小麦DON三种提取方法的比较研究

对比了三种提取小麦DON方法的差异。采用振荡、超声和旋涡提取对充分混合的小麦粉状样品进行提取并测定。结果表明:三种提取方法的DON提取率都与提取时间呈正相关,旋涡法的最佳提取时间最短(4 min),超声法的最佳时间次之(15 min),振荡法的最佳时间最长(20 min)。振荡法和旋涡法测得的DON含量分别为(839.7±40.5)μg/kg和(804.8±28.9)μg/kg,两种方法之间无显著差异;超声法测得的DON含量为(760.6±36.0)μg/kg,明显低于其他两种方法。     

5种方法提取真菌基因组DNA作为PCR模板效果的比较

本研究旨在比较CTAB法、改良CTAB法、SDS法、氯化苄法和Chelex-100法提取真菌DNA作为PCR模板的效果,以生长速率、菌落形态差异较大的11个煤污病菌属真菌为研究对象,以核糖体RNA(r RNA)基因中的内转录间隔区(ITS)序列和28S r RNA基因部分序列的扩增率为指标,采用SPSS软件对结果进行方差分析。结果表明,CTAB法和改良CTAB法适用真菌范围最广,分别有7个和9个属真菌的扩增率都大于70%且无显著性差异;氯化苄法和Chelex-100法适用范围居中,分别有6个和8个属真菌的扩增率较高且无显著性差异,扩增率分别大于70%和50%;SDS法适用范围最窄,有6个属真菌的扩增率高于50%且无显著性差异。大多数煤污病菌至少有2种及以上的DNA提取方法能够取得较好的效果,但链丝孢属真菌只有用氯化苄法提取DNA效果最好。采用改良CTAB法结合氯化苄法,能够满足所有供试煤污病菌类群真菌提取基因组DNA用作PCR反应模板的需要。     

2种蚜虫DNA提取方法的比较与改进研究

蚜虫是农业生产上的重要害虫,蚜虫分子生物学研究的快速发展对于植物-蚜虫间的互作机理探讨、抗蚜基因的克隆和抗蚜农作物品种的选育越来越重要,而简便高效的单头蚜虫基因组DNA的提取一直是蚜虫分子生物学研究中的难点。为了提高单头蚜虫DNA提取的产量和质量,通过采用改进的DNA提取方法,对2种不同提取方法（蛋白酶K法和CTAB法）的蚜虫DNA产量和质量进行了比较研究。结果表明,无论从DNA的产量和质量上,CTAB法都优于蛋白酶K法,能达到测序要求,且方法简便,但是成功率低于蛋白酶K法;蛋白酶K法提取的产量较CTAB法偏低,产量和质量均达到了测序要求,且从DNA的提取成功率上高于CTAB法。2种改进后的DNA提取方法都能得到满足测序要求的DNA,2种方法各具优缺点,可根据具体实验要求进行选择。     

甘薯块根的五种RNA提取方法的比较研究

为了确立甘薯块根总RNA最适提取方法,为富含色素、多糖、蛋白质等物质的试验材料的RNA提取提供参考。本研究选择紫薯1号、徐紫薯L7和浙薯1号的块根作为研究材料,采用Trizol法、RNA prep Pure Plant Kit法、RNA plant Plus法、研卉总RNA提取法和CTAB法共五种提取方法对甘薯块根总RNA进行提取,并考察各方法 RNA提取浓度和纯度。研究显示,Trizol法、RNA plant Plus法和RNA prep Pure Plant Kit法在甘薯块根总RNA提取中存在弊端,提取的RNA质量较差。CTAB法和研卉总RNA提取法提取的RNA质量较好,可有效去除各类杂质,且可用于反转录并扩增出IbTubA基因的特异条带,其中,CTAB法步骤比较繁琐但提取的RNA浓度高,而研卉总RNA提取法操作简便但提取的RNA浓度相对较低。     

几种内生真菌DNA提取方法的比较

通过三种内生真菌DNA提取方法的比较,即CTAB法、SDS法、改良的CTAB法,结果表明三种方法都能得到目的DNA,而且得率都不错,但改良的CTAB法效果最好,DNA纯度高且质量也好。用改良的CTAB法所提取的DNA作为模板,进行PCR扩增,得到了清晰的单一的扩增普带,完全可用于酶切、测序等后续实验。     

