猪胚胎冷冻保存研究现状

猪胚胎超低温冷冻对地方猪种的长期保存意义重大。长期以来,由于猪胚胎脂质含量较高等原因,进展一直较为缓慢(相对于牛、羊等动物)。近年来,由于玻璃化冷冻技术(特别是OPS玻璃化冷冻技术)的突破,使胚胎超低温冷冻保存成功率大幅度提高。本是法国国家农业科学院Francoise Berthelot教授对该领域的最新研究进展作的总结。     

小鼠胚胎的玻璃化冷冻研究

用不同冷冻载体(玻璃管、塑料管和0.25 mL细管)及不同冷冻方法(程序化冷冻和玻璃化冷冻)对小鼠3.5 d~4 d桑椹胚和囊胚进行冷冻保存,并与不做任何冷冻保存处理直接培养进行对比。结果表明,使用玻璃管、塑料管和0.25 mL细管作为胚胎的承载材料进行玻璃化冷冻,效果差异不显著;采用程序化冷冻与OPS玻璃化冷冻法,对小鼠胚胎进行冷冻保存可以取得较好的结果。从而得出,用不同材质的冷冻载体进行玻璃化冷冻,可以获得与程序化冷冻相同的良好效果。     

猪胚胎冷冻保存研究进展

胚胎冷冻保存技术在大多数哺乳动物上已获得成功,牛胚胎冷冻已经进入商业化应用阶段。猪胚胎由于其特殊的低温生物学特性,冷冻保存研究进展缓慢。本文综述了猪胚胎在冷冻过程中的细胞生物学变化,以及近几年猪胚胎冷冻保存研究所取得的显著进展。     

哺乳动物胚胎冷冻保存的研究进展

哺乳动物胚胎的超低温保存技术不仅为动物种质资源的保存和良种家畜的国际交流提供了简单的手段，而且还是胚胎移植、体外受精、转基因和克隆等胚胎生物技术不可分割的组成部分。1972年，英国学者Whittingham等人首次利用慢速冷冻法保存小鼠胚胎获得成功，此后许多学者对冷冻方法进行了广泛的研究。至今，牛、绵羊、山羊、马、兔子、猫、羚羊、狒狒、狨猴、猴和人等的胚胎冷冻保存也获成功。然而，在     

FVB和EIIa-Cre小鼠胚胎冷冻保存研究

为探索FVB和EIIa-Cre小鼠的最佳超排及胚胎冷冻方法,对4～6周龄FVB和EIIa-Cre小鼠进行超数排卵效果比较。结果表明,FVB和EIIa-Cre的超排数量分别为每鼠平均33.71枚和24.23枚,发育至2-细胞期的数量分别为30.43枚和17.08枚,EIIa-Cre的胚胎数明显少于FVB。FVB和EIIa-Cre的胚胎复苏率、妊娠率和产仔率均存在较大差异,分别为77.7%和63.0%、80.0%和57.1%、13.6%和8.2%,FVB小鼠均高于EIIa-Cre小鼠。     

牛胚胎冷冻保存的研究进展

目前,牛的胚胎冷冻保存巳成为一种较成熟的常规技术,广泛应用于牛的繁殖科研与生产。本文回顾了牛胚冷冻保存技术的发展概况,对牛胚胎的常规冷冻技术、直接冷冻法及玻璃化冷冻技术的进展作了简要论述。     

小鼠胚胎冷冻保存及复苏的试验研究

为探讨提高人胚胎冷冻的操作技术水平及进行冷冻实验室质量控制的有效方法，采用慢速冷冻及快速融解复苏的方法对小鼠2－细胞胚胎进行冷冻，复苏后培养72h，通过胚胎的囊胚率来评价冷冻技术和进行质量控制。结果表明，本实验在人胚胎冷冻、复苏条件下，共冷冻小鼠胚胎140个，复苏存活率为89.29%，囊胚率为78.57%，获得较为理想的冷冻复苏效果。因此认为应用小鼠2－细胞胚胎进行程序冷冻及复苏是提高人胚胎冷冻技术水平及进行质量控制的良好方法。     

