三七总皂苷的质量控制研究

三七总皂苷(PNS)是五加科人参属植物三七的有效活性成分,含有多种单体皂苷,具有扩张血管、降低心肌耗氧量、延长凝血时间、调节免疫等方面的药理作用,临床上主要用于治疗心脑血管疾病.近年来,随着研究的不断深入,又发现三七总皂苷有抑癌作用,因此越来越受到人们的重视.本试验选用的三七总皂苷由江苏省动物药品工程技术研究开发中心自行制备,为有效控制制剂质量,对其进行了薄层色谱鉴别,并采用香草醛-高氯酸比色法测定了三七总皂苷的含量.现将三七总皂苷的质量控制研究介绍如下.     

三七总皂苷的溶血性及体外生物免疫活性研究

[摘 要]　　目的：研究三七总皂苷（PNS）的溶血性及体外生物免疫活性。方法：乙醇回流法提取PNS粗提物,经有机溶剂除杂后,通过大孔树脂柱层析分离纯化;溶血性试验测定PNS作用后红细胞的溶血率;脾淋巴细胞增殖反应测定PNS的生物免疫活性。结果: PNS的半数溶血率HD50大于4mg•ml-1;体外显著促进了刀豆蛋白（Con A）和脂多糖（LPS）诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖反应。结论：PNS安全性好,体外免疫活性较强。     

三七花总皂苷的回流提取工艺研究

为了建立三七花总皂苷含量的测定方法,优化其回流提取工艺,试验采用香草醛-高氯酸法测定总皂苷的含量,以皂苷含量为指标优化其提取工艺.结果表明:人参皂苷Rg1在0.008 3～0.049 6 mg/mL范围内呈良好线性关系(r =0.999 4),平均回收率为99.3％(n=4),变异系数为3.4％;最佳提取工艺条件为将三...     

三七花总皂苷的回流提取工艺研究

为了建立三七花总皂苷含量的测定方法,优化其回流提取工艺,试验采用香草醛-高氯酸法测定总皂苷的含量,以皂苷含量为指标优化其提取工艺。结果表明:人参皂苷Rg1在0.008 3～0.049 6 mg/mL范围内呈良好线性关系(r=0.999 4),平均回收率为99.3%(n=4),变异系数为3.4%;最佳提取工艺条件为将三七花粉末浸泡在10倍量的60%乙醇中12 h,回流提取3次,每次2 h。说明该测定方法简便、准确、重现性好,提取工艺经济、合理。     

三七皂苷药理作用研究进展

综述了近年来三七皂苷在血液系统、心脑血管系统、神经系统、免疫系统、物质代谢系统,以及抗炎、抗衰老、抗肿瘤等多方面生理活性的研究近况,为进一步开发三七提供参考.     

三七总皂苷对罗非鱼体成分及非特异免疫的影响

试验研究了饲料中添加不同水平的三七总皂苷对罗非鱼肌肉营养成分和血清及肝胰脏非特异免疫的影响。选取同一放养批次健康的罗非鱼,随机分为6组。其中第1组为空白对照组,饲喂基础饲料,其余5组为三七总皂苷组(2～6组),分别饲喂添加50、100、200、400和800mg/kg三七总皂苷试验饲料。每组3个重复,每个重复70尾,进行60d的养殖试验。结果显示:试验组与对照组相比,肌肉基本营养成分差异不显著(P0.05),4、5、6试验组与对照组相比,肌肉丙二醛含量和胆固醇含量显著降低(P0.05);添加适宜水平的三七总皂苷,可以显著提高罗非鱼血清溶菌酶活性、血清及肝胰脏酸性磷酸酶活性和碱性磷酸酶活性,增强罗非鱼血清及肝胰脏非特性免疫功能。     

三七总皂苷对异育银鲫生长及体成分的影响

饲料中添加不同水平的三七总皂苷对异育银鲫生长和肌肉营养成分的影响.选取同一放养批次健康的异育银鲫,随机分为5组.其中第1组为空白对照组,饲喂基础饲料,其余4组为三七总皂苷组,分别添加80、160、320和640mg/kg三七总皂苷试验饲料.每组3个重复,每重复30尾银鲫,进行60 d的养殖试验.结果表明:试验组与对照组相比,成活率基本相同,肌肉营养成分差异不显著;160、320和640 mg/kg的试验组与对照组相比,增重率、特定生长率和蛋白质效率显著提高,饲料系数和肌肉中的胆固醇含量显著降低.结果表明:在异育银鲫饲料中添加适宜水平的三七总皂苷可以提高异育银鲫生长性能,降低其肌肉中的胆固醇含量.     

