春蚕豆花叶病毒的鉴定及防治途径

从我国甘肃等地春蚕豆区采集的蚕豆病毒病样本，经单斑分离得到病毒分离物Ｇ１７、Ｇ１２和Ｇ８。此８个分离要蚕豆均引起系统花叶症状；都能经姚蚜和豆蚜以持久性方式传播；传效率很高。经体外抗性测定，失活温度为５５－６０℃，稀释限点为１０＾－３～１０＾－４，体外存活期１－２天（２０～２５℃）。病毒粒体均为线形，大小明显的修饰作用。ＰＡＳ－ＥＬＩＳＡ试验证实，３个分离物与菜豆花叶病毒抗血清呈强耻性反应，反应值与     

辣椒疫病病原菌的分离与鉴定

[目的]明确发生在邯郸地区大名县辣椒大棚中的疫病病原菌。[方法]从辣椒大棚里采集辣椒疫病病样,对病原菌进行分离与纯化,并通过形态学观察、ITS序列分析及致病力测定,对病原菌进行鉴定。[结果]辣椒疫病病原菌为辣椒疫霉(Phytophthora capsici)。[结论]该研究为当地辣椒疫病防治提供科学的理论依据。     

辣椒青枯病生防菌的分离和鉴定

[目的]筛选辣椒青枯病内生拮抗菌,为辣椒青枯病防治提供参考。[方法]通过生防菌拮抗效能的测定从辣椒青枯病发病区健康辣椒植株体内分离对辣椒青枯雷尔氏菌(R.solanacearum)有较强拮抗作用的内生细菌,并通过形态鉴定、16S r DNA同源性序列分析对其进行鉴定。[结果]从辣椒青枯病发病区健康植株体内分离筛选到1株对辣椒青枯病有较强拮抗作用的细菌CQW菌株,初步鉴定其为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)。[结论]为辣椒青枯病防治提供了资源菌。     

辣椒种质资源对烟草花叶病毒和黄瓜花叶病毒的抗病性

通过苗期鉴定1000余份辣椒种质资源对烟草花叶病毒(TMV)和黄瓜花叶病毒的(CMV)抗病性,筛选出抗(耐)TMV的材料185份,抗(耐)CMV的材料152份,其中兼抗二病的材料82份.研究结果表明,辣椒种质资源对CMV的抗病性与其对TMV的抗病性具有极显著回归关系,不同类型辣椒种质资源对TMV的抗病性存有显著差异,但对CMV的抗病性差异不显著.     

辣椒上5个烟草花叶病毒分离物比较

以ＴＭＶ－ｏｍ为对照,对来自北疆地区辣椒上的５个ＴＭＶ分离物进行了生物学、血清学、感病辣椒过氧化物酶（ＰＯＤ）同工酶和酯酶（ＥＳＴ）同工酶的比较研究。结果表明,北疆地区辣椒上的ＴＭＶ存在着自然分化;县有明显的致病性差异。根据病状表现可分成系统坏死型、黄白花叶型、绿色花叶型、轻微花叶型４个类型,这些分离物与国内外报道的辣椒ＴＭＶ有一定差异。     

侵染辣椒的黄瓜花叶病毒分离物的亚组鉴定及株系分析

根据已报道的黄瓜花叶病毒(CMV)外壳蛋白(CP)基因序列合成 1 对引物,对侵染辣椒的黄瓜花叶病毒湖北分离物的病毒外壳蛋白基因进行基因扩增和序列分析.结果表明:湖北省内不同辣椒主产区采集到的样品CP基因之间的核苷酸同源率高达98.2%～99.2%,与CMV亚组Ⅰ和亚组Ⅱ各株系之间的核苷酸同源率分别为92.1%～96.5%和72.1%～78.1%,并且和亚组Ⅰ中的ⅠB系列株系同源率更高.由此确认这4个CMV分离物属于亚组Ⅰ中的ⅠB成员.     

