离子束介导的水稻早熟变异株系AFLP分析

用AFLP分子标记技术对N+离子束介导玉米总DNA获得的2个稳定遗传至第6代的水稻早熟变异株系C(08-5-121-6-1)和D(08-5-121-6-2)进行分析。首先从64对引物中筛选出10对多态性较好的引物,然后用这10对引物对早熟变异株系C和D分别扩增。结果显示,变异株系C、D和阴性对照水稻B(豫粳6号)与阳性对照玉米A(郑单14)之间的AFLP扩增图谱相似率分别为15.7%、16.2%和11.6%,说明变异株系与对照豫粳6号的AFLP扩增图谱存在显著差异。变异株系C和D与阴性对照豫粳6号相比,分别扩增出50条和58条差异带,其中新带分别为25条和35条,缺失带分别为19条和15条,变异株系C和D分别扩增到与阳性对照玉米相一致的目的带6条和8条,说明变异株系C和D基因组DNA与玉米基因组DNA相似性高于对照水稻。     

辐射亚洲百合‘pollyanna’雄性不育突变体的RAPD分析

利用 8 0个 1 0bp随机引物对亚洲百合‘pollyanna’及辐射种球诱导出的 2 0个表现型雄性不育突变体进行了RAPD分析。其中有 31个引物对所有材料都能扩增出理想的带型 ,有 4个随机引物扩增出的带型显示其中的‘P1G0 3’、‘P2G0 4’等 9个突变体与‘pollyanna’基因组 (可育系 )之间具有稳定的多态性差异。它们表现出与‘pollyanna’差异的多态性位点有 7～ 1 8个 ,表明它们为‘pollyanna’的基因型突变体。     

离子束介导甘蓝全DNA转化拟南芥菜的RAPD分析

在离子束介导甘蓝外源全DNA转化拟南芥菜的当代发现了 2株表型变异株 ,以其中的1株 (编号为T6)作为研究对象 ,用 40对 1 0碱基的随机引物对该株和其后代株进行RAPD分析 ,发现S1 68号引物对T6和其后代株的RAPD结果与对照相比有明显差异 ,说明离子束介导外源基因转化可以引起受体基因组变异 ,并且该变异有遗传性。对差异条带测序后同拟南芥菜基因组序列比对 ,发现该条带的序列在ABCTransporter结构基因的内部     

旱稻(Oryza sativa)×长芒稗(Echinochloa caudata)远缘杂交后代结实率及杂种优势分析

以旱稻基因型旱 65(OryzasativaL .)为母本 ,稗草长芒稗 (Echinochloacaudata)为父本进行远缘杂交 ,获得实粒种子。连续 5年试验结果表明 :( 1 )F0 高度不孕 ,并伴有杂交种发育夭折现象。去雄 82 4朵小花 ,结实率为 1 2 1‰。 ( 2 )F1杂种优势明显 ,育性正常 ,结实率 92 2 6% ,单株产量超母本 80 3 9%。 ( 3 )F2 农艺性状分离严重 ,但育性无分离。群体 40 5株无不育株出现。选育出的优良变异单株“远F2 1” ,超亲优势为 55 64%。 ( 4)对“远F2 1”衍生F3株系 1 60株考种株穗数、株高、穗长、主茎穗一级枝梗数、穗总粒数、穗实粒数诸性状 ,平均超亲优势分别为 2 3 2 %、1 5 1 8%、47 2 6%、3 3 84%、2 4 2 6%及 2 1 62 % ,差异显著。 ( 5)F5光合速率测定 ,超母本2 9 72 %。远缘杂交对不同属间引入目的基因 ,非常有效。     

离子束介导玉米DNA的水稻变异后代AFLP分析

利用离子束介导法将玉米（郑单14）DNA片段转入水稻豫粳6号,经过5年的筛选得到了基本稳定遗传的变异株系。本研究通过对64对AFLP选扩引物的筛选,优选出了18对选扩引物,它们能同时在2个变异株系中扩增出大量的DNA指纹条带,并且同时能扩增出差异带以及“目的带”。用AFLP分子标记初步分析了2个变异株系与对照间的差异,变异株系中出现了新带、缺失带和“目的带”等几种情况,这些DNA水平上的差异,表明离子束介导玉米DNA育成的水稻材料可能已经插入了玉米的DNA。     

