猪胚胎细胞核移植研究进展

细胞核移植是目前倍受学术界和国际社会关注的焦点问题之一.已经获得牛、羊、猪、兔、鼠等核移植个体,而且成功地得到体细胞核移植绵羊和小鼠.尽管猪胚胎细胞核移植也有报道,但进展缓慢.现对猪细胞核移植的研究现状,以及与之有关的卵母细胞孤雌激活等问题作较系统的综述.     

猪细胞核移植中卵母细胞激活方法的研究进展

猪的克隆 (核移植 )是当今的热点研究之一 ,研究意义重大。本文就猪核移植中卵母细胞的激活方法、原理及相关研究等作一综述。     

亚胺环己酮对猪卵母细胞人工孤雌激活作用的研究

本文以体外成熟的猪卵母细胞为材料，以乙醇、电脉冲和氯化锶为人工刺激条件，研究了蛋白质合成抑制剂－亚胺环己酮（CHX）对猪卵母细胞的孤雌激活效果的影响。结果表明，乙醇、电脉冲和SrCl2均可使猪母细胞激活，而电脉冲的活效果最好。当分别与CHX联合使用时，激活率显著高于单独的乙醇、电脉冲或SrCl2刺激。说明，CHX与乙醇、电脉冲及SrCl2联合使用对猪IVM卵母细胞激活具有显著的协同促进作用。     

放线菌酮处理对猪孤雌激活及体细胞核移植胚胎发育的影响

为研究放线菌酮(CHX)在猪卵母细胞孤雌激活和体细胞核移植中的作用效果,并验证其对胚胎发育的促进作用,实验对比体外成熟的猪卵母细胞经电激活后结合6-二甲氨基嘌呤(6-D)、细胞松弛素B(CB)或CHX激活后的孤雌囊胚率,及3种激活药物对体细胞核移植重构胚的发育能力的影响;在孤雌激活前用CHX预处理卵母细胞5 min,研究其对孤雌激活后胚胎发育能力的影响。结果表明:在孤雌激活过程中,CHX在激活8 h条件下囊胚率为48.0%,而CB和6-D处理4 h即可达55.2%和63.3%。而在体细胞核移植重构胚的激活中,采用CHX进行激活囊胚率为19.6%,高于CB的10.5%和6-D的16.5%,各组间差异显著(P>0.05)。孤雌激活前,卵母细胞经CHX预处理15 min可以提高CB或CHX激活的孤雌囊胚率。结果说明,CHX在孤雌激活能力较差,但对胚胎发育具有一定保护和促进作用。     

优化成年家兔皮肤上皮细胞核移植有关参数

以成年家兔上皮细胞为核供体,对兔体细胞核移植中孤雌激活、去核、融合、激活及重构胚发育等环节中的有关参数进行筛选和研究。证实160、200和240 V/mm电场强度时的孤雌激活率(77.78%、95.12%、97.30%)无显著差异;200和240 V/mm电场强度时的孤雌激活胚囊胚率(52.94%、48.64%)显著高于160 V/mm时(16.67%);200和240 V/mm电场强度时的重构胚融合率(82.85%、79.78%)无显著差异;200 V/mm电场强度时的重构胚分裂率(71.69%)显著高于240 V/mm时(56.56%),裂解率(6.82%)显著低于240 V/mm时(17.92%)。在纺锤体观测仪下,第一极体与纺锤体在一起或相距较近的占60%左右。原核明显的重构胚的分裂率(91.75%)极显著的高于观察不到原核的重构胚(42.86%)。重构胚体外培养发育囊胚率(24.39%)低于受精卵原核胚的体外培养的发育率(86.05%),但两者同自然交配体内发育的囊胚的细胞数(81±17)差异不显著。将646枚2~4细胞重构胚移植到38只同期化或非同期化的受体后没有幼仔出生。     

猪体外成熟卵母细胞孤雌激活和胚胎培养的研究

以猪体外成熟卵母细胞为实验材料,研究了不同激活方法、激活时间以及是否添加滋养层细胞的条件对猪成熟卵母细胞体外培养的影响。结果表明,Ionomycin+6-DAMP+CB法卵裂率高,且差异显著;使用6-DMAP激活3h的卵裂率要低于4h和5h组,且差异显著;在卵裂率、8细胞率和囊胚率上,添加滋养层细胞组与未添加滋养层细胞组之间无显著差异,但添加vero细胞后效果略好。     

猪卵母细胞孤雌激活技术概述

孤雌激活随着近年来体细胞克隆技术的兴起而成为了又一研究热点.而猪由于其生理结构与人的相似性,所以其卵母细胞的孤雌激活更具有特别的研究价值,文章就孤雌激活的概念、机理、方法、影响因素等方面全面论述了猪卵母细胞孤雌激活的研究概况.     

