深绿木霉T2菌株对百合疫霉拮抗作用及机制

本文采用对峙培养、抗生物质测定、对扣培养、圆盘滤膜法、酶活性测定等方法,研究了深绿木霉对百合疫霉病菌的拮抗作用及机制。结果表明,深绿木霉T2菌株具有较强的营养竞争与重寄生作用;并发现其有抗生物质和溶菌酶类产生,对峙培养60 h时,深绿木霉生长速率是百合疫霉的3.68倍,能够与其竞争营养,抑制了百合疫霉的生长与扩展,深绿木霉寄生在百合疫霉菌丝上生长,导致百合疫霉菌丝降解;其代谢产物能够抑制百合疫霉的生长,48 h时难挥发性和易挥发性代谢产物对百合疫霉的抑菌率分别为85.07%和79.10%;深绿木霉T2菌株的发酵液有较高的β 1,3 葡聚糖酶活性,并在第5天达到峰值,为18.54U;深绿木霉发酵液对百合疫霉菌丝有降解作用。     

深绿木霉TA-9分生孢子固体发酵的响应曲面法优化

前期研究中分离获得深绿木霉Trichoderma atroviride菌株TA-9,其在田间试验中具有较好生物防治效果.本研究通过Plackett-Burman试验设计及Box-Behnken设计-响应曲面法(response surface methodology,RSM)对影响深绿木霉TA-9菌株发酵的培养基和培养...     

深绿木霉发酵液对黑麦草促生作用及生理生化特性的影响

通过种子萌发和幼苗盆栽试验研究了不同稀释倍数深绿木霉发酵液对黑麦草促生作用及生理生化特性的影响。室内试验结果表明,不同稀释倍数深绿木霉发酵液能够显著提高黑麦草种子的发芽率、发芽指数和活力指数,尤其是100倍稀释液对黑麦草种子发芽率、发芽指数和活力指数的影响较为明显,分别为96.55%、37.41和7.83。盆栽试验结果表明,不同稀释倍数深绿木霉发酵液对黑麦草幼苗的生长具有明显的促生作用,以及能够显著地提高幼苗叶绿素、可溶性蛋白含量和与抗性相关酶的活性,尤其是100倍稀释液处理的黑麦草幼苗根系长度、株高、鲜重、干重和根冠比的相对增长率分别为16.95%、13.33%、40.57%、73.68%和36.36%;叶绿素和可溶性蛋白含量的相对增长率分别为8 4.09%和75.50%;多酚氧化酶、过氧化物酶和苯丙氨酸解氨酶活性均显著高于对照,且多酚氧化酶和苯丙氨酸解氨酶活性在处理后第四天达到最大值,过氧化物酶活性在处理后第三天达到最大值。因此,深绿木霉发酵液对黑麦草的生长具有显著的促生作用,且能够显著提高与抗性相关酶的活性。     

深绿木霉TraT2A对5种作物的促生作用研究

为明确来源于深绿木霉(Trichoderma atroviride)T2菌株发酵液的蛋白提取物TraT2A对小麦、玉米、豇豆、辣椒和黄瓜5种作物的促生作用,本试验采用种子萌发和室内盆栽试验测定了4种不同浓度的TraT2A对5种作物种子发芽情况、幼苗形态变化和生理特性的影响。结果表明：4种不同浓度的TraT2A对5种作物均具有促生作用,可显著促进作物生长,促生率可达104.69%,同时提高叶绿素含量和根系活力,促生率达24.95%,且降低丙二醛含量,促生率达36.69%。10 mg·mL^-1 TraT2A对5种作物的促生效果最好,且不同作物不同指标之间促生效果存在差异,表现为对黄瓜干质量的促生率最大,为104.69%,其次是对黄瓜活力指数的促生率为91.86%,第三是对辣椒胚轴的促生率为70.17%;对其他作物的发芽率、发芽指数、胚根、鲜质量、干质量、叶绿素含量和根系活力的最大促生率在17.65%～46.46%范围内;10 mg·mL^-1 TraT2A处理5种作物后小麦丙二醛含量降幅最大(36.69%)。4种不同浓度的TraT2A处理5种作物后...     