不同处理对水稻病程相关蛋白和过氧化物酶的影响

以稻白叶枯菌 (Xanthomonasoryzaepv.oryzae.XOO)弱毒株 75 1和Ni(NO3) 2 作为诱导因子处理水稻幼苗。表明不同处理均在第 2d表现出最大诱导效果 ,Ni(NO3) 2处理后的相对诱导效果达 50 8% ;可溶性蛋白质IEF和SDS PAGE显示 ,诱导蛋白一般在诱导后 2 4h及 48h出现。Ni(NO3) 2 处理后 48h ,SDS PAGE发现上位叶有新增谱带 (MW分别为 54 95和 3 2 3 6kD) ;IEF显示上位叶出现pI5 1谱带 ,诱导叶出现pI5 2 6谱带 ;POD同工酶诱导叶新增加 4条酶带 (Rf分别为 0 62、0 63、0 64及0 73 ) ,上位叶新增加两条酶带 (Rf为 0 63和 0 64)。不同诱导因子处理后 ,可溶性蛋白质含量增加 ,诱导后 2 4～ 48h增幅最大 ;还显示不同诱导因子对同一植物诱导PRP的效力不同     

种子蛋白质电泳在陆地型长绒棉种质鉴定中的应用

采用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶法 ,进行单粒种子醇溶蛋白质电泳分析 ,参试材料有陆地型长绒新种质 9830 1系、4个海岛棉品种和 8个陆地棉品种。 9830 1和中棉所 1 2号、石远 32 1在试验中 ,同一品种 (系 )内的不同种子之间的蛋白谱带基本一致。对分别取样于山东省 7个不同地区试验点的 9830 1种子谱带进行比较 ,没有发现差异。胶板上陆地棉品种均具有 3条与海岛棉相区分的带 ,同样各海岛棉品种也共同具有 3条特征带。 9830 1显出 3条陆地棉特有带 ,证明其谱带主要倾向于陆地棉 ;同时也稳定地出现 1条海岛棉的特有带 ,表现出其属于海陆杂交种的遗传特性。 9830 1分离出一条独有带 (“1”带 ) ,凭借此带和另一条带 (“1 0”带 )可较容易地和其它陆地棉品种相区分     

应用RAPD技术研究4种鲍的亲缘关系

应用RAPD技术研究 4种鲍的亲缘关系结果表明 ,4种鲍群体中 2 0个有效引物共扩增出 5 38条DNA带 ,平均每个引物扩增的条带数为 2 6 .9;扩增的多态性条带数 136 ,平均每个引物扩增的多态性条带数为 6 .8;多态位点百分数为 2 5 .3%。盘鲍群体和皱纹盘鲍群体之间遗传距离与遗传一致度分别为 0 .2 8和 0 .72 ,杂色鲍群体和九孔鲍群体之间遗传距离与遗传一致度分别为 0 .32和 0 .6 8。聚类分析把盘鲍群体和皱纹盘鲍群体聚为 1组 ,二者亲缘关系较近 ;杂色鲍群体和九孔鲍群体聚为 1组 ,二者亲缘关系也较近     

用ISSR分析四川苎麻品种(系)间的遗传关系及雄性不育分子标记的建立

本文从100条ISSR引物中筛选出21条引物,对8个四川苎麻品种(系)间的遗传关系进行了分析。PCR扩增结果表明,21条引物在8份材料中共扩增出86条带,平均每条引物扩增出4.1条,其中多态性位点71个,各引物扩增出的位点数3~8个不等,平均每条引物可以检测到3.4个多态性位点。聚类分析和遗传距离分析结果表明,供试品种川7、川8与其亲本遗传距离较远。3个杂交品种(川7、川8、川9)均表现特有的偏父本遗传现象。此外,本研究用ISSR引物U835筛选到了1个雄性不育分子标记,并将其扩增产物克隆测序,结果表明该序列大小为658bp。根据该序列,此标记被转化成稳定的SCAR标记,可用于苎麻雄性不育分子标记辅助育种。     