茄子上烟草花叶病毒的分离与鉴定

１９９１年在沈阳地区茄子花叶病病株上分离到ＳＹ—ＩＳ分离物．对该分离物进行生物学鉴定、血清学检测及多聚酶链反应（ＰＣＲ）测定，确定引起沈阳地区茄子花叶病的毒原种类为烟草花叶病毒（Ｔｏｂａｃｃｏｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ，ＴＭＶ）的一个株系．此为国内茄子花叶病新的毒原种类。     

广州市郊及其邻近地区辣椒CMV和TMV的鉴定

根据对广州市郊及其邻近地区辣椒病毒病的田间调查、寄主范围和症状特点、血清学反应以及RT-PCR的试验结果，证实了黄瓜花叶病毒(CMV)是广州市郊及其邻近地区辣椒病毒病的主要毒原之一；通过生物学和血清学方法，鉴定了烟草花叶病毒(TMV)是另一主要毒原。在采集的病样中，根据鉴别在寄主上的症状特点，主要存在两种类型的分离物，分别称为分离物Ⅰ和分离物Ⅱ。分离物Ⅰ在辣椒、西葫芦、三生烟、普通烟、心叶烟、曼陀罗等寄主植物上引起花叶等症状，在苋色藜、昆诺阿藜上产生局部枯斑，不侵染千日红，由此可初步鉴定为CMV；从间接ELISA和RT—PCR的检测结果也可判断分离物Ⅰ是CMV，其检出率为36．67％。分离物Ⅱ在辣椒、普通烟上产生花叶症状，在心叶烟、曼陀罗、千日红、三生烟、苋色藜和昆诺阿藜等寄主植物上产生局部枯斑，而不侵染西葫芦，由此可初步鉴定其为TMV；间接ELISA检测结果表明，分离物Ⅱ是TMV，其检出率为43．33％。另外，TMV在田间发生率明显高于CMV。     

甜(辣)椒多抗性鉴定方法的研究

对吉林省甜(辣)椒上的黄瓜花叶病毒(CMV)、烟草花叶病毒(TMV)和辣椒疫病(Ph),先后采用苗期人工单独接种法、复合接种法和“代表株”接种法,结合田间水平抗性调查,对近400份的甜(辣)椒材料进行了鉴定．筛选出部分单抗、双抗及三抗材料。     

福建长汀小米椒病毒病的病原鉴定

1987—1988年从小米椒的主要产地长汀县采回具有花叶、叶片斑驳、皱缩、畸形.叶脉肿大、黄化、小叶和侧枝丛生等病株的标样189份,经5科10种鉴别寄主的传染性试验、血清学反应(酶联免疫吸附测试)和电子显微镜观察,鉴定出4种小米椒病毒病原:马铃薯 X 病毒(PVX),马铃薯 Y 病毒(PVY),烟草花叶病毒(TMV)和黄瓜花叶病毒(CMV).其中复合感染的样本占42.9%,病毒病原为 PVX,PVY 2种或 PVX,PVY,TMV 3种病毒的复合感染,其中以 PVX,PVY TMV 3种病毒感染占优势,为29.75%,是为害小米椒的主要毒源种类;单独浸染的样本88份,占46.6%,其中 PVX 占18.1%,PVY13.9%,TMV9.06%,CMV5.5%;未知病原样本20份占10.6%.     

黄瓜花叶病毒辣椒分离株抗性遗传规律的研究

采用4×4完全双列杂交方法研究了辣椒对黄瓜花叶病毒辣椒分离株(CMV-P)抗性的遗传规律,研究结果表 明,辣椒对CMV-P的抗性至少受4对以上核基因控制,具有数量性状遗传特点;抗性的回交效应显著而正反交效应不显著;辣椒对CMV-P的抗性遗传经检验符合“加性——显性”模型,主要受基因的加性效应影响。群体中抗病基因频率高于感病基因频率。通过自交、回交、系统选择可获得抗病性超亲的系统。抗×感组合的F1代很难获得超亲组合,要获得高抗杂交组合需选双亲都高抗的亲本。     

渭北烟区黄瓜花叶病毒酶联免疫检测方法

将采自渭北烟田的黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）分离纯化后,制备抗血清并建立了双抗体夹心式酶联免疫检测方法（ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ）,同时对其各项指标作了合理选择,结果发现最适包被和酶标抗体的质量浓度均为０．６２５ｍｇ·Ｌ－１．用此方法测定表明,在渭北烟区越冬油菜是ＣＭＶ的主要越冬寄主;ＣＭＶ侵染烟草所引起的花叶病约占６４．３％．     

