高寒草地土壤产漆酶真菌的筛选及分子鉴定

以高寒草地土壤分离出的9株真菌菌株为研究对象,采用rDNA-ITS方法对筛选出的产漆酶菌株进行分子鉴定,根据菌株在愈创木酚、蒽酮、邻苯二酚、邻联甲苯胺、邻甲苯胺、α-萘酚、联苯胺、没食子酸为底物的选择性培养基上的生长情况、菌落大小、漆酶催化氧化还原反应产生的变色圈直径大小及其颜色深浅程度,进行产漆酶真菌初筛,采用液体产酶发酵法选用ABTS为底物测定漆酶活力进行复筛。鉴定结果为菌株1.9为Uncultured fungus clone.,2.1a为Scytalidium,310b为Marasmius tricolor,2.1c为Saccharicola,2.3a为fungal sp,2.4d为Saccharicola.,10a为Marasmiusrotalis,3.7c为Alternaria.WB为Verticilliumlongisporum。筛选结果表明：除菌株3.7c以外,其余8株菌株在以愈创木酚、蒽酮、邻联甲苯胺、联苯胺为底物的培养基上基本都产生氧化带,在没食子酸底物培养基上均不产生氧化带;菌株1.9,2.1a,310b,2.4d,10a,2.1c,2.3a均具有产漆酶活力,其中菌株310b具有较强产漆酶活力。     

东祁连山高寒草地土壤产漆酶真菌的筛选、鉴定及产酶条件的初步研究

以高寒草地土壤分离出的56个真菌菌株为研究对象,经愈创木酚-PDA培养基和α-萘酚-PDA选择性培养基初步筛选, 再根据菌株在愈创木酚、邻苯二酚、邻苯甲苯胺为底物的选择性培养基上菌体生长及菌落大小、漆酶催化氧化还原反应产生的变色圈直径大小及其变色圈颜色深浅程度,以及测定油菜秸秆诱导的液体发酵产漆酶活力,筛选出1株产漆酶酶活真菌菌株(编号为310b)。经rDNA-ITS基因序列分析,初步鉴定为Marasmius tricolor。对菌株310b产漆酶的条件进行了初步研究,结果表明,菌株310b在25℃培养条件下产漆酶活力最大,初始pH值为4.0时,漆酶活力最大,蔗糖、蛋白胨分别为诱导菌株产漆酶活力最高的碳、氮源。几种非营养有机物对菌株产漆酶活力大小不同,α-萘酚和吐温-80对菌株产漆酶没有明显影响,愈创木酚、单宁酸、吲哚乙酸抑制菌株产漆酶,其中吲哚乙酸抑制作用最强烈(P＜0.01)。在Cu²⁺浓度为0.001~0.025 g/L范围内,随Cu²⁺增加,产漆酶活力增加,0.025 g/L时产酶活力最大。随着接种量的增加,诱导漆酶活力增加。在60~180 r/min的转速范围内,随着转速的增加,漆酶活力增加。油菜秸秆粉的量在0~1 g范围内,随着秸秆添加量的增加,漆酶活力增加;1~2 g范围内,随着秸秆添加量的增加,漆酶活力减小。     

高寒草地土壤5株真菌合成不同功能酶系间互作效应的研究

为研究筛选自高寒草地5株真菌合成不同功能酶系间的互作效应,采用单个菌株发酵粗酶液直接混合和菌株组合发酵的2种方式,分别测定了反应体系中不同功能酶活力的变化情况。结果表明:菌株310b与4个菌株23a,26B,24d及H发酵粗酶液直接混合的情况下,反应体系中漆酶、羧甲基纤维素酶、木聚糖酶的酶活力下降, 且差异显著(P<0.05);而菌株310b与4个菌株组合发酵的情况下,反应体系中漆酶的酶活力下降,且差异显著(P<0.05),在与菌株23a和H的组合中,反应体系羧甲基纤维素酶和木聚糖酶的酶活力下降,且差异显著(P<0.05),与菌株26B和24d 的组合中,反应体系中羧甲基纤维素酶和木聚糖酶的酶活力没有变化。     