家蚕肾脏形卵(ki)的荧光差异显示研究

为了探明家蚕（Bombyx mori)肾脏形卵的胚子不能正常发育的原因。使用FDD（flourescent different display)法对ki(kidney)基因同质型与异质型的母蛾所产未受精卵及受精24h卵的mRNA进行了差异显示研究。通过137组引物组合进行FDD差异显示，结果检出8254条扩增带。其中未受精卵与受精后24h卵之间的差异片段为206条，占总片段数的2．5％，而ki同质型与ki异质型的差异片段为141条，占总片段数的1．7％，其余的95．8％的扩增片段为4方共有，并且约60％的差异带是比较清晰的。回收了较明显的差异片段计199条，占总扩增带数的2．4％，并对其中部分差异片段进行序列分析表明，其中5个克隆序列分析为：small heat shock proteins,proprotein convertase,cancer antigen like protein fusion RNA-binding protein及receptor like protein kinase同源序列，其余5个克隆序列未发现同源性，可能是新基因。     

甘蓝型油菜陕2A细胞质雄性不育的遗传及RAPD标记

本研究以甘蓝型油菜陕 2A细胞质雄性不育系、保持系和F2 分离群体为材料 ,对F2 分离群体的遗传分离情况进行分析 ,结果表明 ,可育与不育株花器存在明显差异 ,符合 3∶1的分离比例 ,因而推断细胞质雄性不育恢复基因受 1对显性基因控制。利用分离群体分组分析法(BSA) ,用 1 0 5个随机引物对细胞质雄性不育恢复基因进行RAPD分析 ,发现有 6个随机引物扩增出多态性差异谱带。引物S62 和S74在可育和不育基因池中扩增出单条特异性谱带所代表的DNA序列 ,很可能与不育系的恢复基因连锁。     

Assessment of genetic diversity in Solanum trilobatum L., an important medicinal plant from South India using RAPD and ISSR markers

Solanum trilobatum L. is an Indian medicinal plant containing rich amount of steroidal glyco-alkoloids that can be used as precursor for commercial steroid production. Two efficient marker systems such as Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) and Inter Simple Sequence Repeats (ISSR) were used for the first time to assess the genetic diversity across 14 S. trilobatum accessions obtained from five South Indian states. Twenty out of 60 RAPD primers generated 189 distinct bands of which 160 were polymorphic with an average of 8 polymorphic bands per primer. A maximum of up to 15 fragments were amplified with an average of 9.45 bands per primer and the amplicons varied in size between 100 and 3,000 bp. The percentage of polymorphism ranged from 55.5 to 100, with an average of 84.6. ISSR profiling using 7 out of 20 primers amplified 83 bands and the number of amplified fragments varied from 2 to 16 with a size range of 200–1,800 bp. Totally 72 polymorphic bands were obtained using 7 ISSR primers at an average of 10.28 polymorphic bands per primer. Polymorphism percentage varied from 50 to 100 among the selected accessions resulting in an average percentage of polymorphism of 86.7. The PIC values ranged from 0.49 to 0.93 for RAPD and 0.16 to 0.90 for ISSR primers. The study pointed out that ISSR markers were more efficient than RAPD markers in evaluating the degree of genetic variation in S. trilobatum. The UPGMA cluster analysis grouped all Tamil Nadu accessions in one cluster and other state accessions in another cluster. The Principal component analysis also substantiates this clustering pattern. Thus the phylogenetic relationship and a high genetic variation revealed in the present study could provide a baseline data for conservation and improvement of this plant in future. Also the molecular markers identified in this study will be helpful in authentication of this species to prevent adulteration in herbal medicine.     