3种椰子基因组DNA提取方法的比较

旨在得到一套快速提取椰子DNA的方法。采用CTAB小样法、SDS-CTAB法以及PVP法提取椰子组织的DNA,并通过后续的PCR扩增和酶切等实验比较了3种方法所提取的DNA质量的优劣。将CTAB小样法提取的DNA与SDS-CTAB法和PVP法提取的DNA进行了比较,CTAB小样法提取的DNA的OD260/OD280(1.839)较另外2种方法SDS-CTAB法(1.709)和PVP法(1.613)的值更高,CTAB小样法提取的DNA适合于PCR扩增,扩增的条带清晰,且特异性好。此外,CTAB小样法提取的DNA,酶切也较为均匀。CTAB小样法能高效地提取椰子的DNA,并且能一次提取大量的高质量DNA样品,因而能满足高通量的实验要求,同提取DNA能较好地满足下游的分子生物学研究。     

秸秆纤维素提取方法比较研究

目的:意在找出适合秸秆纤维素提取的方法。[方法]:分别采用氢氧化钠-醋酸-亚氯酸钠-丙酮法、高压蒸煮法、硝酸-氢氧化钠法、氢氧化钠-氢氧化钠法、硝酸-乙醇法、过氧酸体系法等方法提取秸秆纤维素,采用重铬酸钾-硫酸亚铁铵法测定纤维素的含量,以纤维素含量与所需时间为评价指标,选出最适合提取玉米秸秆纤维素的方法。[结论]：高压蒸煮法和硝酸-乙醇法较优越,具有操作简单、速度快捷、提取率较高的优点。高压蒸煮法处理量大,适合工业生产需要,硝酸-乙醇法提取的纤维素量少,但其含量高,适用于科研机构及相关部门。     

菠菜叶绿素提取方法的比较研究

以菠菜为对象,用不同有机溶剂处理,对研磨法、浸提法和超声波萃取法提取叶绿素的效果进行比较研究。结果表明,3种提取方法的最佳提取剂分别为:研磨法为丙酮与无水乙醇1∶1、直接浸提法和超声波萃取法均为丙酮与95%乙醇2∶1加少许碳酸钙;后两种方法提取的叶绿素含量比研磨法分别高53.5%和45.1%;混合液提取效果比单一试剂好,可以认为是一种协同萃取效应。综合比较确定超声波萃取法是最佳的提取叶绿素方法。     

四种消解方法对小麦中铅含量测定的比较

选用N9628小麦品种为试验材料,分别通过压力消解罐消解法、干法灰化、过硫酸铵灰化法和湿式消解法消解小麦样品,原子吸收分光光度计测定小麦中铅含量,比较了四种消解方法对小麦中铅含量测定的影响,结果发现不同处理方法差异不显著,压力消解罐消解法的稳定性最好。     

棉花胚珠与纤维蛋白质的两种提取方法比较研究

分别用三氯乙酸—丙酮沉淀和苯酚抽提两种方法,提取棉花胚珠和纤维总蛋白质,发现用三氯乙酸—丙酮沉淀法提取得到的蛋白质,获得率为2.3 mg.g-1,双向电泳后,用胶体考马斯亮蓝染色法染色后检测的蛋白质点数极少;银染色后,发现蛋白质点数没有明显的增加。而用苯酚抽提法得到的蛋白质获得率达到10.4 mg.g-1,是三氯乙酸-丙酮沉淀法的5倍,双向电泳后,用胶体考马斯亮蓝染色法染色后检测的蛋白质点数可以达到923个;银染色,可以检测到1061个蛋白质点。等电点pI从pH 3~10都有分布,但是集中在pH 4.3~8.6。结果表明:酚抽提法具有获得蛋白质种类更多、pI分布范围较宽,蛋白质容易溶解等优点,而且该方法操作简便,是适用于棉花胚珠和纤维的蛋白质组学研究的理想方法。     

