鸭病毒性肝炎研究：强毒在雏鸭和成年鸭体内的分布和排泄

１日龄雏鸭肌肉接种强毒株鸭肝炎病毒（ＤＨＶ）后，经Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测，在显现临床症状和死亡鸭的肝脏及直肠粪便中可测到ＤＨＶ，无症状或未死雏鸭体内测到ＤＨＶ的顺序为：心→肾→肺→胸肌→脑；ＤＨＶ强毒进入成年鸭体内后４４ｈ可在直肠粪便中测到ＤＨＶ，其体内测到ＤＨＶ的顺序为：心→肾→肺→肝→肠，而胸肌和脑均未测到ＤＨＶ；同居感染成年鸭体内测到ＤＨＶ的顺序是：肺→脾→肝→心→肾→肠。此外，还讨论了鸭病毒性肝炎（ＤＶＨ）的发病机理。     

鸭病毒性肝炎的研究：弱毒在雏鸭和成年鸭体内分布和排泄

本文首次报道了将鸭肝炎病毒（ＤＨＶ）弱毒株接种鸭（成年鸭和雏鸭）后，用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测不同时间病毒在鸭体各组织器官的分布和由粪便排出的情况，以及同群饲养但不接种ＤＨＶ的雏鸭和成年鸭感染ＤＨＶ弱毒后在体内分布及排泄情况，结果表明ＤＨＶ弱毒接种１日龄争论鸭后２０小时，接各成年鸭后４８小时即可在直肠中检出ＤＨＶ；雏鸭接种弱毒后年鸭后４８小时即可在直肠中检出ＤＨＶ；雏鸭接种弱毒后用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ     

应用PCR检测成年鸭体内鸭瘟强毒的分布

鸭瘟病毒(DPV)强毒经人工接种和同居感染100日龄鸭后，应用聚合酶链反应(PCR)检测病毒在鸭体内各组织器官的动态分布。试验结果表明，DPV强毒经肌肉注射进入鸭体后6h可在肝、脾、血液和粪便中检测到DPV DNA；DPV强毒经肌肉注射到鸭体后各受检样品被检测到DPV DNA的先后顺序为：肝、脾、血液和直肠粪便(6h)→肺、脑和腿肌(12h)→肾和胸肌(24h)；同居鸭于混群后48h在肝、肺、血液和直肠粪便中检出DPV DNA；DPV强毒经同居感染鸭后各受检样品检测到DPV DNA的先后顺序为：肝、肺、血液和直肠粪便(48h)→脾和脑(72h)→胸肌和腿肌(96h)→肾(120h)。     

鸭瘟病毒弱毒株在免疫雏鸭体内的分布和排毒规律

鸭瘟病毒(DPV)弱毒Cha株经皮下、口服和滴鼻3种途径免疫1日龄雏鸭，应用聚合酶链反应(PCR)检测了病毒在体内分布和排毒规律。Cha株免疫雏鸭后，对血液、心、肝、脾、肺、肾、十二指肠、直肠、法氏囊、胸腺、胰腺、延脑、大脑、小脑、舌、肌肉、骨髓、粪便和食道共19种组织PCR检测结果如下：(1)皮下接种雏鸭后4h，即可在心、肝、脾、肾、法氏囊、胸腺、胰腺、延脑、大脑和小脑共10种组织中检出DPV的DNA；8h后，所有采取的组织器官均可检测到DPV的DNA。(2)口服接种雏鸭后4h，可在舌和食道中检测到DPV的DNA；8h后，可在心、肝、脾、肾、胸腺、胰腺、延脑、大脑、小脑、舌、食道和血液共12种组织器官中检出DPV的DNA。(3)滴鼻接种雏鸭后4h，未能在各种组织中检出DPV的DNA；8h后，可在心、肝、脾、肾、胸腺、延脑、大脑、小脑、舌、食道和血液共11种组织中检测到DPV的DNA。(4)在3种免疫途径中，检出时间最早和检出率最高的组织器官为肝脏、脑(大脑、小脑和延脑)；3种途径免疫的鸭，从免疫后12h至21d均能从所有采集的组织中检测出DPV DNA。     

雏鸭病毒性肝炎防治研究

根据养鸭生产实际，采用抗鸭病毒性肝炎（ＤＶＨ）血清给发病鸭及时注射；雏鸭接种弱毒活疫苗并隔离饲养１周再放入鸭棚饲养和种鸭接种灭活三种程序，有效地控制了ＤＶＨ的暴发和流行。     

