TGF-β1对奶牛乳腺上皮细胞增殖与凋亡的影响

应用特异性方法检测转化生长因子(TGF-β1)对奶牛乳腺上皮细胞增殖和凋亡的作用,用不同浓度的TGF-β1作用于体外培养的奶牛乳腺上皮细胞,在不同时间收集培养细胞及其培养液,应用MTT法检测细胞增殖、应用分光度法检测caspase-3活性、测定DNA片段化率法检测细胞凋亡。结果表明,1、5、10ng/mL TGF-β1试验组与对照组比较细胞增殖差异显著(P<0.05),随TGF-β1浓度增大抑制细胞增殖作用增强。细胞凋亡检测显示,1、5、10ng/mL TGF-β1试验组与对照组比较细胞凋亡差异均显著(P<0.05),随TGF-β1浓度增大促进细胞凋亡作用增强。TGF-β1可以抑制奶牛乳腺上皮细胞的增殖,促进奶牛乳腺上皮细胞凋亡。     

TGF-β通路与哺乳动物卵母细胞发育研究进展

转化生长因子β(TGF-β)信号通路是一个包含众多成员的多功能细胞因子的大家族,其在卵母细胞形成和发育方面发挥重要的作用。TGF-β信号通路主要是通过配体与受体结合形成复合物,从而激活相关分子调控关键基因的表达。这一系列过程包括直接参与调控作用的骨形成蛋白(BMPs)、激活素(activins)、抑制素(inhibin)、TGF-β和抗苗勒管素(AMH)。另外,还通过偶联环腺苷酸(cAMP)、激素和表皮生长因子(EGF)三个主要途径间接影响TGF-β通路对卵母细胞的发育。论文通过综述TGF-β通路对哺乳动物卵母细胞发育影响的研究进展,为相关研究提供参考。     

17β-雌二醇对仔猪支持细胞周期的影响

为了研究17β-雌二醇对仔猪睾丸支持细胞周期的影响,实验采用流式细胞术测定了细胞周期中DNA含量,分析了细胞周期细胞增殖指数(PI)和S期细胞指数(SPF)的变化。结果表明:低浓度的17β-雌二醇(10-10～10-7mol/L)能够促进支持细胞周期的转化,其中17β-雌二醇浓度为10-9mol/L时的作用最强;而高浓度的17β-雌二醇(10-6mol/L)则抑制支持细胞周期的转化。17β-雌二醇(10-9mol/L)能以时间依赖性促进支持细胞周期转化,其中24h的作用最明显。ERK1/2抑制剂U0126能减少17β-雌二醇诱导的细胞周期的转化。cAMP的激动剂8-Br-cAMP促进了细胞周期的转化,而抑制剂Rp-cAMP阻止了17β-雌二醇诱导的细胞周期的转化。表明17β-雌二醇对细胞周期的调节呈现一定的时间-剂量依赖性,cAMP和ERK1/2级联参与了这一过程。     

始丰微型牛GH基因的遗传特性分析

为考察始丰微型牛生长激素(GH)基因的遗传特性及与其小体型的关联性,采集12头始丰微型牛、5头雷琼牛和4头蒙古牛血液,提取血样的基因组DNA,PCR扩增GH基因编码区外显子5部分区段,序列测定后采用DNAstar、Meg Align软件进行序列分析和同源比对分析,结果表明:所检测3个家牛群体的GH基因部分区段含2个多态位点。始丰微型牛在GH基因649位存在一个SNP:C649A,矮小型Brahman在该位点的等位基因为C649,正常体型普通牛为A649,正常体型瘤牛及雷琼牛为C649,而在641位除了矮小型Brahman的等位基因为T641,其他牛均无多态,均为C。本研究在GH基因第5外显子649位处的A→C有突变,但未发生氨基酸的改变。而矮小型Brahman在641位与其他群体相比有C→T的突变,使苏氨酸(Thr)变为蛋氨酸(Met),引起蛋白质构象及功能发生变异。始丰微型牛在649位有AA、AB两种基因型个体,其基因型频率分别0.8333、0.1667,该位点上基因型与体型大小无关。本研究表明始丰微型牛不含有报道的矮化基因(T641),且GH基因座上的SNP(C649A)似乎与小体型无关联,其矮小化机制可能来源于GH或生长激素受体(GHR)基因座上的其他位点,本研究为进一步阐明始丰微型牛的矮化机制作了铺垫。     

