Bt水稻"克螟稻"杂交后代中转基因的遗传表达及育种利用

利用GUS反应检测了Bt转基因粳稻(克螟稻)与籼稻、粳稻杂交的不同世代群体的叶片染色情况,结果发现粳粳交F2出现抗性株与非抗性株的3∶1的分离,籼粳交的BC1出现1∶1分离,籼粳交的BC1F2出现3∶1分离,表明转基因在杂交后代的传递属单基因显性遗传.利用Western 点杂交技术结果发现F1、F2 和BC1代的Bt蛋白表达量均超过转基因株供体,呈现出表达能力上的杂种优势.农艺性状考察结果发现,无论是籼粳交,还是粳粳交后代,两者在株高、穗长、单株分蘖数、播始历期和千粒重上无显著差异.这无疑为Bt水稻的育种利用提供了良好的证据.     

Frankia共生固氮基因的分离与克隆

利用ＤＮＡ－ＤＮＡ杂交方法，分离细枝木麻黄的Ｆｒａｎｋｉａ菌株Ｃｏ０１的ｎｉｆ克隆ｐＣｃ１ＧＸ，赤杨内生菌株Ａｔ４的ｎｉｆ克隆ｐＡｔ１ＧＸ及沙棘的ＦｒａｎｋｉａＨｒ１８的ｎｉｆ克隆ｐＨｒ１８ＧＸ、ｐＨｒ１１－③ＧＸ。用基因功能互补法，从Ｆｒａｎｋｉａ菌株Ａｔ４的基因文库中分离到二个可能可互补豌豆根瘤菌ｎｏｄ基因功能的克隆ｐＡｔ２ＧＸ、ｐＡｔ３ＧＸ，并制作了ｐＡｔ２ＧＸ、ｐＡｔ３ＧＸ的亚克隆，予进一步实验，获得充分的证据证明ｐＡｔ２ＧＸ、ｐＡｔ３ＧＸ是否带有Ｆｒａｎｋｉａ菌株Ａｔ４的ｎｏｄ基因．     

玉米胚性愈伤组织转化及转Bt基因植株的抗虫性

用基因枪直接轰击玉米胚性愈伤组织，经潮霉素抗性选择平均每皿可得到０．７￣２．０块抗性愈伤组织，且大部分可再生植株。对这些从抗性愈伤组织分化的植株进行点杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ吸印杂交的结果也证明Ｂｔ基因已插入玉米染色组。对一个转Ｂｔ基因植株的测交后代进行了玉米暝抗性的田间鉴定，抗虫和感虫植株的比例接近１：１，符合孟德尔单显性基因的遗传规律。     

我国转基因Bt棉对棉铃虫的控制效果

本研究就中国转基因Ｂｔ棉花对主要害虫棉铃虫的毒杀效果。网室与田间小区抗虫性,大田控害效果及其对其害虫,天敌的影响进行了初步研究,结果表明：中国转基因Ｂｔ棉对棉铃虫初孵及１龄幼虫高效,７２ｈ的最高毒杀效果可达９０．５％;对棉铃虫的控制力大小顺序为初孵幼虫〉１龄〉２龄〉３龄,嫩叶〉顶尖〉幼蕾〉幼铃,５叶期嫩叶〉盛蕾期嫩叶,２代〉３代〉４代;网室鉴定Ｂ２,Ｂ３,Ｒ２,Ｂ４,Ｂ６,３,８,１０,１６,２６     

普通野生稻和亚洲栽培稻叶绿体DNA的籼粳分化

本研究通过对１５１份普通野生稻和９３份妥的叶绿体ＤＮＡ的０ＲＦ１００的研究表明，无论是中国普野还是南亚、东南亚普野，其ｃｐＤＮＡ已发生籼粳分化。中国普野的ｃｐＤＮＡ籼粳之比接近１：１，印度、孟加拉、缅甸普野粳型多于籼型，马来西亚、柬埔寨则籼型多于粳型。而泰国、斯里兰卡普野的ｃｐＤＮＡ中以籼型为主。根据普野的ｃｐＤＮＡ有籼粳分化的事帝，认为籼粳稻的起源是二元的。     