人工感染雏鸭体内DEV强毒的荧光定量PCR检测

将鸭肠炎病毒(DEV)强毒GZ株经腿部肌肉注射感染15日龄雏鸭后,应用建立的SYBRGreenⅠ荧光定量PCR方法检测病毒在雏鸭体内各组织的动态分布。结果显示,感染后3 h即可在肝、脾、脑、胸腺、肾和肺6种组织中检出病毒核酸;感染后6 h,除上述组织外还可在十二指肠和盲肠检测到;感染后10 h又可在胸肌和心肌等检测到。不同受检组织病毒核酸检出量有所不同,由高到低依次为脑、肝、脾、胸腺、肾、十二指肠、盲肠、肺、胸肌和心肌。为阐明DEV的致病机理提供了重要的试验数据。     

番鸭呼肠孤病毒弱毒株在免疫番鸭体内的分布及排毒规律

番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,DRV)B37弱毒株经肌内免疫1日龄雏鸭,应用RT-PCR检测病毒核酸,以阐明病毒在体内分布及排毒规律。结果表明,B37株免疫雏鸭后4h,即可在血液、心、肝、脾组织中检出DRV RNA;接种后8h,血液、心、肝、脾、肺、肾、胰腺均可检测到DRV RNA;接种后3d,喉头和泄殖腔棉拭子可检出DRV RNA;接种后14d,喉头和泄殖腔棉拭子已不能检出DRV RNA;接种后28d,肺、肾和胰腺均已不能检出DRV RNA;接种后42d,血和心脏已不能检出DRV RNA;接种后49d,所有组织均已不能检出DRV RNA。因此,DRV弱毒在血液、心脏中分布时间为接种后4h～35d,在肝、脾组织中分布时间为4h～42d;肺、肾和胰腺的分布时间为8h～25d;向外界排毒时间为3～14d。     

雏鸭病毒性肝炎防治研究

根据养鸭生产实际，采用抗鸭病毒性肝炎血清给发病鸭及时注射，雏鸭接种弱毒活疫苗并隔离饲养１周再放入鸭棚饲养和种鸭接种灭活三种程序，有效地控制了ＤＶＨ的暴发和流行。     

间接ELISA检测鸭肝炎病毒抗体的研究

以蔗糖密度梯度离心法纯化的病毒作为包被抗原，建立了检测鸭肝炎病毒（ＤＨＶ）抗体的间接ＥＬＩＳＡ方法。经特异性及重复性试验，效果良好。ＥＬＩＳＡ效价与琼扩、中和效价存在平行关系。经ＥＬＩＳＡ检测，１日龄雏鸭免疫后，４日龄可检出ＥＬＩＳＡ抗体，１０日龄达到峰值。ＤＨＶ高免血清在雏鸭体内作用维持时间为１０ｄ左右。攻毒保护试验表明，攻毒前雏鸭的血清抗体水平与攻毒后雏鸭存活率具直接相关性。     

应用高免卵黄抗体防治鸭病毒性肝炎的研究

应用雏鸭肝炎病毒（ＤＨＶ）鸡胚化弱毒株（ＱＬ７９）和鸭病毒性肝炎油剂苗免疫鸡制备了高免卵黄抗体。考察了使用高免卵黄抗体治疗雏鸭病毒性肝炎（ＤＶＨ）的疗效。结果表明，用卵黄抗体治疗ＤＶＨ的疗效取决于卵黄抗体的中和效价及治疗的时间。卵黄抗体的中和效价应达２８．５以上，治疗最佳时间应在ＤＨＶ强毒进入鸭体后２８小时内，抗体效价在２８．５以下或错过最佳时间或超过３６小时，则治疗效果极差。     

应用高免卵黄抗体防治鸭病毒性肝炎的研究

应用雏鸭肝炎病毒（ＤＨＶ）鸡胚化弱毒株（ＱＬ７９）和鸭病毒性肝炎油剂苗免疫鸡制备了高免卵黄抗体，考察了使用高兔卵黄抗体治疗雏鸭病毒性肝炎（ＤＶＨ）的疗效。结果表明，用卵黄抗体治疗ＤＶＨ的疗交取决于卵黄抗体的中和效价及治疗的时间，卵黄抗体的中和效应应达２＾８．５以上，治疗最佳时间应在ＤＨＶ强毒进入鸭体后２８小时内，抗体效价在２＾８．５以上或过最佳时间或超过３６小时，则治疗效果极差。     

绿头野鸭疫苗接种程序及操作要领

１接种程序１．１出壳后２４h内无母源抗体的雏野鸭皮下或胸肌接种鸭肝炎弱毒苗；有母源抗体的雏野鸭７～１０日龄时，接种上述疫苗。１．２１４日龄胸肌接种鸭瘟弱毒苗。１．３４２日龄颈部皮下接种禽出败灭活菌苗。１．４６０日龄胸肌接种鸭瘟弱毒疫苗。１．５９０日龄颈部皮下接种禽霍乱油乳剂菌苗。１．６１２０日龄母野鸭（开产前３０d）胸肌接种鸭肝炎弱毒苗；１３５日龄时再接种鸭肝炎弱毒苗１次。１．７２８０日龄（母野鸭停产期）胸肌接种鸭瘟弱毒疫苗。１．８成年经产种野鸭每年春秋两季各注射一次鸭瘟弱毒苗和禽霍乱油乳剂苗。２…     