山东省辣椒主要病毒种类的分子检测与鉴定

【目的】鉴定山东省辣椒上的主要病毒种类,明确该地区辣椒上的主要病毒病原。【方法】2014—2015年,在山东省临沂、日照、青岛、烟台、潍坊、淄博、济宁、菏泽、聊城、德州共10个市(区)采集253份疑似感病的辣椒植株叶片,提取叶片总RNA和总DNA,利用双生病毒的通用引物(PA/PB)、马铃薯卷叶病毒属通用引物(POL-F/POL-R)及已报道侵染辣椒的主要病毒的检测引物对样品进行PCR、RT-PCR分子检测与鉴定,将扩增得到的目的条带经凝胶回收试剂盒回收纯化后连接到pMD18-T载体上,再送至公司进行克隆测序。分别将所得的PMMoV、PeVYV和BWYV序列在NCBI上利用BLAST进行检索,利用DNAStar软件中的Megalign将所得序列与Gen Bank中已登录的世界各地有代表性的序列进行同源性比对,利用软件MEGA 5.05的Clustal W法进行多序列比对分析以及邻接法(neighbor-joining,NJ)构建系统进化树,系统进化树中各分支置信度(Bootstrap)进行1 000次重复分析。【结果】PMMoV、CMV总检出率分别为61.66%、60.08%;TMGMV、BBWV-2、BWYV、TMV发生也比较普遍,检出率为41.90%、34.78%、33.20%和24.90%;PCV-2、ToMV、TYLCV、PVY、MABYV、PeVYV、PCV-1、ChiVMV、AMV发生侵染现象较少,检出率分别为11.86%、9.88%、9.09%、6.72%、5.53%、3.56%、3.16%、0.79%和0.40%;未检测到Ca CV、PSV、Chi RSV、TSWV和To MMV。通过对病毒复合侵染现象进行分析发现,病毒复合侵染率高达89.92%,其中3种病毒复合侵染现象最多,所占比例达28.63%,4种病毒复合侵染率为25.00%,2种病毒复合侵染率为21.77%,5种病毒复合侵染率为13.31%,一个辣椒样品最多可同时感染6种病毒,侵染率为1.21%;对山东省10个地区的辣椒病毒检测,结果表明在辣椒上检出病毒种类最多的为临沂、济宁,检测到12种病毒,其次是烟台、聊城,检测到11种病毒,潍坊、菏泽检测到9种病毒,青岛、德州检测到8种病毒,日照检测到7种病毒,淄博检测到6种病毒,日照地区辣椒病毒复合侵染率最高,为100%,菏泽地区复合侵染率最低,为69.23%。分别根据PMMoV的部分CP基因序列、PeVYV部分Rd Rp、CP、MP基因序列以及BWYV部分CP、MP基因序列构建系统发育树,结果表明本研究PMMoV山东分离物SD60与中国贵州分离物的亲缘关系最近,PeVYV山东分离物SDRZ31-1与意大利IT83分离物的亲缘关系最近,BWYV山东分离物SD与韩国分离物LS的亲缘关系最近。【结论】在山东省采集的253份辣椒样品可被15种病毒侵染,PMMoV、CMV为主要病毒种类;在山东新检测到的病毒有MABYV、PeVYV、BWYV、PCV-1和PCV-2;明确了山东省主要辣椒产区病毒病发生情况以及病毒种类的主次关系。     

辽宁省玉米矮花叶病毒外壳蛋白基因序列分析及株系鉴定

对辽宁地区近年发生的玉米矮花叶病毒株系进行了鉴定.电镜下病毒粒子形态呈线条状,大小为(420～750)nm×(13～15)nm,超薄切片中有风轮状内含体.以病毒RNA为模板,按已知的玉米矮花叶病毒外壳蛋白(CP)基因核苷酸序列合成引物,逆转录合成cDNA,以此为模板进行PCR,扩增出了1kb左右的CP基因片段,将这一片段插入到载体pUC19中转化E.coliDH5a菌株,得到了CP基因克隆.cDNA序列分析表明,和中国已报道的玉米矮花叶病毒B株系(MDMV-B)外壳蛋白基因序列同源率达98.4%,氨基酸序列同源率99.4%.由此认为引起辽宁地区玉米矮花叶病的毒原为MDMV,其流行株系为B系.     

Study on Graft-induced Resistance to Cucumber Mosaic Virus in Pepper

To introduce CMV resistance to susceptible variety, interspecific grafting between d45-6 (Capsicum annuum) and LS1205 (C. baccatum) was conducted. The graft-progenies, G1 and G1S1 were obtained. Mechanical inoculation with CMV showed that disease index of G1and G1S1 were significantly decreased, similar to that of the resistant stock. EUSA serological test indicated that resistance of LS1205 and the graft-progenies to CMV was caused by inhibition of virul replication. Further, peroxidase isozymatic analysis revealed that zymotypes of G1 were a summation of those found in the donor plants. This result perfectly fit the theory of gene transformation and reconfirmed the conclusion of mechanism of graft-induced variants.