利用植物体细胞无性系变异技术育成三系杂交籼稻恢复系371

以偏籼材料Ｉｒｉ３７１的幼穗为外植体,经１０Ｇｙ＾６０Ｃｏ－γ射线照射处理后,进行碎段离体培养,获１０２株Ｍ１Ｒ１再生株。Ｍ１Ｒ１植株表现出明显的生理性损伤,Ｍ２Ｒ２代有２７．５％株系出现８种可见性状的稳定变异与分离变异。     

两系杂交水稻主要性状配合力与亲本灿粳分化关系的研究

选用４个光温敏核不育系及５４个常规品种（系）,按ＮＣⅡ设计配制杂交组合,以灿粳特异ＲＦＬＰ标记及形态指数法检测供试品种（系）的灿粳分化程度,研究两系杂交水稻主要性状一般配合力及特殊配合力与双亲灿粳分化的关系。结果表明,（１）多数品种的灿粳遗传分化和形态分化相一致,只有个别品种不一致;（２）组合间一般配合力方差大于特殊配合力方差,基因加性效应更重要;（３）亲本的一般配合力效应及其特殊配合力效应对Ｆ１     

籼粳杂种后代支链淀粉结构及其与稻米糊化特性相关性分析

为了探讨利用优质粳稻改良灿稻品质的可行性,以食味品质极佳的粳稻品种越光为母本、食味品质差的籼稻品种桂朝2号为父本构建的重组自交系群体(RIL)为试验材料,研究了籼粳杂种后代的支链淀粉结构变异特征及其与稻米胶稠度、起始成糊温度和RVA谱特征值的相关关系。结果表明,在RIL群体中,所有性状呈现连续分布,且双向超亲分离明显,双亲平均值除最高粘度和崩解值低于低亲值外,其余性状均介于双亲之间。RIL群体中支链淀粉短链(6≤DP≤11)分配比率表现为籼型偏籼型偏粳型粳型,中链(12≤DP≤24)分配比率表现为籼型偏籼型偏粳型粳型,存在极少量短链分配率较高而中链分配率较低的灿型株系,说明利用优质粳稻与籼稻杂交,其后代的籼粳特性对稻米支链淀粉结构有较显著影响,但通过加强后代选择,也可以选到支链淀粉结构象粳型的优良株系。在RIL群体中,支链淀粉短链分配率与起始成糊温度呈极显著负相关,中链分配率与起始成糊温度呈极显著正相关,长链分配率与消减值呈极显著负相关关系,而支链淀粉链长与胶稠度和RVA谱其他特征值的相关性表现因种植地点不同而有差异。研究结果为灿粳亚种间杂交育种的品质改良提供了理论参考。     

利用InDel标记鉴定水稻育种材料的籼粳属性

准确高效鉴定水稻材料的籼粳属性对于开展水稻籼粳亚种间杂种优势利用有着重要意义.利用19对基于籼稻(9311)和粳稻(日本晴)全基因组DNA序列比对获得的差异片段而设计的特异插入/缺失(Insertion/Deletion,InDel)引物,对48份育种上常用的籼稻、粳稻和中间型材料(品种)进行了InDel 标记的籼粳属性分析,利用DNA样品在这19对InDel位点上的籼型或粳型基因频率,结合聚类分析和主成分分析,确定了这些材料的籼粳属性,通过比对程氏指数法的籼粳鉴定结果检验了InDel分子标记法在水稻籼粳属性鉴定上的有效性.结果表明,InDel分子标记法与传统的程氏指数法的总体吻合率为89.58％,在典型籼稻或典型粳稻材料上两者的吻合率为100％;在具有复杂遗传背景的中间型材料上,InDel分子标记法比程氏指数法具有更高的准确性.因此,InDel分子标记法是真正鉴定籼粳的特异方法,比传统方法具有更高的灵敏性和准确度,可以用于籼粳属性鉴定及遗传分化研究.     