斑点酶联免疫吸附试验检测小鹅瘟病毒的研究

应用斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）能检出少至４．８８３ｎｇ／ｍｌ的小鹅瘟抗原。与鸭瘟病毒（ＤＰＶ）、雏鸭病毒性肝炎病毒（ＤＶＨＶ）、猪细小病毒（ＰＰＶ）等对照，病毒不发生交叉反应。能从人工感染１２小时后的雏鹅组织中检出小鹅瘟病毒（ＧＰＶ）。对１８只人工感染死的雏鹅的检同率为１００％，其中对不同组织的阳性检出率为：肝脏、肾脏、空肠为１００％，心脏、脾脏、十二指肠为９４．４％，回肠８８．９     

新型鸭呼肠孤病毒在番鸭体内分布和排毒规律

为阐明新型鸭呼肠孤病毒(New-type duck reovirus,NDRV)在体内分布和排毒规律,采用J03C10株攻击1日龄雏鸭,对血液、心、肝、脾、肺、肾、胰腺、脑、胸腺、法氏囊、盲肠扁桃体、喉头和泄殖腔采用RT-PCR检测病毒分布情况。结果显示:NDRV在血液中分布时间为攻毒后(PI)12 h~21 d,在脾、胸腺中分布时间为PI 12 h~18 d,在肝、法氏囊中分布时间为PI 12 h~15 d,在胰脏中分布时间为PI 1 d~18 d,在心、肺、肾和盲肠扁桃体中分布时间为PI 1 d~15 d,在脑组织中分布时间为PI 1 d~12 d。攻毒后1 d,即可在喉头和泄殖腔棉拭子中检测到NDRV RNA,而在12 d后已不能检出NDRV RNA。结果表明:番鸭接种NDRV J03C10株后1 d开始向外界排毒,12 d后停止排毒,向外界排毒时间为PI 1 d~9 d。     

鸭肝炎鸡胚化弱毒MY人工接种雏鸭后组织结构动态变化比较研究

对鸭肝炎鸡胚化弱毒株MY接种4日龄雏鸭后的组织变化进行了动态观察比较研究。结果显示：雏鸭接毒12 h肝、肾呈现轻度细胞变性;48 h后组织变性程度减轻,汇管区周围细胞增生;144 h细胞核、浆染色加深,组织修复迹象明显;14 d结构正常。接毒12 h脾脏白髓、法氏囊滤泡中淋巴细胞减少,72 h脾、24 h法氏囊中淋巴细胞有所增多。心脏、肺、脑组织在接毒各期皆有轻度的充血、出血。鸭肝炎鸡胚化弱毒株MY与标准毒导致的多组织变性、坏死相比,其变性轻而可逆;与疫苗HY所致的组织变化相似,但结构恢复时间早。结果表明：鸭肝炎鸡胚化弱毒株MY接种4日龄雏鸭,虽可造成雏鸭肝、肾等实质器官轻微的组织病变,但损伤的组织结构可在短期内修复,并恢复至正常;脾脏、法氏囊中的淋巴细胞在接毒后,也由减少到增多。本研究为鸭肝炎鸡胚化弱毒株MY用作鸭肝炎疫苗株的安全性从病理组织学角度提供了依据。     

雏鸭人工接种鸭肝炎鸡胚化弱毒株MY后组织结构动态变化的比较研究

对鸭肝炎鸡胚化弱毒株MY接种4日龄雏鸭后的组织变化进行了动态观察比较研究.结果显示:雏鸭接毒12 h肝、肾呈现轻度细胞变性;48 h后组织变性程度减轻,汇管区周围细胞增生;144 h细胞核、浆染色加深,组织修复迹象明显;14 d结构正常.接毒12 h脾脏白髓、法氏囊滤泡中淋巴细胞减少,72 h脾、24 h法氏囊中淋巴细胞有所增多.心脏、肺、脑组织在接毒各期皆有轻度的充血、出血.鸭肝炎鸡胚化弱毒株MY与标准毒导致的多组织变性、坏死相比,其变性轻而可逆;与疫苗HY所致的组织变化相似,但结构恢复时间早.结果表明:鸭肝炎鸡胚化弱毒株MY接种4日龄雏鸭,虽可造成雏鸭肝、肾等实质器官轻微的组织病变,但损伤的组织结构可在短期内修复,并恢复至正常;脾脏、法氏囊中的淋巴细胞在接毒后,也由减少到增多.本研究为鸭肝炎鸡胚化弱毒株MY用作鸭肝炎疫苗株的安全性从病理组织学角度提供了依据.     

