Oct4在山羊睾丸组织中的表达与定位

探讨不同时期山羊睾丸组织中干细胞的分布和特点,以45 d和75 d山羊胎儿及出生后4月龄山羊睾丸为试验材料,进行了HE染色和Oct4抗体的免疫组化染色。结果显示,在45 d山羊胎儿睾丸组织中睾丸实质细胞聚集呈团状,形成岛屿状组织结构;发育到75 d山羊胎儿睾丸组织中睾丸的间质与实质组织结构差异明显,睾丸生精小管已经形成,生精小管管腔闭锁;出生后4月龄山羊睾丸组织结构明显,生精小管形态特征清晰,但管腔仍处于闭锁状态;Oct4免疫组织化学显示在45 d山羊胎儿睾丸组织中Oct4阳性细胞呈岛屿状分布,多见于生精小管前期的组成细胞;对于75 d山羊胎儿睾丸组织Oct4阳性细胞呈环状分布于生精小管中,睾丸间质组成细胞中则较少;在出生后4月龄山羊睾丸中阳性细胞主要分布于睾丸组织生精小管基底膜,沿基底膜环状分布。试验证实了在早期山羊睾丸组织中Oct4主要表达在生精前体细胞。     

羊驼睾丸细胞凋亡及凋亡相关蛋白的定位

本研究旨在观察羊驼睾丸的出生后发育和精子发生过程中的细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl2和Caspase3 的定位.取材新生、12月龄和24月龄羊驼的睾丸,用TUNEL法检测睾丸发育和精子发生过程的细胞凋亡,用免疫组织化学技术检测凋亡相关蛋白Bcl2和Caspase3在羊驼出生后发育和精子发生过程中的定位.结果显示在新生羊驼睾丸未检测到TUNEL阳性细胞,Caspase3和Bcl2表达于间质细胞,提示在新生期凋亡蛋白参与间质细胞凋亡的调节,为曲精小管的发育提供空间;12月龄羊驼睾丸TUNEL阳性细胞定位于曲精小管中央部分,Caspase3 和Bcl2定位于间质细胞和曲精小管中央生殖细胞,提示在青春期(12月龄)羊驼睾丸,细胞凋亡和凋亡相关蛋白参与曲精小管管腔形成的调节;24月龄羊驼睾丸TUNEL阳性细胞定位于精原细胞、精母细胞和精子细胞,Caspase3 和Bcl2定位于间质细胞和各个发育阶段的生精细胞,Caspase3阳性细胞在精原细胞最高,向精母细胞和精子细胞逐渐减少,Bcl2在精原细胞弱阳性表达,在血睾屏障以内的曲精小管近腔室部分呈弥散性强阳性表达,提示在性成熟(24月龄)羊驼睾丸精子发生过程中,细胞凋亡主要发生于精原细胞和早期精母细胞,Bcl2可能抑制精母细胞之后生殖细胞的凋亡.结果提示在羊驼睾丸出生后发育和精子发生过程中存在细胞凋亡现象;凋亡蛋白Caspase3和Bcl2参与羊驼睾丸发育和精子发生过程中细胞凋亡的调节.     

不同月龄山羊睾丸生精小管及固有层结构分析

试验旨在探究不同月龄山羊睾丸生精小管、固有层的结构及成分变化，及睾丸中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白的分布情况。选用1月龄和2月龄(幼龄)、12月龄(成年)山羊睾丸，利用特殊组织染色、免疫荧光、透射电镜并结合形态学计量统计分析，研究性成熟前后山羊睾丸生精小管、固有层细胞的结构成分及变化。结果显示：随着睾丸发育，生精小管管径增大，生精细胞种类、数量增多；支持细胞发育完善，体积增大，但轮廓不明显；睾丸间质细胞逐渐发育成熟，胶原纤维广泛分布于生精小管固有层基膜和睾丸间质中。免疫荧光染色观察可见：在1月龄、2月龄山羊睾丸中，α-SMA在管周肌样细胞、小动脉血管管周平滑肌细胞中表达阳性，在支持细胞、各级生精细胞、睾丸间质细胞中无表达；在12月龄山羊睾丸中，α-SMA在管周肌样细胞、小动脉血管管周平滑肌细胞中表达阳性，在支持细胞、各级生精细胞、睾丸间质细胞中无表达。本试验为深入研究睾丸的生理功能提供了基础形态学依据。     

