猪分级卵母细胞体外成熟时间规律的研究

试验根据猪卵丘－卵母细胞复合体（COCs）的颗粒细胞层数,把COCs分成A、B、C和D级,A、B级用于体外分别培养24、32、38、44、48和54 h,C级用于体外分别培养24、32、38、44、48、54和60 h,观察它们不同时间排出极体数,然后将排出极体的卵母细胞孤雌激活。结果发现,A和B级COCs培养48 h时成熟率最高（83.2%和78.0%）,明显高于同级水平培养24、32和38 h的成熟率;不同级别COCs体外培养相同时间,A与B级成熟率差异不显著（P＞0.05）,但二者与C级的成熟率差异显著（P＜0.05）;体外培养48 h COCs卵裂率最高（81.7%）,与培养38 h前的卵裂率差异显著（P＜0.05）。结果表明,A、B级卵母细胞更适于体外培养,能获得高的成熟率和卵裂率,COCs周围颗粒细胞对卵母细胞的成熟有显著影响;COCs培养38 h之前,部分虽能看到极体,但激活后卵裂率极低,说明卵母细胞并未真正成熟,通常通过排出极体判断卵母细胞成熟是不够准确的,COCs体外培养44～48 h是成熟的最佳时期,能为体细胞核移植提供大量优质的MⅡ期卵母细胞。     

猪卵母细胞回收方法对其体外成熟及体外受精的影响

研究采用刺破法、切剖法和抽吸法采集猪卵母细胞,比较3种不同方法对卵母细胞在体外成熟及受精后发育的影响.结果表明:刺破法和切剖法所得A、B级卵母细胞数显著高于抽吸法(P<0.05);三种方法回收的A、B级卵母细胞成熟率差异不显著(P>0.05),但三种方法荻取的A级卵母细胞成熟率均显著高于B级卵母细胞(P<0.05);刺破法得到的成熟卵母细胞受精后的卵裂率显著高于抽吸法(P<0.05),与切剖法相比差异不显著(P>0.05),但在卵裂胚胎中胚胎各发育阶段所占比例相同(P>0.05).     

不同培养条件对牛卵母细胞体外成熟的影响

利用屠宰场采集的牛卵巢,研究了培养时间和不同激素组合对卵母细胞体外成熟的影响,结果表明:在成熟培养液中添加10μg/mLFSH、1μg/mLE_2的Ⅰ组(成熟率77.78%、卵裂率64.37%)和同时添加10μg/mLFSH、10μg/ mLLH、1μg/mLE_2的Ⅱ组(成熟率82.76%、卵裂率67.26%)与对照组(成熟率45.46%、卵裂率52.29%)相比,卵母细胞成熟率和卵裂率差异极显著(P<0.01),Ⅰ、Ⅱ两组之间,卵母细胞抽检成熟率、卵裂率虽无显著差异(P>0.05),但Ⅱ组卵母细胞成熟率、卵裂率分别比Ⅰ组提高了5.02%和2.89%。卵母细胞培养<20h、20h、24h、28h,成熟率分别为53.33%、77.77%、78.57%和71.43%,卵母细胞成熟率20h、24h、28h组与<20h组相比差异显著(P<0.05)。卵裂率20h、24h组(51.79%、58.16%)明显高于<20h组(38.24%)、28h组(36.98%)(P<0.05),但20h、24h组卵裂率差异不显著(P>0.05)。     

牦牛卵母细胞的体外成熟、种间受精与胚胎培养

探讨了卵母细胞体外成熟时间、卵母细胞质量、精子准备和受精卵培养体系对牦牛卵母细胞种间体外受精效果的影响。结果表明:牦牛卵母细胞随体外成熟培养时间延长,第一极体排出率增加,囊胚发育率以成熟培养24 h最高;A级卵母细胞种间受精后囊胚的发育率(48.77±3.76)%显著高于B级(32.05±5.24)%和C级(7.54±7.18)%(P<0.05);BO液洗涤离心处理的精子受精后卵裂率(82.53±6.54)%显著高于Percoll液分离精子受精后的卵裂率(67.39±4.50)%(P<0.05),而两者囊胚率差异不显著((42.32±4.13)%vs(35.59±5.62)%,P>0.05);荷斯坦奶牛精子浓度在1×106～5×106/mL范围与牦牛卵母细胞受精效果差异不显著。卵丘细胞、输卵管上皮细胞共培养和SOF液培养种间受精卵,其卵裂率差异不显著,但共培养组的桑葚胚、囊胚和孵化胚发育率均显著高于SOF液培养组。     

