核桃RAPD条件的优化

对核桃RAPD分析中Mgh、引物、dNTPs、TaqDNA聚合酶浓度及复性温度等因素进行了比较影响分析。建立了适合核桃DNA多态性分析的RAPD反应体系：25μL反应液中,3．5mM Mg^2＋、0．2mM dNTPs、0．2μM随机引物、1．0UT aq酶、50ng～100ng模板DNA;反应过程为45个循环,94℃变性60s,36℃退火60s,72℃延伸120s。     

麻竹RAPD反应条件的优化

以麻竹DNA为模板,对影响麻竹RAPD扩增的重要参数进行了优化试验,以期建立麻竹RAPD反应的最适体系。最终得出的麻竹RAPD反应体系为:20μL反应体系,2μL10倍反应缓冲液,模板含量为50ng,2 5mmol·L-1的Mg2+,1 5U的Taq酶,dNTP为1 75mmol·L-1,引物浓度为0 4μmol·L-1。优化后的RAPD反应程序为:94℃3min→[94℃1min→37 5℃1min→72℃1min20sec]40个循环→72℃8min→4℃保持。     

香榧的生态习性及其适生条件

为了解和掌握香榧的生态习性和适生条件,对榧树重点分布区和香榧分布区的自然生态条件进行了研究.结果表明:香榧的生态习性与榧树相一致,适生气候条件为年平均气温14.5～17.5℃、年降雨量1 000～1 700 mm、年绝对最低温度-8～-15℃、年有效积温3 500(中山丘陵地)～6 000℃(中亚带南缘);香榧喜地形起伏,但相对高差不大的立地;香榧对地质环境和土壤适应性范围较宽,但生长结果和种子品质良好的宜林地应是海拔200m以上,土层厚度50 cm以上,疏松肥沃,氮、磷在中等水平以上,含钾量丰富,pH值5.2～6.8.     

闽楠基因组DNA提取及RAPD反应条件优化

以闽楠叶片为材料，研究了闽楠基因组DNA提取方法及RAPD反应条件。采用改良的CTAB高盐法提的DNA质量较高，适宜RAPD-PCR分析。在20μL反应体积中，RAPD分析的优化反应体系为：2mmol/L的Mg^2 ，200μmol／L dNTP，1，5ng/μL的模板DNA，1UTap酶，50nmol／L引物。     

云南箭竹基因组DNA的提取及RAPD反应条件的优化

用改良的SDS法从云南箭竹硅胶干燥的叶片中提取基因组DNA进行RAPD扩增。通过正交法对RAPD反应条件优化,6个试验因子的最适条件为:模板DNA1.5ng/μL,随机引物0.8～1.0μmol/L,dNTPs浓度0.1～0.15mmol/L,Mg2+浓度2.0～2.5mmol/L,Taq酶用量0.5～1.0U。最佳热循环参数为:94℃预变性2min,之后进行40次循环(94℃变性30s,36℃退火60s,72℃延伸90s),最后72℃总延伸7min后在4℃终止反应。     

桢楠DNA提取和RAPD条件的优化

以桢楠（Phoebe zhennan）新鲜叶片、硅胶干燥叶片为材料,研究了DNA的提取方法,并对影响RAPD反应的各因素进行了优化。得到了桢楠RAPD的优化反应体系及程序,适合桢楠RAPD反应的体系总体积为25μL,DNA模板2μL,Taq DNA聚合酶用量0.3μL,引物用量1μL,Mg2＋用量5μL,dNTPs用量0.5μL,ddH2O16.2μL;适合桢楠RAPD扩增的程序是94℃预变性3 min,94℃变性1min,36℃复性1 min,72℃延伸2 min,42个循环,最后72℃延伸10 min,产物于4℃保存,同时结果表明硅胶保存的样品完全可以与传统的新鲜叶片得到同样的PCR扩增结果,完全可以满足研究需要。     