脱氢表雄酮对雄性小鼠睾丸组织发育的毒性作用

昆明种雄性小鼠32只,随机分为4组。脱氢表雄酮（DHEA）日摄取量分别为0（对照组）、20、40和60mg／kg,试验期52d。各组分别在42日龄、72日龄处死小鼠,分离睾丸,制作石蜡切片,HE染色,显微观察、摄影。结果显示,与对照组比较,42日龄时中、高剂量组的曲精小管断面变形,各时期的生精细胞和成熟精子数量均减少;高剂量组曲精小管内生精细胞层次基本消失,出现较大腔隙,间质发生不同程度的变化。72日龄时中、高剂量组的曲精小管断面变形。基膜变薄伴有断裂和间质受损增加。中剂量组出现畸形精子,高剂量组曲精小管中央空白区域增大,缺乏成熟精子。以上结果表明,中、高剂量的DHEA对生长期小鼠的睾丸组织结构发育有明显的毒性作用。     

犬隐睾及睾丸肿瘤中PGP9.5和NPY的分布比较

试验旨在分析肽能神经递质蛋白基因产物9.5（protein gene product 9.5,PGP9.5）和神经肽Y（neuropeptide Y,NPY）在犬隐睾及睾丸肿瘤中的分布和表达,并与同年龄正常睾丸组织进行比较,为认识犬睾丸肿瘤恶变临床诊断提供参考。应用HE染色、Masson三色染色、Gomori银浸染、甲苯胺蓝染色观察各组织中网状纤维、胶原纤维及肥大细胞等组织特征,采用免疫组织化学SP法及免疫荧光法结合IPP统计分析PGP9.5和NPY在组织中的表达及定位。结果显示,正常犬睾丸生精上皮由4~7层生精细胞及Sertoli细胞构成,间质组织胶原纤维和网状纤维分布稀疏。隐睾生精小管基底膜胶原纤维厚度增加,Sertoli细胞核浓缩位于生精小管基底,间质网状纤维增多。睾丸肿瘤组织结构不清晰,胶原纤维和网状纤维无规则分布,肥大细胞较正常组及隐睾组显著增多。免疫荧光定位表明,PGP9.5在正常睾丸Leydig细胞中呈中等阳性表达,生精细胞中无明显表达;隐睾Leydig细胞及生精细胞中呈强阳性表达;睾丸肿瘤中偶有表达。NPY在正常睾丸Leydig细胞中偶见阳性表达,生精细胞中无表达;隐睾Leydig细胞及生精上皮中无表达,间质小血管管壁呈高密度强阳性表达;睾丸肿瘤组织中无明显表达。免疫组化统计表明,睾丸肿瘤组织中PGP9.5和NPY较正常组极显著降低（P<0.01）,隐睾组PGP9.5和NPY表达显著或极显著增加（P<0.05;P<0.01）。因此,犬隐睾时PGP9.5及NPY的表达增高,提示犬隐睾时已有发展为肿瘤的趋势,且与肿瘤恶变程度相关。     

连城白鸭睾丸胚后生长发育的初步研究

利用形态学、组织学方法,对初生至300日龄连城白鸭睾丸生长发育进行了初步研究,以探讨其胚后发育和性成熟特点。结果显示:连城白鸭睾丸大小、重量、睾丸指数及睾丸曲精小管组织结构均呈明显的日龄性变化。随着日龄增长,连城白鸭双侧睾丸体积、双睾重、睾丸指数逐渐增大,曲精小管管径和上皮高度逐渐增大,细胞层数增多,间质组织先增多,而后又减少,白膜厚度也先增大后减小。随着性成熟的开始,精原细胞不断分裂分化,出现了不同发育阶段的生精细胞。连城白鸭睾丸的胚后发育过程分为4期:30日龄之前为精原细胞增殖和曲精小管形成期,30~60日龄为初级精母细胞增殖期,60~75日龄为次级精母细胞增殖期,90~120日龄为精子形成期。     