换液培养对猪卵母细胞的成熟及胚胎体外发育的影响

通过后期去除激素培养比较了卵丘卵母细胞成熟及构建克隆胚后的发育情况,同时孤雌胚胎和体外受精胚胎体外培养48 h后全量换液,比较了其卵裂率和囊胚率之间的差异。结果显示,卵丘卵母细胞培养22h后换成不含激素的成熟培养液继续培养至44 h,其成熟率与对照组无显著差异(P0.05);后期克隆胚胎卵裂率和囊胚率与对照组均无显著差异(P0.05)。孤雌胚胎换液培养卵裂率高于未换液组,囊胚率低于未换液组,但差异均不显著(P0.05)。体外受精胚胎换液培养卵裂率以及囊胚率和未换液组差异不显著(P0.05)。本实验结果说明换液培养对卵母细胞的成熟及后续的体细胞克隆胚发育无显著影响,孤雌和体外受精胚胎换液培养对后期发育也无显著影响。     

卵丘细胞对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎体外发育的影响

为探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)的添加浓度及脱卵丘细胞时间对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎体外发育的影响.试验通过在体外成熟液中添加不同浓度(0、10、15、20、30、40 ng/mL)的EGF来研究其对培养44 h的卵母细胞成熟率以及孤雌胚胎发育的影响;在培养开始后的不同时间(18、24、38、44 h)进行脱卵丘细胞处理来研究不同时间脱卵丘处理对培养44 h的卵母细胞成熟率以及孤雌胚胎发育的影响.结果表明,成熟培养基中添加10 ng/mL EGF能显著提高卵母细胞的卵裂率和囊胚率(P <0.05).共培组和独培组卵母细胞培养18 h后脱卵丘细胞成熟率均低于44 h,但差异不显著(P >0.05);共培组卵母细胞培养18 h后脱卵丘细胞的卵裂率和囊胚率显著高于培养44 h(P <0.05);独培组卵母细胞培养18 h后脱卵丘细胞的卵裂率与44 h无显著差异(P >0.05),但囊胚率显著高于培养44 h后脱卵丘细胞(P <0.05).添加10 ng/mL EGF对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎体外发育较好;卵母细胞培养18 h后脱卵丘细胞可提高孤雌胚胎早期发育能力.     

牛卵母细胞体外成熟、体外受精及胚胎培养的研究

以牛卵母细胞为试验材料,研究了不同温度、不同运送时间对牛卵母细胞成熟的影响,比较自配成熟培养液与IVMD101成熟培养液对牛卵母细胞发育的影响,也进行了孤雌激活和体外受精在相同培养条件下对牛卵母细胞胚胎发育的影响比较.结果表明:卵巢在37～42℃运输后的成熟率(11.3%)明显低于20～30℃、30～37℃(79.3%、85.1%),20～30℃、30～37℃组间差异不显著(P>0.05);运送6 h后的卵母细胞成熟率(53.2%)明显低于4 h内、4～6 h(85.6%、77.8%),4 h内、4～6 h组间差异不显著(P>0.05);自配成熟液与IVMD成熟液相比,体外成熟率(89.03%、88.89%)、卵裂率(71.73%、74.53%)、8细胞率(62.35%、72.05%)和囊胚率(22.94%、21.18%)均无显著差异(P0.05).     

