枯草芽孢杆菌改善水质提高凡纳滨对虾幼体抗逆性的研究

投放不同浓度梯度的枯草芽孢杆菌于凡纳滨对虾幼体养殖环境中,监测不同枯草芽孢杆菌使用浓度下与养殖环境相关的水质因子（氨氮、亚硝酸盐氮、化学需氧量）的变化;观察不同枯草芽孢杆菌使用浓度下凡纳滨对虾幼体对人工制造的胁迫环境的抗逆性;观测不同枯草芽孢杆菌使用浓度下凡纳滨对虾幼体的成活率与体重增长率。研究枯草芽孢杆菌对水质改善和凡纳滨对虾幼体抗逆性的影响。结果表明,枯草芽孢杆菌能显著（P〈0.05）降低化学需氧量、氨氮含量,抑制亚硝酸盐氮的产生;当枯草芽孢杆菌投放浓度为1.25×10^4cfu/ml时,水体中化学需氧量、氨态氮、亚硝酸盐氮含量均值比对照组分别降低了65.30%、59.70%、88.64%,成活率比对照组提高了10.00%,体重增长率是对照组的2.44倍;当枯草芽孢杆菌使用浓度为1.25×10^4～1.25×10^6cfu/ml时,对虾抗逆性显著（P〈0.05）增强,对虾在氨氮、亚硝酸盐氮、高锰酸钾、甲醛胁迫下24小时的成活率均值分别比对照组提高了16.94%、24.44%、44.17%、18.61%。     

饲料中补充蜡样芽孢杆菌对凡纳滨对虾生长及其肠道微生物组成的影响

为了研究外源补充蜡样芽孢杆菌对凡纳滨对虾生长及对其肠道微生物组成的影响,以基础饲料为空白组,在基础饲料中添加蜡样芽孢杆菌活菌作为实验组(活菌含量为108 CFU/g),每组4个平行,在养殖场对凡纳滨对虾自幼苗至成虾进行一个完整养殖周期的养殖实验。选取养殖场中8个光照、位置等条件基本相同的养殖池分为2组,空白组投喂基础饲料,实验组投喂免疫饲料,养殖周期95 d。期间在第45、52、59、66、73天采样,称重并计算生长速率,并取其肠道内容物提取DNA,用16S r DNA序列V4区高通量测序方法检测对虾肠道内微生物群落的结构及变化情况。结果显示:(1)投喂免疫饲料的实验组对虾生长速度比空白组平均快15.2%。(2)健康的凡纳滨对虾肠道微生物以变形菌门和拟杆菌门含量高,厚壁菌门、疣微菌门、浮霉菌门、放线菌门含量较低。(3)空白组变形菌门平均含量(68.30%),明显高于实验组平均含量(57.94%);空白组拟杆菌门平均含量(23.58%)明显低于实验组平均含量(30.06%)。(4)变形菌门中以弧菌属、Anaerospora、小红卵菌属为主,空白组弧菌属平均占总含量的5.40%,实验组平均占总含量的1.94%;拟杆菌门中以异养硝化菌属、粘着杆菌属为主,实验组异养硝化菌属平均占总含量的8.12%,空白组平均占含量的5.56%。研究表明,饲料中添加蜡样芽胞杆菌投喂凡纳滨对虾后可改变对虾肠道的微生物组成,提高对虾生长速度。     