一株纤维素分解菌的鉴定及对两种草坪草凋落物分解活性的研究

对1株分离筛选自东祁连山高寒草地土壤真菌菌株F₁的分类学地位及对多年生黑麦草和白三叶凋落物的分解活性进行了研究。采用形态学和rDNA-ITS分子生物学相结合的方法,对菌株F₁的分类学地位进行了确定,初步鉴定为Microdochium bolleyi;应用摇瓶液体发酵法,通过接种和不接种处理,分别以2种草坪草凋落物为底物,于25℃,150 r/min震荡培养42 d,测定了2种草坪草凋落物诱导真菌分泌木质纤维素酶活力动态变化和草坪草凋落物细胞壁物质(CWM)的降解率。结果表明,1)接种处理后,2种草坪草细胞壁非水溶性物质(ICWM)的量显著减少(P<0.05);2)漆酶出现最早,其次是纤维素酶和木聚糖酶,邻苯二酚氧化酶和愈创木酚氧化酶出现最晚;3)与白三叶凋落物为底物的发酵体系相比,黑麦草凋落物ICWM和CWM降解率高,且差异显著(P<0.05);4)除漆酶之外,以黑麦草凋落物诱导菌株F₁分泌的滤纸酶、羧甲基纤维素酶、木聚糖酶、邻苯二酚氧化酶和愈创木酚氧化酶活力比白三叶诱导相应的酶活力高(P<0.05)。     

产漆酶真菌对高寒草甸土壤有机质矿化特性的研究

为了了解产漆酶微生物真菌对高寒草甸土壤有机质的矿化作用及其特性,实验采用室内密闭静置培养法,对添加产漆酶真菌Marasmius tricolor 310b发酵粗酶液对高寒草甸土壤生物活性有机碳库的影响进行了研究。结果表明：与对照组相比,添加产漆酶真菌Marasmius tricolor 310b发酵粗酶液后,在整个培养期内土壤CO₂释放量和微生物生物量碳含量随培养时间的延长,呈现不断下降的趋势,35 d后趋于稳定;在整个培养周期,微生物呼吸熵的变化总体呈对数降低趋势,处理组符合方程y=-9.964ln （x）+32.281（R²=0.9744）,对照组符合方程y=-9.788ln （x）+28.683（R²=0.95）,处理组土壤CO₂的累计释放量始终高于对照组（P<0.05）,说明菌株310b促进了土壤有机质矿化作用。土壤有机碳含量在培养前期开始降低,但差异不显著,15 d后处理组的土壤有机碳含量低于对照组（P<0.05）,说明不同阶段产漆酶真菌对有机质的周转速率不同,推测产漆酶真菌对有机质的转化作用与土壤环境条件有关。     

α-淀粉酶产生菌的分离筛选与诱变选育

从土样、水样和面样中分离产α-淀粉酶的芽胞杆菌,对3个样品进行淀粉平板分离和革兰氏染色、芽胞染色,选出产α-淀粉酶芽胞杆菌10株(土样4株、面样3株、水样3株).同时测得其水解圈直径与菌落直径的比值,均在1.9～2.6之间,通过产淀粉酶液体培养基发酵产酶,采用比色法测定发酵液中α-淀粉酶活力均在4.8～5.7 g/mL之间.以筛选出产酶活力较高的菌株为出发菌株,进行紫外线诱变选育,经过大量筛选得到优良菌株,在适宜条件下经过发酵其α-淀粉酶活力可达9.6～13.0g/mL,较出发菌株酶活力提高了69.9%～129.5%.     

