节律基因Clock和Per2在高邮鸭不同组织中的表达分析

Clock和Per2为两个重要的节律基因,在调节昼夜节律中具有重要作用。为弄清节律基因Clock和Per2在鸭组织中的表达情况,本文采用荧光定量PCR的方法检测了Clock和Per2两基因在鸭下丘脑、垂体、卵巢、肾上腺、肝脏、胸肌、腿肌,以及不同大小的卵泡颗粒细胞中的表达情况。结果表明,Clock和Per2两基因在所检测的几种组织和卵泡颗粒细胞中均有表达,而且两基因在组织中表达量高低水平变化趋势一致。提示,Clock和Per2两基因可能共同调节鸭昼夜节律。本研究为鸭Clock和Per2基因研究奠定理论基础。     

鹅不同繁殖时期GnRH和GnIH基因表达和激素浓度变化分析

旨在研究GnRH和GnIH基因和激素在鹅繁殖过程中的重要作用,本研究以产蛋性能差异显著的四川白鹅和溆浦鹅为试验材料,利用Real-time RCR方法检测产蛋前期、产蛋期和休产期两种鹅的下丘脑、垂体和卵巢组织中GnRH和GnIH mRNA的表达量;利用放射性免疫和酶联免疫吸附测定法测定血清中的GnRH和GnIH激素变化情况。结果表明:GnRH和GnIH基因在四川白鹅和溆浦鹅的下丘脑、垂体和卵巢组织中均有表达;产蛋前期和产蛋高峰期的下丘脑和卵巢组织中,四川白鹅的GnRH mRNA表达量显著(P0.05)或极显著(P0.01)高于溆浦鹅,在产蛋高峰期和休产期四川白鹅GnRH激素浓度也极显著(P0.01)或显著高于(P0.05)溆浦鹅,在高峰期和休产期四川白鹅GnRH血清浓度分别为51.13和51.10pg·mL-1,溆浦鹅分别为49.52和49.94pg·mL-1;GnIH在两种鹅的变化比较一致,仅在产蛋高峰期,四川白鹅下丘脑组织中GnIH mRNA表达水平极显著低于(P0.01)溆浦鹅,而两种鹅之间的GnIH激素在各个时期均无显著差异。这提示随着繁殖阶段的改变,在调控两种鹅产蛋性能的作用过程中GnRH可能较GnIH发挥着更为重要的作用,为进一步研究鹅繁殖分子机制奠定基础。     

鹅产蛋相关基因筛选获得成功

日前许多学者针对鹅产蛋性能普遍较低的现状,利用抑制性消减杂交技术分别构建了产蛋前期和产蛋期鹅垂体、卵巢、肝脏等组织消减cDNA文库,采用反向斑点杂交技术对文库进行了差异表达基因的筛选和鉴定,经测序获得了多个可在产蛋期鹅垂体、卵巢、肝脏组织中高效表达的基因或     

扬州鹅NPFFR1基因CDS区克隆、生物信息学分析及组织表达检测

本研究旨在对鹅促性腺激素抑制激素受体基因(NPFFR1)进行克隆及生物信息学分析,并检测其在鹅不同组织中的表达。利用鸡NPFFR1基因为种子序列,采用RT-PCR方法克隆出扬州鹅NPRRF1基因,并通过相关软件对基因序列进行生物信息学分析。结果显示:共发现扬州白鹅NPFFR1基因的两种剪接形式:剪接体1的ORF大小为1 200 bp,编码399个氨基酸;剪接体2的ORF大小为432 bp,编码143个氨基酸,相对剪接体1缺失31 bp。对其进行生物信息学分析发现,鹅NPFFR1基因与鸡NPFFR1基因CDS序列同源性为92.8%,其产物是一种不稳定、疏水性蛋白,主要分布在细胞膜上;蛋白质跨膜结构预测显示鹅NPFFR1蛋白含有7个跨膜结构,属于跨膜蛋白,无信号肽片段。对产蛋末期母鹅10个组织样品的cDNA实时定量PCR结果显示,NPFFR1基因在各组织中均有表达,在下丘脑中表达最高,其次是腹脂、小肠、卵巢、胃、垂体、心脏、肌肉,在肾脏以及肝脏中表达很低。研究结果为今后探究鹅NPFFR1蛋白的相关功能及与其他蛋白质的相互作用提供了理论依据,同时为扬州鹅生殖轴调控产蛋性能的机理研究提供参考。     