水稻中抑制衰老的嵌合基因的基因枪转和表达分析

利用基因枪法把抑制衰老的嵌合基因导入水稻恢复系ＨＰ１２１和偏籼型品系８７０６，经ＰＣＲ，点杂交以及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析，证明外源基因已整合到水稻基因中。通过叶片细胞分素含量和叶绿素含量的测定以及形观察，表明抑制衰老的嵌合基因 部分转基因水稻中表达，叶片衰老得到延迟。转基因植标后代符合３：１遗传规律。     

水稻耐低钾基因型筛选方法的研究

本试验用１／４强度的ＫｉｍｕｒａＢ营养液将灿稻、稻和籼型杂交稻各１１份，分别培养到三叶期后，以含有０．２６５μｍｏｌ／ＬＨ２Ｏ２，０．２ｍｍｏｌ／ＬＣａＳＯ４加０．１或０．２或０．３或０．４ｍｍｏｌ／ＬＫ＾＋的营养液为测定介质，在２５±２℃，连续自然光下，运用离子耗竭技术分别测定了各种不同钾浓度下灿稻、粳稻和杂交稻不同基因型的吸钾速率。并于三叶期和五叶期分别测定这三类基因型的生物量和钾素利用效率。     

甬优系列籼粳杂交稻氮素积累与转运特征

【目的】 比较分析甬优系列籼粳杂交稻氮素吸收利用与转运特征,从氮素层面阐明甬优系列籼粳杂交稻高产形成特征。 【方法】 2013～2014 年,选用 7 个甬优系列籼粳杂交稻组合为试验材料,以 2 个常规粳稻品种和 2 个杂交籼稻品种为对照,比较研究甬优系列籼粳杂交稻主要生育时期植株含氮率、氮素积累量,不同生育阶段氮素积累量与吸收速率,抽穗期和成熟期各器官的含氮率和氮积累量所占比例,抽穗至成熟期各器官间的氮素转运,以及氮素利用效率等特征。 【结果】 甬优系列籼粳杂交稻抽穗期植株含氮率和氮积累量分别为 1.47%、202.67 kg/hm2,成熟期植株含氮率与氮积累量分别为 1.31%、257.23 kg/hm2,极显著大于对照类型。甬优系列籼粳杂交稻氮素最大阶段性积累量为 107.63 kg/hm2,所占比例为 41.84%,最大吸收速率为 2.73 kg/(hm2·d),且均出现在拔节至抽穗阶段,杂交籼稻出现在移栽至拔节阶段。甬优系列籼粳杂交稻抽穗期茎鞘和叶的含氮率分别为 1.19% 和 2.34%,成熟期分别为 0.75% 和 1.58%,高于对照类型。甬优系列籼粳杂交稻抽穗期茎鞘和叶氮积累量所占比例分别为 43.92% 和 43.87%,成熟期分别为 16.44% 和 17.44%,极显著大于杂交籼稻。甬优系列籼粳杂交稻氮素转运量大,表观转运率和转运贡献率不高,抽穗后的氮素净积累量贡献率为 32.06%,显著大于对照类型。甬优系列籼粳杂交稻百公斤籽粒吸氮量为 2.29 kg,极显著大于杂交籼稻;氮肥偏生产力为 37.54 kg/kg,极显著大于常规粳稻;氮素籽粒生产效率、氮素干物质生产效率和氮素收获指数偏低。 【结论】 甬优系列籼粳杂交稻总吸氮量大,在拔节期足量氮素积累的基础上,提高了拔节至抽穗期与抽穗至成熟期两个阶段的氮积累比例;抽穗至成熟期茎鞘和叶的氮素转运量大,但表观转运率与表观转运贡献率低,抽穗后氮素积累优势明显,氮素净积累量贡献率高,满足了灌浆期籽粒对氮素的需求。      

