猪源益生乳杆菌HEW-A405的鉴定及发酵条件

试验从猪肠道中获得一株具有益生功能的乳酸杆菌,通过菌落特征、生理生化鉴定和16S rDNA分子鉴定确定其为植物乳杆菌,并采用液体发酵法,以发酵液中活菌数为指标,对菌株HEWA405发酵条件进行筛选,获得菌株的最适培养条件,接种量600%、发酵时间16 h、培养温度35℃、pH65及搅拌转速180 r/min,为菌株的应用奠定基础。     

椰子水中甘露醇产生菌的筛选及发酵条件的初步优化

为了研究自然发酵椰子水中的甘露醇产生菌,试验对不同发酵时间的椰子水进行连续分离培养,得到31株不同的微生物;通过液体纯培养,利用分光光度法测定发酵液中甘露醇的含量,筛选得到1株甘露醇产量最高的菌种,同时对该菌株的培养条件进行了初步优化。结果表明:该菌株发酵液中的甘露醇含量最高,达1.5 mg/mL,果糖转化率为63.2%,初步鉴定为酵母菌;当果糖和葡萄糖配比为2︰1时,果糖浓度为0.04 g/mL;在32℃条件下经过96 h的静置培养后,该菌株发酵液中的甘露醇含量最高,果糖转化率也大大提高。     

一株高产酸乳酸菌的分离、鉴定及高密度发酵研究

为获取产酸能力强、发酵性能好、具有强抑菌能力的乳酸菌,本试验以35日龄断奶健康仔猪粪便为菌源,对其乳酸菌进行筛选、分离、鉴定,并对分离菌株进行发酵性能研究。从35日龄断奶健康仔猪粪便中分离得到6株目标菌株,经产酸测试及抑菌试验后,得到一株产酸能力强、抑菌效果良好的筛选菌株,命名为RSJ-5。通过对RSJ-5菌株的菌落与菌体形态观察、生理生化鉴定试验、糖醇发酵试验,确定其为嗜酸乳杆菌。利用50 L发酵罐接种RSJ-5菌株厌氧发酵36 h,发酵液活菌数达158 CFU/mL,乳酸钙含量为85 mg/mL,pH4.2,发酵液对大肠杆菌、沙门氏菌有较强抑菌作用。结果表明RSJ-5嗜酸乳杆菌具备优良乳酸菌发酵剂的性能,探索了发酵工艺的可行性,为液体饲料(乳酸菌发酵液)大规模发酵生产提供参考。     

枯草芽孢杆菌对香菇发酵液中蛋白质降解规律的影响

通过探究枯草芽孢杆菌对香菇发酵液中蛋白质降解规律,以其为开发香菇为原料的益生菌保健品提供理论依据。本试验以香菇子实体为主要原料配制发酵培养液,接入枯草芽孢杆菌纯培养物种子液,分别在25、35、45℃下进行发酵培养,动态监测0~96 h内发酵液中蛋白质含量变化。结果表明:发酵温度对发酵液中蛋白质降解率有明显影响,发酵至96 h时发酵液中蛋白质降解率分别为42.58%、69.53%、83.96%,发酵温度决定了降解程度的峰值。45℃发酵温度有利于提高香菇发酵液中蛋白质等大分子的降解率、缩短发酵时间、提高发酵生产效率。     

桑枝水提物对桑黄液体发酵的影响及桑黄液体发酵条件的优化研究

以每100 m L发酵液生成的菌丝体生物量及其中桑黄多糖、三萜及黄酮含量为考察指标,研究液体培养基中添加桑枝水提物对桑黄发酵的影响,并对桑黄的液体发酵培养条件进行了优化。结果表明,在常规培养基中添加桑枝水提物对菌丝体每100 m L发酵液生成的生物量及发酵液中的有效成分的含量具有明显的促进作用,桑黄菌株SH1501、SH1502、SH1503每100 m L发酵液生成的生物量分别达到0.312 g、0.183 g、0.235 g,比对照组分别提高了9.1%、107.9%、39.9%;最适桑黄液体发酵的培养条件为发酵温度25℃,发酵时间11 d,p H值6.5。     