养殖水体中添加蜡样芽孢杆菌PC465 对凡纳滨对虾抗病力的影响

将蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)PC465添加到凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)养殖水体中至终浓度分别为10~4、10~5和10~6 CFU/mL,以无益生菌添加的养殖组为对照组,定期检测实验对虾肠道和养殖水体中的细菌总数、弧菌总数以及水体中氨氮含量和亚硝酸氮含量。实验结果表明,水体中添加益生菌能降低凡纳滨对虾肠道内细菌数量,且与对照组相比差异显著(P0.05);高浓度的益生菌处理组可以明显降低养殖水体内弧菌数量(P0.05),但是益生菌并没有显著影响水体中的氨氮含量和亚硝酸氮含量。养殖4周后进行WSSV投喂感染实验,感染实验表明,实验组H组(益生菌浓度为10~6 CFU/mL)和M组(益生菌浓度为10~5 CFU/mL)凡纳滨对虾的累计死亡率分别为63.9%和74.6%,显著低于对照组100%的累计死亡率(P0.05)。感染实验期间采用荧光定量PCR方法测定了凡纳滨对虾3种免疫相关基因的表达情况,统计数据显示,益生菌处理组的脂多糖-β-1,3-葡聚糖结合蛋白(lipopolysaccharide-β-1,3-glucan-binding protein,LGBP)、β-1,3-葡聚糖结合蛋白-脂蛋白(beta-1,3-glucan-binding protein-lipoprotein,βGBP-HDL)、热激蛋白70(heat shock proteins,Hsp70)mRNA的表达量在WSSV感染后呈显著上调趋势。实验结果提示,水体中添加蜡样芽孢杆菌PC465可以提高凡纳滨对虾抗WSSV感染能力,其作用机制可能是降低对虾肠道和水体中的细菌和弧菌数量,或调节免疫相关基因的表达水平。     

枯草芽孢杆菌对水质及凡纳滨对虾幼体免疫指标影响的研究

研究了不同浓度的枯草芽孢杆菌（Bacillus substilis）对养殖环境水质和凡纳滨对虾（Penaeus vannamei）幼体抗病力相关酶活性的影响。结果表明,枯草芽孢杆菌能显著（P〈0．05）降低化学需氧量（COD）和氨氮（NH3-N）含量,抑制亚硝酸氮（NO2-N）的产生;当枯草芽孢杆菌投放浓度为1．25×10^4cfu·mL^-1时,水体中COD、NH3-N和NO2-N含量均值比对照组分别降低了65．30％、59．70％和88．64％;20d后测定对虾的碱性磷酸酶（AKP）、过氧化物酶（POD）、酚氧化酶（PO）、超氧化物歧化酶（SOD）、抗菌和溶菌活力,各值相对于对照组分别提高了3．67、1．64、0．45、3．06、2．57和1．14倍;成活率比对照组提高了10％,增重率是对照组的2．44倍。因此,一定浓度的枯草芽孢杆菌能改善凡纳滨对虾幼体的养殖水质进而提高凡纳滨对虾幼体的抗病力。     

芽孢杆菌制剂对凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei肠道微生物群落的影响

应用Biolog方法和传统的平板培养方法分析比较了施用芽孢杆菌制剂的虾池(B)和没有施用任何有益菌的虾池(A)在养殖后期凡纳滨对虾肠道微生物群落结构,并用Shannon指数、Simpson指数和McIntosh指数分析了2种群落的代谢功能的差异。2个虾池对虾肠道微生物群落可培养细菌优势菌属都是革兰氏阴性菌;B虾池对虾肠道可培养细菌数量比A虾池的少;但B虾池对虾肠道微生物群落Shannon指数、Simpson指数和McIntosh指数及其微生物群落代谢功能均显著高于A虾池(P<0.05)。结果表明,虾池施用了芽孢杆菌制剂,可促进养殖对虾肠道微生物群落的代谢功能。     

一种赖氨酸芽孢杆菌对凡纳滨对虾生长和水质影响

为探讨一种赖氨酸芽孢杆菌对凡纳滨对虾生长、存活和养殖水质的影响。设1个试验组和1个对照组,每组3个平行,125尾对虾/桶,初始体质量(5.18±0.13) g、体长(9.40±0.18) cm、水温(26±2)℃、盐度30、试验时间10 d。试验组定期添加浓度为0.463×10⁹ CFU/mL的赖氨酸芽孢杆菌菌液,试验组和对照组NH⁺₄-N质量浓度变化范围分别为(0.05±0.01)～(5.51±0.09) mg/L、(0.05±0.01)～(6.07±0.22) mg/L。NO^-₂-N质量浓度变化范围分别为(0.07±0.01)～(0.13±0.01) mg/L、(0.07±0.01)～(0.19±0.01) mg/L。NO^-₃-N质量浓度变化范围分别为(0.07±0.01)～(0.81±0.07) mg/L、(0.07±0.01)～(1.26±0.07) mg/L。pH的变化范围分别为(7.10±0.01)～(7.74±0.01)...     