苜蓿中华根瘤菌042B与公共结瘤基因nodABC有关的大片段物？…

将苜蓿中华根瘤菌０４２Ｂ总ＤＮＡ提取,用Ｓａｕ３ＡＩ部分酶切后回收２０－３０ｋｂ长的片段,以ｐＬＡＦＲ３为载体,构建基因文库。用苜蓿中华根瘤菌ｎｏｄＡＢＣ作探针,经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交获得了三个阳性克隆Ａ,Ｂ和Ｃ,将这３个阳性克隆所携带的质粒分别命名为ｐＸＣＡ,ｐＸＣＢ,ｐＸＣＣ。在辅助质粒ｐＲＫ２０１３的帮助下,将这３个质粒分别转入ｎｏｄＣ＾－突变株ＡＫ１６５７后接种苜蓿,携带ｐＸＣＢ质粒的接合     

播期对浙东南地区直播晚粳稻产量、生育期及温光利用的影响

为筛选适宜在浙东南地区作受灾补播的直播晚粳稻品种,选用3个籼粳杂交稻(甬优1540、甬优7850、嘉优中科3号)和2个常规粳稻(秀水519、秀水417),开展大田分期直播试验,研究不同播期对水稻产量及产量构成因素、生育期和温光资源利用的影响。结果表明,水稻产量表现为籼粳杂交稻>常规粳稻,具体为甬优1540>甬优7850>嘉优中科3号>秀水519>秀水417,随着播期的推迟,产量均呈下降趋势,下降幅度为籼粳杂交稻>常规粳稻,播期每推迟5 d,籼粳杂交稻平均产量下降0.71 t·hm^-2,常规粳稻下降0.30 t·hm^-2,主要与每穗粒数和结实率显著降低有关;水稻生育时期随播期推迟而相应顺延,且播种-齐穗期、齐穗-成熟期等生育阶段缩短,籼粳杂交稻全生育期缩短幅度大于常规粳稻;水稻全生育期的有效积温、日照时数及其利用率和有效积温生产效率随播期推迟基本呈下降趋势,同一播期内,籼粳杂交稻有效积温生产效率高于常规粳稻。产量与齐穗-成熟期的温光资源呈显著或极显著正相关。救灾品种若在7月15日前补播,籼粳杂交稻首选甬优1540,其次为甬优7850,而常规粳稻宜选用秀水519,且播期可推迟至7月20日。本研究结果可为浙东南地区受灾后,采用直播技术选择适宜救灾补播品种提供实践指导与科学依据。     

猪繁殖与呼吸综合症病毒分离毒株基因型的鉴定

根据猪繁殖与呼吸综合症病毒美洲型参考毒株ＡＴＣＣ ＶＲ－２３３２株ＯＲＦ７及部分３‘端非编码区基因序列,设计合成了一对美洲型毒株特异性引物,采用反转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术成功地从６株ＰＲＲＳＶ国内分离株ＢＪ１－６株中扩增出与预期大小相同的基因片段,大小约５７１ｂｐ,与美洲型参考毒株ＡＴＣＣ ＶＲ－２３３２株扩增产物大小相似,扩增产物经限制性内切酶ｐｖｕⅡ酶切作ＲＦＬＰ分析证实ＲＴ－     

Bt毒蛋白基因叶绿体转化载体的构建及其生物杀虫试验

本工作设计和构建了全长３．５ｋｂ Ｂｔ毒蛋白基因和２．１ｋｂ、１．８ｋｂ两种３＇端缺失Ｂｔ毒蛋白基因并分别包含烟草叶绿体同源片段ＲＴＰ和ＴＯ的叶绿体转化载体ｐＴＲＳ１、ｐＴＲＳ２和ｐＴＲＳ３，对它们菌体总蛋白进行生物杀虫试验表明所有载体的Ｂｔ毒蛋基因都得到了表达，并且对二龄棉铃虫有１００％的毒杀作用，对三龄棉铃虫的致死率也很高，尤其是含全长Ｂｔ毒蛋白基因的ｐＴＲＳ１可高达９５％以上。因而它们都可以     