香果树RAPD扩增条件的优化及遗传多样性初步分析

对浙江省天台山自然香果树种群的DNA进行了提取和RAPD扩增条件的优化,分别测试了镁离子、dNTP、模板DNA含量、引物浓度、DNA聚合酶量和牛血清白蛋白浓度对反应结果的影响,通过各因子的组合研究,可知香果树RAPD分析较适宜的扩增条件为:15μLPCR反应体积,1×Taq酶配套缓冲液,1 8mmol·L-1MgCl2,2UTaq酶;10ng模板DNA;20pmol引物;dATP、dCTP、dGTP、dTTP各0 1mmol·L-1。以此适宜条件对12个引物进行扩增,共扩增出51个DNA片段,多态位点百分率为45 1%,种群内遗传多样性较低,进一步研究不同种群香果树的遗传多样性具有一定的意义。     

落叶松—杨栅锈菌DNA提取及RAPD条件优化

本文对采自全国8个省市的落叶松—杨栅锈茵茵株进行了基因组DNA提取，并以其为模板对影响RAPD扩增1的重要参数进行优化试验，以期建立落叶松—杨栅锈茵RAPD反应的优化体系。结果表明，PCR扩增体系最佳条件是：25μL体积中，2．5mmol／LM^2 ，30ng／μL模板，0．15mmol／LdNTP，1．5μL引物，0．75UTaq聚合酶。     

七叶树RAPD反应体系的优化

以七叶树新鲜叶片为材料,研究了七叶树RAPD分析过程中的影响因素包括Taq酶、Mg2+、dNTP、引物、模板DNA浓度、变性时间、循环次数等,建立了适合七叶树RAPD反应的PCR体系。即20μl反应体系中含有dNTP 0.25 mmol/L,Mg2+2.5 mmol/L,Taq酶1.0U,引物0.8μmol/L,DNA模板50ng。扩增程序为:94℃预变性5min,然后40个循环(94℃变性30 s,33℃退火40 s,72℃延伸60 s),最后72℃延伸10min,4℃保存。     

松阳县香榧病虫害发生情况调查分析

对松阳县香榧病虫害发生情况进行调查分析。于2020年4月～2021年6月对选取浙江省丽水市松阳县4种香榧林进行病虫害调查,包括纯幼苗林、纯幼树林、幼古树林、幼树套种林,分析病害(香榧绿藻、香榧膏药病、香榧枝条黄化)和虫害(香榧瘿螨、白蚁)发生情况。香榧绿藻：纯幼苗林感病率(88.67%)最高,纯幼树林感病指数(0.30)最高;香榧膏药病：纯幼苗林和幼树套种林种未发生此病,纯古树林,纯幼树林感病指数均为0.08,感病率分别为23.33%、14.17%;香榧枝条黄化：纯幼树林、幼树套种林、幼古树林、纯幼苗林感病率分别为27.50%、16.25%、12.50%、8.75%,感病指数与感病率呈正相关;香榧瘿螨：幼树套种林中香榧瘿螨危害率达到31.67%,其余林分中未发现香榧瘿螨;白蚁：幼树套种林白蚁为害率(30.83%)最高,纯幼苗林白蚁为害率(15.83%)最低。5种病虫害在4个不同香榧林中均未出现大规模成灾表现,仅在个别林地中局部发生。     

香榧不同部位DNA提取效果研究

分别对香榧胚乳、新老叶片以及1年生幼果进行DNA的提取,经比较分析发现,以香榧嫩叶为实验材料提取DNA的效果最好。     

香榧实生大苗嫁接技术试验

以地径3～4cm的实生香榧大苗为砧木、‘细榧’等品种为接穗,研究不同嫁接方法、嫁接时间、接穗类型及是否剪砧、是否采取防晒措施对香榧新梢生长和嫁接成活率的影响.结果表明,采用贴枝接和劈接的嫁接成活率分别为90.58％和76.67％,达到5％显著水平,贴枝接的新梢抽生数、新梢个数、新梢生长量也略高于劈接;2月29日(2012年)至3月22日嫁接,嫁接成活率间没有显著差异,但新梢生长量随嫁接时间推迟而减小;1年生新梢上段和半木质化嫩梢作接穗的成活率均达到85％以上,1年生接穗粗度对嫁接成活率没有明显影响,但接穗越粗,新梢生长量越大,1年生枝条下段和2年生接穗嫁接成活率较低;第1年不剪砧的嫁接成活率高于剪砧,但剪砧新梢生长量大于不剪砧;对嫁接枝用箬叶包扎进行防晒对提高嫁接成活率没有作用.     

