重组禽流感病毒灭活疫苗(细胞源)保存期试验的研究

为保证重组禽流感病毒灭活疫苗(细胞源)在有效期内使用是安全、高效、稳定、均一的,将公司生产的3批疫苗置2～8 ℃保存,分别于保存0、4、8、12、15个月时进行性状检验、效力检验及甲醛残留量测定。结果表明,保存15个月内疫苗性状稳定,免疫SPF鸡后血清抗体效价无明显变化,甲醛残留量含量稳定。实际应用中,疫苗按规定条件储存,在有效期内使用是有质量保证的。     

不同保存方式对猪伪狂犬活疫苗病毒含量的影响

为了探究猪伪狂犬(Bartha-K61株)病活疫苗及专用稀释液的最佳保存温度及保存时间,试验取40瓶山东某生物公司生产的猪伪狂犬(Bartha-K61株)病活疫苗(批号为20190801,-20℃保存)进行试验,其中20瓶用专用稀释液稀释,20瓶不稀释,分别在4℃、37℃存放,并分别于0小时、2小时、4小时、6小时、8小时测病毒含量;取不同温度(4℃、23℃、38℃)保存的稀释液对-20℃保存的疫苗进行稀释,每个温度稀释2瓶,当稀释后的疫苗温度为37℃时测定病毒含量。同时从-20℃保存的疫苗中取出2瓶作为对照,测定病毒含量。结果表明:疫苗在稀释前低温冷冻保存最好,如果4℃存放,不要超过8 h;稀释后的疫苗要及时使用,若不能及时使用,可于4℃保存,保存时间不超过8 h。室温保存尤其是天气炎热的夏季保存时间不要超过6 h。猪伪狂犬病活疫苗专用稀释液的保存温度以23℃为最佳。     

猪细小病毒病冻干疫苗的保存期试验

为研究制定猪细小病毒病冻干疫苗的保存期,将3批疫苗分别在4℃保存3、6、9和12个月,在-20℃保存6、12、18和24个月,并进行物理性状、无菌检验、安全检验和效力检验,结果证实疫苗在4℃至少可保存12个月,-20℃至少可保存24个月。     

响应面法优化猪伪狂犬病病毒耐热保护剂的研究

为提高猪伪狂犬病活疫苗的保存温度,本实验应用响应面法(RSM)筛选并优化出猪伪狂犬病病毒(PRV)耐热保护剂最佳配方。结果表明:谷氨酸钠、L-精氨酸盐酸盐和D-山梨醇能够显著提高病毒对冻干环境的耐受能力,酶解酪蛋白、海藻糖、明胶、蔗糖和牛血清白蛋白显著性依次递减;以冻干后病毒保护率为响应值,响应面优化出最优配方为:谷氨酸钠2%、L-精氨酸盐酸盐2%、D-山梨醇2%、酶解酪蛋白7.6%、海藻糖1%、明胶4%、蔗糖15.2%、牛血清白蛋白2%。采用该配方进行验证试验,冻干保护率达到80.40%,经37℃保存7 d的耐老化试验及2℃~8℃保存24个月,3批疫苗病毒滴度分别下降0.55、0.62、0.47及0.47、0.51、0.41,证明该配方制备的疫苗具有良好的热稳定性。     

鸭病毒性肝炎精制蛋黄抗体保存期的测定

将3批（0501、0502、0503）鸭病毒性肝炎精制蛋黄抗体,置于不同温度条件下保存,间隔一定的时间抽取样品,测定样品的中和抗体效价和攻毒保护率。结果表明：3批病毒性肝炎精制蛋黄抗体在-20℃保存24个月,在2～8℃保存18个月,25℃保存6个月,均达到标准规定的要求。     

反复冻融次数和不同保存温度对病毒滴度的影响

为探讨在有宿主细胞的情况下,反复冻融和不同保存温度对病毒滴度的影响,将收集的含ST细胞培养的猪细小病毒和含Vero细胞培养的伪狂犬病病毒经过不同次数的反复冻融,测定其病毒滴度。将收集的猪细小病毒液和伪狂犬病病毒液分别在4、22、-20、-80℃保存,间隔一段时间后测定半数组织细胞感染剂量(TCID_(50)),以了解病毒滴度。结果显示,含ST细胞的猪细小病毒和含Vero细胞的伪狂犬病病毒经过反复冻融3次之后,病毒滴度比未经冻融的病毒滴度分别提高了1.81lg和1.86lg。同一温度下,随着放置时间的增加,病毒滴度均呈下降的趋势。在一定时间内,不同保存温度下病毒滴度有明显区别,但在-20℃和-80℃条件下保存的病毒滴度下降比4℃和22℃条件下保存的慢。因此,在培养病毒的时候可以用反复冻融3次的方法来提高病毒的滴度。4℃和22℃只能作为病毒的短期储存温度,-20℃和-80℃对于病毒来说是合适的保存温度。     

