用辛酸—硫酸铵法快速提纯鸡IgG

鸡ＩｇＧ目前广泛应用于鸡病诊断、免疫检测、治疗、及抗独特型抗体苗制备等［１］。然而,在提纯鸡ＩｇＧ过程中,不但要保证除去绝大多数杂蛋白和白蛋白,保留大多数免疫球蛋白（Ｉｇ）,包括各种ＩｇＧ亚类,而且又要不影响ＩｇＧ生物活性。这就需要一种好的提纯方法,...     

莪术油注射液鸡胚接种抗新城疫病毒的研究

新城疫也称亚洲鸡瘟或伪鸡瘟,是由新城疫病毒(New castle disease virus,NDV)引起的急性高度传染性疾病。由于疫苗的广泛使用,使该病多以慢性或散发为特点。同时,由于饲养管理不完善、免疫程序不当,以及毒株的变异,使得疫苗预防效果减弱,临床上常表现为非典型新城疫,而对于水禽(鹅、鸭等)则表现为强毒感染,并出现高致死率[1-2]。在     

莪术油注射液鸡胚接种抗新城疫病毒的研究

[目的]探讨莪术油对新城疫病毒的抑制和杀灭作用。[方法]用鸡胚培养法和血凝试验,测定莪术油对鸡新城疫病毒增殖的抑制作用。[结果]莪术油对鸡胚无毒性作用;莪术油与病毒同时接种鸡胚,能完全抑制鸡新城疫病毒在鸡胚中的增殖。[结论]结果为莪术油在兽医临床上的应用提供了理论依据。     

中药蓝靛注射液鸡胚接种抗鸡新城疫病毒研究

采用鸡胚培养法和红血球凝集(HA)试验,测定中药蓝靛注射液对鸡新城疫病毒的抑制作用。结果表明:中药蓝靛注射液对鸡胚无毒性作用;蓝靛注射液与病毒同时接种鸡胚,能完全抑制鸡新城病毒在鸡胚中增殖。     

新城疫病毒(NDV)HN基因真核表达重组质粒的构建

应用一对自行设计的引物,通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)获得新城疫病毒(NDV)Lasota株的血凝素神经氨酸酶(HN)基因片段,其长度约为1.7 kb,与已报道的NDV-HN基因片段大小一致.再将该HN基因片段定向插入真核表达质粒pcDNA3中,经酶切和测序鉴定,表明构建的重组质粒含有NDV-HN基因片段.     

鸡胚接种虎杖醇提取液后对新城疫病毒的抑制作用

为研究虎仗对新城疫病毒的抑制作用,用鸡胚培养法和血凝试验测定中药虎仗醇提液对鸡新城疫病毒的作用效果。结果显示,Ⅰ组接种病毒尿囊液与虎杖醇提液,HA滴度0。Ⅱ组接种病毒尿囊液与盐酸金刚烷胺混合液,HA滴度5lg2。Ⅲ组接种病毒尿囊液与生理盐水混合液,HA滴度9lg2。Ⅳ组不接种病毒尿囊液、不给药、HA滴度0。Ⅰ组与Ⅲ组差异极显著(P<0.01),Ⅱ组与Ⅲ组差异显著(P<0.05)。可见,虎仗醇提液对鸡胚无毒性作用;虎仗醇提液与病毒同时接种鸡胚,能完全抑制鸡新城疫病毒在鸡胚中的增殖。     

新城疫病毒的抗独特型单克隆抗体的研制——新城疫单克隆抗独特型疫苗研究(Ⅱ)

作者用纯化 FE_8和 LA_(15-6)2株抗新城疫病毒(NDV)中和性单抗(MAb_1)分别免疫 BALB/c /小鼠,经杂交瘤技术获得2株抗独特型单克隆抗体(MAb_2),分别命名为AFE_8Id_(16-6)和ALA_(15-6)Id.在血凝抑制阻断试验(BHI)中,2株MAb_2都能阻断FE_8MAb_1抑制NDV血凝活性,BHI效价分别达1:8和1:4.在中和抑制试验(NIT)中,2株MAb_2在 1:10～1:80稀释时均可特异地抑制FE_8MAb_1中和NDV的能力,使部分试验鸡胚死于NDV感染.这些结果不仅表明,2株MAb_2的抗原结合位点是针对FE_8MAb_1独特型决定簇的,而且提示它们的可变区构形和与FE_8MAb_1相结合的NDV抗原决定簇或其邻近结构相似.这2株MAb_2可用于新城疫单克隆抗独特型疫苗的研究。     

