冷休克和冷冻对猪精子微细结构和精清内酶的影响

用9头梅山、8头二花脸和4头苏白公猪的精液进行了冷休克和冷冻试验.共分原精(对照)、稀释、稀释后平衡和冷冻四种情况,10个处理组别。结果表明,冷休克使猪精于活力明显下降,并随着低温处理的延长和冷冻过程而加剧.冷休克后光镜下顶体形态主要表现为质膜膨大,顶脊突出或形成皱褶。稀释后平衡有保护顶体减轻冷休克损伤的迹象.冻后精子主要表现为顶体严重肿胀,起泡乃至破裂.原精的顶体完整率与活力呈正相关(r=0.60,p<0.01),低温处理后这两个性状的相关不显著。猪精子冷冻前后的电镜观察研究揭示,解冻后精子的主要损伤部位在顶体.冻后精子质膜严重膨大、破裂,顶体外膜肿胀,形成小泡,顶体內容散失.试验中未见到由质膜和顶体外膜共同形成的所谓“杂合泡”。冷休克和冷冻后精清内 GOT 和 LDH 活性增加,冻后精清內 LDH 为原精的1.5倍,GOT 为原精的13.6倍。低温处理对精清内 GPT 活性的影响不大。用琼脂糖凝胶电泳分离猪精清,得到5条 LDH 同功酶区带.原精冷休克后 LDH—4上升(p<0.05),解冻后精清內 LDH—4上升(p<0.01),原精经稀释平衡后,M—LDH明显升高。     

驴精液冷冻保存的研究

试验以解冻后精子的活力、顶体完整率、顶体膨胀率、顶体破损率、尾部畸形率等几个重要评定指标为依据,筛选了几种驴冻精的冷冻稀释液配方,将其中较好的稀释液作为对照组,再分别进行细管冻精、颗粒冻精和添加不同剂量安钠咖的对比试验.结果表明:5号稀释液的冻后精子活力要显著高于其他4种稀释液(P0.05),精子活力达到0.31,顶体完整率达62.8%;细管冻精的活力要显著高于颗粒冻精(P0.05);在冷冻液中添加安钠咖2mg·mL-1能显著提高解冻后精子的活力(P0.05),使顶体的膨胀率降低9%.     

除精浆提高冷冻精液品质的实验研究

采用离心洗涤法去除精浆后,对精液进行冷冻处理。发现:1、除精浆精子冻后的活率、Ⅰ类顶体率和精子畸形率与未除精浆组存在显著差异(P<0．05);2、除精浆使稀释后精液精浆中GOT和LDH活性明显升高(P<0．05)。从平衡后到解冻后各组GOT和LDH活性都呈上升趋势。但除精浆试验组比未除精浆试验组上升缓慢;3、除精浆试验组精子的穿卵率、卵内平均精子数都显著高于未除精浆试验组(P<0．05);4除精浆离心洗涤液用生理盐水和脱脂乳-卵柠液．两者之间无显著差异(P>0．05)。     

维生素A对乳用种公牛精液品质和某些生化指标的影响

选用9头黑白花种公牛随机分为3组:Ⅰ组根据饲养标准在基础日粮中添加维生素 A 42 IU/千克体重·头·日(对照组);Ⅱ组添加维生素 A 105 IU/千克体重·头·日;Ⅲ组添加维生素 A 210 IU/千克体重·头·日。试验期4个月。测定了公牛精液品质、精清酶活性和精清、血清中睾酮浓度的变化。结果表明:Ⅱ组能显著地提高采精量、原精活力、冻后活力和顶体完整率,降低精子畸形率,对精子密度无显著作用;Ⅲ组对精液品质有不良影响;原精清中谷草转氨酶(GOT)和乳酸脱氢酶(LDH)活性在各组间无差异(P>0.05),Ⅱ组冻后精清中 GOT 活性显著低于Ⅰ组和Ⅲ组,而 LDH 为Ⅱ组<Ⅲ组<Ⅰ组;血清睾酮浓度随维生素 A 添加量的增加而升高。     