水貂犬瘟热Vero细胞活疫苗(CDV_3-CL株，悬浮培养)保存期试验

为了探讨不同保存条件和保存期对新研制犬瘟热疫苗病毒滴度和免疫效力的影响,将3批疫苗分别置于2～8℃和-20℃保存,并随机取样进行质量、安全和免疫效力检验。结果表明:疫苗在2～8℃条件下保存6个月TCID_(50)没有明显变化,9～12个月内下降0.3～0.5滴度;-20℃保存12个月没有显著变化,15个月内下降0.1滴度左右;疫苗能诱导产生高免疫保护水平的抗体,确定疫苗保存期2～8℃和-20℃分别为6个月和12个月;保存期内的疫苗的物理性状、无菌、支原体、外源病毒等检验均符合《中国兽药典》的要求。     

猪肺炎支原体抗原致敏红细胞冻干与保存试验

继应用间接血凝反应诊断猪气喘病试验后,进行了猪肺炎支原体抗原致敏红细胞的冻干保存试验,先后冻干13批。测定结果表明冻干前、后血凝价一致.在4—8℃保存6个月,效价无变化.     

鸽Ⅰ型副黏病毒(S-1株)灭活疫苗保存期试验研究

为了确定鸽Ⅰ型副黏病毒(S-1株)灭活疫苗的保存期，对不同温度下保存不同时间的3批鸽Ⅰ型副黏病毒(S-1株)灭活疫苗实验室制品的物理性状、安全性和免疫效力进行了检测。试验结果表明，该疫苗冷藏(2～8℃)保存12个月、室温(25℃左右)保存6个月，其物理性状、安全性和免疫效力无明显变化，均能达到《鸽Ⅰ型副黏病毒(S-1株)灭活疫苗质量标准》的要求。因此，在《鸽Ⅰ型副黏病毒(S-1株)灭活疫苗制造及检验试行规程》中规定该疫苗的保存期为：冷藏(2～8℃)保存，保存期为12个月。     

畜禽生产过程中重要疫病的防控手段——商品猪生产过程疫病控制

五、猪的常用灭活疫苗6.猪丹毒灭活疫苗:性状:上层为橙黄色透明液体,下层为灰白或浅褐色沉淀物,振摇后均匀混浊液体。用途:用于预防猪丹毒。免疫方法与用量:体重在10千克以上的断奶猪,一律皮下或肌肉注射5毫升,10千克以下或未断奶猪均皮下或肌肉注射3毫升,1月后再注3毫升。免疫产生期及免疫持续期:注苗后21天产生免疫力,免疫期为6个月。保存条件及有效期:保存于2～8℃,有效期为18个月;保存于16～28℃阴暗处,有效期为9个月。注意事项:体格瘦弱、健康异常的猪不宜注射;疫苗在临用前应仔细检查,瓶内有异物或有摇不散的凝块不宜使用;注射前应将…     

猪伪狂犬病基因缺失疫苗的制备、安全性、免疫原性、保存期测定及区域试验

为了提供有效的伪狂犬病疫苗，用鸡胚成纤维细胞扩大培养了PrV HB-98突变株（TK^-/gG^-/LacZ^＋），研制了伪狂犬病基因缺失疫苗，并对该疫苗经肌肉接种、经口等免疫途径的最小免疫剂量进行了测定，同时也对4批疫苗的安全性、效力、免疫期和保存期进行了检测；同时将4批疫苗用于免疫23个猪场的母猪、新生仔猪和育肥猪进行区域试验。测定结果表明，疫苗经上述两种途径接种对不同阶段猪的最小免疫剂量均为10^5.0 TCID50；10倍免疫剂量的疫苗对初生仔猪、15日龄仔猪和妊娠母猪是安全的，免疫猪能抵抗强毒的攻击；疫苗在4℃和-20℃下分别可保存6个月和12个月。对伪狂犬病毒抗体阴性的70日龄商品猪和种猪的免疫期为6个月。田间试验表明，4批猪伪狂犬病基因缺失疫苗安全有效，并可用于仔猪发病时的紧急接种。为猪伪狂犬病基因工程疫苗的制备与应用提供了有力的依据。     