疯草内生真菌Undifilum oxytropis次级代谢产物分析

为阐明疯草内生真菌Undifilum oxytropis次级代谢产物的化学组成,为其生物活性研究和开发利用提供依据,以本实验室保存的疯草内生真菌Undifilum oxytropis为研究菌株,采用察氏液体培养基对该菌发酵培养30d,收集菌丝体和发酵液,按照植物化学成分传统预试方法进行预试。在此基础上用不同极性有机溶剂梯度萃取得到菌丝体和发酵液石油醚相、氯仿相、乙酸乙酯相和正丁醇相,经薄层色谱检测及气相检测方法对其次级代谢产物进行初步分析。系统预试表明,Undifilum oxytropis发酵产物中含有生物碱、蛋白质、酚类与鞣质、黄酮类、醌类、挥发油和油脂等物质;薄层色谱检测发现,Undifilum oxytropis发酵产物中至少含有5种化合物,且菌丝体和发酵液正丁醇相均有苦马豆素及其类似物存在;气相色谱分析Undifilum oxytropis发酵液中苦马豆素含量为5.17×10~(-3)g/L。疯草内生真菌Undifilum oxytropis发酵产物含有苦马豆素等多种次级代谢产物。     

猪源枯草芽孢杆菌HEW-B113的鉴定及发酵工艺优化

研究从猪肠道中获得一株疑似枯草芽孢杆菌,通过形态特征、生理生化鉴定和16S r DNA分子鉴定确定其为枯草芽孢杆菌,并采用液体发酵法,以发酵液中活菌数和芽孢数为指标,通过单因素试验和正交试验对枯草芽孢杆菌HEW-B113的培养基和发酵条件进行优化。确定其最佳培养基配方为玉米淀粉2%、葡萄糖1%、豆粉1%、硫酸锰0.2%和硫酸铁0.15%;最佳发酵条件为初始p H 7.1、接种量0.8%、发酵摇瓶装液量100 m L/500 m L、转速200 r/min、发酵温度35℃及发酵时间40 h。采用枯草芽孢杆菌的最优发酵工艺可以降低成本,提高质量,为枯草芽孢杆菌的扩大化生产提供理论依据。     

绿汁发酵液中的微生物多样性及其对菌糠发酵品质的影响

本试验旨在通过高通量测序技术,测定分析5种不同原料制备的绿汁发酵液的微生物分布情况,通过Alpha多样性、主成分分析等解明其微生物群落结构。同时,为探究其微生物与发酵品质的关联性,本试验调制了对照组（无添加）和添加2%绿汁发酵液的5个菌糠青贮处理组,每个处理5个重复。结果表明：5种材料制作的绿汁发酵液样本通过Illumina Miseq测序平台共获得548 266条高质量有效序列,经分类学鉴定分属23门,129属,其中丰度大于1%的有9属。聚类分析结果表明甘蔗梢、玉米秸秆和葛藤绿汁发酵液归为一类,红象草和菌糠绿汁发酵液各自单独一类。5种绿汁发酵液处理组的菌糠青贮料乳酸含量显著（P<0.05）升高,丁酸含量显著（P<0.05）降低,能够提高青贮料的发酵品质。其中,红象草绿汁发酵液处理菌糠的发酵效果最佳,原因是象草绿汁发酵液中与青贮发酵密切相关菌属的分布比例最高。     

堆肥土壤中黄曲霉毒素降解菌株的筛选及活性分析

为了筛选能稳定高效降解黄曲霉毒素B1(AFB1)的细菌,本试验以香豆素培养基进行初筛,AFB1标准品进行复筛,从动物粪便堆肥土壤中获得降解率最高的菌株,命名为SG16,并初步鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。通过研究各发酵组分的降解率,不同p H、温度、金属离子等因素下发酵液的降解活性,以及浓缩发酵液对发霉玉米中AFB1降解的效果。结果显示:各组分中发酵上清液降解率最高为80.62%,菌悬液和胞内液的降解率仅为14.32%和10.67%,温度、p H、金属离子、蛋白酶K均能影响其毒素降解活性,因此SG16产生的降解AFB1活性物质初步鉴定为胞外酶。浓缩发酵液能显著降低霉变玉米中AFB1的含量,这为生物防治饲料或粮食中的黄曲霉污染提供资源。     

乳酸粪肠球菌的筛选及富硒效果的试验研究

采用厌氧罐培养,对乳酸粪肠球菌进行筛选、富硒效果及富硒条件的研究,结果乳酸粪肠球菌具有较强的耐受硒和富集硒的能力,其富集硒的效果受培养发酵液中的硒添加量、接种量和发酵时间的影响.获得乳酸粪肠球菌最佳发酵产量和富硒量的条件,考虑到试验中的菌体红色因素,确定硒添加量35 mg/L、接种量10%、发酵时间28 h、pH4.5~6.3,是比较理想的乳酸粪肠球菌富硒发酵增殖培养条件.其发酵产量和最佳富硒量为:菌体产量404.10 mg/100ml,干物质产量683.14 mg/100 ml,菌体富硒量248.56 μg/100 ml,干物质富硒量393.21 μg/100 ml,发酵液环境硒量31.07 mg/L,干物质非有机硒量147.65 μg/100 ml.     