荷斯坦种公牛冻精质量的综合分析研究

牛冻精质量与精子活力对牛群质量的提高和改良有着重要作用,在奶牛业生产和育种中占有至关重要的地位。按照国家技术监督局发布的《牛冷冻精液质量检测方法》(GB4143—84),测定了荷斯坦种公牛的冷冻精液解冻后的成活率、顶体完整率、精子活力、每剂量精液中呈直线前进运动精子数、畸形率、每剂量菌落数和剂数因素分析。测定了荷斯坦种公牛的冷冻精液解冻后的成活率≥10%;顶体完整率≥92.2%;精子活力≥40%;每剂量精液中呈直线前进运动精子数≥1.73×107个;畸形率≤13.5%;每剂量菌落数小于500个。测定结果表明,荷斯坦种公牛的冷冻精液质量指标均达到国家标准。我们应用多元回归分析的原理,系统地分析了荷斯坦种公牛的原精各主要指标(射精量、原精密度、原精活力)及冻后精子复苏率对冻后精子活力和冻精质量剂数的影响程度,以及它们之间的相关程度的大小。分析结果说明,要想提高冻精质量与精子活力这一质量指标,就要提高原精质量(活力、密度、冻后精子复苏率);而提高冷冻精液剂数这一数量指标,就要提高射精量、原精密度。且只有通过提高种公牛营养水平,提高采精技术和冷冻技术才能达到高质量冻精生产。     

除去精浆、添加维生素E及水浴平衡对莎能奶山羊精液冷冻效果的影响

主要探讨精液离心、添加VE及平衡方法对山羊细管冻精冷冻-解冻后活力、顶体完整率等的影响,为提高山羊精液冷冻保存效果提供依据.试验1:将鲜精稀释后分为3组,第1组为稀释精液1 000 r/min离心6 min,去掉一半的上清液;第2组用相同的方法反复离心3次,完全去掉精浆;第3组不离心,做为对照.试验2:在稀释液中添加15 g/L VE,以不添加组作为对照.试验3:采用纱布包裹和水浴平衡两种方法.试验结果表明,离心去掉部分精浆组和离心去精浆组精子冷冻-解冻后的活力比不离心组高,差异显著(P＜0.05).精子顶体完整率和畸形率有所下降,但与对照组相比较差异不显著(P＞0.05).离心去掉部分精浆组和离心完全去精浆组相比,精子冷冻一解冻后的活力、顶体完整率和畸形率差异不显著(P＞0.05).冷冻稀释液中添加VE组的顶体完整率显著提高(P＜0.05),畸形率变化与对照组无差异(P＞0.05),精子活力提高效果也不明显(P＞0.05).精液冷冻前平衡方法以水浴法为好,与纱布包裹平衡组相比,水浴平衡组的活力和顶体完整率高(P＜0.05),精子畸形率较低(P＜0.05).可见,精液离心后去掉适量精浆可显著提高冷冻后精子的活力;添加VE可显著提高精液冷冻后精子的顶体完整率;与纱布包裹平衡法相比,水浴平衡法可显著提高精液冷冻后精子的品质.     

维生素B12对牛冷冻精液精子质量的影响

牛精液冷冻前于精液然释中添加ＶＢ１２为试验组,不添加ＶＢ１２的对照组。冷冻结果表明：试验组冻精解冻后精子活力,顶体完整率分别对照组提高１６．１１％,１５．９％,精子畸形率与ＧＯＴ活性明显下降;精子存活时间处长。说明ＶＢ１２在牛精液冷冻中对牛了形态结构具有保护作用。     

