全悬浮培养LMH细胞制备FAdV-4灭活疫苗的研究

通过对LMH细胞进行驯化,获得一株可全悬浮培养的LMH细胞,命名为LMH-S。此细胞可适应无血清、高密度悬浮培养,以初始细胞密度0.5×10⁶/mL～1×10⁶/mL接种,细胞密度最高达6×10⁶/mL。研究确定生物反应器悬浮培养LMH-S细胞制备FAdV-4抗原的最优参数为：接毒时细胞密度2×10⁶/mL～3×10⁶/mL、接毒量0.1MOI～1MOI、接毒后48 h～72 h收毒,所获抗原病毒含量不低于10^9.25TCID₅₀/mL。试验鸡分别免疫0.02 mL、0.05 mL、0.1 mL、0.3 mL疫苗,攻毒保护率分别为9/10、10/10、10/10、10/10,表明疫苗有效性良好。本试验成功建立了LMH全悬浮培养细胞株,确定了FAdV-4抗原的生物反应器悬浮培养工艺,验证了悬浮培养抗原的免疫原性,为高效FAdV-4灭活疫苗的研制奠定了基础。     

鸡源4型禽腺病毒滨州株适应细胞的筛选及培养特性的研究

为探究鸡源禽腺病毒的适应细胞及培养特性,将前期分离保存的1株4型禽腺病毒滨州株,分别接种Vero细胞、QT-35细胞、DF-1细胞和LMH细胞,连续传3代后,通过细胞病变特征和病毒含量,选出最适宜的细胞,并对细胞进行克隆优选.同时研究了该毒株的接毒剂量、接毒后吸附时间和收获时间.结果表明,LMH细胞最适于4型禽腺病毒滨...     

AILTV临床分离株鸡肝癌细胞培养特性及黏附因子测定

禽传染性喉气管炎病毒(avian infectious laryngotracheitis virus,AILTV)引起鸡上部呼吸道传染病,危害养鸡业的发展。2017年冬季至2018春季,本实验室从河北地区各发病鸡场病死鸡分离鉴定得到8株AILTV,分别编号为AILTV-HB-1～AILTV-HB-8。将病毒进行鸡胚传代后,与标准强毒王岗株和河北地区使用的2株疫苗分别接种于鸡肝癌细胞(LMH),检测LMH增殖速度。ELISA方法检测鸡整合素和鸡层黏连蛋白/板层素(LN),分析二者与AILTV致病力关系。结果显示:所分离的鸡传染性喉气管炎病毒中AILTV-HB-2不会导致LMH细胞贴壁力下降,其他毒株可导致LMH细胞贴壁力下降。AILTV-HB-1可导致LMH细胞LN蛋白降解,从而降低LMH细胞贴壁力,使其游离性增加,增强其增殖速度,推测温和型AILT病症气管中的干酪样堵塞物的产生可能与病毒降解LN有关。     

禽腺病毒血清4型感染的LMH细胞mRNA表达谱分析

禽腺病毒血清4型(FAdV-4)引起的禽肝炎-心包积液综合征已严重危害我国养禽业的发展,迫切需要深入了解FAdV-4的致病机制并制定有效的防控方案。论文旨在利用高通量测序技术分析禽腺病毒血清4型感染鸡肝癌(Leghorn male hepatocellular, LMH)细胞后差异表达的mRNA,以探究mRNA在FAdV-4感染过程中的作用及其调控机制。结果显示,与对照组相比,FAdV-4感染48 h共筛选到2 604个上调的差异表达基因,2 883个下调的差异表达基因。其中,GNB3、NECTIN4、SFRP4、FABP2、PLPP3、GALR1L和MBL2等基因之前并没有被报道过与FAdV-4感染相关。通过GO和KEGG分析得知,差异表达基因主要富集在从细胞表面位点和信号受体结合至细胞周期调节、MAPK信号通路、细胞黏附分子作用等;其中,显著下调的差异基因还富集到多种代谢途径中,提示病毒感染会影响宿主细胞的代谢水平。本研究为深入解析FAdV-4感染宿主细胞的致病机制提供了相关的理论基础及科学依据。     

乳酸菌培养条件的优化

1材料与方法 1．1菌种 乳酸菌菌种由广东绿百多生物技术有限公司提供。     

猪体外受精胚胎培养条件优化的研究

试验将卵母细胞经过体外成熟、体外受精后在不同条件的PZM-3液中培养,检测卵裂率、囊胚的发育率和质量,目的是进一步优化培养条件用于体外生产猪胚胎.     