转柽柳金属硫蛋白基因（MT1）烟草的获得及对重金属镉的抗性分析

将柽柳（Tamarix. sp）金属硫蛋白基因（MT1）插入到植物表达载体pBI121，利用农杆菌（Agrobactrium tumefaciens）介导法将MT1导入烟草基因组。对转基因T1植株的卡那霉素抗性分析表明，多数转基因植株后代表现为3:1的分离比例，只有少数转基因植株的抗性分离表现为15:1或不符合孟德尔遗传的分离比例。说明整合到烟草基因组的外源基因多为单拷贝基因，也有少数为多拷贝基因。对具有卡那霉素抗性的转基因植株进行PCR-Southern检测和Northern杂交分析表明，外源MT1基因已整合到烟草基因组，并且得到了正确表达。转基因植株对重金属镉的抗性比对照显著提高，表现为转基因植株的株高和鲜重均明显优于非转基因株系。     

生长因子对卵母细胞体外成熟及早期胚胎体外发育的影响

为了探讨生长因子（ＥＧＦ，ＰＤＧＦ）对牛卵母细胞体外成熟与早期胚胎体外发育的影响，本研究进行了两个实验。实验１：在卵母细胞体外成熟（ＩＶＭ）中，将卵母细胞平均随机的放入表皮生长因子浓度为０，２．５，２５，５０μｇ／Ｌ的成熟培养液和对照组中。实验２：在早期胚胎体外培养（ＩＶＣ）过程中，将受精卵平均随机分配入５个不同培养液的处理组：（１）ＴＣＭ－１９９＋１０％阉公牛血清（ＳＳ）；（２）ＴＣＭ－１９９＋ＥＧＦ＋ＰＤＧＦ；（３）ＴＣＭ－１９９＋ＥＧＦ；（４）ＴＣＭ－１９９＋ＰＤＧＦ；（５）ＴＣＭ－１９９＋无生长因子、其中ＥＧＦ：５０μｇ／Ｌ，ＰＤＧＦ：０．１μｇ／Ｌ。２，３，４，５组有０．１％ＰＶＡ和０．３％ＢＳＡ，并与颗粒细胞单层协同培养。卵母细胞的体外成熟（ＩＶＭ）、体外受精（ＩＶＦ）和早期胚胎体外培养（ＩＶＣ）的方法与Ｌｕ等（１９８７）报道的相同。结果表明：浓度为５０μｇ／Ｌ的处理组分裂率与对照组无差异（８９．０％，９２．４％，Ｐ＞０．０５），而浓度为０，２．５，２５μｇ／Ｌ的处理组分裂率均显著低于对照组（７８．６％，８２．３％，８４．３％，Ｐ＜０．０５），在囊胚率和第７ｄ一级胚胎率上各组均无差异。ＥＧＦ在体     

转Bt基因抗虫棉R19品系的棉铃虫抗性表现及抗虫性遗传研究

转Ｂｔ基因抗虫棉Ｒ１９品系对棉铃虫有明显的抗性。饲喂５个抗虫棉株系盛花期叶片５天后，初孵棉铃虫幼虫的死亡率为５６．７％对照泗棉３号和太１９３两个常规推广品种初孵幼虫的死亡率分别为２１．１％和１８．４％转Ｂｔ基因抗虫棉Ｒ１９叶片能显著延缓棉铃虫的发育进程，饲喂Ｒ１９叶片５天后，存活幼虫以２龄早为主；饲喂泗棉３天叶片５天后，存活幼虫以３龄虫为主。Ｒ１９盛花期对棉铃虫的抗性可能受一对显性主基因控制。     

反转录—套式PCR检测IBV分离株及其RFLP分型研究

根据国外发表的基因序列,自行设计两对引物,应用反转录－套式ＰＣＲ成功扩增ＩＢＶ分离株Ｈ１和Ｈ２Ｓ１基因,利用限制性内切酶ＨａｅⅢ,ＸｃｍＩ,ＢｓｔＹＩ三级酶切,做ＲＦＬＰ分析,将两毒株归为Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ型。