新城疫病毒(NDV)F基因的克隆及其真核表达重组质粒的构建

应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术和一对自行设计的引物,从新城疫病毒(NDV)F48E9株扩增出长度为1664bp的DNA片段。与已报道的NDV-融合蛋白(F)基因比较,两者大小一致。经限制性内切酶反应,获得两个预期大小的片段。将克隆的F基因定向插入真核表达质粒pcDNA3中,经酶切和测序鉴定,证明构建的重组质粒含有NDV-F基因。     

中药注射液鸡胚接种抗鸡新城疫病毒研究

为了研究中药与西药奥司他韦(达菲)抗鸡新城疫病毒效果的差异,用珍珠草、华荠苧2味中药制成注射液,采用鸡胚培养法和红血球凝集(HA)试验,检测中药与西药注射液对鸡新城疫病毒的抑制作用。结果表明,中药注射液对鸡胚无毒性作用,并且从鸡胚死亡数、活胚数和HA滴度等方面比较,中药与西药抗病毒效果无差异。表明二者抗病毒效果相似,均能完全抑制鸡新城疫病毒在鸡胚中增殖。     

红芪多糖注射液鸡胚接种抗鸡新城疫病毒研究

用鸡胚培养法和红血球凝集(HA)试验,测定中药红芪多糖注射液对鸡新城疫病毒的抑制作用。结果表明,中药红芪多糖注射液对鸡胚无毒性作用。红芪多糖注射液与病毒同时接种鸡胚,能完全抑制鸡新城病毒在鸡胚中增殖。     

复方酸制剂体外抗新城疫病毒试验

[目的]探讨复方酸制剂体外抗新城疫病毒（NDV）的活性,为研制新型抗NDV制剂提供理论依据。[方法]采用鸡胚成纤维细胞（CEF）培养法,观察细胞病变（CPE）,并用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞活性,计算病毒抑制率,评价复方酸制剂的体外抗NDV作用。[结果]随着复方酸制剂浓度的增加,CPE逐渐减弱,病毒抑制率明显升高,当浓度为1.0mg/ml时,病毒抑制率可达70.04%。[结论]复方酸制剂在体外具有明显的抑制NDV增殖作用。     

新城疫F48E9病毒体外诱导的鸡T淋巴细胞程序性死亡

 应用流式细胞仪及DNA琼脂糖凝胶电泳技术研究了我国鸡新城疫标准强毒F48E9株体外诱导鸡T淋巴细胞的程序性死亡现象。同时,对其灭活毒以及从该毒株提取的囊膜蛋白诱导鸡T淋巴细胞的程序性死亡现象进行了观察,并以健康SPF鸡胚尿囊液作为对照。结果发现,F48E9株及其灭活毒体外均可诱导鸡T淋巴细胞发生程序性死亡,而从病毒中提取的囊膜蛋白及SPF鸡胚尿囊液无此特性。新城疫F48E9株体外诱导鸡T淋巴细胞程序性死亡这一现象初步表明,新城疫强毒F48E9株感染鸡T淋巴细胞数量的减少和功能的降低以及由此所致的感染鸡免疫功能的降低可能和病毒诱导鸡T淋巴细胞发生程序性死亡有关。     

垂花香薷挥发油鸡胚接种抗鸡新城疫病毒的研究

用鸡胚培养法和血凝试验,测定了中药垂花香薷挥发油对鸡新城疫病毒的抑制作用。试验结果表明:垂花香薷挥发油对鸡胚无毒性作用;垂花香薷挥发油与病毒同时接种鸡胚,能完全抑制鸡新城疫病毒在鸡胚中的增殖。     

单抗夹心ELISA检测免疫鸡群新城疫病毒

用SPF鸡胚将送检的免疫鸡群泄殖腔棉拭样品盲传一代，再用新城疫单抗夹心ELISA对F1代尿囊液进行新城疫病毒(NDV)快速检测，同时用世界动物卫生组织(OIE)推荐的NDV分离及鉴定的方法加以验证。通过对3423份样品的检测，检出阳性样品453份，阴性样品2959份，可疑样品11份，两种方法的阳性符合率为99．3％，阴性符合率为99．7％。对全部阳性样品进行病毒分离，经血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验证明均含有新城疫病毒(NDV)，再将全部阳性样品分离物进一步作毒力鉴定，结果有强毒力株、中等毒力株及弱毒力株，因此用新城疫单抗夹心ELISA检测免疫鸡群泄殖腔棉拭样品F1代尿囊液新城疫病毒快速、准确率高，呈阳性者不全是NDV强毒力株感染，还有NDV中等毒力株或弱毒力株感染。     

新城疫病毒毒力的演化研究进展

新城疫是由新城疫病毒引起禽的一种急性、热性、败血性和高度接触性传染病.该病主要以高热、呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血为特征.新城疫对我国养禽业的发展造成了巨大的威胁,其病毒是一种突变快、进化快的病原,该病毒毒力的强弱并不是一成不变的,其毒力具有本身的演化趋势.通过对新城疫病毒的生物特性、新城疫病毒毒力的演化及与其毒力演化相关的因素研究,旨在探讨新城疫病毒毒力的演化与流行趋势的关系.     