冷冻保存新生牛睾丸组织中支持细胞的分离纯化

睾丸支持细胞(sertoli cells,SCs)是生精上皮中的多功能体细胞,其分离培养对体外探讨精子发生机理至关重要。因牛新鲜睾丸组织取材不便,本试验在前期基础上探讨了从冷冻保存的新生牛睾丸组织中分离纯化SCs的可行性。将冻存的1日龄牛睾丸组织复苏,进行形态学检查和SCs分离培养。石蜡切片苏木精-伊红(HE)染色显示,曲细精索及睾丸间质保存完好。二步酶消化结果显示,生精上皮解离良好。利用差异贴壁法将原代细胞纯化后扩大培养,绝大多数细胞呈不规则多边形,3d即可生长至汇合。RT-PCR分析显示,贴壁细胞表达SCs阳性分子标记胶质细胞源神经营养因子(GDNF)和雄性激素结合蛋白(ABP)而不表达精原细胞分子标记PLZF。流式细胞术检测显示,所获细胞中ABP和GDNF阳性细胞数分别为99.7%和99.8%。以上结果表明,从冻存的新生牛睾丸组织中可获高纯度的SCs。本试验结果为后续相关试验奠定了基础。     

不同月龄阶段陕北白绒山羊生精细胞发育规律研究

为研究陕北白绒山羊生精细胞发育规律,取1月龄、3月龄、6月龄及成年陕北白绒山羊睾丸组织,HE染色观察睾丸发育情况。结果表明:(1)随着年龄的增长,曲细精管直径显著增大(P0.05),6月龄达到150.72μm,略低于成年羊(161.94μm)(P0.05)。(2)细胞层数随年龄的增长而增长,6月龄达到7.70层,显著高于1月龄和3月龄(P0.05)。曲细精管横截面细胞总数随年龄增长而增长,6月龄和成年绒山羊曲细精管横截面细胞总数显著高于1月龄和3月龄绒山羊(P0.05)。(3)3月龄陕北白绒山羊曲细精管中精原细胞最为丰富,占总细胞数的46.40%,明显高于1月龄(33.10%)、6月龄(9.10%)和成年羊(7.60%)(P0.05)。(4)精原干细胞标记基因(CD49f、PLZF、Thy1、ETV5、VASA、Oct4、Nanog、Nanos2)均在3月龄睾丸中高表达,其中Oct4、PLZF、Thy1、ETV5、VASA、Nanog及Nanos2显著高于1月龄、6月龄及成年羊(P0.05)。研究结果表明,6月龄陕北白绒山羊已经达到性成熟;与1月龄、6月龄和成年羊相比,3月龄陕北白绒山羊睾丸组织含有更加丰富的精原细胞。     

羔羊睾丸支持细胞发育的组织学观察

为研究羔羊睾丸支持细胞发育过程中的形态学变化,本实验以湖羊1-5月龄的羔羊睾丸为材料,采用常规石蜡包埋、组织切片技术,应用Olympus DP71显微镜照相系统和DP Control软件拍照获取图像,观察了睾丸支持细胞、生精细胞的的形态学变化,利用显微测微系统测量了支持细胞大小、数量、生精小管管径以及面积变化。结果表明:性成熟前羔羊睾丸的解剖特征参数总体表现出左侧大于右侧;随着羔羊睾丸的发育,支持细胞的结构更加清晰完整,细胞体积逐渐增大,生精小管管径、睾丸支持细胞和生精细胞的数目都有增加,并没有在生精小管中发现圆形精子。性成熟之前,羔羊睾丸支持细胞的快速增长主要表现在生精小管直径显著性增大,随着羔羊睾丸生长发育,支持细胞的增殖能力增强,并对生精细胞的发育有一定的影响,本研究可为进一步研究不同季节及不同发情时期滩羊睾丸发育特征提供参考。     