蒲翘散发酵条件的筛选及其产物对肉雏鸡生长性能的影响

为了研究蒲翘散最佳发酵条件及其发酵液对肉雏鸡生长性能的影响,采用单因素试验方法,选用枯草芽孢杆菌为发酵菌种,对蒲翘散发酵培养基pH值、温度、接菌量、转速以及发酵时间进行优化,再以该发酵液作为饲料添加剂,研究其对肉雏鸡生长性能的影响。结果显示,蒲翘散最佳发酵条件为:发酵培养基初始pH值5.2～5.4,温度35℃,接菌量2%,转速210 r/min,发酵时间24 h,发酵后总黄酮含量提高5.17%;与空白组相比,各试验组肉雏鸡平均日增重增加,料重比降低,脾脏和法氏囊指数增加。表明蒲翘散发酵液能提高肉雏鸡生长性能,促进免疫器官发育。     

解磷根瘤菌液体培养基类型,浓度及透气条件的比较

以解磷根瘤菌SL01为供试菌株,采用液体培养研究了培养基类型和浓度以及透气状况对其生长的影响。结果表明:供试的培养基中,最适的液体种子培养基为LB和1/2 LB液体培养基,菌株的繁殖速度不仅与培养基的类型有关,更受到营养条件的限制;培养基接入解磷根瘤菌SL01并充分发酵之后,发酵液的pH值都相当程度的偏离了初始的酸碱度;根瘤菌作为好气菌,YMA液体培养基中培养12 h后,透气条件下发酵液内的活菌数达12.2×109cfu/mL,为密闭培养条件下的10.51倍,在解磷根瘤菌的发酵培养中,透气状况应作为重要的环节进行考虑。     

益生菌发酵工艺中蜡样芽孢杆菌的分离鉴定

在益生菌生产发酵工艺中常出现耐热杂菌污染的现象,导致产品质量下降,甚至生产失败,从而造成经济损失。本试验为确定发酵工艺中被污染的耐热性杂菌,采集污染发酵液为检样,分离及纯化一株菌株(命名为YBNR),通过形态学、生化试验及16sRNA测序等方法进行菌株鉴定。结果显示:污染发酵工艺的耐热菌为蜡样芽孢杆菌。     

一株鸡白痢沙门菌噬菌体的发酵及后处理工艺研究

为探究1株鸡白痢沙门菌噬菌体STP98-a的液体发酵条件及噬菌体发酵液的后处理工艺,本试验在100 mL液体增殖体系下,通过对STP98-a培养时间、噬菌体与宿主菌接种比例及起始宿主菌活菌数进行优化,确定STP98-a的液体发酵工艺;发酵液离心后收集上清液,以0.22μm滤膜过滤后加不同冻干保护剂,以冷冻干燥法制备噬菌...     

拮抗草坪蘑菇圈生防菌剂的关键发酵工艺及优化

为获得草坪蘑菇圈病原菌拮抗生防菌剂的优化参数,本研究以拮抗蘑菇圈病原-肉褐麟小伞菌(Lepiota brunneo-incarnata)的黄曲霉(Aspergillus flavus)CP01为目的菌,对其分别进行液、固态发酵条件的优化。通过单因素试验优化发酵时间、培养温度、培养基类型及初始pH等条件,对最佳液态发酵条件进行筛选;并通过单因素试验优化培养物料、外源养分、发酵时间和温度等条件,对最佳固态发酵条件进行筛选。结果表明:液体发酵条件下,马铃薯葡萄糖液体培养基(PDB)中菌丝体干重含量最高,而在青秸秆粉浸提液培养基(CSE)中有效菌数最高,且该发酵液对蘑菇圈病原的抑菌效果最佳,培养基最适初始pH为5、最佳发酵条件为30℃、5d;在固态发酵条件下,最适发酵培养物料为经浸提法去营养化的青秸秆粉,外源添加养分为料水比1∶50的青秸秆粉浸提液,最适发酵条件为33℃、9d。以上优化参数为草坪蘑菇圈生防菌剂的研发奠定了基础。     