一株饲用酪酸菌特性及培养条件的研究

对本实验室分离保藏的一株饲用酪酸菌的一些特性进行了研究,发现该菌株具有较强的耐热性、耐酸性,对胆盐具有较强的耐性,对大肠杆菌有较强的抑制作用。对其碳源、氮源、无机盐等培养基组成进行了研究优化,并确定了最适培养温度等培养条件。     

鸭疫里默氏杆菌培养特性的研究

鸭疫里默氏杆菌标准1型和2型与野毒株进行各种培养基培养特性的对比,并利用标准1型和2型菌株免疫的实验鸭鲜血制备成鸭疫里默氏杆菌鲜血平板,建立鸭疫里默氏杆菌鲜血平板实验室初步鉴别诊断法。结果表明:不同来源的鸭疫里默氏杆菌在显微形态、生化试验略有不同;不同培养基上鸭疫里默氏杆菌表现出不同的生长速度,不同来源的鸭疫里默氏杆菌在固体培养基上的菌落形态大小、显微形态略有不同;鸭疫里默氏杆菌鲜血平板能对标准1型、2型、鸭疫里默氏野毒株、大肠杆菌、巴氏杆菌及疑似里氏杆菌进行实验室的初步鉴别诊断。     

富锌益生素的制备及其培养条件的优化

试验旨在通过有益菌转化无机锌制备富锌益生素。将锌浓度为50 mg/ml的硫酸锌溶液与产朊假丝酵母、嗜酸乳杆菌、凝结芽孢杆菌种子液混合发酵培养,研究不同温度、培养时间、锌添加量、接种量、烘干温度对富锌益生素活菌数及锌转化率的影响。结果表明:硫酸锌溶液和复合菌固体发酵培养基中比例为1:200,混合种子液接种量比例为5%;发酵温度35℃;培养时间为36 h;烘干温度为60℃;得到的富锌益生菌总活菌数9.07×10~9 CFU/g,有机锌转化率为79.82%。用10倍剂量的富锌益生菌连续饲喂雏鸡5周,雏鸡健康状况良好。     

FADV-4感染LMH细胞STING依赖的干扰素及细胞因子转录水平动态变化

为了探讨干扰素刺激基因(STING)依赖的干扰素及细胞因子在血清4型禽腺病毒(FADV-4)感染鸡肝癌细胞(LMH)后的表达量情况。试验将FADV-4感染LMH细胞,观察病变,收集感染后24,48,72,96,120 h的细胞样品,抽提RNA反转录成cDNA,通过实时荧光定量PCR技术监测FADV-4病毒复制情况及STING、TANK连接酶(TBK1)、干扰素调节因子7(IRF7)、干扰素α(INF-α)、干扰素β(INF-β)、白介素6(IL-6)、白介素8(IL-8)、白介素1β(IL-1β)基因表达量动态变化。结果表明：FADV-4感染LMH细胞24 h后,细胞开始出现病变迹象,随着感染时间延长,细胞出现变圆变亮、脱落、死亡等典型病变。病毒在24～48 h快速增殖,72 h出现增殖高峰(9.13×10¹⁰ copies/μL),96～120 h呈现下降趋势。与对照组相比,STING和IRF7的表达量在感染72 h后显著上调(P<0.05),96～120 h极显著上调(P<0.01);其中TBK1表达量在24～72 h上调,96～120 h下调;I...     

北京油鸡胚胎成纤维细胞系建立与生物学特性研究

采取组织块直接培养法，对北京油鸡胚胎组织进行原代和继代培养，成功地建立了成纤维细胞系。并对培养细胞进行了形态学、细胞生长动力学观察，以及核型和乳酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶的同工酶分析。结果表明，该细胞系的群体倍增时间(PDT)为24h；细胞染色体中二倍体占主体，为76％～88％；乳酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶同工酶电泳图谱与本室其它细胞系有明显差别；细菌、真菌、病毒、支原体检测呈阴性。该细胞系的建立，使北京油鸡这一国家重要种质资源在细胞水平上保存下来，也为基因组文库和体细胞克隆等研究提供了理想的生物材料。     