哺乳动物胚胎细胞核移植克隆技术的研究进展

对哺乳动物胚胎细胞核移植克隆技术的基本环节，以及细胞周期阶段对细胞核移植克隆胚胎效率影响的研究进行系统综述。     

哺乳动物胚胎细胞核移植

本文介绍了哺乳动物胚胎细胞核移植技术。对供核胚胎的来源、受核卵的来源、核移胚植的方法、核移胎隔合后的培养以及核移植的前景等方面进行了综述。     

猪孤雌激活早期胚胎线粒体分布及mtDNA拷贝数变化的研究

本研究通过线粒体分子探针标记技术检测孤雌激活早期胚胎线粒体的分布变化,运用实时荧光定量PCR技术检测mtDNA拷贝数的变化,揭示早期胚胎发育过程中线粒体分布、mtDNA拷贝数变化趋势。结果表明,成熟卵母细胞电激活后,由2-细胞胚胎开始,卵裂球内线粒体分布均匀且密集,每个细胞均有分布,卵裂球之外的空隙未见线粒体分布,直到囊胚形成,线粒体均有分布。孤雌激活4-细胞胚胎mtDNA拷贝数显著高于8-细胞胚胎mtDNA拷贝数(907210.77±145520.77,186224.33±103308.00,P<0.05),但显著低于2-细胞胚胎、桑椹胚、囊胚的mtDNA拷贝数(1563422.54±224666.51、1697626.25±176999.53和1752301.29±101146.64,P<0.05)。孤雌激活扩张囊胚mtDNA拷贝数最高,为2812545.67±156819.31,显著高于其他发育时期胚胎的mtDNA拷贝数(P<0.05)。由此可见,孤雌激活早期胚胎发育进程中线粒体分布及mtDNA拷贝数会发生变化。     

哺乳动物卵母细胞孤雌激活的研究进展

本文对哺乳动物卵母细胞孤雌激活机制、激活方法及激活效果的影响因素等作了浅要的综述和总结。     

家兔胚胎细胞核移植的研究现状

胚胎细胞核移植技术(核移植)是指将不同发育时期的胚胎细胞核以显微手术及细胞融合的方法移植到去核卵母细胞或受精卵中,并使重组胚胎发育至产仔的过程。通过此技术,不仅可以生产出大量的克隆动物,而且对于研究动物胚胎的发育机理也具有重要的作用。 早在1905年,Spemann就证明,蝾螈早期胚胎的卵裂球具有功能相同的核,并在1938年提出了核移植的设想;按这一设想,1952年Berggs和King首次获得了两栖类美洲豹蛙的核移植后代。到80年代,核移植技术在哺乳动物中也相继获得成功,目前已取得了绵羊、牛、小鼠、兔、猪、山羊的核移植后代。而且核移植技术也成功地用于研究细胞的核质关系,配子发光过程中核的相互作用等方面。     

家兔胚胎细胞核移植与连续移植

将发育不同时期的兔胚和移核胚的卵裂球细胞核与去核的成熟卵母细胞共同组成移核胚,通过中间受体培养和移植实验检验胚胎的发育能力。结果表明,（１）兔囊胚之前各个时期的胚胎细胞核均可使移核胚发育到囊胚;（２）胚胎极化前后的卵裂球参与组成的移核胚发育到囊胚的比例无显著差异。但极化后 ６４细胞胚的卵裂球与去核卵母细胞的融合率低于极化前的 ８细胞胚胎卵裂球;（３）兔 １６细胞胚与去核的卵母细胞组成的移核胚可以发育到期,产仔率为 ３．１６％ ;（４）兔移核胚卵裂球用于连续核移植,其后 ２ 代均可发育成囊胚,其中第 １ 代移核胚与第 ２ 代移核胚发育率相似,但显著高于第 ３ 代移核胚;（５）兔移核胚和各代连续移核胚卵裂球与去核卵的融合率无显著差异。     