蝇蛆甲壳素对深绿木霉T2产生几丁质酶的诱导作用

分别采用EDTA除钙和氢氧化钠-戊醇反应体系,并结合微波加热处理2次的优化工艺,从蝇蛆中提取甲壳素、壳聚糖,探讨二者对深绿木霉T2菌株产生几丁质酶的影响,并对深绿木霉T2几丁质酶活性及其对4种病原真菌的拮抗作用进行了研究。结果表明,提取的蝇蛆甲壳素的产出率为75.0%,灰分含量为17.3%;蝇蛆壳聚糖制备获得脱乙酰度为95.5%、含水量为8.36%的高质量壳聚糖产品,且碱用量明显下降,反应时间由4 h缩短为6 min;蝇蛆甲壳素培养基诱导培养的深绿木霉T2几丁质酶活性为0.9721 U/mL,高于PDB液体培养基、SCMS营养液和蝇蛆壳聚糖培养基;不同营养条件下,蝇蛆甲壳素培养基均能够诱导深绿木霉T2菌株产生几丁质酶,且最佳产酶培养时间为120 h,酶活性峰值为1.8340 U/mL;经蝇蛆甲壳素诱导后的深绿木霉T2菌株对4种病原菌的抑菌效果明显高于对照菌株T2。     

康氏木霉抑菌物质的抑菌效果

康氏木霉抑菌物质的抑菌效果与培养时间呈直线回归关系，即在培养５７天以内，随着培养时间的延长，抑菌效果在不断增强。康氏木霉抑菌物质对丝核菌属、镰孢属，、刺盘孢属、核菌属等致病菌都有较强的抑制作用。     

深绿木霉蛋白质TraT2A诱导兰州百合抗灰霉病的作用

采用生长速率法和活体试验法分别测定了深绿木霉Trichoderma atroviride蛋白质Tra T2A对兰州百合灰霉菌的抑制作用和诱导抗病效果及持效期。结果表明TraT2A高浓度(5×液)具有较高的抑制作用,抑制率为47.44%,低浓度(100×液)具有较高的诱导抗病作用,其诱导效果可达55.89%;TraT2A 100×液处理兰州百合植株3 d后挑战接种灰霉菌,分别于0、1、3和5 d对兰州百合叶片中的PAL、PPO、POD和SOD酶活性及丙二醛、叶绿素含量变化进行了测定。发现TraT2A诱导处理后可提高百合叶片中与抗病性相关的防御酶PAL、PPO、POD、SOD活性和叶绿素含量,降低丙二醛的含量;在接种后1、3和5 d时,4种酶活性和叶绿素含量显著高于对照,丙二醛含量则低于对照,4种酶活性在第5 d时均达到最大值,PAL、PPO、POD和SOD分别是对照的1.47、2.28、1.36和1.49倍;在接种后1、3和5 d时,叶绿素含量分别比对照高10.13、12.05和6.05 mg/g;丙二醛含量仅为对照的0.68、0.40和0.51倍;TraT2A防治百合灰霉病的持效期为7 d,高于阿泰灵和速克灵的持效期。     

木霉共培养发酵对黄瓜枯萎病的防治效果

为明确深绿木霉HB20111和哈茨木霉TW21990共培养发酵对黄瓜枯萎病的防治作用,采用对峙培养法观察两菌株的亲和性,通过浸种抑菌萌发试验筛选共培养发酵的最佳条件,并在温室条件下验证其生防效果.结果表明:在PDA平板上25℃对峙培养5 d,两株木霉亲和性较好.两菌株等量接种发酵培养基,25℃、130 r/min振荡培...     