荣昌猪BMP15基因通过TGF-β RⅡ激活SMAD4信号分子机制研究

本研究旨在阐明荣昌猪BMP15基因在荣昌猪性成熟前不同发育期的表达特性及其与SMADs信号相关基因的表达关系。采集1月龄、3月龄及5月龄荣昌猪卵巢组织,利用qRT-PCR及石蜡切片免疫荧光染色法分析荣昌猪不同月龄卵巢组织内BMP15基因表达及细胞定位特征;利用5月龄卵巢活组织添加重组人BMP15蛋白及TGF-β受体抑制剂(LY215799和LY2109761),应用qRT-PCR及Western blot方法分析BMP15及SMADs信号通路相关基因SMAD2、SMAD3、SMAD4、SMAD7、TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、TGF-βRⅠ和TGF-βRⅡ表达特征及BMP15/SMADs信号通路。结果表明:从1月龄至5月龄,随着荣昌猪生长发育,卵巢组织内BMP15基因mRNA表达量呈上调表达(P0.05);石蜡切片免疫荧光试验表明,5月龄卵巢组织卵母细胞周围颗粒细胞内存在BMP15蛋白荧光信号;从3月龄至5月龄的卵巢组织内BMP15、SMAD4、TGF-β1及TGF-βRⅡ基因在mRNA水平呈上调表达(P0.05),而SMAD2、TGF-β2及TGF-βRⅠ呈下调表达(P0.05);通过5月龄卵巢活组织添加重组人BMP15蛋白、TGF-βRⅠ/Ⅱ及TGF-βRⅠ受体抑制剂培养,发现TGF-βRⅠ/Ⅱ抑制剂(LY2109761)明显抑制TGF-βRⅡ受体蛋白的表达,TGF-βRⅠ抑制剂(LY2157299)不能抑制TGF-βRⅡ受体蛋白的表达。上述结果表明,荣昌猪BMP15基因在荣昌猪性成熟前的卵巢组织内呈上调表达,SMAD4、TGF-β1及TGF-β RⅡ也呈上调表达。本试验研究表明BMP15基因通过TGF-βRⅡ介导SMAD4信号分子调控下游基因的表达,为进一步研究荣昌猪BMP15基因在卵泡发育中发挥的作用提供理论依据。     

不同年龄青年母牦牛生殖激素含量测定

采用ELISA方法对青海海晏地区85头(1岁、3岁各30头,2岁25头)牦牛进行生殖激素含量的测定,结果发现:不同年龄母牦牛FSH含量测定平均值为7.564±1.838IU/L,14.347±6.616IU/L,16.637±4.96IU/L;不同年龄母牦牛LH含量测定平均值为32.557±6.453ng/L,53.983±30.081 ng/L,51.389±15.53ng/L;不同年龄母牦牛GnRH含量测定平均值为37.476ng/L,77.282±36.774ng/L,81.089±16.355ng/L。生殖激素含量的测定对牦牛发情和乏情的研究,以及提高牦牛繁殖生产性能具有重要意义。     

不同培养液对牛卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响

为研究表皮生长因子(EGF)、β-巯基乙醇(β-ME)、亚硫磺酸(HTAU)对牛卵母细胞体外成熟(IVM)及孤雌激活胚胎体外发育(IVC)效果的影响,实验采集牛卵巢采用切割法收集卵丘-卵母细胞复合体(COCs)随机处于不同浓度EGF、β-ME培养液成熟培养24 h后孤雌激活,研究其在不同胚胎培养液中的后续发育,以期筛选出最好的牛卵母细胞IVM-IVC条件。结果表明:添加25、50、100 ng/mL EGF组的成熟率、卵裂率均高于对照组,其中50 ng/mL EGF组的成熟率、卵裂率与对照组差异显著(P<0.05);50、100、500μmol/L的β-ME对牛卵母细胞体外成熟没有促进作用;50 ng/mL EGF与50、100μmol/Lβ-ME组合并无协同作用;胚胎培养基中添加不同浓度EGF对早期胚胎的体外发育无显著影响;而添加100μmol/Lβ-ME组的囊胚率、囊胚细胞数均极显著高于对照组(P<0.01);在成熟液中添加50 ng/mL EGF和100μmol/Lβ-ME、胚胎培养液中添加0.5 mmol/L HTAU孤雌胚发育最好。     

TGF-β超家族成员引起的信号转导及对卵泡生长发育的影响

TGF-β超家族(transforming growth factor-β,TGF-β)是一类在结构上相对保守的生长因子,参与细胞增殖与分化等多种细胞生理活动。近来发现卵巢体细胞和卵母细胞能够表达多种属于TGF-β超家族的生长因子。这些生长因子参与调节卵泡的生长发育,并且其表达和功能的发挥随卵泡生长发育表现出阶段特异性。 其中BMP15和GDF9等基因的突变会影响卵泡正常的生长发育和功能发挥,甚至不育。     