胶红酵母分离鉴定及其对凡纳滨对虾幼体存活和变态的影响

用平板划线或稀释法从湛江的凡纳滨对虾、斑节对虾、翡翠贻贝、华贵类栉孔扇贝和褐蓝子鱼肠道中分离红酵母.根据形态和碳源利用特征进行分型,利用5.8S-ITS和26S rRNA基因测序分析鉴定代表菌株,通过间歇饥饿胁迫试验,比较代表菌株对凡纳滨对虾无节Ⅵ期到溞状Ⅱ期幼体存活影响,筛选出最优菌株,进而研究目标菌株从无节Ⅵ期开始...     

溶藻弧菌VZ5株在凡纳滨对虾育苗中应用的研究

在凡纳滨对虾育苗涵状幼体期以不同频次添加溶藻弧菌VZ5株,并在糠虾幼体后搭配添加芽孢杆菌Bz5株,测定育苗过程中水质、水体中弧菌密度变动以及对虾幼体生长和存活状况,研究溶藻弧菌VZ5株在凡纳滨对虾育苗中应用的效果。结果表明,添加溶藻弧菌的3个处理组仔虾期氨氮浓度显著低于对照组;仔虾期幼体干重分别为0．0463±0．0009、0．0420±0．0006、0．0407±0．0009g／尾,显著高于对照组（0．0253±0．0003g／尾）。滏状幼体期每天添加溶藻弧菌的处理组幼体成活率显著高于其他处理组（P〈0．05）。溶藻弧菌VZ5株能够有效降低水体中氨氮的积累和促进对虾幼体生长。     

芽孢杆菌对凡纳对虾生长和消化酶活性的影响

选用豆粕、鱼粉、植物油、淀粉等原料配制基础料为对照组,在基础饲料中分别添加0.5％、1.0％、3.0％、5.0％芽孢杆菌(Bacillus subtilis)制剂为实验组。实验结果显示,凡纳对虾(Pennaus-vannamei)生长的2个阶段,实验组γSGR均大于对照组;生长第1阶段,组1与组2差异显著(P<0.05),与其余3组差异不显著(P>0.05),但各实验组之间差异均不明显(P>0.05);生长第2阶段,组1与组2之间γSGR差异极显著(P<0.01),与其余3组差异不明显(P>0.05),但各实验组间:组2与组4γSGR差异显著(P<0.05),而与组5γSGR差异极显著(P<0.01);对虾生长2个阶段的成活率实验组均略高于对照组,第1阶段的成活率明显高于第2阶段;芽孢杆菌对凡纳对虾2个生长阶段消化酶活性的影响表现出一定的相似性:实验组蛋白酶活性较淀粉酶、脂肪酶和纤维素酶高,且明显高于对照组,但各实验组间变化不明显。表明芽孢杆菌可以提高凡纳对虾消化酶活性和成活率,利于养分的消化吸收,促进生长。     

饲料中补充蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)生物膜对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)生长、抗病力及其肠道微生物组成的影响

为了研究外源补充蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)生物膜对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)生长、抗病力及对其肠道微生物组成的影响,以基础饲料为空白组,在基础饲料中添加蜡样芽孢杆菌游离态活菌作为游离态组(活菌含量为108 CFU/g);在基础饲料中添加蜡样芽孢杆菌活菌生物膜作为生物膜组(活菌含量为108 CFU/g);每组8个平行.在养殖大棚暂养7d后,对凡纳滨对虾进行40 d的养殖实验.在第17天进行白斑综合征(White Spot Syndrome Virus,WSSV)攻毒实验;第22天进行副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)攻毒实验.期间在第1、5、10、15天采样,称重并测量体长计算生长速率.在第1、5、10、15、20、25天采样,并取其肠道内容物提取DNA,用16S rDNA序列V3+V4区高通量测序方法检测对虾肠道内微生物群落的结构及变化情况.结果显示,生物膜组和游离态组对虾体重、体长增长速率高于空白组,生物膜组与游离态组对虾体重、体长差异性不显著,生物膜组和游离态组对虾体重、体长与空白组相比差异性显著.实验中凡纳滨对虾肠道微生物由变形菌门(Proteobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、放线菌门(Actinobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)等组成,其中,变形菌门平均占到总量的94.0％.变形菌门中主要以弧菌属(Vibrio)、发光杆菌属(Photobacterium)、Octadecabacter等为主,生物膜组、游离态组、空白对照组弧菌属平均含量分别为34.65％、39.27％、58.00％.在WSSV攻毒实验中,生物膜组、游离态组、空白对照组平均累积死亡率分别为80.0％、77.0％、92.0％,各组差异性不显著(p＞0.05).在副溶血弧菌攻毒实验中,生物膜组、游离态组、空白对照组平均累积死亡率分别为61.3％、75.0％、77.3％,生物膜组与游离态组和空白对照组相比差异性显著(P＜0.05).研究表明,饲料中添加蜡样芽孢杆菌生物膜和游离态蜡样芽孢杆菌投喂凡纳滨对虾后,可改变对虾肠道的微生物组成,提高凡纳滨对虾生长速度、增强抗病能力,而且添加蜡样芽孢杆菌生物膜效果最明显.     