胚胎玻璃化冷冻的实验研究

用小鼠胚胎分别在甘油、丙二醇、乙二醇不同浓度比例的10组玻璃化1液中平衡,每组均分室温和低温平衡,共20个组合。研究表明,提高甘油浓度、降低丙二醇及乙二醇浓度,可明显提高玻璃化冷冻后的胚胎体外培养发育率。低温平衡优于室温平衡。15%甘油 5%丙二醇 5%乙二醇的PBS液,是较为理想的第1冷冻液组合。室温平衡的培养发育率为37.5%（18/48）,低温平衡的培养发育率为71.4%（30/42）,差异极显著（P<0.01）;采用2步低温平衡,优选上述第1冷冻液,玻璃化冷冻200枚小鼠胚胎,解冻后培养至膨胀发育率为82.5%（165/200）。     

哺乳动物胚胎冷冻保存的研究进展

哺乳动物胚胎的超低温保存技术对于动物种质资源的保存和良种家畜的国际交流具有重要意义,是胚胎移植、体外受精、转基因和克隆等胚胎生物技术不可分割的组成部分。1972年,英国学者Whittingham等人首次利用慢速冷冻法保存小鼠胚胎获得成功。此后许多学者对冷冻方法进行了广泛的研究。然而,在胚胎冷冻和解冻过程中都存在许多会使胚胎受到损伤的因素,如:抗冻保护剂的毒性,冷冻损伤,细胞内冰晶的形成,破裂损伤,渗透压引起的膨胀。因此,使用不同的冷冻和解冻法应避免或减少胚胎受到损伤,以提高胚胎解冻后的存活率。1抗冻保护剂和冷冻溶液在哺乳…     

哺乳动物胚胎冷冻保存研究进展

哺乳动物胚胎冷冻保存效果受冷冻保护剂、冷冻方法、解冻方法等多种因素影响,其中冷冻方法是一个关键性因素.目前胚胎冷冻方法主要有常规慢速冷冻法和玻璃化冷冻法两种.常规慢速冷冻法是指利用甘油、乙二醇等做冷冻保护剂通过缓慢降温的方式进行胚胎冷冻;玻璃化冷冻法是指利用高浓度的冷冻保护剂通过快速降温的方式进行胚胎冷冻.与常规慢速冷冻法相比,玻璃化冷冻法简化了操作过程,大大缩短了操作时间,不需昂贵的程序控制冷冻仪.     

小鼠胚胎快速冷冻的研究

本文研究了小鼠胚胎快速冷冻方法,以ＰＢＳ＋２．０Ｍ甘油＋０．５Ｍ蔗糖为冷冻液,以ＰＢＳ＋０．５Ｍ蔗糖为称释液。结果桑椹胚冷冻解冻后的存活率为６９．３％,早期囊胚冷冻解冻后的存活率为６０．４％,二者之间无显著差异。     

小鼠卵母细胞和胚胎不同冷冻方法的比较研究

探讨程序化冷冻与玻璃化冷冻对小鼠GV期卵母细胞及二细胞期胚胎的复苏率及其发育潜能的影响。通过小鼠的卵母细胞与早期胚胎的不同冷冻方法的比较,为后续阿旺绵羊的胚胎冷冻保存提供参考。采用程序化冷冻与玻璃化冷冻技术,分别冷冻小鼠GV期卵母细胞及二细胞期胚胎,复苏后培养,比较不同冷冻处理后的复苏率、成熟率与囊胚率。小鼠GV期卵母细胞程序化冷冻复苏率(48.00%±5.29%)显著低于玻璃化冷冻复苏率(65.00%±5.00%),有统计学差异(P=0.0147<0.05);而程序化冷冻后复苏卵母细胞的发育成熟率略高于玻璃化冷冻组,但无统计学意义。小鼠二细胞期胚胎程序化冷冻组复苏率(76.00%±2.00%)显著高于玻璃化冷冻组复苏率(70.00%±2.00%),有统计学差异(P=0.0213<0.05);冷冻后复苏胚胎发育的囊胚率程序化冷冻略低于玻璃化冷冻及对照组,但无统计学意义。     