鸭肝炎自然病例与鸭肝炎病毒人工发病病例组织病理学观察

到目前为止，对鸭肝炎I型作组织病理学研究的工作可分为下列几种：鸡鸭肝炎I型标准毒株人工发病雏鸭肝、脾、脑等多种器官作组织病理学观察；对鸭肝炎I型野外病例肝、脾、脑等作组织病理学观察；对鸭肝炎I型人工感染鸡胚肝脏等几种脏器作组织病理学观察等。国外Sandhu等还对鸭肝炎I型变 异株感染雏鸭作组织病理学观察。本文报道了对珠江三角洲有变异倾向的鸭肝炎I型自然病例和6株野毒人工发病病例的组织病理学观察结果，观察包括肝、脾、胰、脑、心、肺、肾、、腺胃、小肠、法氏囊等10种脏器，并对各器官的病变进行具体描述与统计。为国内外研究DHVI型变异株感染的组织病理学研究提供了更丰富详实的资料。     

鸭瘟病毒强毒株在急性人工感染成年鸭病例体内分布规律

5 6只 3月龄四川麻鸭经皮下接种鸭瘟病毒 (DPV)强毒 SC1株 ,成功建立了 DPV感染的急性病理模型 ,并应用PCR方法检测了不同时间 DPV在感染鸭体各组织器官的分布情况。结果表明 ,接种 2 h后 ,即能够从脑、肝、脾、法氏囊、胸腺中检出 DPV DNA;12 h,可从心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、十二指肠、直肠、法氏囊、胸腺、胰腺、脑、胸肌、食管、腺胃、血液、舌、口腔分泌物、皮肤、骨髓和粪便等检测到 DPV的 DNA。检出时间最早和检出率最高的组织器官为肝脏和脑组织。本试验为阐明 DPV的致病机理和应用 PCR方法检测感染鸭体组织中的 DPV提供了重要的实验数据。     

鸭坦布苏病毒对雏鸭的致病性研究

为研究鸭坦布苏病毒对雏鸭的致病性,对1周龄樱桃谷雏鸭肌肉接种坦布苏病毒FX 2010株,建立雏鸭感染模型,动态观察感染雏鸭的临床表现、病理变化、组织病毒含量及免疫反应。结果显示,雏鸭攻毒后第3天食欲下降,排黄白色稀粪,第5天时出现神经症状,部分雏鸭急性死亡,死亡率高达22.5%(9/40)。剖检病、死鸭可见心内膜出血,脾肿胀、坏死,肝、肾变性肿胀,脑膜充血。感染雏鸭的组织病理学变化主要表现心、肝、肾实质细胞变性、坏死,间质炎性细胞浸润或见出血;脾淋巴细胞局灶性坏死并伴有大量异嗜性粒细胞浸润;大脑呈典型的病毒性脑炎变化。雏鸭感染后第1天各器官就能检测到坦布苏病毒,第3天器官病毒含量除脾外均达峰值,后逐渐下降。雏鸭攻毒后第5天血清中出现微弱的中和抗体,以后逐渐升高,第17天时达峰值。以上结果表明,鸭坦布苏病毒感染雏鸭后能迅速入侵机体各组织器官并大量复制,呈组织泛嗜性特征,造成全身广泛性组织损伤,重症雏鸭死于急性败血症病变。雏鸭接种病毒后能快速产生中和抗体以抵抗感染并迅速清除病毒。     

企鹅新城疫强毒人工感染北京雏鸭的研究

以分离鉴定的企鹅新城疫强毒（ＰＮＤＶ）经静脉注射、肌肉注射和洋鼻点眼等途径分别人工感染７日龄和１４日龄的北京雏鸭,结果只有静脉注射组雏鸭发病死亡,其致死率分别为１００％和５０％,且自死亡雏鸭脑组织中均可重新分离到ＰＮＤＶ。而肌肉注射组雏鸭和滴鼻点眼组雏鸭于接毒后１４天内均未表现任何异常,但可诱导产生较高效价的特异性抗体,然而抗体效价在短时间内迅速下降,且春脑和脾脏中均未分离到ＰＮＣＶ。试验结果表明北京鸭对ＰＮＤＶ的易感性不强,即使经静脉注射静致死率也随着日龄的增大而降低;而经肌肉注射或滴鼻点眼途径均未能使北京雏鸭发病,且其脑和脾脏的带毒时间不超过１４天。