皖西白鹅催乳素受体基因表达特点的研究

采用荧光定量PCR法,研究了皖西白鹅催乳素受体基因(prolactin receptor,PRLR)在产蛋不同时期及生殖轴不同组织mRNA的表达特点。结果表明,在垂体、下丘脑和卵巢组织中,皖西白鹅产蛋前期PRLR表达水平较低,至产蛋期降至最低,抱窝期上升至极高水平,休产期再次下降至较低水平,且各组织均表现出相似的规律,但卵巢中的表达量相对较高;就巢期间,在就巢前、中、后期,PRLR mRNA表达量在各组织呈现不同的变化规律,垂体组织中表达量呈"V"形变化,在中期前下丘脑中PRLR mRNA维持稳定,到后期有所下降,卵巢中表达量呈梯形下降。PRLR mRNA表达量在不同周期及不同组织中的变化规律反应了PRLR对皖西白鹅就巢的影响,PRLR对鹅就巢的调控可能在转录时期已经开始。     

蛋鸡输卵管子宫部蛋壳钙化节律及其分子调控途径

高产蛋鸡具有近似24 h的产蛋规律(近日节律),被排出卵巢的卵在输卵管各部位具有相对固定的停留时间,其中停留于子宫部的时间最长。时钟基因是生物钟的最基本组成单位,其节律性表达预示着生物钟的存在,研究发现时钟基因调控动物繁殖周期,并且在鸡输卵管子宫部中节律性表达,输卵管子宫部是蛋壳形成的主要部位,可以推测生物钟存在于输卵管子宫部,时钟基因通过发条机制调控蛋壳形成相关离子、离子通道蛋白、离子结合蛋白、蛋壳特异性基质蛋白等下游蛋壳形成相关基因节律性表达,从而保证蛋壳按序合成和蛋鸡产蛋的连续性。     

反季节生产技术对鹅FSHβ和FSHR基因表达的影响

为研究反季节生产技术对鹅FSHβ和FSHR基因表达的影响,选取经反季节生产技术控制的处于产蛋期和正常处于休产期扬州鹅,测定血清中FSH含量,并应用实时荧光定量PCR技术研究FSHβ和FSHR基因mRNA在下丘脑-垂体-性腺轴中的表达水平变化。结果表明,试验组(反季节生产技术控制处于产蛋期)鹅的血清中FSH水平极显著高于对照组(未调控处于休产期)鹅的血清中FSH水平(P<0.01);FSHβ和FSHR基因在垂体、下丘脑和卵巢组织中均有表达,且FSHβ在垂体中表达最高(P<0.01),FSHR基因在卵巢组织中表达最高(P<0.01);FSHβ基因在试验组鹅垂体中的表达量极显著高于其在对照组鹅垂体中的表达量(P<0.01);FSHR基因在产蛋期鹅卵巢组织中的表达极显著高于休产期鹅卵巢组织中的表达量(P<0.01)。反季节生产技术控制下鹅生殖轴组织中FSHβ和FSHR基因表达显著增加,血清中FSH测定结果与之一致,表明FSH与生殖周期密切相关。     

牦牛卵巢颗粒细胞中Bmal1基因的表达试验

为了研究Bmal1基因在牦牛卵巢颗粒细胞中的表达情况。本试验利用细胞免疫荧光法分析Bmal1基因在体外培养的牦牛卵巢颗粒细胞中的表达定位,并用qRT-PCR方法检测经地塞米松处理后24 h内不同培养时间点颗粒细胞中Bmal1基因的表达规律。结果显示:Bmal1在牦牛颗粒细胞的细胞质中表达。Bmal1基因在不同培养时间点的颗粒细胞中呈节律性表达(P0.05),振幅为0.28。表明牦牛颗粒细胞中存在Bmal1基因并且呈现规律性表达,Bmal1有可能是牦牛卵巢发育中的关键性生物节律调控基因。     

浙东白鹅催乳素受体基因的克隆及其表达特点的研究

本研究克隆了浙东白鹅催乳素受体基因（PRLR）的部分序列,并应用荧光定量PCR技术研究了浙东白鹅在产蛋期、就巢期和恢复期时PRLR基因在下丘脑、垂体和卵巢中的表达特点,结果表明,浙东白鹅PRLR基因的表达量在产蛋期、就巢期和恢复期差异显著（P〈0.05）,就巢期表达量最高,产蛋期次之,恢复期表达量最低。对不同组织PRLR的表达量分析,垂体最多,其次是下丘脑,卵巢中的表达量最低,垂体与卵巢中的表达量、卵巢与下丘脑的表达量均有极显著的差异（P〈0.01）,垂体与下丘脑中的表达量差异不显著（P〉0.05）。     