不同培养条件对牛卵母细胞体外成熟的影响

利用屠宰场采集的牛卵巢,研究了培养时间和不同激素组合对卵母细胞体外成熟的影响,结果表明:在成熟培养液中添加10 μg/mL FSH、1 μg/mL E2的Ⅰ组(成熟率77.78%、卵裂率64.37%)和同时添加10 μg/mL FSH、10 μg/mL LH、1 μg/mL E2的Ⅱ组(成熟率82.76%、卵裂率67.26%)与对照组(成熟率45.46%、卵裂率52.29%)相比,卵母细胞成熟率和卵裂率差异极显著(P＜0.01),Ⅰ、Ⅱ两组之间,卵母细胞抽检成熟率、卵裂率虽无显著差异(P＞0.05),但Ⅱ组卵母细胞成熟率、卵裂率分别比Ⅰ组提高了5.02%和2.89%.卵母细胞培养＜20 h、20 h、24 h、28 h,成熟率分别为53.33%、77.77%、78.57%和71.43%,卵母细胞成熟率20 h、24 h、28 h组与＜20 h组相比差异显著(P＜0.05).卵裂率20 h、24 h组(51.79%、58.16%)显著高于＜20 h组(38.24%)、28 h组(36.98%)(P＜0.05),但20 h、24 h组卵裂率差异不显著(P＞0.05).     

电激活参数与渗透压阶段培养法对孤雌胚胎发育能力的影响

试验旨在摸索猪卵母细胞孤雌激活的电场强度和脉冲时间,并探索渗透压阶段培养法对孤雌胚胎后期发育的影响。猪卵母细胞成熟培养42~44 h后,分别在电场强度2.1、2.3、2.5 kV/mm和脉冲时间30、60、90 μs的9组电激活参数下进行孤雌激活试验;卵母细胞在2.1 kV/mm和30 μs的参数下进行孤雌激活后,分别培养于渗透压为271、280、290、302 mOsm的PZM-3中,48 h后移入渗透压280 mOsm的PZM-3中继续培养96 h;孤雌胚胎于电激活后先在含2 mmol/L 6-DMAP的PZM-3中培养4~6 h,然后移入不含6-DMAP的PZM-3中继续培养。试验结果表明,电场强度和脉冲时间两个参数间无显著的交互作用(P>0.05),脉冲时间相同条件下,卵裂率在不同电场强度条件下均无显著差异(P>0.05),2.1和2.5 kV/mm的电场强度条件下,脉冲时间为30 μs时的卵裂率显著高于60和90 μs(P<0.05),而2.3 kV/mm电场强度下3个脉冲时间试验组的卵裂率无显著差异(P>0.05),各试验组的囊胚率无显著差异(P>0.05);孤雌胚胎在渗透压为290~310 mOsm的PZM-3中培养48 h,卵裂率得到显著提高(P<0.05),渗透压对囊胚率无显著影响(P>0.05);6-DMAP对孤雌胚胎卵裂率无显著影响(P>0.05),但可以显著提高囊胚率(P<0.05)。结果提示,猪卵母细胞孤雌激活需要较高的电场强度(2.1~2.3 kV/mm)而脉冲时间不宜过长(30 SymbolmA@s);48 h的高渗培养和6-DMAP的辅助激活有助于孤雌胚胎的后期发育。     

精卵因素对母牛卵胞质内精子显微注射效果的影响

实验探讨了精卵因素对母牛卵母细胞质内精子显微注射效果的影响.结果表明:新鲜精液组和性控冻精组ICSI对卵母细胞存活率、卵裂率和囊胚率均无显著差异(P>0.05);采用A、B、C级精子穿刺Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级卵母细胞时,穿刺卵受精率、卵裂率和囊胚率在三者之间无显著差异(P>0.05),总体效果A>B>C、Ⅰ>Ⅱ>Ⅲ;D级精子穿刺Ⅱ级卵母细胞后的穿刺卵受精率显著低于Ⅰ级卵母细胞(P<0.05),卵裂率和囊胚率与Ⅰ级卵母细胞相比无显著差异(P>0.05),穿刺Ⅲ级卵母细胞后的穿刺受精率和囊胚率均显著低于Ⅰ级卵母细胞(P<0.05),受精卵的卵裂率与Ⅰ级卵母细胞相比则无显著差异(P>0.05).由此可见:采用流式细胞仪分离的性控冻精与新鲜精液相比,对ICSI后的受精率和囊胚率无显著影响;精子活动力和卵子质量对ICSI的效果均有一定程度影响,且随精子活动力的降低和卵母细胞质量的下降而逐渐显著.     