不同浓度表皮生长因子(EGF)对鸡胚盲肠上皮细胞生长的影响

为了研究不同浓度表皮生长因子(EGF)对鸡胚盲肠上皮细胞生长的影响,通过体外培养鸡胚盲肠上皮细胞,添加不同浓度表皮生长因子(EGF,0、10、20、30、40 ng/mL)对鸡胚盲肠上皮细胞生长的影响,并对体外培养的鸡胚盲肠上皮细胞进行了碱性磷酸酶鉴定,细胞形态学观察贴壁率,测定生长曲线。结果显示:加入20 ng/mL的EGF,对鸡胚盲肠上皮细胞增殖的促进作用是极显著的(P0.01)。表明EGF作为重要的细胞因子之一,参与调节并促进鸡胚盲肠上皮细胞体外生长。     

凉亭鸡(配套系)的选育

凉亭鸡原名为凉亭土鸡,来源于广西北流市塘岸镇凉亭村以及周边地区,是2000年以来经凉亭禽业发展有限公司进行系统选育,经过4个世代培育而成的优质黄羽小型肉鸡.……     

中华鳖心组织成纤维细胞系的建立及特性

以中华鳖心组织为材料,用含10％胎牛血清的TC199培养基,于25℃条件下,经14个月传代培养60余次,获得一个能稳定生长、以成纤维样细胞为主的细胞系,称之为TSH（Trionyx sinesis heart)细胞系。分别对其原代和传代细胞的染色体数目、不同温度下细胞的生长线及原代和传代细胞的显微形态进行了测定和比较。结果表明,细胞在25℃条件下生长速度最快;原代细胞约有64％的染色体为2n=66,而传代细胞为四倍体的有62％。初步估计的细胞周期为2－3d。传代细胞冻存后,复苏状态良好,能继续增殖传代。     

矮小型品系(S1系)在优质鸡生产中的应用

本研究用矮小型黄鸡品系(S1系)作为母本并以不同配套模式生产杂交后代,分析各组合后代的生长及肉用性能等性状.结果表明组合L×BS1与L×S1L可以作为适合目前市场要求的最佳配套组合,L×S1次之.组合B×S1L与X×YS1具有生产局限性,而组合A×S1及A×L S1,基本不适合优质鸡的生产.     

Insulin-Secreting Pancreatic (Islet Cell) Carcinoma in a Cat

A functional, insulin-secreting pancreatic (islet cell) carcinoma was diagnosed in a 17-year-old male Siamese cat. Diagnosis was made on the basis of clinical signs (i.e., seizures and stupor) that resolved temporarily after correction of hypoglycemia with feeding or intravenous administration of glucose, the finding of an inappropriately increased serum insulin concentration in the face of hypoglycemia, and prolonged resolution of hypoglycemia after surgical removal of the tumor. Primary islet cell tumor of the pancreas was confirmed by biopsy. The cat died 18 months later, and necropsy revealed metastases to regional lymph nodes and liver. Specimens of the tumor and metastatic lesions both stained positively for insulin.     

鸡传染性法氏囊病病毒在DT40细胞中的增殖规律

为了系统地研究IBDV弱毒在DT40细胞系中的增殖规律,作者探讨了IBDV弱毒株对DT40细胞的侵染性以及不同培养条件对IBDV在该细胞中增殖的影响.结果表明,在基础维持液培养条件下,IBDV TAD和HN32个弱毒株均不需要传代适应过程即町直接感染DT40细胞,并在其中增殖;而在细胞最佳生长液条件下,IBDV可伴随宿主细胞的快速分裂而增殖,并可在较长培养时间内进行连续、大量的病毒收获.本研究表明DT40细胞可以作为深入探讨IBDV分子致病机制的良好靶细胞模型,其同时也可能为生产IBDV商品化疫苗提供一种潜在便捷的工具细胞.     

庄河大骨鸡育成期生长特点研究

为了解庄河大骨鸡现有群体育成期的生长特点,本研究对庄河大骨鸡育成期720余只母鸡和100余只公鸡的体重进行了3个时间点的测定,深入分析了群体的增重和变异情况。研究发现,除8w母鸡群体外,其他时间点的公母鸡群体的体重和增重变异度均超过10%,母鸡的变异度高于公雏;不仅公母雏间生长发育规律不同,而且同性别群体内部生长发育规律也呈现明显的多样性。     

隐性白肉鸡羽速自别雌雄系的选育(2)

本研究是在第一报的基础上,通过对扩繁的隐性白表型慢羽公鸡79只与快羽母鸡560只进行基因测交试验,结果从中发现并选出24只基因型为纯合慢羽的公鸡.从而以此为基础,建立起以24只公鸡与1196只母鸡组成的隐性白一世代纯合慢羽系,并形成了拥有1600只核心群和6000只育种群的隐性白二世代纯合慢羽系,为育成隐性白慢羽系和羽速自别雌雄系奠定了基础.