金龟子绿僵菌对几种林木害虫的致病性及防治应用试验

金龟子绿僵菌Ma83菌株对27种供试昆虫中的19种显示致病性。该菌株毒力很强,尤其对隐蔽性的蛀于害虫作用显著。利用Ma83菌株的菌液防治青杨天牛、云斑天牛、枇杷天牛、黑肿角天牛、柑桔吉丁虫、茶毛虫、吹绵蚧等7种昆虫,死亡率分别为94.12％、77.43％、78.26％、81.17％、92.72％、59.65％、20.32％。     

绿僵菌对金龟子的感病性试验

在室内用绿僵菌液喷洒３种金龟子幼虫，黄闪丽金龟、棕色鳃金龟和直蜉金龟子的感病率分别为９０．２％、５０．０％和８３．３％。用黄闪丽金龟子幼虫作试验，在室内观察不同施用菌剂的方法对该虫的防效，结果土壤中施用菌剂，在菌土比为１：１２５０时，防效为８６．２％；用菌剂拌麦种（菌剂麦种比为１：１０）防效为６２．５％；在小麦出苗后分３次施用菌液，防治效果为６４．８％。     

金龟子绿僵菌对稻水象甲的致病性

以稻水象甲为靶虫,对３７株不同来源的绿僵菌菌株进行了致菌性检测,结果有６株致病率大于９０％对不同生育期的稻水象甲感病性测定表明,在寄主产卵期感病性最强,越冬期次之,新羽化代最 成虫产卵期施用绿僵菌,对控制稻不象甲有明显的作用。     

金龟子绿僵菌孢子低温休眠与复苏

金龟子绿僵菌[Metarhizium anisopliae（Metsch．）Sorokin]能寄生8个目30个科共约200多种昆虫、螨类及线虫，具有良好的杀虫效果，国内外已在害虫防治中作为生物防治手段实现了工厂化生产与大规模应用。目前，低温贮藏是最普遍的方法。随着虫生真菌制剂的生产与应用，其标准化的需求日益迫切，低温保藏的菌种在低温休眠与复苏阶段，孢子萌发率、生长速率及产孢量均是极为重要的指标，将直接影响孢子粉的生产效率及生产质量。本文主要报道了对金龟子绿僵菌IMI330189菌株进行低温贮藏后，其低温休眠与复苏阶段孢子萌发、生长速率及产孢量的变化规律。     

金龟子绿僵菌固态培养生物变量优化研究

金龟子绿僵菌属于真菌类生物杀虫剂,本文研究了接种量、种龄、菌种代数等生物因素对金龟子绿缰菌生长及产孢量的影响,并对液—固两步发酵工艺进行了研究。经过优化,得到金龟子绿僵菌产孢的最佳生物参数是:接种量为2.5g/100g、种龄为5-6天;采用固体二代种,培养6天,孢子产量可达1.531×10~(10)孢子/g干培养基。     

金龟子绿僵菌CQMa421对小麦蚜虫的防治效果

为明确80亿孢子/mL金龟子绿僵菌CQMa421可分散油悬浮剂防治小麦蚜虫的效果,在宁夏银川开展了田间喷雾试验,发现单次喷施该药剂450、900、1350 mL/hm23个剂量的处理,药后14 d对小麦蚜虫防效为71.8％～90.7％,低剂量处理的防效低于对照药剂4.5％高效氯氰菊酯微乳剂750g/hm处理,而中、高剂...     

金龟子绿僵菌防治茶小绿叶蝉试验

为了验证杀虫真菌药剂对茶小绿叶蝉的防治效果,选择不同剂量的金龟子绿僵菌CQMa421(80亿孢子/m L)可分散油悬浮剂进行田间防治试验。结果表明,金龟子绿僵菌CQMa421防治茶小绿叶蝉的效果较好,推荐使用剂量120mL/667m2,防治适期为茶小绿叶蝉百叶虫量3头～5头。     

对西花蓟马高效金龟子绿僵菌菌株筛选及在花生田间的应用效果

西花蓟马Frankliniella occidentalis是一种世界性检疫害虫,对包括花生在内的农作物造成极大威胁,金龟子绿僵菌在西花蓟马生物防治中可发挥重要作用.本文从23株金龟子绿僵菌中筛选出菌株M18-8-4,经紫外诱变得到F1、F2代菌株,测定了其及两代诱变菌株对西花蓟马的室内毒力,并对筛选到的高毒力菌株进行...     