老龄牦牛睾丸组织结构研究

探讨高原老龄牦牛睾丸组织结构特点与其生殖机能的关系。采集9~13岁健康老龄牦牛睾丸组织,应用组织化学染色和透射电镜技术,观察其细胞化学特点及结构特征。结果显示,老龄牦牛睾丸体积及重量左侧略大于右侧,光镜下睾丸被膜、间质组织胶原纤维及网状纤维丰富,小叶不明显,Leydig细胞散在于结缔组织之间,生精小管不同程度退化,生精上皮层数为2~5层,细胞间隙变大,部分脱落,Sertoli细胞低矮,细胞质较少。电镜观察Sertoli细胞核外形不规则,内质网呈疏松的泡状,次级溶酶体增加,体积增大。相邻Sertoli细胞间没有观察到并行的内质网层和细丝束这一血-睾屏障所特有外质特化区形态结构,部分生精小管固有膜胶原纤维增生,上皮皱缩;Leydig细胞内脂滴异常丰富,毛细血管内皮细胞间存在紧密连接。间质组织偶有肥大细胞,间质血管及生精小管固有膜中PAS及AB-PAS阳性反应明显。老龄牦牛Sertoli细胞细胞器结构异常,血-睾屏障中Sertoli细胞间的连接处缺陷,且Sertoli细胞与基膜连接的改变可能影响了Sertoli细胞和生精细胞之间的相互作用,进而抑制了生精细胞的功能。     

中华鳖睾丸界膜的组织学特性

以中华鳖2个繁殖阶段的睾丸为研究对象,探究睾丸界膜细胞成分的变化,为中华鳖界膜的深入研究提供理论依据。分别在冬眠期(4月)以及繁殖期(9月)摘取健康成熟的野生中华鳖睾丸,使用HE染色、马松染色、甲苯胺蓝染色、免疫组化染色等方法观察不同阶段中华鳖睾丸组织及细胞成分变化情况,使用免疫组化对肌样成纤维细胞进行表达定位,对中华鳖睾丸生精小管及睾丸界膜变化进行统计分析。结果显示:繁殖期中华鳖睾丸生精小管面积显著大于冬眠期(P0.05),生精上皮厚度极显著大于冬眠期(P0.01);冬眠期中华鳖睾丸界膜面积显著大于繁殖期(P0.05),界膜厚度极显著大于繁殖期(P0.01)。冬眠期细胞间质内含有大量细胞,胶原纤维增多,而繁殖期中华鳖睾丸界膜细胞成分少,胶原纤维减少;冬眠期中华鳖睾丸的肌样成纤维细胞较繁殖期有着明显的多层弥散状结构,而繁殖期中华鳖睾丸肌样成纤维细胞的分层结构并不明显。提示:睾丸结构的改变可能与中华鳖不同繁殖阶段的生理功能相关,这也为研究界膜成分的变化对于生精障碍提供了一定的参考。     

贵州香猪睾丸发育中支持细胞和生精细胞数量变化观察

为了解香猪睾丸发育过程中生殖细胞和支持细胞数变化规律,用手术取出30,40,50,70,90和110日龄(每个年龄组n=3～4)香猪右侧睾丸,经中性多聚甲醛固定,石蜡包埋,组织切片采用免疫组化SP法,用单克隆抗体GATA-4检测睾丸支持细胞的特异生长转录因子-4,经DAB显色、苏木素复染。光镜下核呈棕色者为支持细胞,核呈蓝色者则为生殖细胞;经显微照相并用Scion image软件测量生精小管及管壁面积。结果:30～110日龄睾丸支持细胞数维持在稳定水平(P>0.05),而生殖细胞数随日龄增加而增多,70日龄生殖细胞数快速增多(P<0.05),持续到110日龄。同样,从70日龄开始睾丸生精小管和管壁面积显著性增大(P<0.05)。香猪睾丸支持细胞快速增殖发生在30日龄前,而生殖细胞数随着日龄的增长而增多。     

香猪睾丸发育的形态学变化

为了解香猪睾丸发育过程中的形态学变化,外科手术取30、40、50、60、90、110日龄（每个年龄组n=3～4）香猪右侧睾丸经中性多聚甲醛固定,石蜡包埋,组织切片采用HE染色,40倍物镜下观察细胞数量变化,经显微照相后用Scion image软件测量生精小管、输出小管和附睾管的管壁面积。结果发现30～50日龄时睾丸生精...     