枯草芽孢杆菌体外降解饲料蛋白能力的评估

为了评价枯草芽孢杆菌降解豆粕、玉米粉和酪蛋白的能力,试验选用3株性状优良的猪源枯草芽孢杆菌A7株、H6株、S1株为供试菌株,优化培养后定性分析3株菌的产酶能力,提取各菌株培养后的粗酶液定量评定菌株酶解豆粕、玉米粉和酪蛋白的能力。结果表明:枯草芽孢杆菌A7株分泌蛋白酶能力明显强于其他菌株。进一步采用粗酶液降解豆粕、玉米粉和酪蛋白,试验组各底物水解度明显高于对照组,其中试验组A7菌株增加幅度最大。A7菌株各底物的酶解液中游离氨基酸含量增幅较高,同时三氯乙酸氮溶解指数(TCA-NSI)和非蛋白氮(NPN)含量增幅均最高,其中酶解玉米粉时TCA-NSI增幅可达25.18%,NPN增幅可达27.89%。A7菌株对饲料样本豆粕、玉米粉的降解率分别为53.13%和11.17%,比对照组提高了17.64%和7.49%,且明显高于其他菌株。说明A7株蛋白酶无论是对饲料蛋白还是硬性蛋白,都具有良好的分解能力。     

果叶兼用多倍体新桑品种嘉陵30号多酚氧化酶(PPO)酶学特性研究

本文以人工四倍体新桑品种嘉陵30号为供试材料,以邻苯二酚为作用底物,用紫外分光光度吸收法,测定不同pH、反应温度、底物浓度等对多酚氧化酶活性的影响.实验结果表明,嘉陵30号的多酚氧化酶对光的最大吸收波长为410nm,PPO酶活力为0.032nm/min,最适底物浓度为均0.4mol/L,最适pH为4.0,最适温度为25...     

木质素降解菌的筛选及其漆酶性质研究

为筛选产漆酶的木质素降解菌,采用愈创木酚平板法和RB亮蓝平板法进行菌株筛选,利用16S r DNA序列分析对菌株进行鉴定,通过液体发酵培养对漆酶活性和木质素降解能力进行研究。将漆酶基因cot A克隆到表达载体p ET-32a(+)上获得重组质粒p ET-32a(+)-Cot A并转化到BL21中进行表达,通过酶活测定将表达条件进行优化。结果:从白蚁肠道中成功筛选出1株产漆酶的木质素降解菌,鉴定为枯草芽胞杆菌。漆酶的最适酶活温度为60℃,最适酶活p H为3.5~4.0;0.2 mmol/L Cu2+可诱导菌株漆酶的产生,缩短了产酶时间并提高了酶活性。菌株木质素降解率在液体发酵培养24 h后达到了17.1%。漆酶基因大小为1 542 bp,表达的重组蛋白为85 ku,属于有活性的可溶性蛋白。在IPTG浓度为1mmol/L、Cu2+浓度为0.3mmol/L、诱导时间为9 h的条件下,漆酶蛋白活性可达到113.10 U/L。研究表明,本试验成功筛选出1株降解木质素能力较强的枯草芽胞杆菌,获得可分泌较高活性漆酶的重组菌,为木质素酶在畜牧业生产实践上的应用奠定了基础。     

适宜内生真菌Epichloësinensis生长的碳氮源筛选

前期试验筛选出了生长迅速、性状优良的Epichlo? sinensis内生真菌菌株,为进一步利用这些性状优良的菌株,需筛选出适宜E. sinensis生长的最佳碳氮源,本研究分别采用不同碳源(葡萄糖、淀粉、麦芽糖、甘露醇、山梨醇)和氮源(氯化铵、蛋白胨、胰蛋白胨、酵母浸粉、尿素)的固体培养基及液体培养基,对3株E. sinensis内生真菌菌株(菌株ID:1、41C和111C)进行培养,探究不同碳氮源条件下,E. sinensis的生长状况及总抗氧化能力。结果表明:供试的3株E. sinensis菌株的生长有显著差异(P 0.05),在所有的碳源和氮源培养基上,菌株111C的菌落直径、生长速率、菌丝鲜重及总抗氧化能力均显著高于菌株1和41C (P 0.05),菌丝直径低于菌株1和41C。而菌株41C的菌落直径及菌丝鲜重显著高于菌株1 (P 0.05),总抗氧化能力及菌丝直径显著低于菌株1 (P 0.05)。不同菌株适宜的碳源和氮源亦不相同,在供试的5种碳源和氮源中,菌株111C的最佳碳氮源为麦芽糖和胰蛋白胨;菌株41C的最佳碳氮源为葡萄糖和胰蛋白胨;菌株1的最佳碳氮源为葡萄糖和胰蛋白胨;且在以酵母浸粉为氮源的条件下,3株内生真菌的总抗氧化能力最强。本研究结果表明,菌株111C生长迅速,总抗氧化能力强,可用于后续研究利用且初步研究获得适宜E. sinensis生长的最佳碳氮源。     