绿僵菌蝗虫菌株Pr1蛋白酶基因的克隆及序列分析

从绿僵菌蝗虫菌株M2189克隆了昆虫表皮降解酶Pr1的基因。以特异性引物，分别进行了DNA-PCR和mRNA-RT-PCR反应，得到了预期扩增片段，回收纯化后通过pGEM-T载体转化大肠杆菌JM109，得到重组质粒，EcoR Ⅰ酶切鉴定表明目的片段已插入质粒。对重组质粒中插入的DNA片段进行了核苷酸序列测定，表明该序列全长1369bp，其中有3个内含子，分别为76、59、67bp；编码序列长度为1167bp，含有起始密码子和终止密码子，是一个完整的蛋白读码框。与菌株Mel得到的Prl编码序列（GenBank／M73795）相比，二者的核苷酸数目相同，同源性达到92．2％，编码的389个氨基酸中48个不同，占12．3％。     

绿僵菌胞外蛋白酶Pr1C诱导飞蝗中肠免疫功能分析

为明确金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae胞外蛋白酶Pr1C在绿僵菌侵染飞蝗Locusta migratoria中肠中的作用,从绿僵菌IMI330189菌株转录组中获得并分析了Pr1C基因全长序列,设计引物对该基因进行了克隆和原核表达。将表达的Pr1C蛋白与绿僵菌IMI330189混合后饲喂处理,测定了混合物对飞蝗的毒力,并通过荧光定量PCR检测了飞蝗中肠免疫相关基因的表达情况。结果显示,该基因属于绿僵菌类枯草杆菌丝氨酸蛋白酶家族,全长为2126 bp,蛋白大小为71 kDa。Pr1C与绿僵菌IMI330189混合后可以显著提高对飞蝗的毒力。荧光定量结果表明,Defensin,Persephone,Tube,Relish,Dredd 5个基因在各处理中表达量均呈现升高趋势,其中Pr1C蛋白和绿僵菌混合处理的变化比其他处理组变化快,于第2天达到较高水平;绿僵菌处理变化较慢,于第6天达到最高水平。本研究表明,绿僵菌胞外蛋白酶Pr1C可显著提高绿僵菌毒力,促进绿僵菌侵染速率,为进一步研制和应用生物制剂防治飞蝗提供理论依据。     

花生田施用绿僵菌对土壤微生物群落的影响

昆虫病原真菌绿僵菌对地下害虫防治具有良好应用前景,而大量释放绿僵菌可能引起土著微生物群落变化,从而影响其植物保护的综合效果。本文研究了花生播种期施用绿僵菌后,在根际和根围土壤中绿僵菌自身种群及土著细菌、真菌和放线菌种群的消长和群落结构变化。结果表明,绿僵菌种群在30 d内快速下降,之后降速减缓,以低密度持续存活。随花生生长,土壤微生物自身有消长过程,施用绿僵菌对放线菌影响最大、真菌其次、细菌最小,在根际的影响大于在根围的影响。分别地,绿僵菌处理对根际和根围细菌、根围真菌无显著影响;使根际真菌种群初期的下降速度减缓,到达谷底时间由15 d推迟到30 d,但回升速度加快,达峰顶由60 d提前到45 d,峰值降低1/3;绿僵菌明显抑制了根际放线菌种群,使其消长变化周期与对照完全相反,且45 d时回落至低点后不再回升;绿僵菌减缓了根围放线菌种群下降,使达谷底时间由30 d推迟到45 d,且回升幅度减小。土壤微生物群落结构在施菌后15～30 d的幼苗至初花期有明显变化,细菌种群总体占比显著下降,但与对照相比,施菌后的根际细菌占比提高,真菌占比下降,放线菌占比显著地先抑后扬。在根围的变化相对较小。45 d即盛花期后,三类微生物结构逐渐恢复趋近原来状态。     

MrXrn1基因参与调控罗伯茨绿僵菌的产孢和致病

本研究以罗伯茨绿僵菌为研究对象,针对5'-3'核糖核酸外切酶基因（MrXrn1,MAA_09154,5'-3'exoribonuclease 1）,利用农杆菌介导的同源重组方法进行基因敲除。对获得的MrXrn1基因敲除株（ΔMrXrn1）与野生型进行表型分析结果发现,与野生型相比,ΔMrXrn1的营养生长无明显变化,而产孢能力显著下降,其中产孢量降低了75.75%;以大蜡螟为试虫的体壁侵染毒力分析显示ΔMrXrn1的毒力显著减少,也即半致死时间（LT₅₀：9.16 d）显著长于野生型的（5.96 d）,但注射接种情况下不同菌株的毒力无差异;进一步的研究表明ΔMrXrn1的附着孢形成率降低了43.58%。这些结果说明MrXrn1基因对绿僵菌的产孢及毒力起着重要的调控作用。本研究为进一步有效提高真菌杀虫剂的生防效果提供了基础。     