产蛋前期和产蛋期鹅HPG轴褪黑素受体mRNA表达规律的研究

为阐明不同繁殖阶段鹅HPG轴褪黑素受体mRNA表达的变化规律,应用实时荧光定量PCR技术检测产蛋前期和产蛋期四川白鹅下丘脑、垂体、卵巢组织中3种褪黑素受体亚型(Mel-1a、Mel-1b和Mel-1c)mRNA相对表达量。结果表明:产蛋前期鹅下丘脑Mel-1a、Mel-1b和Mel-1c的相对表达量分别是产蛋期的5.25倍(P<0.01)、0.43倍(P<0.01)和1.20倍(P<0.01);产蛋前期鹅垂体Mel-1a、Mel-1b和Mel-1c的相对表达量分别是产蛋期的3.01倍(P<0.01)、7.51倍(P<0.01)、7.25倍(P<0.01);产蛋前期鹅卵巢组织中Mel-1a、Mel-1b和Mel-1c的相对表达量分别是产蛋期的1.55倍(P<0.01)、0.55倍(P<0.01)、2.86倍(P<0.01)。以上结果提示,褪黑素可通过其特异性受体的介导在HPG轴的各级水平发挥其调节作用,并且下丘脑褪黑素主要通过Mel-1a介导、垂体褪黑素主要通过Mel-1b和Mel-1c,卵巢褪黑素主要通过Mel-1a和Mel-1c介导来发挥其调控作用。     

维生素、矿物质与能量蛋白质水平对浙东白鹅母鹅繁殖性能、血液生殖激素浓度及生殖轴相关基因mRNA相对表达量的影响

本试验通过在饲粮中添加维生素与矿物质、调整饲粮能量蛋白质水平,旨在研究其对浙东白鹅母鹅繁殖性能、血液生殖激素浓度和生殖轴相关基因mRNA相对表达量的影响.选择138只月龄相近的浙东白鹅种母鹅,按体重相近原则分为3组,分别饲喂不同的饲粮,试验期150 d,测定繁殖性能(平均产蛋数、平均蛋重、受精率和孵化率)、血液生殖激素[卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、孕酮(P4)、雌二醇(E2)、催乳素(PRL)]浓度和生殖轴相关基因[促性腺激素释放激素(GnRH)、卵泡刺激素-β(FSHβ)、雌激素受体1(ESR1)、雌激素受体2(ESR2)、卵泡刺激素受体(FSHR)、催乳素(PRL)、催乳素受体(PRLR)] mRNA相对表达量的变化.结果表明:1)添加维生素与矿物质可显著提高浙东白鹅母鹅第1产蛋周期平均蛋重和受精率(P＜0.05);提高第2产蛋周期内血液FSH和P4的浓度,降低LH浓度,改变E2、P4和PRL浓度波动(P＜0.05);下调下丘脑PRLR、垂体PRL和卵巢PRLR基因的mRNA相对表达量(P＜0.05),上调卵巢ESR2基因的mRNA相对表达量(P＜0.05).2)调整饲粮能量蛋白质水平可显著提高浙东白鹅母鹅第2产蛋周期平均蛋重(P＜0.05);提高浙东白鹅第2产蛋周期内血液LH浓度,降低FSH浓度,改变E2和P4浓度波动(P＜0.05);上调下丘脑GnRH、垂体PRL和PRLR基因的mRNA相对表达量(P＜0.05),下调卵巢FSHR基因的mRNA相对表达量(P＜0.05).由此得出,添加维生素与矿物质、调整饲粮能量蛋白质水平可通过影响产蛋周期内部分血液生殖激素浓度和波动,局部调节生殖轴相关基因的mRNA相对表达量,改善浙东白鹅母鹅的繁殖性能.     

生物节律影响家禽繁殖性的作用机理

生物节律是生物的生命活动呈周期性变化的规律,是一种生物生理和行为的时间机制.这个普遍存在于生命活动中的时钟系统称为生物节律系统,其负责机体外周组织器官生物节律的驱动、产生和调节等作用,分为中心时钟节律和外周时钟节律系统[1].它们都通过时钟基因的正负反馈作用产生节律信号,而中心时钟系统能通过神经和内分泌等方式将生物节律信号传导至外周组织器官,并影响外周器官功能的正常发挥,使生物体更容易适应内外环境的变化[2].在家禽中生物节律对性腺发育、产蛋周期以及生长等具有相同的调节作用[3],而其本质是受时钟基因的节律性表达的影响.     