苯噁唑和狄普诺啡对大鼠血浆、垂体和下丘脑β-内啡肽含量的影响

采用放射免疫分析法测定在苯噁唑(Rx781094) 狄普诺啡(M5050)作用下,不同时间大鼠血浆、垂体和下丘脑中β-内啡肽(β-EP)的含量。结果显示:Rx781094 M5050可降低大鼠血浆、垂体和下丘脑β-EP含量,5min开始显著降低,10min时都降到最低点,分别是8.92ng/mL、131.43ng/mg和9.32ng/mg,60min时β-EP亦低于正常值,至120min时逐渐恢复正常。垂体β-EP含量在10min时与对照组比较有显著差异。提示:Rx781094 M5050能降低大鼠血浆、垂体、下丘脑中β-EP含量,可能是发挥催醒作用的机制之一。     

中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞免疫信号分子表达的影响

试验旨在探讨中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡免疫调节作用的影响。采用PCR-SSCP方法对500只试验鸡进行MHC B-LβⅡ基因分型,采集不同MHC B-LβⅡ基因型鸡的外周血淋巴细胞,分别加入终浓度为200、100、75、50、25、0μg/mL的中药复方多糖共培养24h,收集细胞,采用ELISA方法检测不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞培养液中环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)、钙离子(Ca~(2+))、一氧化氮(NO)及诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)含量。结果显示,与对照组相比,中药复方多糖能显著提高不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞培养上清液中cAMP、cGMP、Ca~(2+)、NO和iNOS的含量(P0.05)。中药复方多糖剂量为50μg/mL时,AA、BC基因型鸡淋巴细胞培养上清液中cAMP、Ca~(2+)、NO和iNOS的含量最高,BC基因型鸡淋巴细胞培养上清液中cGMP的含量最高;中药复方多糖剂量为75μg/mL时,AA基因型鸡淋巴细胞培养上清液中cGMP的含量最高;中药复方多糖剂量为100μg/mL时,BB基因型鸡淋巴细胞培养上清液中cAMP、cGMP、Ca~(2+)、NO和iNOS的含量最高。本试验结果表明,中药复方多糖能不同程度地提高各MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞培养上清液中cGMP、cAMP、NO、Ca~(2+)和iNOS的含量,且不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞最适中药复方多糖免疫调节剂量不同。     

水牛唾液蛋白胃蛋白酶解产物中总阿片样生物活性的测定

研究唾液中的生物活性物质是受人注目的领域。许多研究表明 ,唾液中除含有多种激素和细胞因子外 ,还含有丰富的蛋白质。这些蛋白质(特别是粘蛋白)含有脯氨酸富集片段 ,这些片断抵抗蛋白酶的水解。因而推测 ,唾液进入消化道后有可能解放一些活性肽段。本试验旨在探讨唾液蛋白经胃蛋白酶水解是否有阿片样活性物质产生。自5头体重(450±50kg)公水牛口腔采集混合唾液 ,测定蛋白含量。加入胃蛋白酶 ,在 pH1.4 ,39℃孵育2小时后 ,将酶灭活。以孵育前将酶灭活作对照。调 pH7.2,8500×g离心30分钟。取上清液和1640培养液各5ml与生长旺盛的NG108 -15细胞一起在37℃孵育15分钟。收集细胞 ,提取细胞内cAMP,放免测定cAMP的含量。发现NG108 -15细胞膜上有丰富的阿片受体 ,受体激活后可引起细胞内cAMP减少 ,这种作用可被特异性的阿片受体阻断剂纳洛酮(Nal)反转。因此 ,本试验对照组与试验组分别作加Nal和不加Nal2种处理 ,以细胞cAMP与胞浆蛋白比值变化判定酶解液是否具有阿片样生物活性。试验结果表明 ,试验组细胞cAMP含量 :不加Nal显著低于加Nal(20.103±2.473)ng/mg蛋白质vs(25.850±2.461)ng/mg 蛋白质(P<0.01) ;对照组不加Nal差异不显著(27.177±3.738)ng/mg 蛋白质vs(27.337±3.461)ng/mg 蛋白质(P>0.05)。结果表     