深绿木霉T2菌株发酵液蛋白提取物TraT2A抑菌条件优化及其对百合叶斑病的田间防治效果

为了提高深绿木霉Trichoderma atroviride T2菌株发酵液蛋白提取物TraT2A的抑菌活性和光稳定性,采用菌丝生长速率法,通过对紫外保护剂 (抗坏血酸、腐殖酸) 和辅助剂 (IE-08、SP-4821A和SP-4821B) 的筛选,优化了TraT2A对百合叶斑病菌Alternaria alternata的抑菌条件,并测定了其对百合叶斑病的田间防治效果。结果表明:TraT2A在200.00 mg/mL下对百合叶斑病菌A.alternata的抑菌作用较好,抑制率为72.12%;随着紫外光照时间的延长,TraT2A的抑菌活性逐渐降低,添加5.00 mg/mL的腐殖酸对TraT2A有较好的紫外保护作用,抑制率 (69.01%) 比不加紫外保护剂对照 (29.37%) 提高39.64%;添加0.17 mg/mL 的辅助剂SP-4821A对TraT2A活性的提高效果最好,抑制率 (95.13%) 比TraT2A对照 (69.16%) 提高25.97%。按照优化后的配方:200 g TraT2A (质量浓度为200.00 mg/mL) + 5 g腐殖酸 (质量浓度为5.00 mg/mL) + 0.17 g SP-4821A (质量浓度为0.17 mg/mL) + 794.83 mL灭菌水,进行田间药效试验,结果发现其对百合叶斑病的防治效果为80.37%。该研究结果为进一步开发防治百合病害的TraT2A制剂提供了理论依据。     

产香真菌GS-1挥发性物质特征分析及抑菌作用观察

产香真菌GS-1为分离自构树枯枝的一株丛赤壳Nectria cinnabarina,该菌株产生浓郁的香味,其挥发性物质对多种重要植物病原菌均有明显的熏蒸抑制作用.为明确菌株GS-1挥发性物质对植物病原菌的熏蒸抑菌机制、挥发性物质化学组分及菌株生长过程中的挥发性物质释放量的动态规律,利用扫描和透射电镜观察GS-1菌株挥发...     

拮抗内生芽孢杆菌BEB17分离鉴定及其挥发性物质抑菌活性分析

 项目组从健康香蕉植株根部中分离得到一株对多种植物病原真菌具有抑菌活性的内生细菌。结合形态特征观察、生理生化分析及分子鉴定,鉴定该菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),命名为BEB17。双皿对峙实验结果表明,该菌株产生的挥发性有机物(Volatile organic compounds, VOCs)可抑制多种病原真菌生长,其中对香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporum f. sp. cubense race 4,Foc4)抑制效果最强,抑制率达66.86%±0.90%,并能抑制其孢子萌发。用BEB17产生的挥发性物质做熏蒸处理后,Foc4菌丝发生缢缩膨大,细胞膜被破坏。采用顶空法固相微萃取结合气质联用(HS-SPME-GC-MS)对BEB17产生的挥发性有机物(VOCs)进行收集鉴定,得到10类33种单体有机物组分。     

枯草芽孢杆菌挥发产物的杀线虫活性评价及成分鉴定

寄牛线虫Ditylenchus destructor是许多作物和蔬菜的重要病原物.本研究进行的密封皿内测定结果表明,由枯草芽孢杆菌BL02和G8产生的挥发物能够强烈地抑制D.destructor(24 h杀虫活件均达100%).经挥发物处理后,大部分线虫在1～12 h内活动逐渐减弱,24 h后完全停止活动.经固相微萃取并经气相色谱-质谱联脂技术进一步鉴定,挥发物包括烷烃、醇、酯、酮、酸、胺、肟、酚及杂环类.本研究为微生物活性挥发物的开发和利用提供了有价值的参考并预示了细菌挥发物在未来植物线虫病害生物防治方而的应用潜力.     