扬州鹅ACSF2和MAGI-1基因多态性及其与产蛋性状的关联分析

本研究旨在探讨ACSF2和MAGI-1基因多态性对扬州鹅产蛋性状的影响,以期筛选出可用于提高扬州鹅产蛋性能的分子标记。采用PCR扩增结合直接测序的方法对ACSF2和MAGI-1基因内含子区域进行单核苷酸多态性（SNP）检测,分析SNP的遗传多样性及其与产蛋性状的关联性。结果显示,扬州鹅ACSF2基因内含子中有1个与扬州鹅产蛋性能相关的SNP位点,为Record-106582 A>C,包含3种基因型,分别为AA、AC和CC。关联分析结果显示,Record-106582 A>C位点对产蛋量有显著影响,AA基因型扬州鹅的产蛋量显著高于AC和CC基因型个体。本研究中MAGI-1基因Record-106975 A>G突变位点对扬州鹅群体产蛋量、开产体重和蛋重均无显著影响。结果表明,ACSF2基因对扬州鹅部分产蛋性状有显著影响,可作为扬州鹅早期选育的分子标记。     

我国地方鹅种就巢性状相关转录组研究进展

随着转录组测序技术的发展,利用组学技术解析我国地方鹅就巢性的研究逐渐深入.在不同品种鹅的各个繁殖阶段,围绕下丘脑-垂体-卵巢轴的不同水平进行转录组分析,可以深入解析鹅就巢的遗传机制.文章针对转录组解析我国地方鹅繁殖性能的研究进行综述,分析不同品种鹅在各产蛋阶段的基因表达图谱,汇总与鹅繁殖性状显著相关的差异表达基因,总结...     

维生素A、维生素C和维生素E混合物对浙东白鹅繁殖机能的影响

研究了添加VA、VC和VE混合物(1.5 kg/t饲料)对浙东白鹅繁殖性能、血浆激素浓度和下丘脑-垂体-性腺轴基因mRNA水平的影响。结果显示:饲喂维生素混合物可显著提高浙东白鹅第1产蛋周期蛋重和受精率(P<0.05),但对第2产蛋周期产蛋量、蛋重、受精率和孵化率影响有限;饲喂维生素混合物可提高浙东白鹅第2产蛋周期内血浆FSH、P4、HCG和赖抱期、恢复期E2的浓度,降低LH浓度,改变浙东白鹅产蛋周期内FSH波动规律(P<0.05),降低下丘脑内PRLR、垂体内PRL和卵巢内PRLR基因的mRNA水平(P<0.05),提高卵巢内ESR2基因的mRNA水平(P<0.05),对下丘脑内GnRH、垂体内PRL和FSHβ、卵巢内PRL、ESR1和FSHR基因的mRNA水平影响不显著。因此,VA、VC和VE混合物可以通过影响繁殖期内部分血浆激素浓度变化,下调生殖轴PRLR mRNA水平以减弱PRL信号,从而改善浙东白鹅的繁殖性能。     

鸡CLOCK基因在不同组织中的表达

CLOCK基因是一种与生物节律相关的基因,对维持正常的近日节律起重要作用。本研究旨在分析鸡CLOCK基因在不同组织间的表达以及在同一组织中的节律性表达情况。根据鸡CLOCK基因mRNA序列(登录号:NM_204174)设计特异性引物,利用QRT-PCR方法,检测早上(06:00)、中午(12:00)、傍晚(18:00)3个时间点CLOCK基因在下丘脑、心脏、肝脏、脾脏等17种组织中的表达。结果表明:鸡CLOCK基因在各组织中均有表达,在胸肌中的表达量极显著高于其他各组织(P0.01),为心脏表达量的1.99倍;在同一种组织不同时间点的表达呈现出一定的节律性,心脏、肝脏、肌胃中表达量持续升高,下丘脑、回肠、空肠、盲肠、腺胃等先升高后降低,且在空肠、盲肠、腺胃中表现出显著的节律性,脂肪中先降低后升高,脾脏、卵巢中持续下降。结果显示,鸡CLOCK基因表达存在时空特异性,并呈现较强的节律性。     

籽鹅卵巢组织差异表达基因的研究

本研究旨在筛选产蛋前期和产蛋期籽鹅卵巢组织差异表达的基因,并进行功能分析,从而探讨鹅产蛋的分子调控机理。利用抑制性消减杂交技术筛选籽鹅卵巢组织中的差异表达基因,用GOTM软件将所得ESTs从分子功能水平进行GO分类。结果表明,所构建的籽鹅卵巢组织消减cDNA文库的削减效率在20倍以上,片段大小主要在300～750bp;挑选86个阳性克隆测序,获得15个ESTs,其中有11个为已知的ESTs,4个未知的ESTs;11个已知的ESTs被分成结合功能、催化活性、酶调节活性、转运蛋白活性和其它功能。本研究成功构建了籽鹅卵巢组织消减cDNA文库,并筛选得到了15个可能在产蛋前期和产蛋期籽鹅卵巢组织中差异表达的ESTs,它们可能在鹅产蛋过程中起着重要的调控作用。     