耐热保护剂鸡传染性支气管炎活疫苗试验

用3批耐热保护剂冻干的鸡传染性支气管炎活疫苗在2-8℃条件下放置2年，疫苗的病毒含量EID50由10^53、10^55、10^55分别下降为10^37、10^41、10^37。在20-25℃条件下储存6个月病毒含量EID50由10^53、10^55、10^55分别下降为10^39、10^35、10^41。由试验结果可知，试验中的3批耐热保护剂冻干的鸡传染性支气管炎活疫苗在2—8℃条件下保存有效期不少于2年，20-25℃条件下仍具有6个月的有效期。     

猪伪狂犬病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及其冻干检测试剂的制备

猪伪狂犬病是由伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染猪引起的一种传染病,目前在我国广泛流行。本研究针对GenBank中PRV的gE基因序列进行比较分析,在其保守区设计了特异性探针和PCR引物,通过优化反应条件,建立了可以区别野毒株和基因缺失疫苗株的TaqMan荧光定量PCR检测方法。该方法可特异性地检测出野毒感染,而对基因缺失疫苗株、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒无检测信号;对PRV检测的灵敏度可达10个模板拷贝数,是普通PCR的100倍。通过优化的冻干工艺制备出PRV全预混PCR试剂,室温25℃保存3个月或37℃保存15d,敏感性仍为10个拷贝,推测储存于4℃的有效期约为24个月;利用手持单通道荧光PCR仪,可在42 min时间内完成核酸诊断。本研究基于TaqMan荧光定量PCR检测方法,结合核酸扩增体系冻干工艺制备的PRV PCR冻干试剂具有耐保存,便于运输,准确性高等特性,对快速诊断PRV和病毒定量检测具有重要意义。     

猪伪狂犬病-传染性胃肠炎二联高免血清最佳免疫程序及保存条件的初步筛选

为了获得高效价的猪伪狂犬病-传染性胃肠炎二联高免血清,试验采用冻融法制备猪免疫血清,ELISA阻断法、血凝试验及血凝抑制试验分别检测各组猪伪狂犬病病毒、猪传染性胃肠炎病毒血清抗体效价,比较试验组及空白对照组两种病原的血清抗体效价。将两种病原抗体效价最高组血清分别置不同温度保存不同时间检测其抗体效价,探讨最适保存条件。结果表明:S6组的两种病原血清抗体效价最高,猪伪犬病病毒血清OD630值为0.352、猪传染胃肠炎病毒血清抗体效价为1∶64;试验组与空白对照组之间、S6组与其他试验组之间抗体效价差异显著。说明S6组为此次探讨的猪伪狂犬病-传染性胃肠炎二联高免血清的最佳免疫程序,通过30 d的基础免疫及10~15 d的强化免疫能获得较高效价的猪伪狂犬病病毒、猪传染性胃肠炎病毒血清抗体。-20℃和4℃分别适合猪伪狂犬病-传染性胃肠炎二联高免血清抗体液的长期和短期保存。     

猪圆环病毒2型抗体胶体金免疫层析检测方法的建立

为建立便捷、快速检测猪圆环病毒2型(PCV2)抗体的免疫层析方法,本研究利用G蛋白标记胶体金制备金标垫,以PCV2病毒样颗粒(VLPs)和兔Ig G分别作为检测线与质控线组装胶体金试纸条。检测结果显示,该试纸条与A型塞内卡病毒(SVA)、猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病毒(PRV)等猪其它病毒抗体阳性血清无交叉反应,仅对PCV2抗体阳性血清具有高度的特异性;对PCV 2阳性血清最低检测限为1∶6 400稀释度,敏感性较高;批内、批间变异系数CV均小于5%,重复性较好。试纸条在4℃保存6个月,其特异性和敏感性无明显变化。对采集的100份临床血清样品进行检测,该方法与标准ELISA的总符合率为98%。表明本研究建立的PCV2抗体的胶体金免疫层析检测方法具有敏感、特异、稳定等特点,可以做为评价PCV2疫苗免疫效果及其感染筛查的检测方法。     