Screening and Identification of Laccase Fungi in Alpine Meadow北大核心CSCD

Nine strains of fungi that isolated from alpine meadow were used as research objects. The laccase-producing strains were identified by rDNA-ITS method. According to the strains, guaiacol, anthrone, catechol and neighbors were identified. Growth on selective medium of toluidine, o-toluidine, crnaphthol, benzidine, gallic acid as substrate, colony size, size of the color circle produced by laccase-catalyzed redox reaction, and the degree of color depth, the laccase-producing fungus is firstly screened, and the laccase activity is determined by the liquid-producing enzyme fermentation method using ABTS as a substrate for re-screening. The results showed that strain 1. 9 was Uncultured fungus clone. 2. la was Scytalidium, 310b was Marasmius tricolor, 2.1c was Saccharicola, 2. 3a was fungal sp, 2. 4d was Saccharicola. 10a was Marasmiusrotalis, 3. 7c was Alternaria. WB was Verticilliumlongisporum. The screening results showed that except for strain 3. 7c, the other 8 strains basically produced oxidative bands on the culture medium with guaiacol, anthrone, ortho-toluidine and benzidine as substrates, and cultured in gallic acid substrate. No oxidative bands were produced on the culture medium; strains 1. 9, 2. la, 310b, 2. 4d, 10a, 2. lc, and 2. 3a all had laccase activity, and strain 310b had stronger laccase activity than the other strains. © 2019 China Agricultural University. All rights reserved.     

桑卷叶枯病病原菌的形态特征与分离培养条件

桑卷叶枯病是桑树的主要真菌病害之一。采用常规的微生物学试验方法观察病原菌桑单胞枝霉菌(Hormodendrummori Yendo)的形态并研究病原菌的分离培养条件。结果表明,病原菌在PDA培养基上生长良好,形成白色圆形凸状菌落,并能产生大量的暗蓝褐色分生孢子梗和淡灰色分生孢子;菌丝的生长温度为8～40℃,产生分生孢子的温度为10～38℃,分生孢子的致死温度为50～55℃,菌丝生长和分生孢子产生的最适温度为25～30℃;适合菌丝生长的pH为4.5～11.0,最适pH为6～7;相对湿度大有利于菌丝生长和分生孢子的产生与萌发;连续光照可促进产孢。以上结果信息可供研究桑卷叶枯病病原菌的危害特点和建立病害的有效防治方法参考。     

不同培养基及诱导物对捕食性真菌Duddingtonia flagrans发酵液中蛋白质的产生及杀虫作用的影响

为研究捕食性真菌Duddingtonia flagrans发酵液中蛋白质的产生及杀虫作用,使用不同营养成分组成的液体培养基及诱导物,对Duddingtonia flagrans进行培养和诱导,测定其发酵液中的蛋白质含量、蛋白酶活性、磷酸酶活性和杀虫作用,进而确定Duddingtonia flagrans产生胞外蛋白质和杀虫作用最适的培养基与诱导物。结果显示,不同培养基及诱导物对Duddingtonia flagrans的代谢过程会产生明显影响,导致其分泌的蛋白质种类、浓度以及蛋白酶和磷酸酶的活性显著不同;Duddingtonia flagrans发酵液不仅具有杀线虫活性,而且有杀蝇蛆作用。上述结果为进一步研究捕食线虫性真菌的杀虫机理提供了重要参考依据。     