不同锌水平对荷斯坦种公牛精液品质及血液理化指标的影响

【研究目的】本文旨在研究不同锌水平日粮对荷斯坦种公牛精液品质和血液理化指标的影响。【方法】选取30头荷斯坦种公牛,随机分为5组,A为对照组,饲喂基础日粮,B、C、D、E组锌的添加水平分别为50、80、110、200mg/kg,试验期8个月。【结果】结果表明,(1)不同锌水平对荷斯坦种公牛精子活力、射精量、精子密度影响极显著(P<0.01);对精子顶体完整率无显著影响(P>0.05),能显著降低精子畸形率(P<0.05)。(2)不同锌水平对荷斯坦种公牛血清中睾酮含量影响极显著(P<0.01),对血清锌、精清锌和精清睾酮含量无显著影响(P>0.05)。(3)不同锌水平对荷斯坦种公牛精清中谷草转氨酶(GOT)活性影响极显著(P<0.01),对碱性磷酸酶(AKP)和谷丙转氨酶(GPT)活性有显著影响(P<0.05),对乳酸脱氢酶(LDH)活性无显著影响(P>0.05);对血清中GOT和GPT活性影响极显著(P<0.01),对AKP和LDH活性无显著影响(P>0.05)。【结论】综合分析不同锌水平试验牛生理生化指标的变化,本次试验研究表明:锌的适宜添加量为110mg/kg日粮干物质。     

波尔山羊个体精子抗冻性研究

为了加速贵州省地方山羊品种改良,2000年9月试验采用常规的精液冷冻解冻方法,通过鲜精活力、畸形率、冻精活力、解冻后4 h存活指数、顶体完整率、谷草转氨酶(GOT)释放量等指标研究了3只波尔山羊精子的抗冻性,结果3只试验公羊精子抗冻性存在明显差异,968号公羊生存指数显著高于2022和098号(P<0.05),098号公羊谷草转氨酶释放量显著低于2022和968号(P<0.05),但其鲜精品质全部达到常规制作冻精的要求,配种试验,65.77 %(146/222)的受胎率也验证了3只公羊适宜制作冻精。     

超低温冷冻对德国牧羊犬精子超微结构及顶体酶类活性的影响

为探讨超低温冷冻对德国牧羊犬精子超微结构及顶体酶类活性的影响,对冷冻前后德国牧羊犬精子采用扫描电镜和透射电镜观察超微结构变化;采用改良明胶底膜法、改良BNPNA法、磷酸苯二钠法对精子透明质酸酶、顶体酶和酸性磷酸酶活性进行研究。结果表明:鲜精和冻前精子形态变化不显著,而超低温冷冻后精子头部、颈部和尾部发生形态变化的精子数极显著高于鲜精和冻前精子;超低温冷冻后德国牧羊犬精子3种顶体酶活性极显著降低;超低温冷冻后德国牧羊犬精子3种顶体酶活性与精子活率和顶体完整率呈正相关(P0.01),与畸形率呈负相关(P0.05)。     

猪精液预处理稀释液与冷冻基础液的配伍效应

采用6种预处理稀释液对猪精液进行预处理,然后用3种冷冻基础液冷冻保存,研究精液预处理稀释液和冷冻基础液对精子冷冻保存效果的影响,以及其间的配伍效应。结果表明,不同的预处理稀释液对解冻后精子活力的影响差异显著(P<0.05),而3种冷冻基础液对冻后精子活力的影响差异不显著(P>0.05)。不同的预处理稀释液与冷冻基础液之间存在明显的配伍效应,并且用含甘油的稀释液对平衡不同时间的精液冷冻时,其配伍效应又有所不同。猪精液中去除精清可显著提高精子冻后活力和顶体完整率(P<0.05),有利于提高精液品质。     