以PCR为目的的大豆叶片DNA提取方法的比较研究

模板DNA的质量直接影响PCR扩增的结果,而不同提取方法及其缓冲液的成份与浓度对提取DNA的质量有重要影响。本文以5个栽培大豆品种的叶片为材料,比较分析了SDS与CTAB两种提取方法以及不同浓度CTAB提取缓冲液对所提取的DNA质量的影响,并通过PCR进行检验。实验结果表明：用1％(W/V)、2％(W/V)浓度的CTAB提取缓冲液和1．25％(WV)SDS提取缓冲液所提取的大豆叶片DNA的质量较好,均能满足PCR扩增模板的需求,其中以1．25％(W／V)SDS提取得到的大豆叶片DNA质量最好,以其为模板扩增的效果最佳,而4％浓度的CTAB不适宜提取大豆叶片DNA。     

金龟甲基因组DNA提取方法比较研究

摘 要：为了筛选适宜金龟甲RAPD-PCR的基因组DNA提取方法,于2009年在青岛农业大学实验室内,分别采用改良的SDS法、平衡酚法、裂解液法和CTAB法提取棕色鳃金龟(Holotrichia titanis Reitter)的基因组DNA,通过DNA沉淀性状观察、产量和质量分析,以及随机引物PCR (RAPD-PCR)比较,筛选最优的金龟甲基因组DNA提取方法。研究结果表明,改良的SDS法提取的基因组DNA产量较高,但纯度较低,并且降解严重,RAPD-PCR扩增谱带弥散较严重;裂解液法提取的基因组DNA纯度较高,降解程度较低,但产量最低,RAPD-PCR扩增谱带弥散较严重,并且存在非特异扩增现象;CTAB法提取的基因组DNA不仅产量和纯度较低,降解严重,而且RAPD-PCR扩增结果不稳定,具非特异扩增现象;平衡酚法提取的基因组DNA产量和纯度高,降解轻微,RAPD-PCR扩增结果稳定,扩增谱带弥散轻微。因此,在上述4种方法中,平衡酚法是最适合PAPD-PCR的金龟甲基因组DNA提取方法,裂解液法和改良的SDS法次之,CTAB法最差。     

沙苑子粗多糖的提取和脱蛋白方法的比较研究

用水提法提取沙苑子多糖,并对其脱蛋白方法进行了比较研究。结果表明,水提沙苑子多糖的最佳条件是:提取温度为65℃,提取时间为3h,料液比为1∶15,提取次数为3次。在该提取条件下,可以得到最高粗多糖得率96.9g/kg;分别采用sevag法、酶法、三氯乙酸(TCA)法和sevag法结合酶法等方法脱去沙苑子粗多糖提取物中的蛋白质。酶法脱蛋白的最佳条件为:温度为45℃,时间为1h,酶量为0.4g,pH值为7.0。结果表明,用sevag法结合酶法脱蛋白的效率最高,为87.5%,且多糖损失率较低,为14.9%。     

花生DNA的五种改良CTAB提取方法的比较分析及其应用

花生是世界上重要的油料作物和经济作物之一,也是最重要的植物食用油来源之一,但花生分子标记和功能基因组学等分子生物学研究较落后。因此,本研究旨在建立适合自身的花生基因组DNA的提取方法,为开展花生分子标记研究和分子生物学研究提供帮助。本研究使用了5种改良CTAB法提取花生基因组DNA,所得DNA的纯度和浓度分别通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测,再利用8种分子标记技术的48条单引物和4对转座子保守区扩增引物对提取获得的花生基因组DNA的质量进行扩增验证和应用。结果表明:(1)综合花生基因组DNA的质量检测数据以及花生分子标记技术和转座子保守区的扩增验证结果来看,五种改良CTAB法的DNA提取效果表现依次为:方法一>方法五>方法四>方法三>方法二,其中方法一为最佳首选,方法五和方法四的提取效果也好,但是由于其有利用到强腐蚀性的平衡酚,不安全且不环保,所以不推荐;(2)在花生上建立了8种分子标记技术和4类转座子保守区的扩增体系;(3)克隆获得了花生4类转座子保守区序列。本研究为今后开展花生分子标记研究及转座子的克隆鉴定利用提供了帮助。     

甘蔗基因组DNA提取方法的研究

试验是以甘蔗的嫩叶为材料,通过对前人的CTAB提取方法进行改良,以探索更好的甘蔗基因组DNA提取方法。通过改良最后得到的CTAB提取方法Ⅲ具有成本低、操作简单、省时等特点,并且得到的DNA经核酸蛋白质分析仪、琼脂糖凝胶电泳及RAPD检测分析表明方法Ⅲ提取得到的DNA完整性好,纯度高,可以直接用于各种分子标记。     

