规律并进行了猪毛发样品检测。结果喂药7 d至停药21 d猪毛发中均检出克仑特罗、莱克多巴胺残留;检测猪毛发样品25份,1份样品检出克仑特罗,残留量为58.68μg/kg。     

用HPLC-MS/MS研究动物毛发中克伦特罗的残留及代谢规律

研究建立了高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)测定毛发中盐酸克伦特罗残留的方法。猪毛发以0.1moL/L盐酸溶液提取,MCX固相萃取柱净化,流动相溶解定容。以SB-C18柱为分离柱,1%乙酸水溶液和甲醇(60∶40,V∶V)作为流动相,MS/MS进行定性和定量分析。在优化条件下的最低检出限为0.05μg/kg,定量限为0.2μg/kg。毛发样品中添加不同浓度盐酸克伦特罗,测得回收率在79.0%～86.2%之间,变异系数均低于15.2%。应用该方法研究了盐酸克伦特罗在猪毛发中的代谢并初步探讨其代谢机理。结果表明:在较高饲喂浓度(10mg/kg)时,用药5d后,黑色猪毛发有少量盐酸克伦特罗残留,而白色猪毛发中未检出。从第7天起猪毛发中盐酸克伦特罗蓄积量逐渐增加,最高蓄积浓度为4852.5μg/kg。     

检测莱克多巴胺胶体金免疫层析试验的建立

采用混合酸酐法制备莱克多巴胺-OVA偶联抗原,胶体金标记莱克多巴胺单克隆抗体,建立了检测莱克多巴胺的胶体金免疫层析试验。该试验具有较好的敏感性和特异性,最低可检测10ng/mL的莱克多巴胺,而与克伦特罗和沙丁醇胺无交叉反应。胶体金免疫层析试验对尿液和饲料样品中莱克多巴胺的最低检测量分别为10ng/mL和0.01mg/kg。     

鸡蛋中氟喹诺酮类药物残留量检测方法研究

建立一种可同时检测鸡蛋中四种氟喹诺酮类药物(环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星和沙拉沙星)残留的高效液相色谱-荧光检测法。结果表明,四种氟喹诺酮类药物中环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星在2~500 ng/mL范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系,R2均大于0.9999;达氟沙星在0.4~100 ng/mL范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系,R2大于0.9999。环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星的定量限为10μg/kg,达氟沙星的定量限为2μg/kg。环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星在10~200μg/kg的浓度添加水平上,其回收率为70%~100%;达氟沙星在2~40μg/kg的浓度添加水平上,其回收率为70%~100%,批内、批间的相对标准偏差均小于10%。     

Decreased insulin binding to porcine adipocytes in vitro by beta-adrenergic agonists

The present study was conducted to determine the influence of dibutyryl-cAMP (dbcAMP), epinephrine, ractopamine and clenbuterol on insulin binding to porcine adipocytes. Dibutyryl-cAMP decreased insulin binding to swine adipocytes by 40 and 20% at 1.8 and 25.8 ng insulin/ml, respectively. Ractopamine and clenbuterol directly reduced insulin binding at the low insulin concentration and decreased binding at high insulin concentrations in the presence of adenosine deaminase. Scatchard analysis suggested that the reduction of insulin binding was due to a decrease in receptor number. Epinephrine alone did not influence insulin binding. In the presence of theophylline, epinephrine decreased binding at both low and high insulin concentrations; however, ractopamine plus theophylline decreased binding only at the low insulin concentration. Clenbuterol did not affect insulin binding in the presence of theophylline. Propranolol blocked the inhibitory effect of epinephrine on insulin binding. These beta-adrenergic agonists can inhibit insulin binding and, thus, antagonize insulin action in swine adipocytes.     

液相色谱串联质谱法测定鸡蛋、牛奶和羊奶中泰乐菌素A残留的研究

建立了鸡蛋、牛奶和羊奶中泰乐菌素A残留的液相色谱-串联质谱法.样品经乙腈提取后,Prime HLB固相萃取柱净化,以0.1％甲酸水和乙腈为流动相,液相色谱-串联质谱法测定,内标法定量.试验结果表明:泰乐菌素A在1～100 ng/mL浓度范围内线性关系良好,相关系数r大于0.99;在鸡蛋、牛奶和羊奶中的检测限为2 ng/...     

高效液相色谱法测定博落回注射液中血根碱和白屈菜红碱的含量

利用高效液相色谱法测定博落回注射液中血根碱和白屈菜红碱的含量。采用Agilent1100型高效液相色谱仪,色谱柱为AgilentEcpliseXDB—C18（5μm,4．6mm×250mm）,流动相为三乙胺溶液-乙腈（75：25,V／V）,流速1．0mL／min;检测波长270nm;柱温35℃。结果表明：血根碱在0．5～100μg／mL范围内线性关系良好（R2=0．9999）,平均加样回收率（n=3）为96．1％～97．9％,RSD为0．8％～1．8％;白屈菜红碱在0．5～100μg／mL范围内线性关系良好（R2=1）,平均加样回收率（n=3）为96．8％-98．8％,RSD为0．6％～1．0％。本法简单快捷,精密度好,可为制定质控标准提供参考。     

国内外克伦特罗ELISA检测试剂盒评价

根据B/B0-50%抑制浓度、检测范围、标准溶液浓度梯度、板内变异、板间变异、样品添加检验、实际样品检验等方面的比较结果对两种克伦特罗ELISA检测试剂盒(A: 中国兽医药品监察所研制, B: 德国 r-Biopharm公司研制)进行评价。结果表明,试剂盒A的50%抑制浓度低于1.0 ng/mL; 检测范围在0.10~3.0 ng/mL之间;标准溶液浓度梯度中包括1.0 ng/mL这一限定值;板内变异系数小于13.7%,板间变异系数小于8.8%;样品回收率在70%~110%之间;实际样品检验和试剂盒B检样的阳性符合率为95.5%。试验证明,试剂盒A与试剂盒B的水平相当。     

超高效液相色谱―串联质谱法检测猪肝中乙酰异戊酰泰乐菌素残留

本研究建立了猪肝中乙酰异戊酰泰乐菌素残留的超高效液相色谱―串联质谱检测方法(UPLC-MS/MS)。样品经EDTA-McIlvaine's缓冲液提取,HLB固相萃取柱净化后,采用C₁₈色谱柱分离,以乙腈―0.1％甲酸(7∶3,V/V)为流动相洗脱,电喷雾正离子模式电离,选择离子监测模式检测。结果表明,药物浓度与峰面积在5~2000 ng/mL范围内呈现良好的线性关系,相关系数大于0.99,对空白猪肝组织进行5~500 μg/kg的药物添加回收试验,经统计分析获得平均回收率约为84.9%~88.1%,批内变异系数为8.2％~15.1%,批间变异系数为14.7％~16.5%。本方法对乙酰异戊酰泰乐菌素的检测限为0.76 μg/kg,定量限为2.51 μg/kg,方法灵敏、准确,适用于猪肝脏中乙酰异戊酰泰乐菌素残留的检测。