猪精液颗粒冷冻技术的研究

为提高猪冻精质量,加速猪冻精在生产上的应用,本试验以解冻后的精子活率、顶体完整率和体外受精(IVF)结果作为判定指标,探讨了冷源和Equex.STM对猪精液颗粒冷冻效果的影响。手握法采集成年、健康种公猪精液,分别采用含有Equex.STM的稀释液和普通稀释液进行两步法稀释,然后以干冰或液氮为冷源进行精液冷冻。结果表明,以干冰为冷源滴冻精液冻后活率为0.487833±0.046761,顶体完整率为0.782±0.039704,而以液氮为冷源的方法冻后活率为0.3334±0.055734、顶体完整率为0.5578±0.068482,前者在这两项指标上均显著优于后者(P<0.05)。另外,在稀释液中添加Equex.STM,以干冰为冷源进行滴冻,可使冻精顶体完整率极显著提高(P<0.01)。以含有Equex.STM的稀释液采用干冰滴冻的冻精进行IVF,胚胎卵裂率、囊胚率分别为0.5316±0.125582和0.216±0.053198。结果表明,采用Equex.STM作为冷冻保护剂并以干冰作为冷源可以获得高质量的猪冷冻精子。     

卵黄在鸡精液冷冻保存中的应用研究

以Lake’s为基础稀释液,通过在鸡精液冷冻过程中添加全卵黄和不同浓度卵黄上清,探究卵黄及其离心处理在鸡精液冷冻中的应用效果。结果表明:与对照相比,稀释液中添加10%的全成分卵黄处理鸡精液冷冻保存后活率(22.33%)和活力(13.26%)显著下降(47.81%,42.55%),质膜完整性、顶体完整性和线粒体活性也下降显著。卵黄经稀释和离心处理后,添加5%—15%的卵黄上清可提高鸡精液的冷冻保存效果,其中以10%的卵黄上清效果最佳,其冻后活率和活力可达58.93%和55.36%,显著高于对照组。当卵黄上清添加浓度达到25%时,冻精质量开始明显下降。综上,在鸡精液冷冻过程中,添加全卵黄成分不利于其冷冻保存;10%的卵黄上清可显著提高鸡精子的抗冻能力。     

绵羊冷冻精液品质评定的研究——电子显微镜检查和生物化学的方法

精子在异常的条件下受损害的迹像之一,是其顶体完整性丧失,因此,许多学者研究了精子超微结构的改变和生理生化特性与受胎率的相关性。Foulkes(1975)以精清中透明质酸酶(Hyase)的活力评定牛精子的完整性。Cralo(1972)测定猪冷冻精液     

五指山猪精液冷冻保存研究

试验利用液氮熏蒸法进行颗粒冻精,以1组冷冻保护液为对照,2组,3组冷冻保护液以氨基酸代替部分糖类物质,以解冻后的精子活力、活率和顶体完整性为判断标准,比较了4种冷冻保护液及不同冷冻-解冻程序对五指山猪精液冷冻的影响。结果表明:解冻后精子2组,3组的3个判断标准均显著高于1组(P<0.05);4组(2.5 mL DMSO)冷冻保护液解冻精子的活力和活率显著低于2组(2 mL甘油)和3组(1.25 mL DMSO 1 mL甘油)(P<0.05)。精清保留量为0 mL/10 mL时解冻精子的活率和活力显著低于0.5 mL/10 mL和1 mL/10 mL(P<0.05)。干解法解冻后精子活率显著高于湿解法(P<0.05)。     

流式细胞仪分离奶牛精子性控效果的试验研究

用流式细胞仪分离荷斯坦奶牛的精液,检测在冷冻前和冷冻后分离的精子活力。同时,对不同牛群利用分离得到的性控鲜精和性控冻精进行人工输精,对其人工授精效果和性别控制效果进行观察。结果表明:分选后冻前精子活力达到0.60～0.67,分选后解冻精子活力达0.31～0.39;育成牛群性控鲜精输精的情期受胎率高于使用性控冻精输精,经产母牛群性控鲜精输精的情期受胎率高于使用性控冻精输精,但差异均不显著(P>0.05);使用性控鲜精、性控冻精进行人工输精,育成牛群情期受胎率高于经产母牛群,且差异显著(P<0.05);产母犊率差异不显著(P>0.05);用性控精液人工授精的奶牛早期流产率高于非性控精液,但差异不显著(P>0.05)。     