连翘酯苷诱生干扰素-γ对AAⅠ诱导的RTECs转分化的影响

体外培养小鼠RTECs,将其随机分为6组,CCK-8法测连翘脂苷对RTECs的增殖率及存活率的影响,ELISA检测转化生长因子β1（TGF-β1）和干扰素-γ的含量,RT-PCR和Western blot检测CK18和Smad7等相关因子的表达变化。结果显示连翘酯苷质量浓度为160mg/L以下对RTECs无毒性,且诱生干扰素2.392μg/L;用药E组与模型B组比较TGF-β1表达显著下降（P〈0.01）;用药组与模型组相比Smad7mRNA极显著高表达（P〈0.01）、CK18mRNA显著高表达（P〈0.05）,而vimentin、α-SMA mRNA抑制表达（P〈0.01）;Western blot结果表明上调了Smad7的表达量。试验表明连翘脂苷可以提高Smad7的表达量,阻止Smad2/Smad3磷酸化,抑制TGF-β1/Smads信号通路,有效改善AAI诱导的肾小管上皮细胞转分化。     

中国美利奴军垦型细毛羊繁殖周期中NAG活力与发情排卵的关系

1998～1999年测定了中国美利奴军垦型细毛羊正常繁殖周期中血清N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)活力与孕酮(P4)浓度,并探讨了它们与发情排卵的关系.结果表明,母羊在休情期的NAG活力为26.98U/L±1.65U/L,P4平均含量小于0.1ng/ml.发情排卵当天(0天)NAD活力为51.12U/L±5.43U/L,P4平均含量为0.236ng/ml±0.07ng/ml.发情后1天(+1天)NAG活力为38.35U/L±3.78U/L,P4平均含量为5.256ng/ml.经t检验,0天和+1天的NAG活力和P4含量差异十分显著(P＜0.01).提示NAG活力变化可以作为简便、快速预测母羊发情排卵的指标.     

催乳素对奶牛乳腺上皮细胞乳脂和乳蛋白合成相关基因表达的影响

本试验旨在探讨催乳素对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)乳脂和乳蛋白合成相关基因表达的影响。选取中国荷斯坦奶牛BMECs为试验材料,经纯化培养后,培养基中添加不同浓度催乳素[0(对照)、100、300、500和1 000 ng/m L],继续培养24 h。通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞活力;利用试剂盒检测胞内甘油三酯的含量;采用实时定量PCR法检测乳脂和乳蛋白合成相关基因的表达。结果表明:1)催乳素浓度为100、300 ng/m L时,BMECs相对增殖率显著高于对照组与其他试验组(P0.05)。2)与对照组相比,300 ng/m L催乳素能够显著提高BM ECs乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、二酰甘油酰基转移酶(DG AT)、脂肪酸结合蛋白3(FABP3)基因表达量及甘油三酯的含量(P0.05),硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因表达量有增加的趋势。3)与对照组相比,100、300 ng/m L催乳素能够显著提高哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)、催乳素受体(PRLR)基因表达量(P0.05);300 ng/m L催乳素能显著提高αS1酪蛋白(CSN1 S1)基因表达量(P0.05)。综上所述,100~300 ng/m L的催乳素对BM ECs乳脂和乳蛋白合成有较好的促进效果。     

藏猪和大约克夏猪血清中脂代谢相关细胞因子的发育性变化研究

采用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测了2、4、6月龄藏猪和大约克夏猪血清中甘油三酯、瘦素和脂联素含量。结果表明,2、4、6月龄藏猪和大约克夏猪血清中甘油三酯含量分别为26.17μmol/L和24.25μmol/L、29.36μmol/L和37.88μmol/L、28.39μmol/L和37.88μmol/L;瘦素含量分别为2 403.82 ng/L和2 080.21 ng/L、2 513.31 ng/L和2 060.91 ng/L、2 564.75 ng/L和2 068.05 ng/L,脂联素含量分别为78.28μg/L和104.94μg/L、94.84μg/L和129.13μg/L、95.23μg/L和103.01μg/L。试验探索了藏猪和大约克夏猪脂肪代谢相关细胞因子的发育性变化规律和差异,为深入研究猪脂肪沉积机理提供了基础数据。     

牛磺酸对高尿酸血症大鼠抗氧化指标和炎症因子的影响

探讨牛磺酸对高尿酸血症大鼠抗氧化指标和炎症因子水平的影响。将40只SD大鼠随机分为正常对照组、高尿酸模型组、10g/L牛磺酸组、20g/L牛磺酸组和20g/L牛磺酸对照组,每组8只。牛磺酸组大鼠造模前预防饮用7d,正常对照组和模型组大鼠正常饮水。然后,除正常对照组和20g/L牛磺酸对照组之外,其他3组灌胃造模,连续10d。10d后检测血液中尿酸、XOD、抗氧化指标和炎症因子水平。给予牛磺酸的高尿酸血症大鼠与高尿酸血症大鼠相比,血清尿酸水平与XOD活力显著降低(P0.05);MDA含量极显著降低(P0.01);GSH-PX与SOD含量显著升高(P0.05);IL-1β、IL-6β、TNF-α和TGF-β含量显著降低(P0.05)。说明牛磺酸可提高高尿酸血症大鼠抗氧化能力,抑制炎性反应,对肾脏有一定保护作用。     