pH对凡纳滨对虾蛋白酶和淀粉酶活性的影响

研究了不同pH对凡纳滨对虾胃、肠道及肝胰脏中蛋白酶和淀粉酶活力的影响及在最适pH条件下不同部位上述酶活性的差异。试验结果表明,凡纳滨对虾消化系统不同部位的蛋白酶活力大小依次为:肝胰脏>胃>肠,其最适pH分别为8.0、6.0和7.5;淀粉酶活力大小依次为:胃>肝胰脏>肠,其最适pH分别是7.0、7.0和6.5。     

南美白对虾室外育苗的初步试验

在4个室外水泥池和2个室内水泥池进行南美白对虾育苗试验,室外池总育苗水体为40 0m3,室内池总育苗水体为20 0m3。直接在室外育苗池培养单胞藻;白天日照时间为8h以上,光照强度为500～8000lx;室外育苗池共放入南美白对虾无节幼体600万尾,培育至体长1 0cm的虾苗,出苗354 4万尾,总成活率为59 1%。室外育出的虾苗规格整齐,体质强壮;比室内池育苗的时间缩短3～4d。     

凡纳滨对虾感染白斑综合症病毒后的新症状

2007年6-7月,辽宁营口地区凡纳滨对虾养殖场陆续出现死虾现象,通过组织病理观察和PcR检测,确定为白斑综合症.患病初期,对虾并未表现出典型白斑、甲壳易剥离等症状,而在鳃区头胸甲内侧滋生一种囊状胶状物,导致头胸甲内侧肿胀,病理观察发现该滋生物为对虾感染白斑综合症病毒后,皮下组织"胶质化"的结果,同时胃和皮下组织的结缔组织中有大量的典型性病变核;细菌分离结果显示,伴随着弧菌和假单胞菌的混合感染.     

凡纳滨对虾蛋白酶的分离纯化及生化特性

采用Tris-HCl缓冲液抽提、Sephadex G-100凝胶过滤层析、DEAE-Sepharose F.F.阴离子交换层析和SDS-PAGE等方法,分离和纯化了凡纳滨对虾蛋白酶,研究了其生化特性.试验结果表明,该蛋白酶粗提物经层析后,得到聚丙烯酰胺凝胶电泳纯的一酶组分.该蛋白酶的比活力从128.35 U/mg增至1835.65 U/mg,提高了14.3倍,产率达31.9%.SDS-PAGE显示该蛋白酶只含一条谱带,相对分子量为25 kD.以酪蛋白为底物,该酶的最适pH为7.0,最适温度为60 ℃, 在50 ℃以下,比较稳定,放置1 h后活性仍超过60%,而超过50 ℃时蛋白酶活性急剧下降,60 ℃放置1 h后,酶活性只残留4.7%.10 mmol/L EDTA、Fe~(2+)、Ba~(2+)和Zn~(2+)对该蛋白酶有较强的抑制作用,抑制率分别为84%、53%、43%和38%,10 mmol/L Mg~(2+)和Cu~(2+)对蛋白酶活性有轻微抑制作用,而10 mmol/L Ca2+能显著促进蛋白酶活性,据此推测凡纳滨对虾蛋白酶可能为一种金属蛋白酶.     