Role of strawberry volatile organic compounds in the development of Botrytis cinerea infection

Botrytis cinerea, the main pathogen of strawberry, has the ability to remain quiescent in unripe tissue and develop disease symptoms in ripe fruit. As strawberry ripening is characterized by an increase of aroma compounds, the role of volatile emission in the development of infection was investigated. Thirty‐five strawberry volatile organic compounds (VOCs) were tested on B. cinerea in vitro and volatile emission was analysed in strawberry harvested at four ripening stages by headspace solid‐phase microextraction/gas chromatography–mass spectrometry and proton transfer reaction–time of flight–mass spectrometry. The coupling of such data sets made it possible to conclude that key strawberry aroma compounds stimulate B. cinerea conidial germination and some typical wound‐volatiles stimulate pathogen conidial germination or mycelial growth. This study is the first report of fungal stimulation by some VOCs naturally occurring in strawberry: the esters ethyl butanoate, cis‐3‐hexenyl acetate, trans‐2‐hexenyl acetate, methyl butanoate and hexyl butanoate, the furanones furaneol and mesifurane, and the alcohol trans‐2‐hexenol. The results of this work provide advances in understanding the functional role of fruit VOCs and suggest, for the first time, that fruit VOCs may influence the development of B. cinerea from the latent phase and that they could favour the invasive growth of B. cinerea after wounding. In particular, ethyl butanoate and furaneol could signal strawberry ripening, and the green leaf volatiles trans‐2‐hexenol, trans‐2‐hexenyl acetate and cis‐3‐hexenyl acetate could signal the presence of damaged tissues that are easier sites for penetration by B. cinerea.     

基于组效关系的土荆芥挥发油熏蒸抑菌活性组分鉴定

通过分析土荆芥Chenopodium ambrosioides L.挥发油对灰葡萄孢Botrytis cinerea Pers.的熏蒸抑制作用与其化学组分之间的组效关系,鉴定挥发油中与抑菌作用显著相关的活性成分。采用气相色谱-质谱联用(gas chromatograph-mass spectrometry, GC-MS)技术分析29个土荆芥挥发油样品的化学组分和相对含量,同时以菌丝生长速率法分别测定各样品对灰葡萄孢的熏蒸抑制效能。在此基础上,我们选取相对含量占总挥发油91.39%～99.50%的13种共有化合物为特征化合物,采用正交最小偏二乘判别分析(orthogonal partial least squares discriminant analysis, OPLS-DA)法分析组效关系,同时利用双变量相关分析验证组效分析结果。结果表明,3-甲基-4-异丙基苯酚、麝香草酚、α-萜品烯、p-伞花烃和驱蛔萜等化合物是土荆芥挥发油对灰葡萄孢菌发挥熏蒸抑制作用的主要活性组分。     

Interplay of apple volatile organic compounds with Neofabraea vagabunda and other post-harvest pathogens

Neofabraea vagabunda, causing bull’s eye rot, produces notable loss during cold storage of apples growing in cool humid regions. The infection initiates in the orchard, but the pathogen lives quiescently in fruit for some months before causing the symptoms of the disease. In vivo and in vitro assays were carried out to gain knowledge on the influence of fruit volatile organic compounds (VOCs) in N. vagabunda development and define volatile markers for pathogen detection, using SPME/GC-MS, PTR-ToF-MS analysis and light microscopic observations. This study reports that: (i) the main VOCs of Cripps Pink apple (highly susceptible to bull’s eye rot) are degraded during the conidial germination of N. vagabunda, stimulating pathogen hyphal growth towards the host; (ii) first disease symptoms appear when fruit releases VOCs related to senescence, which also stimulate pathogen hyphal growth; (iii) VOCs typical of ripe-senescent fruit are also emitted by infected fruit during N. vagabunda quiescence, and methanol and ethanol are the earliest markers of bull’s eye rot; and (iv) the in vitro volatile metabolism of Botrytis cinerea, Penicillium expansum and Colletotrichum fioriniae has similarities with that of N. vagabunda, but the volatile profile of each pathogen is distinguishable. Overall, this study provides novel knowledge on fruit–fungus interaction and insights for the development of tools for early disease detection in packing houses.     