牛体细胞核移植胚胎的批量化生产

利用2枚显微去核后的半卵与1枚供体细胞同步融合,并结合微穴法(WOWs)培养体系批量化生产成年牛克隆胚胎(日产40～80枚).结果,重构胚电融合率95.7%(3059/3197)、卵裂率87.1%(2637/3027)、囊胚率41.1%(1244/3027)和可冻胚率(72.5%,933/1244)均达到较高水平.克隆胚胎采用玻璃微管玻璃化冷冻保存数月后移植,30日龄时妊娠率为28.1%(48/171),已经产下5头足月克隆牛续.结果表明,该方法具有产业开发潜力.     

供体细胞和去核卵母细胞的不同预激活对体细胞核移植胚胎体外发育的影响

研究用细胞质内注射法构建重组胚，比较了离子霉素和乙醇预激活供体细胞和去核卵母细胞对重组胚卵裂和体外发育的影响。结果表明：与未经处理的对照组相比，离子霉素预激活供体细胞对重组胚的卵裂率和囊胚发育率有所提高；而供体细胞和去核卵母细胞同时用离子霉素预激活，重组胚的卵裂率无明显提高，囊胚发育率下降；用离子霉素或乙醇预激活去核卵母细胞，对重组胚的卵裂和发育无明显影响。     

猪孤雌胚胎体外培养影响因素

对NCSU-23和PZM-3等2种培养基体外培养猪孤雌激活(PA)胚胎的效果进行了比较,结果显示,PZM-3组与NCSU-23组PA胚胎囊胚孵化率差异显著(32.6%vs 18.9%,P<0.05);NCSU-23中添加2%必需氨基酸(EAA)显著降低猪PA胚胎的囊胚发育率(20.1%vs 25.1%,P<0.05);添加1%非必需氨基酸(NEAA)显著提高猪PA胚胎的囊胚率(24.7%vs 19.7%,P<0.05),但是联合添加NEAA和EAA对猪PA胚胎体外发育无显著影响(P>0.05).     

哺乳动物胚胎细胞核移植克隆技术的研究进展

对哺乳动物胚胎细胞核移植克隆技术的基本环节，以及细胞周期阶段对细胞核移植克隆胚胎效率影响的研究进行系统综述     

昆明鼠卵母细胞的孤雌发育及对其干扰核移植试验的预防措施

本文着重研究了在昆明鼠细胞核移植过程中，卵母细胞孤雌发育的激活原因、形成过程，并提出了一些防止其干扰细胞核移植的措施。     

猪手工体细胞核移植电融合/激活参数的优化

通过对猪体细胞核移植中电融合及联合化学激活对猪重构胚发育能力进行探讨,为广西巴马小型猪的手工克隆搭建平台.利用手工克隆(HMC)技术对猪体细胞核移植胚胎采用不同的电融合方法和融合后化学激活不同时间,研究猪手工克隆胚胎的发育能力.结果表明:(1)对重构胚进行一步法电融合时,参数2(180 V·mm-1,30μs×1次)与参数1(160·mm-1,30 μs×1次)两组间的融合率差异显著(65.31%VS 58.33%,P<0.05);(2)对重构胚进行两步法融合时,参数3(第一次:180 V·mm-1,10μs×1次,融合60 min后进行第二次融合;第二次:85V·mm-1,80 μs×1次)和参数4(第一次:200 V·mm-1,10μs×1次,融合60 min后进行第二次融合;第二次:85V·mm-1,80μs×1次)两组间的总融合率差异不显著(75.88%vs 81.20%,P>0.05);(3)采用参数4与采用参数2融合的重构胚其分裂率和囊胚率均差异不显著((79.98%vs 72.66%)和(13.14%vs 9.36%),P>0.05);(4)在电激活和CHX+CB联合激活4、5、6 h这3组中.其分裂率和囊胚率均差异不显著(P>0.05).相对而言,重构胚采用参数4的两步融合法和CHX+CB激活5 h效果较好.