老龄牦牛睾丸细胞外基质相关蛋白的分布特征

探索细胞外基质相关蛋白在老龄牦牛睾丸的分布特征。应用组织化学方法比较、观察9头健康老龄牦牛和10头青年牦牛睾丸组织结构特点及层黏连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)和硫酸乙酰肝素糖蛋白(HSPG)的分布特征。结果显示:光镜下,老龄牦牛生精上皮部分或完全退化,生精小管固有膜及间质胶原纤维及网状纤维较青年牦牛丰富;老龄睾丸间质血管及生精小管固有膜中AB-PAS阳性反应较青年牦牛增强。数据统计表明,老龄牦牛Sertoli细胞及Leydig细胞数均明显减少,生精小管横截面积以及平均间质组织面积极显著大于青年牦牛(P0.01)。免疫组织化学显示,LN在老龄牦牛睾丸Sertoli细胞和肌样细胞表达与青年牦牛相近,LN在生精细胞表达降低,而在Leydig细胞几乎无表达;ColⅣ在不同年龄牦牛睾丸组织表达位置及强弱相似,但其平均吸光度检测结果无统计学差异;老龄牦牛睾丸组织HSPG主要在Leydig细胞表达降低,平均吸光度检测统计极显著低于青年牦牛(P0.01);同一年龄段LN、ColⅣ和HSPG表达无明显差异。高原环境中,老龄牦牛生精上皮退化伴随着间质成分增加、间质面积增大、Leydig细胞及Sertoli细胞数量减少等形态学变化;睾丸组织ColⅣ分泌增加且胶原纤维合成增强,LN和HSPG的显著降低可能影响Leydig细胞合成分泌能力。     

双峰驼隐睾组织结构分析

比较观察同年龄(2岁)双峰驼(Camelus bactrianous)正常睾丸与隐睾的显微及超微结构特点。采用光镜和电镜制片及组织化学染色技术,比较双峰驼隐睾与正常睾丸的组织结构特点,进而用IPP图像分析软件进行定量分析。结果:光镜下双峰驼隐睾生精上皮由1~3层细胞组成,生精小管平均直径显著减小(P0.05),间质组织面积极显著增加(P0.01),间质/管腔面积比较正常组极显著增大(P0.01)。电镜观察,双峰驼正常睾丸生精小管固有膜层发育良好,相邻Sertoli细胞之间形成典型连接复合体;生精细胞之间多处形成细胞间小管和桥粒结构。隐睾生精上皮基膜增生明显,其上半桥粒结构不清晰,发育不成熟的Sertoli细胞相邻细胞膜间存在不完全的桥粒结构,可见相邻精母细胞间的胞质桥及Sertoli细胞与初级精母细胞之间桥粒连接;双峰驼正常睾丸Leydig细胞内滑面型内质网和粗面型内质网相延续;隐睾Leydig细胞形态不规则,胞内肿胀线粒体数量较多,内质网不发达;隐睾间质毛细血管基膜不清晰;血管内皮细胞之间可见缝隙连接。双峰驼隐睾生精小管组织结构主要变化为Sertoli细胞异常分化及精子发育阻滞;隐睾Sertoli细胞多为幼稚型,其与基膜连接的改变以及Sertoli细胞外质特化区形态结构及桥粒结构不完整影响了血-睾屏障构成;Leydig细胞内质网发育不均衡为其分泌功能与机体发育阶段关系研究提供思路。     

大通牦牛的培育——野、家牦牛杂种公牛生精水平的研究

通过解剖组织学、体视学方法及聚丙酰胺凝胶电泳方法,对半血野牦牛,横交半血野牦牛和家牦牛6～24月龄公牛睾丸组织进行了超微结构形态学观察,组织定量学参数、乳酸脱氢同工酶(LDH)及LDH-x活性及百分含量比较分析.结果表明半血野牦牛、横交半血野牦牛和家牦牛睾丸组织的超微结构、生殖细胞发育程度相似.12月龄时公牛精细胞开始分化,第一批精子生成,睾丸开始迅速生长,应为牦公牛的初情期.睾丸的重量和曲细精管、生殖上皮的体积密度及生精上皮高度随月龄增长而逐渐增加和变厚.曲细精管的空腔体积密度及间质组织的体积密度随月龄增长而逐渐减小,睾丸和附睾LDH同工酶随月龄增长和睾丸组织生殖细胞发育,活性分布规律和电泳图谱特征表现出明显组织器官特异性.24月龄时,睾丸和附睾6条带俱全.LDH-x位于LDH4及LDH5之间,标志着牦公牛性成熟开始和睾丸发育及精子生成是同步的.     