三七总皂苷的提取及纯化

三七主要产于云南、广西等地,其总皂苷（PNS）具散淤止血、活血化淤、消肿止痛等功效。为了避免三七根中淀粉糊化,目前主要采用醇提和提取液水沉、大孔树脂纯化的工艺,乙醇消耗量大,有效成分损失多,有人提出采用内部沸腾法提取植物有效成分。为了降低提取温度,有人提出了减压内部沸腾的方法。     

三七不同皂苷的分析条件研究

三七总皂苷含有人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re及三七皂苷R1、R2、R3、R4、R6等20多种皂苷成分,其中人参皂苷Re、Rb1、Rg1及三七皂苷R．含量最高。阎萍等对三七总皂苷的研究中,将Rb1、Rg1及R1三种单体皂苷进行了分离。通过实验发现,人参皂苷Re、Rb1、Rg1及三七皂苷R14种单体皂苷相互之间分离条件要求较高。笔者在此基础上对其分离条件进行了研究,利用薄层色谱与高效液相考察了4种皂苷的分离条件,为中药三七提取物制剂质量控制提供依据。     

三七总皂苷渗透泵控释片的质量标准研究

本试验建立三七总皂苷渗透泵控释片质量标准,采用薄层色谱法鉴别人参皂苷Rb.和人参皂苷Rg,,采用高效液相色谱法测定对三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1进行含量测定.试验结果:在薄层色谱中检出了人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg1;在高效液相色谱中,三七皂苷R1平均回收率为99.9%(n=9),RSD为1.00%,人参皂苷Rg1平均回收率为99.9%(n=9),RSD为0.8 3%,人参皂苷Rb1平均回收率为99.4%(n=9),RSD为0.76%.试验表明该鉴别方法专属性强,含量测定方法简便、准确,可有效控制三七总皂苷渗透泵控释片的质量.     

三七总皂苷亚慢性毒性试验研究

[目的]评价三七总皂苷(PNS)用药安全性,为临床用药提供参考依据。[方法]将40只昆明系小白鼠随机分为4组,每组10只,3个药物处理组小鼠通过腹腔注射的方式分别给予11.34、56.70、113.40mg/(kg·BW)的PNS,每天1次,连续给药14d;空白对照组小鼠腹腔注射生理盐水0.3mL/只,连续注射14d。测定并比较各组小鼠在试验期间的体重、脏器指数(肝脏、脾脏、肾脏指数)以及血液生化指标;取各组小鼠肝脏、脾脏、肾脏组织,制备病理组织切片,利用显微镜观察上述组织是否出现病理变化。[结果]3个PNS给药组小鼠在试验期间的体重与空白对照组小鼠相比,均无显著性差异(P>0.05);11.34mg/(kg·BW)PNS组小鼠的脾脏指数显著低于空白对照组(P<0.05);113.40mg/(kg·BW)PNS组小鼠的谷草转氨酶活力和肌酐含量显著低于空白对照组(P<0.05),而尿素氮含量显著升高(P<0.05);病理组织学观察结果表明,PNS对肝脏、脾脏、肾脏组织无明显损伤。[结论]PNS实际无毒,长期用药会产生肾毒性,提示用药不宜过量。     

三七总皂苷对凡纳滨对虾生长性能的影响

选取同一放养批次健康的凡纳滨对虾,随机分为5组。第1组为空白对照组,饲喂基础饲料,其他4组为三七总皂苷组,分别添加100、200、400和800mg/kg三七总皂苷试验饲料。每组3个重复,每重复40尾虾,试验期40d。结果表明:在饲料中添加适宜水平三七总皂苷能显著提高凡纳滨对虾的增重率和特定生长率,降低饲料系数,提高蛋白质效率,添加不同水平三七总皂苷对凡纳滨对虾肌肉粗蛋白、粗脂肪、灰分和水分含量无显著影响。     

三七总皂苷对异育银鲫非特异免疫及抗氧化性能的影响

试验饲料中添加不同水平的三七总皂苷对异育银鲫血清非特异免疫和抗氧化性能的影响。选取同一放养批次健康的异育银鲫,随机分为5组。第1组空白对照组饲喂基础饲料,其他4组为三七总皂苷组,分别添加80、160、320和640mg/kg三七总皂苷试验饲料。每组3个重复,每重复30尾鱼,试验期60d。养殖结束后采集血清、肌肉和肝胰等样品进行血清非特异免疫和抗氧化性能的分析测定。试验结果表明:添加适宜水平的三七总皂苷能显著提高异育银鲫的非特异免疫功能,添加320和640mg/kg的三七总皂苷可显著提高异育银鲫的抗氧化性能。     

硫酸化人参总皂苷体外对免疫活性细胞功能的调节

采用MTT法及形态学观察法研究4种硫酸化人参总皂苷衍生物对体外ConA促淋巴细胞增殖、转化的影响,并采用乳酸脱氢酶释放法探讨了其对NK细胞杀伤活性的影响.结果表明,人参总皂苷对淋巴细胞增殖影响不明显,较高质量浓度(>150 mg/L)能抑制淋巴细胞增殖(P<0.01);硫酸化人参总皂苷衍生物2、3在一定质量浓度下都能明显或极明显增加淋巴细胞(鸡的外周血淋巴细胞,小鼠脾淋巴细胞)增殖活性(P<0.05,P<0.01),且所试质量浓度硫酸化人参总皂苷衍生物的D值显著或极显著高于同质量浓度人参总皂苷(P<0.05.P<0.01);人参总皂苷、衍生物2、3都能提高小鼠NK细胞的活性(P<0.01),且衍生物2、3的作用比人参总皂苷更强(P<0.05,P<0.01).结果提示,人参总皂苷经硫酸化修饰后,在体外能明显增强免疫活性细胞功能.     