西花蓟马对12种植物挥发物的选择行为

为寻找对西花蓟马Frankliniella occidentalis有吸引或者驱避作用的植物挥发物用于其综合防治,使用四臂嗅觉仪测试其对12种植物挥发物（松油醇、芳樟醇、罗勒烯、α-蒎烯和月桂烯5种萜类化合物,1-辛烯-3-醇和叶醇2种醇类化合物,叶醛、壬醛和苯甲醛3种醛类化合物,乙酸叶醇酯和水杨酸甲酯2种酯类化合物）的选择行为。结果表明,对西花蓟马有显著引诱活性的植物挥发物是月桂烯,在10μL/mL和100μL/mL浓度处理下西花蓟马成虫对其的选择率分别为21.67%和26.67%。对西花蓟马有显著驱避作用的植物挥发物有4种,其中100μL/mL叶醛对西花蓟马成虫的驱避率为36.67%;1、10和100μL/mL叶醇对成虫的驱避率分别为48.75%、40.00%和45.00%;100μL/mL 1-辛烯-3-醇对成虫的驱避率为41.33%;1μL/mL和100μL/mL水杨酸甲酯对成虫的驱避率分别为25.00%和31.67%。表明植物挥发物中存在对西花蓟马具有较好引诱或驱避作用的化合物组分,可用于西花蓟马植物源引诱剂或驱避剂的开发。     

微生物挥发性有机化合物对指状青霉产孢的抑制及其机制

为有效防控柑橘绿霉病,分别测定丙酸乙酯、异丁酸乙酯、2-甲基丁酸甲酯、异丁酸和2-甲基-1-丁醇5种微生物挥发性有机化合物(volatile organic compound,VOC)单剂及其混剂(5种VOC体积比为1:1:1:1:1)对指状青霉Penicillium digitatum菌落生长和产孢的抑制作用、对指状青霉产孢关键调控基因表达量的影响和对分生孢子梗形态的影响及对柑橘绿霉病的室内防控效果。结果显示,丙酸乙酯、2-甲基-1-丁醇单剂和混剂对指状青霉菌丝生长有明显的抑制作用,EC₅₀分别为1.816、0.154和0.230μL/cm³;5种VOC单剂及五者混剂对指状青霉产孢均有不同程度的抑制作用,其中混剂对指状青霉产孢的抑制作用最明显,EC₅₀达到0.006μL/cm³;5种VOC单剂处理后,指状青霉帚状枝变短,侧枝发育不良;一定浓度丙酸乙酯、异丁酸乙酯、2-甲基丁酸甲酯或异丁酸处理后,指状青霉体内brlA和abaA基因过表达,然而2-甲基-1-丁醇和混剂处理后,其体内brlA、abaA和...     

红蓼种子中杀黏虫活性成分的初步分析

［目的］ 对红蓼种子乙酸乙酯萃取物中具有潜在杀虫活性的化合物进行初步分析,为指导开发利用杀虫植物资源提供依据。［方法］ 采用硅胶柱层析和气相色谱 质谱(GC MS)联用法,以5龄黏虫为试虫;对红蓼种子萃取物的有效杀虫活性成分进行分析,应用色谱峰面积归一法测定各组分的相对百分含量。［结果］ 极性（甲醇）组分共分离出37个色谱峰,鉴定了其中的35个组分,占总含量的94.46%。弱极性（二氯甲烷）组分共分离出39个色谱峰,鉴定出39个组分。［结论］ 从成分的化学结构推断,红蓼种子的杀虫活性可能存在于14种成分中,主要成分为酮、醇、开环萜和五环三萜烷类化合物。