商会自治的基石——商会自治规范研究

在现代法律秩序中,商会自治规范是制定法的基础和必要的补充,甚至在某些方面替代了制定法;商会自治规范主要包括商会组织规范、行为规范、惩罚规范以及争端解决规范等;其效力仅及于其内部成员;商会自治规范和制定法之间存在冲突,但也存在整合的基础。     

癸氧喹酯干混悬剂含量测定的改进

采用高效液相色谱法测定癸氧喹酯干混悬剂的含量,在2-250μg/mL范围内,峰面积的常用对数与进样量浓度的常用对数呈良好的线性关系,R^2=1(n=5),平均回收率为99.24%~99.51%,RSD在0.05%~0.28%。此方法分析时间短,样品前处理简便、定量结果准确,重现性好,结果满意,为其质量控制提供了依据。     

猪毛色遗传的研究进展

本文概述了猪的毛色类型、猪的毛色遗传模式,着重综述了猪毛色基因分子基础的研究进展,指出存在问题并就未来发展方向做了思考。     

Comparison of 2 methods of centesis of the bursa of the biceps brachii tendon of horses

REASONS FOR PERFORMING STUDY: Centesis of the bicipital bursa using an 8.9 cm long spinal needle has been reported but the alternative of employing a 3.8 cm long hypodermic needle requires validation. OBJECTIVE: To compare the efficacy of 2 different methods of centesis of the bicipital bursa and to evaluate the usefulness of ultrasonographic imaging to determine the location of solution administered when centesis of the bursa is attempted. METHODS: For Trial 1, 6 clinicians, who had no previous experience of centesis of the bicipital bursa, attempted to inject a solution composed of an aqueous radiopaque contrast medium and physiological saline solution (PSS) into the bicipital bursae of 2/12 horses using the previously described distal approach to inject one bursa and a proximal approach to inject the contralateral bursa. The bicipital tendon and bursa were examined ultrasonographically before and after injection; and both shoulders were examined radiographically to identify the location of the medium. In Trial 2, another 6 clinicians, also with no previous experience of centesis, repeated Trial 1, using 6 horses, but the radiopaque contrast medium was mixed with air instead of PSS. RESULTS: Accuracy of centesis using the proximal approach was 39% and that of the distal approach 28%. Ultrasonographic examination of the shoulder allowed the location of solution and air to be accurately predicted in all 12 shoulders examined. CONCLUSIONS: Clinicians who have had no previous experience performing centesis of the bicipital bursa are unlikely to be successful in centesis using either approach. Radiographic examination after injecting a radiopaque contrast medium may be necessary to assess the success of centesis especially if bursal fluid is not obtained during centesis. Injecting air along with the radiopaque contrast medium provides more accurate ultrasonographic confirmation of centesis and better radiographic definition than does injection without air.     

不同样本商品蜂蜜中硒含量的测定

用硝酸和高氯酸消化蜂蜜,使硒游离出来,在微酸性环境下,硒和2,3-二氨基萘(DAN)生成有较强荧光的物质,用环己烷萃取,在激发波长378nm,荧光波长518nm处测定其荧光强度。蜂蜜中硒含量范围:0.10～0.82μg/g。表明:蜂蜜应视为天然富硒营养品。     

乳酸杆菌益生作用机制的研究进展

乳酸杆菌作为益生菌广泛用于人和动物。本文综述了乳酸杆菌改善宿主健康的机制。乳酸杆菌可通过产生抗菌物质如乳酸、过氧化氢、细菌素,或者通过竞争营养或肠道黏附位点来抑制致病菌;通过诱导黏附素的分泌或阻止细胞凋亡而增强肠道的屏障功能,从而保护肠道。文章重点讨论了乳酸杆菌表面成分（表面蛋白、脂磷壁酸和肽聚糖）与肠道受体（Ｃ型凝集素受体、Ｔｏｌｌ样受体和 Ｎｏｄ样受体）,阐述了他们结合后启动免疫调节信号,调控肠道免疫功能以发挥改善健康作用的机制。     