内陆地区南美白对虾苗种淡化试验

在内陆地区利用工厂化设施、臭氧水处理系统进行南美白对虾苗种淡化。淡化周期为12~15d,苗种成活率为65%~85%,单位水体出苗量5.0×104~7.0×104尾/m3。每个育苗季节可淡化虾苗4.0×107~5.0×107尾,卤水使用量仅为30 m3,并且无药物投放。     

凡纳滨对虾白便综合征的组织病理学观察

本文比较观察了不同规格的健康和患白便综合征凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei肝胰腺、中肠、后肠、后盲囊等的组织结构。组织病理显示:白便综合征凡纳滨对虾肠道严重病变,肠腔空,环肌两侧增生大量成纤维细胞,这些增生细胞取代了肠上皮,而不见正常柱状上皮细胞;肝胰腺有不同程度和性质的病变,如腺管萎缩、崩解、坏死等。凡纳滨对虾患白便综合征的组织病变演变过程为:最初肠上皮基膜下出现一圈增生细胞,肠上皮柱状细胞脱离基膜;增生细胞持续增生增多,肠上皮崩解脱落至肠腔,增生细胞完全取代肠上皮;增生细胞不断增生,增生细胞层逐渐变厚,随着时间的推移,增生细胞层近腔端的一圈增生细胞坏死,出现一圈棕黄色物质,最终坏死细胞连同棕黄色物质脱落至肠腔。脱落至肠腔的腺管细胞、上皮细胞、增生细胞排出体外即为肉眼可见的白便。     

凡纳滨对虾商业苗种抗WSSV性能比较

白斑综合征病毒(WSSV)一直是甲壳类生物的高致病性病原。为了解市场上不同凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)商业苗种病原携带情况及其抗WSSV性能,本研究收集了6个品牌的凡纳滨对虾商业苗种(分别简称为海南Z、海南S、广州P、广州Z、黄骅R和东营M),先进行包括WSSV在内的8种病原的检测,然后,采用单尾定量口饲感染方式进行抗WSSV性能测试,并比较各组苗种感染WSSV后的平均存活时间、存活率以及累积死亡率的差异。结果显示,6个商业苗种都不携带WSSV,部分苗种检测有潜在虾肝肠胞虫(EHP)和偷死野田村病毒(CMNV)。各苗种感染WSSV后,平均存活时间从长到短依次为海南Z、广州P、黄骅R、海南S、广州Z、东营M。东营M感染WSSV后第4天达到死亡高峰,而海南Z在第6~7天到达死亡高峰,比东营M晚了2~3d。感染实验结束后,海南Z和广州P存活率最高,同为72.5%,而东营M和黄骅R的存活率最低。本研究表明,海南Z和广州P抗WSSV性能最强,研究结果可为凡纳滨对虾抗病新品种的选育提供基础数据。     

凡纳滨对虾血蓝蛋白酚氧化酶活性的研究

试验结果表明,凡纳滨对虾血蓝蛋白在胰蛋白酶诱导下可表现出一定的酚氧化酶活性,与对照组相比,其酚氧化酶活力单位显著上升。同时,其活性可被D-半乳糖、α-葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、甘露醇和N-乙酰神经氨酸不同程度地抑制,其抑制率分别为67%、100%、33%、33%、67%和100%。血蓝蛋白与胰蛋白酶孵育后经SDS-PAGE分析和L-Dopa显色,其75 kDa单体呈明显的棕褐色,添加抑制剂N-乙酰神经氨酸之后,其显色强度显著减弱。由此进一步证实凡纳滨对虾血蓝蛋白在胰蛋白酶诱导下确实具有酚氧化酶活性,其活性可被不同的糖所抑制,其发挥活性的单体为75 kDa单体。     

凡纳滨对虾虾头蛋白的内源酶水解研究

试验结果表明,凡纳滨对虾虾头蛋白白内源的最优水解条件为:40℃,pH 6,固液比1∶3,7 h,此时得氨基态氮达6.90 mg/g。从水解液检出16种氨基酸,其中含7种人体必需氨基酸。