含硒型牛副伤寒活疫苗保存期试验的研究

为了弄清含硒型牛副伤寒活疫苗及其专用稀释液的最佳保存条件及保存期,将四批含硒型牛副伤寒活疫苗(批号200001、200101、200102、200201)分别置-20℃、0～4℃、15～21℃保存不同时间后,检查其活菌率及其对豚鼠的免疫效力;同时用3批含硒型牛副伤寒活疫苗专用稀释液(批号200101、200201、200202)分别置室温(15～21℃)下保存不同时间后,检查其物理性状及灭菌状态.结果显示,这四批疫苗于-20℃保存24个月、0～4℃保存12个月、15～21℃保存2个月,活菌率均在80%以上,对豚鼠的免疫效力均合格;同时这三批含硒型牛副伤寒活疫苗专用稀释液于15～21℃保存12个月外观物理性状及无菌检验均合格.因此,含硒型牛副伤寒活疫苗保存期暂定为-20℃ 24个月、0～4℃ 12个月、15～21℃ 2个月;保存专用稀释液15～21℃(室温)保存期暂定为12个月.     

猪瘟活疫苗(种毒)鉴别检验阳性血清制备

为制备猪瘟活疫苗(种毒)鉴别检验阳性血清,本实验将4头非免疫健康猪进行猪瘟活疫苗基础免疫和猪瘟石门强毒株反复强化免疫后,采血分离血清,过滤、分装、冻干、熔封,获得4批产品,并进行了检验和验证。结果显示:物理性状、无菌检验、安全检验、均一性检验、支原体检验、真空度测定均合格;剩余水分均小于4%;特异性检验表明,口蹄疫病毒、猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪细小病毒、牛病毒性腹泻/粘膜病病毒抗体均为阴性;残余猪瘟病毒免疫荧光和套式RT-PCR核酸检测结果均为阴性;兔体中和效价分别为1∶800、1∶800、1∶800和1∶1 600;对猪瘟兔化弱毒种毒和5种猪瘟活疫苗的验证结果均良好。该4批血清可以用于猪瘟活疫苗(种毒)鉴别检验。     

猪伪狂犬病的诊治与净化措施

<正>猪伪狂犬病是目前对养殖业危害最为严重的疫病之一,近年来通过接种疫苗使其得到抑制,但由于伪狂犬病毒的变异,自2011年以来,各养殖场出现猪伪狂犬病的病例逐日增加,并且与猪瘟病毒、蓝耳病毒、圆环病毒并发的现象时有发生,我国许多地区均有猪伪狂犬病发生的报道,为此,如果能净化该病,对养殖场是有百利而无一害的。1猪伪狂犬病的诊治1.1病原猪伪狂犬病是一种由伪狂犬病毒引起的多种家畜和野生动物共患的急性传染病,猪是伪狂犬病毒的贮存宿主,病毒不耐热,55℃~60℃经30~50分钟可灭活病毒,80℃则3分钟可达到灭活病毒的目的。短期保存病毒时,4℃保存效     

猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株)免疫产生期和免疫持续期的研究

为评价猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株,传代细胞源)的免疫保护效力,本研究对3批疫苗分别进行免疫产生期试验和免疫持续期试验。免疫产生期试验中将3批疫苗以单剂量免疫仔猪,在免疫后2、3、4、5、6 d连同对照组分别攻击伪狂犬病强毒,结果表明猪伪狂犬病活疫苗免后5 d即可产生坚强的免疫保护力。免疫持续期试验中将3批疫苗以单剂量免疫母猪,免疫后12、14个月连同对照猪分别攻击伪狂犬病强毒,结果显示免疫母猪及其所产仔猪均健康存活,表明猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株)的免疫持续期可长达14个月。     

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)弱毒活疫苗的安全性和体液免疫研究

采用转瓶生产技术，在MARC-145细胞中增殖PRRSV克隆20株，经过条件的优化选择，得到TCID50≥10^-7.55／mL的高滴度PRRSV溶液，为生产疫苗打下基础；所生产的PRRSV弱毒活疫苗对猪安全无致病性，能刺激猪产生特异性抗体应答，接种后第14天可检测出特异性中和抗体。疫苗内的PRRSV滴度在冻干前后变化不大，冻干疫苗在4～8℃保存有效期为6个月，-20℃保存有效期达18个月，表明生产的PRRSV弱毒活疫苗对猪安全且能刺激猪产生体液免疫应答，可用于PRRS的预防接种。