籽鹅卵巢组织中铁蛋白重链基因和8个新ESTs的定量研究

采用实时定量PCR技术定量检测产蛋前期和产蛋期籽鹅卵巢组织中铁蛋白重链基因(FTH)和8个新ESTs(ODEUG01~ODEUG08)的mRNA表达水平。结果表明:产蛋期籽鹅卵巢组织中FTH和8个新ESTs的相对表达量分别比产蛋前期卵巢组织高13.25、7.68、11.82、14.23、8.25、15.14、9.78、6.48、14.21倍。本研究进一步证实,FTH和8个新ESTs在产蛋期籽鹅卵巢组织中高效表达,FTH和8个新ESTs可能参与籽鹅卵巢功能的调节,并影响籽鹅的产蛋性能。     

伊犁鹅产蛋前后各期卵巢转录谱的构建及卵泡发育相关基因的分析

【目的】构建产蛋前后各期伊犁鹅卵巢转录组文库,结合生物信息学分析揭示不同产蛋期伊犁鹅卵巢组织差异表达基因,并鉴定出影响鹅卵巢发育的关键基因,为伊犁鹅的繁殖调控提供理论参考。【方法】选择处于开产期（KL组）、产蛋期（CL组）及休产期（XL组）的伊犁鹅各4只,屠宰后取其卵巢组织,用于构建卵巢转录组文库。通过新基因挖掘、基因差异表达、基因注释以及蛋白互作网络分析筛选出与鹅卵泡发育相关的候选基因;随机挑选8个差异表达基因,应用实时荧光定量PCR验证其表达情况。【结果】伊犁鹅卵巢组织学结果表明,在开产期时,伊犁鹅卵巢表面有大量初级卵泡,而产蛋期卵巢则显示出卵泡的层级性,在休产期卵巢中可观察到卵泡出现向内凹陷、闭锁的现象。通过转录组测序（RNA-Seq）,从构建的12个伊犁鹅卵巢cDNA文库中获得有效读数57 811 186~85 328 377条,Q30值均>93.38%,每个样品所产的测序读数于鹅参考基因组上的比对率在82.79%~89.24%。在卵巢中注释的新基因共有1 112个,单核苷酸多态性（SNP）位点总数为1 642 273~2 425 069个;SNP和插入缺失（InDel）均主要注释于内含子区域;各时期的可变剪切类型主要集中为最后1个外显子可变剪切（TSS）及第1个外显子可变剪切（TTS）。在KL vs CL、XL vs CL及XL vs KL组中分别有337、1 136和525个差异表达基因,共有差异表达基因为α2A肾上腺素能受体（ADRA2A）、表皮蛋白（CP）、非转移性黑色素瘤糖蛋白B （GPNMB）及α-1-抗胰蛋白酶样（LOC106033756）。GO功能富集分析发现,差异表达基因主要富集在肽基酪氨酸磷酸化的正调控、细胞黏附及质膜外侧等过程。KEGG通路富集分析发现,差异表达基因主要显著富集于神经活性配体-受体相互作用、ECM-受体相互作用及类固醇生物合成等。结合蛋白互作网络分析,筛选到与鹅卵巢发育相关的潜在调控因子Bruton’s酪氨酸激酶（BTK）、血小板源性生长因子受体α（PDGFRA）、整合素β3（ITGB3）等。实时荧光定量PCR结果显示,RNA-Seq结果准确可靠。【结论】本研究揭示了产蛋前后各期伊犁鹅卵巢组织中的基因表达差异,筛选到影响伊犁鹅卵巢发育的神经活性配体-受体相互作用、ECM-受体相互作用、类固醇生物合成等重要通路与BTK、PDGFRA和ITGB3等关键候选基因,为了解鹅卵巢组织调控产蛋性能的分子机制提供了理论支撑。     

文昌鸡GnRHR基因在不同组织中差异表达的研究

采用半定量RT-PCR方法检测文昌鸡处于性腺轴(下丘脑-垂体-性腺)的不同组织中GnRHR基因的表达水平,结果表明:GnRHR基因mRNA表达于鸡的3种组织--下丘脑、垂体和卵巢;GnRHR mRNA在3种组织中的表达量不同:下丘脑和垂体中表达量较高,卵巢中表达量较弱.