Effects of size of ingestively masticated fragments of plant tissues on kinetics of digestion of NDF

Ingestively masticated fragments were collected and sized via sieving. Different sizes of esophageal masticate and ruminal digesta fragments, and ground fragments of larger masticated pieces were incubated in vitro, and undigested NDF remaining at intervals of up to 168 h of incubation was determined. The ruminal age-dependent time delay (tau) for onset of digestion of NDF was positively correlated (P < 0.004) with the mean sieve aperture estimated to retain 50% of the fragments between successive sieve apertures (MRA). Degradation rate of potentially degradable NDF (PDF) and level of indigestible NDF were not related (P > 0.10) to MRA of masticated and ground fragments. Estimates of tau were positively related to MRA, with slopes of bermudagrass < corn silage < ruminal fragments of corn silage. It was concluded that fragment size-, and consequently, ruminal age-dependent onset of PDF degradation of a mixture of different fragment sizes results in an age-dependent rate of degradation of the more rapidly degrading of two subentities of PDF. Models are proposed that assume a tau before onset of simultaneous degradation of PDF from two pools characterized as having gamma-modeled age-dependency and age-constant rates. The ruminal age-dependent pool seems to be associated with the faster-degrading pool, and its rate parameter increases with range in MRA in the population of fragments. Conceptually, the ruminal age-dependent rate parameter for PDF degradation seems to represent a composite of several effects: 1) effects of the size-dependent tau; 2) range in MRA of the population of ingestively masticated fragments; and 3) subentities of PDF that degrade via more rapid age-dependent rates compared with subentities of PDF that degrade via age-constant rates. The estimated fractional rates of ruminative comminution of ingestively masticated fragments (0.060 to 0.075/h) were of a magnitude similar to the mean fractional rates of PDF digestion (0.030 to 0.085/h), which implies that ruminative comminution may be first-limiting to fractional rate of PDF digestion. The in vivo roles of ingestive and ruminative mastication of fragments on PDF degradation must be considered in any kinetic system for estimating PDF digestion in the rumen. These results and others in the literature suggest that the rate of surface area exposure rather than intrinsic chemical attributes of PDF may be first-limiting to degradation rate of PDF in vivo.     

Mechanism of Action of Probiotic Function of Lactobacilli

乳酸杆菌作为益生菌广泛用于人和动物.本文综述了乳酸杆菌改善宿主健康的机制.乳酸杆菌可通过产生抗菌物质如乳酸、过氧化氢、细菌素,或者通过竞争营养或肠道黏附位点来抑制致病菌;通过诱导黏附素的分泌或阻止细胞凋亡而增强肠道的屏障功能,从而保护肠道.文章重点讨论了乳酸杆菌表面成分(表面蛋白、脂磷壁酸和肽聚糖)与肠道受体(C型凝集素受体、Toll样受体和Nod样受体),阐述了他们结合后启动免疫调节信号,调控肠道免疫功能以发挥改善健康作用的机制.     

中华人民共和国农业部公告 第267号

为贯彻落实《兽药生产质量管理规范》(简称《兽药GMP》),进一步推动兽药GMP实施进程,我部制定了《兽药生产质量管理规范检查验收办法》,现予公告。本公告自2003年6月1日起施行。附件:兽药生产质量管理规范检查验收办法二○○三年四月十日第一章 总则 第一条 为推动《兽药生产质量管理规范》(以下简称兽药GMP)的实施,规范兽药GMP检查验收工作,制定本办法。 第二条 农业部负责全国兽药GMP管理和检查验收工作;负责制修订兽药GMP检查验收管理规定;负责兽药GMP检查员队伍建设和监督管理工作,负责国际兽药贸易中GMP互认工作。 …