鸡盲肠上皮细胞TGF-β信号通路与球虫感染浓度的关系研究

本试验旨在研究鸡盲肠上皮细胞转化生长因子-β(TGF-β)信号通路与球虫感染浓度的关系。用不同浓度球虫(1×10~4、1×10~5、2×10~5、3×10~5、4×10~5、5×10~5个/孔)感染原代分离培养的鸡盲肠上皮细胞,测定TGF-β2、TGF-β4和Smad 7 m RNA的表达并分析其相关性。结果表明:在球虫感染的鸡盲肠上皮细胞中,TGF-β2、TGF-β4 m RNA的表达随球虫孢子浓度的升高而升高,当球虫孢子浓度达到3×10~5个/孔时达到最高,而后下降,以TGF-β4的变化最为明显;Smad 7 m RNA的表达随球虫孢子浓度的升高呈先降后升的趋势;TGF-β4与Smad 7的表达呈显著负相关(r=-0.572,P0.01),TGF-β4与TGF-β2的表达呈显著正相关(r=0.768,P0.01),TGF-β2与Smad 7的表达没有显著相关性(P0.05)。本试验结果说明盲肠上皮细胞中TGF-β信号通路基因的表达与感染球虫的剂量相关。     

母犬发情周期血中生殖激素变化规律的研究

为研究自然发情和诱导发情的母犬发情期体内促卵泡素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)和孕酮(P4)的分泌规律,将25只母犬随机分成2组:对照组为自然发情组,试验组为诱导发情组。对6只自然发情母犬和5只诱导发情母犬采血制备血浆,放射免疫分析法(RIA)测定FSH、LH、E2、P4的含量,采血时间为出现发情表征的第1、3、5、6、7、8、9、10、11、13、17、24天。对照组母犬FSH、LH和E2最低含量均值分别为(4.35±1.98)ng/m L、(4.95±2.22)ng/m L和(1.33±1.04)pg/m L,FSH、LH和E2峰值均值分别为(134.44±20.97)ng/m L、(117.56±17.49)ng/m L和(6.22±2.16)pg/m L,P4含量均值变化范围是(0.24±03)~(12.51±1.76)ng/m L;试验组母犬FSH、LH和E2最低含量均值分别为(4.19±2.12)ng/m L、(5.64±3.84)ng/m L和(1.57±0.76)pg/m L,FSH、LH和E2峰值均值分别为(172.98±56.40)ng/m L、(159.12±35.87)ng/m L和(6.08±1.16)pg/m L,P4含量均值变化范围是(0.24±0.06)~(12.51±3.95)ng/m L。结果表明:自然发情和诱导发情的母犬体内LH、FSH、E2和P4变化比较复杂,但仍有规律可循;E2对FSH的分泌具有一定的抑制作用,P4的含量变化在LH峰后的显著变化,P4稳定性和规律性更强;外源性PG-CI和FSH激素诱导发情的母犬的方法显著性提高了整个发情周期LH和FSH水平(P0.05),而对发情周期内E2和P4分泌水平均没有显著性影响(P0.05)。     

转化生长因子β1/Smads信号传导通路在哺乳动物卵巢发育中的调控作用及其作用机制

不同信号转导通路间的彼此协调保证了机体的正常运行。在众多的信号通路中,转化生长因子(TGF)β1/Smads信号传导通路越来越受到学者们的关注,已经成为分子生物学和细胞生物学研究的一大热点。已有研究证实,TGF-β1/Smads信号传导通路是调控卵泡发育的重要途径。本文就TGF-β1/Smads信号传导通路与哺乳动物卵巢卵泡的发育进行综述,分别从TGF-β受体、Smads蛋白、骨形态发生蛋白(BMP)、血小板反应蛋白1(THB-S1)、S期激酶相关蛋白1(SKP1)和其他调节机制阐述TGF-β1/Smads信号传导通路在哺乳动物卵巢发育中的调控作用及其机制,旨在引起人们对TGF-β1/Smads调控卵巢发育的关注,并为卵巢发育过程中某些疾病的治疗提供一些参考。