性成熟前不同日龄伊拉兔睾丸和附睾形态学与组织学特征

【目的】探究不同日龄伊拉兔睾丸和附睾组织在性成熟前的变化规律,为其初情期及性成熟的判定提供组织学依据。【方法】将45只伊拉兔随机分为9组,每组5只,从30日龄开始每隔15日采集1组试验兔的睾丸及其附睾,运用形态学与组织解剖学方法对其生长发育规律进行研究分析。【结果】随着日龄的增加,睾丸指数、睾丸重、睾丸长径、睾丸短径及厚径等指标逐步增加,且150日龄时各指标均显著高于其他组(P<0.05);30、45、60日龄睾丸内生精小管排列稀疏,75、90、105日龄时睾丸间质成分逐渐增多,管腔逐步形成,120、135、150日龄时间质细胞进一步增生并成群分布,90日龄起出现圆形和长形未成型精子,120日龄的睾丸生精小管、附睾管腔中出现少量成型精子,150日龄时有大量精子密集分布于睾丸管腔内,且在120、135、150日龄时生精小管面积、上皮细胞厚度、支持细胞数均显著大于其他组(P<0.05);30日龄以上各组间质细胞个数在各组间差异不显著(P>0.05),但均显著高于30日龄;120、135、150日龄时附睾头、体、尾的直径均极显著高于其他组(P<0.05),而附睾头的柱...     

猪睾丸组织的形态学观察、细胞凋亡和巴豆酰化修饰

制作睾丸组织切片,运用HE染色和细胞TUNEL染色分别观察不同发育阶段猪睾丸的形态学和细胞凋亡;提取睾丸组织蛋白,利用免疫印迹检测不同发育阶段猪睾丸蛋白的Kcr修饰水平;最后利用免疫荧光技术检测Kcr蛋白在猪睾丸组织中的定位.结果 显示,随着月龄的增长,猪睾丸精细管管腔直径增加,睾丸组织在4月龄时精细胞开始分裂,凋亡细...     

高原牦牛隐睾组织结构特征

观察成年牦牛隐睾的组织结构特点,分析高原环境对其生殖微环境的影响。应用HE、Masson’s、Gomori’s特殊染色以及免疫组织化学方法和透射电镜观察比较成年牦牛隐睾与单侧正常睾丸、正常睾丸组织结构特点,进而用IPP图像分析软件进行定量统计。与正常组睾丸相比,隐睾生精小管管径极显著减小(P0.01),基膜增厚,腔内生殖细胞丢失,散在少数幼稚型Sertoli细胞,胞内线粒体变性且含有大小不等的脂褐素颗粒;间质内胶原纤维增生,间质/管腔面积比极显著增大(P0.01),Leydig细胞数量减少,胞内线粒体肿胀,间质血管数量减少,管壁增厚皱缩,血管内皮细胞内含大量脂褐素颗粒;睾丸实质部分钙化。单侧正常组睾丸生精上皮细胞为3~4层,Sertoli细胞发育成熟,少见初级精母细胞及精子;间质/管腔面积比与正常睾丸无明显差异(P0.05),Leydig细胞数量较多,内质网丰富呈一定扩张状态,线粒体减少。免疫组织化学显示,VEGF及VEGFR2在隐睾组与单侧正常组、正常组睾丸均表达于Sertoli细胞、Leydig细胞及各级生精细胞,血管内皮细胞偶见表达;隐睾组VEGF表达量较正常组、单侧正常组睾丸明显下降(P0.05),VEGFR2表达量明显高于正常组与单侧正常组(P0.05);单侧正常组VEGF及VEGFR2表达量较正常组均无明显差异(P0.05)。高原低氧环境,牦牛隐睾血管发育受阻,组织出现不同程度的纤维化和局部钙化,Sertoli细胞发育异常严重影响生精功能;单侧正常睾丸Leydig细胞数量增加,而其中线粒体数量减少,发育程度较正常组织有所降低,隐睾组织中VEGF与VEGFR2可能参与调节双侧睾丸生精抑制作用。