利用RPAD对中国热带地区疫霉菌分类的初步研究

以来自中国热带地区的２个疫霉种（柑桔褐腐疫霉Ｐ．ｃｉｔｒｏｐｈｔｈｏｒａ和芋疫霉Ｐ．ｃｏｌｏｃａｓｉａｅ）１６个菌株的菌丝体的总ＤＮＡ为模板,使用５种随机引物进行ＰＣＲ扩增,获得随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分析与各菌株相对应的ＲＡＰＤ的相似性。结果表明,ＲＡＰＤ不但能辨别这２个疫霉种间的差异,而且可以辨别种内的分类单元,初步肯定了ＲＡＰＤ可以用于中国热带地区疫霉菌的分类鉴定。     

大豆疫霉菌遗传多样性的RAPD分析

利用随机扩增DNA (RAPD)技术分析了15个大豆疫霉菌( Phytophthora sojae)的遗传多样性,并同其它7 个疫霉种的8个菌株进行了比较。运用筛选出的12个引物共获得152个RAPD标记,其中84. 2%具有多态性。通 过聚类分析结果表明,疫霉属种间的遗传相似系数的变化幅度为0. 533～0. 783,大豆疫霉菌与其它几种疫霉的遗 传距离相对较远,用引物OPB06扩增到P. sojae种特有的一个RAPD标记; P. sojae种内菌株间遗传相似系数的变化 幅度为0. 855～0. 967,亦存在较丰富的遗传多样性,该遗传多样性与菌株毒力之间有一定相关性,而与菌株地理来 源没有相关性。     

海南香蕉褐缘灰斑病原菌的核酸分析鉴定

采用种的特异性引物,通过聚合酶链式反应(PCR)方法,对11个海南香蕉褐缘灰斑病菌菌株进行了鉴定。结果表明,11个菌株中,来自海南儋州、乐东、文昌、东方、澄迈、临高、琼海、昌江、琼山、三亚的10个菌株为Mycosphaerella fijiensis,而白沙菌株既不是M.fijiensis,也不是M.musicola,其Mycosphaerella种的分类地位有待进一步研究。采用随机扩增多态DNA(RAPD)分析,将这些菌株区别为2类,支持PCR鉴定结果。本研究的鉴定结果对指导海南综合治理香蕉褐缘灰斑病的的实践有参考作用。     

中国胡椒疫霉种及交配型的研究

1982—1990年,从海南、云南、广东省13个县(市)的60多个发生胡椒瘟病的胡椒园采集大量带菌材料的样本,经分离获得65个疫霉菌株,并鉴定为寄生疫霉(Phytophthara parasitica Dast.)和竦淑疫霉(P.capsici Leon.)两个种。这是国内首次报道。在65个菌株中,寄生疫霉为34株,辣椒疫霉为31株,两者的比例接近1:1。这两个种对中国主要胡椒植区的胡椒瘟病具有同等的重要性。所有菌株的支配型中,两个种都以A~2占大多数,而且都存在个别同宗配合和中性菌株。     

橡胶树多主棒孢病菌遗传多态性分析

利用ISSR（简单序列重复区间扩增多态性）和RAPD（随机扩增多态DNA）技术对供试的18个多主棒孢菌株进行了遗传多态性分析,研究结果表明,2种分子标记技术均能揭示橡胶多主棒孢病菌的遗传多态性。同时利用P距离模型构建了18个多主棒孢菌株的UPGMA聚类分析树状图,根据2种技术构建的UPG—MA聚类树状图可将供试菌株分为3个主要类群。ISSR类群和RAPD类群与地理来源均不存在明显的关系。     

中国橡胶树疫霉种的研究

1982—1988年从海南省10个县21个植胶场和云南省西双版纳、德宏州4个县9个植胶场采集橡胶树地上部的各种疫霉病害的样本,通过分离、提纯,共获得172株疫霉分离菌。经鉴定有以下5种疫霉:柑桔褐腐疫霉(Phytophthora citrophthora)、辣椒疫霉(P.capsici)、密氏疫霉(P.meadii)、寄生疫霉(P.parasitica)和棕榈疫霉(P.palmivora)。其中 P.citrophthora 有91株,占52.8%。其它4种疫霉顺次为45侏,占26.2%,19株,占11.1%,14株,占8.1%;3株,占1.8%。本文对这5种疫霉分别作了种的描述,其中密氏疫霉和寄生疫霉在中国橡胶树上是首次报道。     