硫酸化人参总皂苷的制备及其对鸡外周血淋巴细胞增殖的影响

用氯磺酸-吡啶试剂制备了硫酸化人参总皂苷衍生物，采用红外光谱仪检测到制备的硫酸化人参总皂苷衍生物中在1230cm^-1和810cm^-1有硫酸酯键的特征吸收峰。为了初步探讨硫酸化人参总皂苷的免疫学活性．以MTT法测定了人参总皂苷及其衍生物对鸡外周血淋巴细胞增殖的影响。结果表明，150μg／m1人参总皂苷和衍生物均能显著抑制鸡外周血淋巴细胞的增殖（P〈0．05），10μg／ml的衍生物能极显著促进淋巴细胞增殖，与同浓度人参总皂苷相比活性极显著增强（P〈0．01）。实验结果提示，对人参总皂苷进行硫酸化修饰是可行的，经硫酸化后人参总皂苷衍生物的免疫活性明显增强。     

三七总皂苷在罗非鱼饲料中的应用试验

罗非鱼隶属于硬骨鱼纲鲈形目鲡鱼科罗非鱼属,是一种中小型热带鱼。由于罗非鱼具有生长快、食性杂、抗病力强、肉质好、适应性强、产量高和繁殖力强等优点,己发展成为世界主要养殖鱼类之一。罗非鱼也是我国南方各省主要养殖的淡水鱼之一,近5年来,国内罗非鱼产量的增长速度在淡水     

口服人参茎叶皂苷减缓环磷酰胺诱导的氧化应激作用研究

考察小鼠口服人参茎叶总皂苷(GSLS)水溶液(50 mg/L)的抗氧化作用。将30只雌性ICR小鼠随机分成5组,A、B、C和D组小鼠一次腹腔注射环磷酰胺(Cy)诱导氧化应激;E组不注射Cy作为空白对照。A组试验全程每天饮水口服GSLS溶液;B组于Cy应激前每天饮水口服GSLS溶液;C组于Cy应激后每天饮水口服GSLS溶液;D组不口服GSLS,作为Cy应激对照。于试验第9天处死小鼠,检测脏器(胸腺和脾脏)指数以及胸腺、脾脏中丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)含量。结果表明,小鼠饮水口服GSLS可显著缓解由Cy诱导的氧化应激作用,提高应激小鼠的胸腺指数及血清中T-SOD活性,脏器中丙二醛MDA水平降低。Cy应激前、后均饮用GSLS的抗应激效果最佳,但应激前与应激后饮用人参茎叶皂苷无显著性差异。     

人参总皂苷及其衍生物抗Ⅰ型马立克氏病毒作用的电镜观察

应用透射电镜负染技术，观察人参总皂苷及其衍生物对Ⅰ型马立克氏病毒（MDVI）作用后病毒颗粒结构改变情况，旨在深入探讨人参总皂苷及其衍生物抗MDV的作用机理。结果显示，病毒颗粒变形，大小不均匀．核心缺损或均质化，包膜裸露或破损以及病毒颗粒凝集融合成块，结构模糊不清。在相同条件下衍生物比人参总皂苷对MDV的破坏作用强。提示人参总皂苷及其衍生物在体外对MDVⅠ（MDV—Ⅰ）病毒颗粒的形态结构、表面成分和分散均有破坏作用，而衍生物作用更加显著。     

人参总皂苷及其衍生物对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响

探讨人参总皂苷及其衍生物对小鼠腹腔巨噬细胞免疫活性的影响。采用中性红试验和MTT法分别测定总皂苷及其衍生物对巨噬细胞吞噬中性红作用及其代谢功能的影响。结果显示,总皂苷及其衍生物浓度在试验范围内时小鼠巨噬细胞吞噬中性红及其代谢功能均有不同程度的促进作用．而衍生物的促进作用更强,且对巨噬细胞的细胞毒性明显降低。提示衍生物对巨噬细胞的免疫活性优于总皂苷。     

人参总皂苷及其衍生物对小鼠淋巴细胞和NK细胞免疫活性的影响

为了提高人参总皂苷的生物学活性,对其进行了硫酸化修饰,并探讨总皂苷及其衍生物对小鼠脾T、B淋巴细胞增殖（MTT法）和NK细胞杀伤活性（乳酸脱氢酶释放法）的影响。结果表明,2种衍生物质量浓度在50～500 mg/L时可以促进小鼠脾T、B淋巴细胞的分化增殖和NK细胞对YAC-1的杀伤作用,质量浓度较高时促进作用明显优于总皂苷;衍生物质量浓度达到1 400 mg/L时,仍然可以显著促进T淋巴细胞的增殖。试验结果提示,人参皂苷的这种衍生物有可能成为一种毒副作用较小、免疫活性更强的药物。