切割取样后胚胎的冷冻保存技术的研究

研究了切割取样后小鼠胚胎和牛胚胎冷冻-解冻的技术方法。结果表明：（1）分别以10％甘油、10％乙二醇作为冷冻液以及在以上两种冷冻液中分别添加10％葡聚糖＋0．1mol／L蔗糖作为冷冻液常规方法冷冻切割后的小鼠胚胎，冷冻-解冻后体外培养72h总发育率分别为56．9％（259／455）、81．8％（604／738）、84．8％（540／637）和59．5％（308／518）。（2）取样后胚胎体外短暂培养（0-4h）并不能提高切割取样后小鼠胚胎冷冻-解冻体外培养发育率。（3）切割取样小鼠胚胎在25％甘油＋0．25mol／L蔗糖＋20％的血清为冷冻液，在-100～-110℃左右熏蒸2min快速冷冻后体外培养发育率为73．3％（33／45），切割取样牛胚胎快速冷冻-解冻移植妊娠率为57．1％（4／7）。     

小鼠4-细胞胚胎OPS法冷冻保存技术

在25℃室温和37℃恒温台条件下，利用玻璃化冷冻溶液EFS30、EFS40、EDFS30或EDFS40，对小鼠4-细胞胚胎进行玻璃化冷冻保存．以解冻后培养72h的囊胚发育率为其体外发育能力的考核指标，同时对解冻后培养1～3h的胚胎进行移植以判定其体内发育潜力。开放式拉长塑料细管（OPS）二步法冷冻保存，即胚胎首先移入预处理液（10％EG或10％EG＋10％DMSO）中平衡30s，再移入玻璃化溶液中洗涤后吸入OPS管中，分别经35、30或25s后直接投入液氮中冷冻保存。一步法冷冻保存则无需预处理液处理。结果表明，小鼠胚胎4-细胞一步法和二步法冷冻后囊胚最高发育率分别为87．7％和88.6％，与对照组（93.0％）差异不显著（P〉0．05）。利用最佳冷冻组获得的143枚胚胎移植于12只假妊娠50～60h的受体母鼠，结果有4只妊娠产仔17只，妊娠产仔率为42．5％（17／40），与对照组59．4％（19／32）差并不显著（P〉0.05）。     

哺乳动物胚胎冷冻技术的研究进展

胚胎冷冻保存已广泛用于胚胎移植、动物克隆以及动物资源保护。此技术的应用需保证胚胎在冷冻—解冻后具有较高的成活率。自从1972年小鼠胚胎冷冻保存获得成功以来,许多学者在简化冷冻程序、缩短冷冻时间等方面进行了深入的研究。文章就胚胎冷冻的原理、保护剂、冷冻方法以及解冻方法等方面进行了综述。     

哺乳动物胚胎冷冻技术的研究进展

胚胎冷冻保存已广泛用于胚胎移植、动物克隆以及动物资源保护.此技术的应用需保证胚胎在冷冻-解冻后具有较高的成活率.自从1972年小鼠胚胎冷冻保存获得成功以来,许多学者在简化冷冻程序,缩短冷冻时间,方面进行了深入的研究.本文就胚胎冷冻的原理、保护剂、冷冻方法以及解冻方法等方面进行了综述.     

小鼠胚胎常规冷冻和玻璃化冷冻效果的比较

将小鼠胚胎分别用常规冷冻法和OPS法冷冻,结果用常规冷冻法和OPS法冷冻 小鼠桑葚胚,解冻后培养24 h胚胎的发育率分别为87．32％、86．67％(P>0．05);用两种方 法冷冻小鼠囊胚的结果分别为81．43％、83．56％(P>0．05),结果表明用OPS法冷冻保存小 鼠胚胎能达到用常规冷冻法的效果。     

不同冷冻和解冻方法对小鼠桑椹胚发育的影响

本试验以2种程序化冷冻液和2种玻璃化冷冻液对昆明白系小鼠的桑椹胚进行细管法冷冻保存,比较程序化冷冻-管外解冻和玻璃化冷冻-管内解冻对胚胎体内、外发育的影响。胚胎体外培养结果表明:玻璃化冷冻组及程序化冷冻组胚胎发育率(95.3%￣95.8%,98.9%)无显著(P>0.05)差异。将程序化冷冻、EFS30玻璃化冷冻以及新鲜的胚胎各168枚移植给假孕受体鼠,妊娠受体产活仔率各组间相比(50.8%,58.3%,54.9%)无显著性(P>0.05)差异。结果证明,玻璃化冷冻保存的胚胎管内解冻效果好,为生产中家畜的胚胎移植提供了理论和技术参考。