冷冻前预处理对新西兰兔精液超低温保存品质的影响

以新西兰兔精液为研究对象,对新鲜精液采用不同的静置时间、离心速度、离心时间及精清留量进行处理,经过超低温保存后,通过测定精子活率、顶体完整性、质膜完整性来选择兔精液冷冻保存最近佳预处理方案。结果表明,精液离心前静置60~90 min再以1 000 r/min的速度离心,其冻后活率及复苏率明显优于其他静置时间;离心10 min时的效果优于其他离心时间;采用1 000 r/min的速度离心时,相同离心时间均较其他离心速率冷冻-解冻后精液活率、复苏率、精子质膜完整性和顶体完整性高;离心后,精清留量和精液的体积比为1∶1的冻后活率、复苏率、精子质膜完整性和顶体完整性优于精液与精清的体积比为0∶1、2∶1。     

不同解冻方法对奶牛细管冻精活力的影响

研究探讨了不同解冻方法对0.25 mL奶牛细管冻精解冻后的影响,细管冻精分别在5,15,40,75,90℃下不同时间（1～120 s）进行解冻操作,通过评定精子冻后活率、顶体完整率、尾膜完整率,筛选出最佳的奶牛细管冻精的解冻方法。结果表明：（1）奶牛细管冻精采用75℃解冻3 s,精子的活率最高,解冻效果最好;其次在接近体温40℃解冻20 s,效果也较好;在低温5℃和室温15℃解冻,精子活率低于0.3;在90℃高温解冻条件下不稳定,不适合生产使用;（2）90℃解冻精子的顶体完整率、尾膜完整率明显低于40℃和75℃,差异显著（P＜0.05）,但是精子畸形率却高于40℃与75℃的处理组（P＜0.05）,而后两者间差异不显著（P＞0.05）;（3）不同解冻温度解冻后精子在37℃时保持有效存活时间存在较大差异,表现为：40℃＞75℃＞90℃。因此,在生产实践中对奶牛细管冻精进行解冻时,可根据具体情况选用适合的解冻方法。若解冻后立即输精的,建议采用75℃下3 s解冻;解冻后不能立即输精的,为了使精子在较长时间内保持活力,宜采用40℃下20 s解冻。     

科苑荟萃

20050129猪冷冻精液的研究(曾维斌,王志刚,刘丑生等)深入系统地研究猪精液冷冻机理和生产的关键技术,探讨影响猪冻精活力及受精能力的因素,进一步改进猪精液冷冻方法,已成为国内外养猪生产中急待解决的问题。本试验以甘油、乙二醇为抗冻剂,并添加ATP或安息香酸咖啡因,以解冻后精子活力、顶体完整率、顶体膨胀率、顶体破损率、尾部畸形率和在37℃下的存活时间几个重要评定指标为依据,筛选了几种猪颗粒冻精的冷冻稀释液配方,并优化了其冷冻程序。结果表明,与对照组相比,在冷冻液中添加0.1mg/ml的ATP或2mg/ml的安息香酸咖啡因都能显著提高解…     

中药提取物川芎嗪及葛根素在猪精液冷冻中的应用效果初报

为了进一步提高猪精液的冻后品质,为中药提取物在猪精液冷冻中的应用提供参考数据,采用手握法采集成年种公猪精液,预处理后用添加不同剂量盐酸川穹嗪(0、0.08、0.10、0.12 mmol/L)和葛根素(0、0.001、0.01、0.10 mmol/L)的稀释液稀释,经平衡、冷冻、解冻后采用考马斯亮蓝对精子进行染色,然后在显微镜下检查精子畸形率和顶体完整率。结果表明,不同浓度的盐酸川穹嗪均能显著降低冻后精子的畸形率,显著提高冻后精子的顶体完整率,其中0.12 mmol/L盐酸川穹嗪效果最好。一定量葛根素不能显著降低冻后精子的畸形率,也不能显著提高冻后精子的顶体完整率。