绿僵菌治蝗研究进展

介绍了目前对防治多种蝗虫效果较好的虫生真菌--绿僵菌的种类、株系,以及绿僵菌对蝗虫的致病机理、 对环境的安全性等,并讨论了国内外应用绿僵菌防治蝗虫的田间试验效果、剂型研制、产业化和推广应用前景。     

田间施放绿僵菌防治稻水象甲效果评价

在稻水象甲成虫怀卵期,田间用绿僵菌（１０＾１４孢子／ｈｍ＾２）喷雾防治,１３天后对成虫的防治效果达９２．５％。经防治后的幼虫和次代成虫平均虫口分别为２．１２和０．３０头／从,而对照分别为８．４０和４．１７头／丛,差异均达极显著（ｔ〉０．０１）。对虫口密度高发地块,若采取菌剂和化学膛药配合使用,效果则更佳。     

用gfp基因标记法研究金龟子绿僵菌在玉米根际的定殖动态

利用草胺磷抗性基因bar为筛选标记,将绿色荧光蛋白基因（gfp）转入载体pbarGPE1,得到了组成性表达载体pGPE-GFP,并转入金龟子绿僵菌RCEF3377,获成功表达。用含有gfp基因的金龟子绿僵菌孢子粉配制种衣剂,对玉米种子包衣。于玉米苗期对根际定殖情况进行定期取样观测。结果表明,与非根际土壤相比,在根际土壤中被标记的绿僵菌带菌量不仅最大,而且在播种后10d数量达最大,20～30d内数量即不再显著变动。相比之下,非根际土壤中的带菌量不仅极显著少于根际土壤,且随时间的延长明显降低;在表层土中的带菌量很低,亦随时间的延长显著降低。表明应用该种衣剂剂型,金龟子绿僵菌孢子在玉米根际有较高活力和定殖效果。     

金龟子绿僵菌小孢变种对筛胸梳爪叩甲幼虫致病力的生物测定

从筛胸梳爪叩甲Melanotus cribricollis僵死幼虫体内分离得到1株金龟子绿僵菌小孢变种Metarhizium anisopliae var.anisopliae菌株WP,首次采用拌土法对该菌寄生筛胸梳爪叩甲幼虫的致病力进行测定,并分析外界条件对绿僵菌致病力的影响。在WP菌株1×104~1×107孢子/g干土7个孢子浓度梯度下,随着浓度的提高,筛胸梳爪叩甲的校正死亡率从20%上升至100%。在15、20、25、30℃4个温度下,该菌对筛胸梳爪叩甲的致死率随着温度升高而上升。30℃时,筛胸梳爪叩甲死亡率达96.7%;当降至15℃,筛胸梳爪叩甲不会被寄生。在6%~18%土壤湿度条件下,土壤湿度的升高会提高WP菌株对筛胸梳爪叩甲的致死率,6%的土壤湿度不会导致该虫染病。     

18种化学农药与绿僵菌相容性研究

本文检测了18种常用低毒化学农药对生防真菌绿僵菌Metarhizium anisopliae孢子萌发、菌丝生长及产孢的影响,分析它们与绿僵菌的相容性。总体看,杀虫剂、植物生长调节剂和除草剂与绿僵菌的相容性好于杀菌剂。其中,氰戊菊酯与绿僵菌相容性最好,即使在10倍的推荐浓度下,对孢子萌发无影响,对菌丝生长速度和产孢量的抑制率只有25.13%和38.63%。高效氯氟氰菊酯和乐果与绿僵菌也有较好的相容性,在推荐的田间使用浓度下,孢子萌发抑制率为30%左右,对菌丝生长和产孢量基本没有抑制。溴氰菊酯、啶虫脒、吡虫啉、甲霜灵、氟乐灵、阿维菌素、敌百虫、毒死蜱和波尔多液与绿僵菌有一定的相容性。矮壮素、哒螨灵、多菌灵、甲基硫菌灵、代森锰锌和三唑酮与绿僵菌相容性很差。