中国南瓜种质资源农艺性状与RAPD标记分析

本研究利用形态学标记和RAPD分子标记同时对70份来自我国不同地区的中国南瓜种质进行遗传多样性和亲缘关系分析。在所观察的56个有差异的农艺性状中,变异系数从6.60%~262.22%,平均变异系数为37.50%。从150个随机引物中筛选出21个进行RAPD分析,结果表明,在检测到的167条带中有130条具有多态性,多态带比率为73.23%;平均每个引物检测到的条带数多达8条,平均Shannon信息指数(Ⅰ)为0.268。基于农艺性状的聚类分析将70份中国南瓜种质分为七类。基于RAPD标记的聚类分析将70份中国南瓜种质分为五类,其聚类结果与形态特征有一定的相关性。但两种聚类结果均无法从地理来源上进行区分。     

草莓品种的亲缘关系及其不同继代次数的叶片组培苗的RAPD分析

从100个随机引物中筛选出10个引物,对16个草莓品种进行RAPD分析。结果显示,10个引物共扩增出73条DNA谱带,其中多态条带49条,多态性程度为67.13%;遗传距离D值在0.40水平上能将供试材料聚为3类,表明RAPD能很好地鉴别草莓品种之间的遗传关系。利用前面筛选的10个随机引物和其他20个随机引物对不同继代次数的草莓组培继代苗进行了RAPD分析,其特征带型表现一致,未发现变异,说明草莓叶盘离体继代培养30次以内能稳定遗传。     

甘蔗宿根矮化病菌PCR检测技术研究

以甘蔗茎组织总DNA为模板,以16S rRNA基因赖氏细菌属(L eif son ia)通用引物为第一轮引物、甘蔗宿根矮化病菌(L eif son ia xy li subsp.xy li,Lxx)亚种特异引物为第二轮引物建立了Lxx巢式PCR检测技术。根据已报道的Lxx巴西分离物基因组全序列(G enB ank登录号AE 016822.1)设计了扩增致病相关基因片段的3个引物对,经多种组合进行了RCR检验,筛选出两个特异性好、灵敏高的引物对,建立了Lxx的多重PCR检测技术。克隆测序表明,PCR产物与巴西分离物基因组相应区段同一率为99%以上,从而证实了上述PCR技术的正确性。检测结果表明,广东样品的阳性率为90%,海南样品的阳性率为60%。     

杏鲍菇单核体菌株及其杂交后代筛选和鉴定

通过对杏鲍菇单核菌丝显微观察、拮抗、ISSR分子标记分析,研究单核体菌株的合理选配及杂种优势。结果显示,2个亲本的8个不同交配类型可以分为两类,一类为亲本ZAASPe003的单核体菌株T1、T2、T3、T4,另一类为亲本ZAASPe007的单核体菌株T5、T6、T7、T8。通过对8个交配类型单核体单×单杂交,经镜检后获得12个杂交组合。通过亲本菌株及其杂交后代菌丝体生长速度与生长势比较,发现杂交后代菌丝体他T6菌株平均生长速度最快,达到0．443cm／d;应用ISSR分子标记技术,其中7个引物能扩增出条带清晰且具多态性的带谱,共扩增单核体DNA片段61条,杂种双核体DNA片段71条。根据ISSR分子标记分析比较亲本和杂交新组合图谱,发现杂交新组合图谱出现“互补型条带”。     

Identification of some Benin Republic's Guinea yam (Dioscorea cayenensis/Dioscorea rotundata complex) cultivars using Randomly Amplified Polymorphic DNA

DNA from twenty-three late maturing cultivars of Guinea yams (D. cayenensis/D. rotundata complex) from the Benin Republic that could not be separated using isozyme markers, were examined using randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) markers with decamer primers of arbitrary sequence. All the twelve primers tested were informative and yielded 63 amplified DNA bands from which 47 (75%) were polymorphic. Although no single primer produced polymorphic bands in all cultivars, the great majority of the cultivars were separated with the combinations of polymorphic bands generated by various primers. Putative duplicates and cultivar misclassifications were identified. Many morphologically distinct cultivars were close. The dwarf cultivar Tam-Sam considered as derived from Tabane, appeared more distant from the latter than was believed. RAPD analysis was found as a practical tool for the identification of duplicates toward establishment of an accurate core collection of Guinea yams in Benin Republic and in the other countries of the African yam belt.