应用RAPD技术对44份木薯材料遗传背景的研究

应用RAPD技术对44份木薯材料的遗传背景进行研究。结果表明,采用筛选出的19条随机引物(10bp)PCR扩增共获得279条带,其中234条出现多态性。引物S32和S76可将供试44份材料全部区分开。计算出44份木薯材料的成对相似系数,绝大多数栽培材料间的相似系数大于0.75。通过UPGMA聚类分析,将44份木薯材料划分为野生种和栽培种2大类,依结合线不同,栽培材料又可细分为若干个类群。不同国家和地区来源的材料不能明显聚类。对中国热带农业科学院自身育成的材料单独进行UPGMA聚类,结果与系谱相吻合。利用RAPD研究结果对部分木薯材料的亲缘关系进行了鉴定,并探讨了RAPD技术运用于木薯育种中亲本选配的可能性。      

芦荟疫病疫霉种的鉴定

１９９７年１０月和１９９８年９月在海南儋州市海南省种苗组培中心芦荟苗圃和华南热带农业大学农学院花圃发现芦荟疫病,感病芦荟叶片病斑初呈水渍状,暗绿色腐烂。从病组织上分离到１０个疫霉分离菌。根据孢子囊形态、孢子囊梗脱落性、厚垣孢子有无、藏卵器形态、雄器着生方式、菌落形态,最低、最高生长温度,将其鉴定为烟草疫霉（寄生疫霉） Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ　ｎｉｃｏ－ｔｉａｎａｅ　 Ｖａｎ Ｂｒｅｄａ ｄｅ Ｈａａｎ．（Ｐ．ｐａｒａｓｉｔｉｃａ）。这１０个分离苗中存在Ａ１,Ａ２和Ａ１,Ａ２三种交配型。     

分子标记技术在玉米和高粱品种分析中的初步应用

以玉米丹2100和高粱辽杂10号的可见叶片为材料,应用RAPD筛选技术,对玉米、高粱基因进行分子标记.主要结果如下:(1)对玉米丹2100和高粱辽杂10号叶片总DNA提取纯化的方法进行优化,确定提取总DNA的最佳方法.即CTAB法.(2)初步建立了玉米丹2100和高粱辽杂10号RAPD反应体系,并确定了RAPD反应体系中最佳的引物种类及PCR扩增的最佳反应条件,获得了稳定高效的RAPD扩增结果及多态性较好的DNA.(3)应用RAPD技术筛选14个随机引物,共扩增出45条谱带.A2、G4、Y13分别扩增出3条差异谱带分别为OPG-04800、OPA-02450、OPY-13500.     

大豆疫霉菌与其它几种疫霉菌同工酶电泳比较研究

本对大豆疫霉菌（Phytophthora sojae）的15个菌株及其它7种疫霉的8个菌株进行了4种同工梅电泳比较研究。结果表明，大豆疫霉菌种内菌株间4种同工酶基本一致。疫霉属种间酯酶（EST）和超氧化物歧化酶（SOD）酶谱存在明显差异，表现为酶带的多少和Rf值的不同；淀粉酶（DIA）和过氧化氢酶（CAT）同工酶酶谱差异不很明显，与某些疫霉种酶谱相似，只表现为酶带强度上的差异。本首次报道了大豆疫霉菌的SOD、CAT和DIA同工酶，并指出EST和SOD同工酶在P.sojae种的鉴定上具有重要意义，在P.sojae种的鉴定提供一个辅助性手段。     