紫花苜蓿根腐新病原-厚垣镰孢菌生物学特性研究

针对紫花苜蓿根腐致病菌厚垣镰孢菌(Fusarium chlamydosporum)在不同温度、光照、p H和多种碳氮源条件下的生物学特性,采用菌饼法进行了测定,并对不同碳氮源下菌落产色素情况进行了连续观察。结果表明:该病原菌在5~40℃均可生长,最适温度为25℃;当p H 4.0~12.0时均能生长,最适宜p H为7.0;全黑暗条件有利于菌丝生长,菌丝生长最适碳源、氮源分别为山梨醇和蛋白胨,碳源氯醛糖及除蛋白胨以外8种氮源均不利于菌丝的生长。含不同碳氮源培养基可诱导菌丝产生不同色素,且颜色变化差异大,在不同的生长阶段,色素颜色也会发生变化。     

一株枯草芽胞杆菌产抑菌物质发酵条件及代谢产物稳定性研究

枯草芽胞杆菌L7是从牛粪中选出的,它的代谢产物中的抑菌物质对多种病原菌具有强烈的抑制作用。通过对其抑菌物质产生的发酵条件研究认为,最佳发酵条件为pH值7.0、接种量4%、30℃恒温振荡培养箱培养,发酵时间约60h。其代谢产物中的抑菌物质在80～121℃下30min稳定,pH值在6.0～10.0范围内稳定,光照2～6h后抑菌活性下降。结论：菌株L7的发酵产物具有较强稳定性,可置避光、pH值中性、常温环境中短期保存,经提高活性、纯化等处理后可能作为新型天然防腐剂应用于食品领域,或应用于抗感染微生态制剂的生产。     

Screening and Identification of the Cellulase-producing Fungus

In order to isolate the strains which could degrade fiber from the straw,the straw samples were inoculated on the potato agar medium and cultured at room temperature.The isolating strains were inoculated on the cellulose-congo red agar medium,the strains were screened that could produce bigger cellulose-decomposing zone.It was identified by morphological characteristics and molecular biological methods,and characterization of cellulase was analyzed preliminarily.The results showed that the fungus was Aspergillus niger,it could grow at room temperature,and the H/C was 7.64.The highest cellulase activity reached 42.18 U/mL when cultivated at 20 ℃ for 5 days.The optimum pH was 7.0 and the optimum reaction temperature was 20 ℃,the relative cellulase activity still retained above 90% at 20 to 40 ℃ or pH 6.0 to 8.0 for 1 h.The Aspergillus niger was a cold-adapted cellulaseproducing strain,it had strongger producing cellulase ability,and was tremendous potential valuable for microbial development.     

莱氏野村菌cq菌株感染家蚕的特性及菌株产生的晶体

莱氏野村菌(Nomuraea rileyi)cq菌株为昆虫致病性真菌,能感染家蚕发生绿僵病。显微镜下观察菌株体外培养产生的分生孢子呈卵圆形或椭圆形,大小为3.2～4.6μm×2.5～3.2μm,分生孢子梗单生,具有3～4个轮状分支,每个分支着生2～3个瓶梗,瓶梗基部膨大,在瓶梗顶端尖处着生分生孢子。在感染莱氏野村菌的家蚕幼虫血液中可观察到菌株产生的大量豆荚状、酵母状芽生孢子,病蚕血液呈浑浊的乳白色,体表出现褐色病斑,反应迟缓,尸体逐渐僵化,被鲜绿色的孢子粉覆盖。另发现该菌株在感染家蚕幼虫的体表和血液中能产生菱形晶体,同时菌株在体外培养基上培养时也观察到大量的正八面体菱形晶体,且改变培养温度和pH值,晶体产生的时间延长,形状和大小也会发生变化,出现长方形、正方形六面体形状及不规则形状晶体。推测莱氏野村菌cq菌株产生的晶体可能是有利于菌株感染家蚕的一种次生代谢产物。