不同保存方法对光皮桦总DNA提取效果的影响

光皮桦是一种顽拗类植物,其鲜叶组织中富含酚类、糖类及其他次生代谢物。这些物质很容易使鲜叶发生褐变,从而严重影响植物基因组DNA的提取质量。本文以新鲜嫩叶为对照,比较了-20℃冷藏、硅胶干燥、改进的饱和NaCl-CTAB溶液保存和核分离缓冲液固定4种鲜叶保存方法对提取光皮桦基因组总DNA效果的影响,寻找最佳的光皮桦嫩叶保存方法。并以提取的核酸得率、纯度、片段分布情况、是否含有PCR反应抑制剂等指标来评价其保存效果。结果表明:-20℃冷藏的样品未能提到DNA;新鲜样品、改进的饱和NaCl-CTAB溶液保存和核分离缓冲液保存的样品均提到纯度较好的DNA,大小在48Kb左右,得率为400!g/g鲜叶左右,并获得条带清晰、多态性好的PCR扩增图谱;用硅胶干燥保存的样品也能提到DNA,但得率低,为51.2!g/g鲜叶,且未获得条带完整、清晰的PCR扩增图谱。     

五种蔷薇属植物基因组DNA的提取及鉴定

高质量基因组DNA的有效提取是蔷薇属植物分子生物学研究的基础。本文以单宁、多糖含量高、极易褐化的5种蔷薇属植物的嫩叶，以及刺梨、月季组培苗和愈伤组织为材料，探索了改良CTAB法、SDS法及CTAB微量法分离基因组DNA的方法。结果表明，采用材料裂解前加入不含CTAB的缓冲液，及提取过程中用4％β-巯基乙醇的改良CTAB法，可有效地控制田间材料的褐变及DNA污染，分离出适合限制性酶切反应的高质量DNA；该法获得的未经纯化的粗提DNA及CTAB法分离的组培材料DNA，可有效地用于蔷薇属植物基于PCR扩增的分子生物学研究。     

植物叶绿素含量不同提取方法的比较研究

为探索不同提取液提取爬山虎叶绿素的效果,分别采用80%丙酮溶液、96%乙醇溶液、90%乙醇丙酮混合溶液、95%乙醇丙酮混合溶液四种提取溶液来提取五叶爬山虎叶片叶绿素。结果表明：叶绿素溶液吸收峰的峰值和不同提取液对植物叶绿素的提取能力随提取液的不同而不同,由大到小排序的顺序为95%丙酮乙醇溶液>90%丙酮乙醇溶液>80%丙酮>96%乙醇,相比于研磨法,用试剂浸泡法的叶绿素提取效率更高,这可为准确提取与检测植物叶绿素的提供一定参考作用。     

不同保存方法对蜡梅总DNA提取效果的影响及ISSR-PCR验证

本文以蜡梅新鲜成熟叶片为对照,比较了真空冷冻干燥、硅胶干燥、压标本干燥、45℃烘干、75℃烘干5种叶片干燥方法和4℃保鲜、-20℃冻存、-70℃冻存法对蜡梅总DNA提取效果的影响.结果表明硅胶干燥的样品提取的DNA完整无降解,纯度高,DNA得率为鲜叶的1/3多,压标本干燥的样品可以提到完整的DNA,DNA得率与硅胶干燥的样品相近,提取的DNA含多酚,纯度低.真空冷冻干燥样品的DNA在冷冻干燥过程中小部分受到损伤,DNA得率较鲜叶稍有下降.45℃烘干的样品可以提取到完整的DNA,纯度高,DNA得率约为鲜叶的1/2,75℃烘干的样品的DNA全部降解.ISSR扩增结果表明75℃烘干的样品提取的DNA没有获得扩增产物,其他4种干燥方法提取的DNA的扩增结果与鲜叶相同.鲜叶可在4℃冰箱保鲜存放6 d,在-20℃冰箱中冷藏半月,可在-70℃超低温冰箱中长期放置而不影响总DNA的提取质量和ISSR扩增结果.