长叶榧RAPD反应条件的研究

以长叶榧为材料 ,研究了RAPD的各种影响因素。确定了长叶榧的最佳的RAPD反应体系为 :15 μl反应体系中含5 0mmol·l-1KCl、10mmol·l-1Tris-HCl(pH9.0 )、0 1%Triton - 10 0、2nmol·μl-1MgCl2 、0 6nmol·μl-1dNTPs、0 .75UTaq酶、30ng引物以及 10 0ng左右的长叶榧DNA。     

香榧采穗圃营建技术

建立采穗圃是香榧扦插育苗以苗繁苗扩大种苗培育规模的基础,通过对香榧采穗圃的营建技术,包括圃地选择、定植密度、搭建荫棚、抚育管理、截干促萌等措施进行试验,提高穗条产量,可生产穗条151万条/hm2。     

香榧古树复壮试验

2005-2007年对因白蚁为害、生长衰老和管理粗放而造成产量下降的香榧(Torreya grandis cv.Merrillii)古树分别采取整枝修剪、白蚁防治、培土及施肥等复壮措施.结果表明,各处理香榧古树枝叶性状、结果性能、株产量均有明显提高,与对照古树表现出极显著性差异,主要表现在新梢数量、粗度,叶片长度和宽度以及鲜质量和干物质质量的增加,树势旺盛,复壮处理单株香榧果实产量均增长1倍或1倍以上,而对照单株产量则继续下降.     

香榧苗木立枯病症状及防治试验

香榧苗木立枯病由终极腐霉、茄丝核菌和黄色镰刀菌3种病原菌引起,该病6～7月为发病盛期,雨水对病害发生有利,试验表明:在苗圃地管理水平较好的情况下,配合使用50%多菌灵500倍液或55%敌克松800倍液浇根,防治效果可达53.4%～70.9%.尤以50%多菌灵防治效果最佳,达70.9%,且成本较低.     

CTAB法抽提香榧种子胚乳DNA的改进

香榧种子胚乳DNA抽提是RAPD和AFLP分子标记构建遗传图谱的基础性工作。经多次实验，我们对CTAB法抽提香榧种子胚乳DNA进行了改进，即先将胚乳冷冻，抽提时加入β－巯基乙醇，抽提过程中用高盐TE重悬DNA－CTAB沉淀，最后用异丙醇沉淀DNA。OD260／OD280比值检测结果为平均1．824，而且DNA得率也较高，证明用此法抽提的DNA能完全满足RAPD和AFLP的分析的要求。     

香榧AFLP实验体系的建立

以香榧(Torreya grandis)的叶片和胚乳为材料,利用改进的CTAB-硅珠吸附法提取DNA,分别就叶片与胚乳建立了香榧的AFLP银染反应体系。结果表明:采用EcoRⅠ/MseⅠ酶切体系,64对引物中有36对引物既不适合叶片也不适合胚乳;适合胚乳AFLP分析的引物有20对,适合胚乳叶片AFLP分析的引物组合有15对,既适合胚乳又适合叶片的引物有7对。实验结果为利用AFLP标记对香榧进行深入研究打下了基础。     

香榧嫁接和人工授粉技术初探

嫁接和人工辅助授粉是提早香榧结实和丰产的重要技术。研究发现,影响嫁接成活率的主要因素是接穗的年龄,以1年生新枝作为接穗嫁接成活率较高。挂枝授粉和嫁接授粉均能提高香榧的结实率,但嫁接辅助授粉结实量远比挂枝授粉要高。