一株新城疫病毒分离株全基因组序列的克隆与分析

根据GenBank上所公布的新城疫病毒(NDV)的全基因组序列,设计了10对引物,运用RT-PCR方法获取了三黄鸡新城疫病毒(SHJ00株)全基因组序列,并对其进行了比较分析。结果表明:此株三黄鸡新城疫病毒(SHJ00)的全基因组序列由15 192个碱基组成,在NP基因和P基因之间的非翻译区多了6个核苷酸ACACTC;与NDV一致,SHJ00基因由6个ORF组成,即3′-NP-P-M-F-HN-L-5′;测序后拼接的F基因长1 672 bp,包含完整的开放阅读框(1 662 bp),编码553个氨基酸,F蛋白裂解位点的氨基酸顺序为112R-R-Q-K-R-F117,具有强毒株序列特性;根据NDV基因分型标准,三黄鸡新城疫病毒SHJ00株归属基因Ⅶ型新城疫病毒;F基因与国内外NDV代表株的核苷酸同源性为80.9%~97.7%,其中与F48E9同源性为84.3%,与Lasota的同源性为82.0%;测序后拼接的HN基因长为1 716 bp,编码571个氨基酸,与国内外NDV代表株的核苷酸同源性为80.0%~98.1%,其中与F48E9同源性为84.5%,与Lasota的同源性为81.4%。     

应用单抗ELISA试剂盒检测免疫鸡群新城疫强毒感染

新城疫（Ｎｅｗｃａｓｔｌｅｄｉｓｅａｓｅ,ＮＤ）是鸡的一种烈性病毒性传染病〔４〕。尽管国内外已知的新城疫病毒（Ｎｅｗｃａｓｔｌｅｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ,ＮＤＶ）毒株达数百种之多,毒力差异很大,但是其血清型只有一个。由于疫苗的广泛使用,从现场免疫鸡群...     

鸡新城疫病毒F基因部分片段克隆表达及其抗体制备

[目的]为进一步研究新城疫病毒的分子结构和基因疫苗奠定基础。[方法]用自行设计的l对引物,通过RT-PCR从接毒的SPF鸡胚的尿囊液中克隆了新城疫病毒F基因部分片段,将该基因片段插入含谷胱甘肽(GST)基因的质粒pGEX-4T-1,构建了重组质粒,对提取的融合蛋白进行亲和层析纯化和琼扩、ELISA及W estern-blot检测。[结果]通过克隆和PCR扩增获得新城疫病毒F基因的部分片段,大小为509 bp;对构建的重组质粒pGEX-4T-1-F509经诱导表达,获得分子大小约为44 000 bp的融合蛋白,其中F基因的部分片段大小约18 000 bp;经亲和层析,获得纯化GST-F509融合蛋白,进一步用该蛋白免疫小鼠,制备了鼠源抗鸡新城疫病毒F蛋白抗体。[结论]琼脂扩散试验、ELISA及W estern-blot检测表明,该融合蛋白中的F片段具有良好的抗原性。     

1株抗肿瘤新城疫病毒的毒力分析

[目的]分析1株抗肿瘤新城疫病毒(NDV)的毒力。[方法]通过传统毒力的测定方法,测定此株NDV的最小致死量的平均死亡时间(MDT)、脑内致病指数(ICPI)及静脉致病指数(IVPI)。通过RT-PCR扩增此株病毒基因组的多个片段,相邻扩增片段之间有部分核酸序列重叠且覆盖完整的融合蛋白(F)基因和血凝素神经氨酸酶(HN)基因的区域,并进行测序。[结果]此株NDV的MDT为105.6h,ICPI约为0.26,IVPI为0。测序结果表明,此株病毒是1株新的NDV,其F蛋白剪切位点为112RRQRRF117。[结论]此株NDV为弱毒株,其F蛋白剪切位点与强毒株一致。除F蛋白剪切位点外,NDV的毒力必然与其他因素相关。