一株干酪乳杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

本研究旨在分离既能用于微生态制剂又能用于青贮饲料发酵剂的优良乳酸菌,采集规模化牛场青贮饲料,取梯度稀释液涂布MRS平板,进行厌氧培养,筛选优势菌株,观察其菌落形态,并进行生化试验和特异性PCR鉴定。研究自筛乳酸菌的生长曲线、产酸曲线、培养温度及培养基初始pH对菌株生长的影响,并研究其抑菌特性、药物敏感性和安全性。试验筛选到1株菌落形态圆形、边缘整齐、表面光滑、乳白色、镜检为革兰氏阳性的无芽孢杆菌。生化结果显示,分离菌株可厌氧生长,运动性试验、过氧化氢酶试验、硝酸盐还原试验、明胶液化试验、吲哚试验结果均为阴性,15种糖醇发酵试验结果符合干酪乳杆菌生化特征。用干酪乳酸杆菌特异性引物对菌株进行PCR鉴定,琼脂糖凝胶电泳结果显示在727 bp处出现特异性扩增条带,与生化鉴定结果相符,将分离菌株命名为RS1。RS1在0~4 h时发酵液pH变化不明显,处于生长延迟期;4~16 h时发酵液pH下降较快,进入对数生长期;16~36 h时发酵液pH下降缓慢,进入稳定期。RS1在培养温度为20~50 ℃范围内均能生长,适宜生长温度为25~40 ℃;在培养液初始pH 1.0~9.0条件下均能生长,最适pH为6.0~8.0;对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为23 mm,对大肠杆菌的抑菌圈直径为17 mm;对恩诺沙星和头孢他啶耐药;经14 d灌服小鼠生长状况良好。上述结果表明,本试验筛选到的干酪乳杆菌RS1安全、无致病性,在微生态制剂及生物饲料添加剂领域具有潜在的开发价值。     

庆大霉素发酵液检测方法研究

在庆大霉素微生物发酵过程中,探索发酵液中庆大霉素效价的快速测定方法。在优化的发酵工艺条件下发酵生产庆大霉素,分别运用旋光法、紫外分光光度法和高效液相色谱法(HPLC)对庆大霉素发酵液的效价进行测定。结果最佳发酵条件为:种瓶接种量2 cm2,种龄24 h,发酵瓶接种量12%,发酵周期5 d。优化后的庆大霉素发酵液效价相较于优化前提高70%左右。紫外分光光度法、HPLC法和旋光法测定的庆大霉素发酵液效价产生的误差均小于3%。三种检测方法均能运用在庆大霉素发酵液效价的快速检测中。旋光法操作简单但对标准品需求量大,紫外分光光度法耗时短但只能测定庆大霉素总体效价,HPLC法需要出峰时间。因此,在庆大霉素发酵液效价测定中需根据自己的需求选择最佳检测方法。     

干酪乳杆菌高密度发酵工艺优化

为探究一种新型干酪乳杆菌高密度发酵工艺，首先通过单因素试验、正交试验对干酪乳杆菌发酵液不同类别的基础成分进行测试，分析并选出最优组合；其次通过对比试验分别对干酪乳杆菌发酵过程中向发酵液中补充的促生长因子、碳源、氮源及p H调节剂的浓度进行测试筛选。结果表明：发酵最优工艺为：在无氧密闭的环境内以温度为37℃、p H为6.5、接种量为2%的初始条件进行发酵，在此条件下使用乳糖5 g/L、牛肉膏10 g/L、硫酸镁0.2 g/L、混合生长因子溶液(苹果汁：橙汁：山楂汁=3:2:1)10 mL/L的发酵液进行恒温无氧发酵；24 h后向发酵液中添加浓度0.3%的乳糖、0.8%的牛肉膏与4%的氨水，继续发酵24 h后收获菌种。在此发酵工艺条件下，收获的菌种密度可达到2.8×10¹⁰CFU/mL。     

甘蔗尾中乳酸菌的分离筛选和鉴定

该研究利用传统培养法从0–90 d打包青贮发酵的甘蔗(Saccharum sinense)尾中分离得到20株乳酸菌。通过形态学观察、API 50 CH生化试剂盒鉴定及16S rDNA基因序列分析法对分离纯化的菌株进行鉴定,并测定其产酸能力。结果显示,菌株Y42是干酪乳杆菌(Lactobacillus casei),菌株Y32、Y59是副干酪乳杆菌(L. paracasei),其余的17株是植物乳酸杆菌(L. plantarum);分离的20株菌株在培养18 h后,菌株发酵液的pH可降低至3.70以下,Y67菌株的pH最低,为3.57。从甘蔗尾中分离的20株乳酸菌产酸能力均较强,具备良好的青贮潜力,可作为制备青贮饲料发酵剂的菌种。     

嗜麦芽寡养单胞菌DHHJ降解羽毛产物的分析研究

通过对固态发酵羽毛产物进行分析,得出羽毛发酵液中氨基酸和微量元素的组分分布以及可溶蛋白分子量分布.根据嗜麦芽寡养单胞菌固态发酵羽毛所得发酵液的组成特点,认为其适合的应用领域是通过表面吸收方式的利用,如洗护用品和肥料.