马铃薯晚疫病种薯带菌的分子检测

从马铃薯块茎上分离纯化得到晚疫病菌、银腐病菌、癌肿病菌、红腐病菌、黑点病菌和镰刀菌等并提取它们的全基因组DNA,用引物08-3和08-4对这些真菌的DNA进行PCR扩增,以检验该引物扩增晚疫病菌DNA的特异性。取马铃薯种薯的芽眼、芽及其他不同部位并用NaOH法提取晚疫病菌DNA,再用引物08-3和08-4进行特异性扩增以检验种薯是否带晚疫病菌。结果表明:(1)引物08-3和08-4有很强的特异性,只能扩增出大小为257bp的马铃薯晚疫病菌DNA片段;(2)用该引物能扩增出种薯芽眼组织中大小为257bp的晚疫病菌DNA,说明通过PCR特异扩增,能直接检测出马铃薯种薯中潜伏的晚疫病菌。(3)本次检测的本地感病品种米拉有10%的种薯带晚疫病菌。该研究为种薯传播晚疫病菌的分子检测提供了依据和方法。     

12种热带植物粗提物对胡椒瘟病的抑菌活性测定

用生长速率法测试了12种热带植物乙醇粗提物对胡椒瘟病菌的离体抑菌活性。结果表明，当供试质量浓度为干样10 mg/mL时，鹰爪和马缨丹粗提物对胡椒瘟病菌菌丝生长的抑菌率均达到90%以上，分别为91.95%和94.32%。可见这两种植物粗提物对供试病原菌菌丝生长具有明显的抑制作用，值得进一步研究开发。     

Relationships between pathotypes and RAPDs, Gpi-allozyme patterns, mating types, and resistance to metalaxyl ofPhytophthora infestans in Canada in 1997

Relationships between pathotypes and other markers such as mating types, metalaxyl resistance, Gpi-allozyme and random amplified polymorphic DNA (RAPD) patterns, were investigated among 33 isolates ofPhytophthora infestans obtained from both potato and tomato across Canada in 1997. Pathogenicity testings, based on virulence against potato differentials carrying single-resistance genes and the size of lesions on leaves, revealed higher pathogenic diversity in 1997 than in the few past years, with more pathotypes and more race-complex isolates. A higher pathogenic diversity was observed within A2 (US-8) than within A1 (US-11) isolates. There was no correlation between the level of resistance to metalaxyl of an isolate and its pathogenicity. Nevertheless, when grouped into metalaxyl-sensitive (MS), -intermediate (MI), and -resistant (MR) classes, both average pathotype complexity and average lesion size were lowest for MS group. RAPD data revealed a good distinction between A1 (US-11) and A2 (US-8) mating type groups, and between isolates from British Columbia and those from other provinces. The detection in the last few years of both A1 and A2 mating types in Canada and the occurrence in 1997 of some isolates sharing different characteristics of both of these two groups suggest that sexual reproduction may have occurred locally.     

Races of Phytophthora sojae in Iran

Phytophthora root and stem rot of soybean is a destructive disease of soybean in Iran. Races 1 and 3 of pathogen have already been reported from two major growing regions of the crop, Lorestan and Golestan provinces. In a survey during 2004-2005, 142 isolates of P. sojae were recovered from infected plants and naturally infested soil samples using selective media and soybean leaf baiting technique. The majority of tested isolates (110 isolates) belonged to race one of P. sojae and 32 isolates belonged to race 3. ITS region of 23 isolates were amplified with specific primers Ps1 and Ps2. Sequences of this regions were similar to other gene banks sequences except two isolates from China. This survey showed low diversity in Iranian population of P. sojae.     

橡胶树炭疽病菌的RAPD指纹分析

利用9条10碱基的随机引物,在分子水平上对来自海南、云南、广东的16株橡胶树炭疽病菌菌株的遗传变异程度进行RAPD指纹分析。结果表明,16株菌株被聚为3个RAPD指纹组;RAPD指纹组与菌株的地理来源有明显的相关性;而将病原菌接种于橡胶树品系PR107,所得到的病情指数与其RAPD指纹聚类组间没有明显的相关性。      

海南岛菠萝疫霉种及交配型的研究

从海南岛的菠萝植区发生根腐病或心腐病的菠萝上收集大量病组织样本,经纯化获得40个疫霉分离菌株,全部鉴定为寄生疫霉(Phytophthora parasitica Dast.)一个种。所有菌株均为A~2交配型。