针对fimW基因沙门氏菌的特异性PCR检测

为建立沙门氏菌快速检测方法,本研究根据沙门氏菌Ⅰ型菌毛蛋白调控基因fimW设计一对引物,建立PCR检测方法,并对收集的A群～F群14个血清型40株沙门氏菌和5种12株非沙门氏菌菌株进行PCR扩增.结果显示所有沙门氏菌均扩增出与预期(477 bp)相符的特异性片段,而非沙门氏菌扩增结果均为阴性.另外,以肠炎沙门氏菌50336株DNA为模板,敏感性试验结果显示该方法可以检测出扩增体系中1pg DNA染色体和102cfu的沙门氏菌.表明本研究建立了检测沙门氏菌简洁、敏感、特异的PCR方法.     

大理州鸡源沙门氏菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解大理州鸡群沙门氏菌的流行和耐药情况,对15份采自大理州的疑似沙门氏菌感染发病鸡的病料进行细菌分离鉴定,通过染色镜检、生化试验、血清型试验及多重PCR鉴定等确诊为沙门氏菌感染,并通过药敏试验了解分离菌株的耐药状况。结果表明：此次共分离到6株沙门氏菌菌株,其中4株为鸡伤寒沙门氏菌,2株为鸡白痢沙门氏菌;不同菌株间表现出不同的抗生素敏感性,多数菌株对强力霉素、红霉素、克林霉素、多粘菌素B、利福平产生耐药;对新霉素、四环素中度敏感;对氨苄西林、阿莫西林、头孢氨苄、头孢噻肟、头孢他啶等13种抗菌药物敏感。为大理州鸡沙门氏菌的防治提供了依据。     

鸡沙门氏菌感染的PCR诊断及药敏实验研究

鸡白痢是养鸡生产中较为多发的常见疾病之一,其主要致病原沙门氏菌具有较强的耐药性,某肉鸡养殖场因患疑似鸡沙门氏菌感染导致雏鸡大量死亡,经实验室细菌分离、沙门氏菌stn基因PCR扩增,确诊为鸡沙门氏菌感染,同时对分离菌进行药物敏感性试验,并根据试验结果制定药物治疗方案,使疾病得到有效控制。     

大庆某牛场牛舍环境中沙门氏菌的调查与分析

为了解沙门氏菌在大庆牛舍环境中的流行情况,本文采集大庆牛舍空气、水、饲料、垫土和粪便等样品共248份,进行沙门氏菌的分离、培养、PCR鉴定、致病性试验、药物敏感试验等检测。结果显示,从248份样品中分离出16株沙门氏菌,检出率为6.4%。分离的沙门氏菌全部来自水、饲料和垫土,其中水和饲料的检出率分别达到21.4%和22.2%。药敏试验结果表明,除对氟哌酸、阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、壮观霉素、依诺沙星、氧氟沙星和多粘菌素B完全敏感外,这些分离菌株均出现耐药和多重耐药,对利福平、克林霉素和阿莫西林的耐药率达到100%,本试验结果可为沙门氏菌的控制与干预提供依据。     

鸡白痢沙门氏菌PCR检测技术的建立与应用

为鸡沙门氏菌的临床检测提供了一种更快速、敏感、特异的诊断,参照GeneBank中已公布的的鸡白痢沙门氏菌fliC基因序列,合成出了一对引物,使用PCR法对1株沙门氏标准菌株和其他3株非沙门氏菌标准菌株进行DNA抽提扩增并检测其敏感度。采用上述技术,对12份可疑病料及10份饲料进行PCR检测,同时与传统检测方法进行比较。结果表明1株沙门氏菌PCR产物出现600 bp的特异性DNA扩增带,而非沙门氏菌均未出现扩增条带,证明所设计引物具有沙门氏菌特异性;通过敏感度检测,此PCR体系能检出50 pg以上的细菌DNA,敏感性较高。运用PCR法阳性检出率及敏感性均高于常规检测方法。由此可见,沙门氏菌PCR检测是一种快速、敏感和高度特异的诊断方法。     

一例鸡沙门氏菌的分离鉴定及药敏试验

无菌摘取病死鸡的心、肝、脾、肺、肾、关节囊液等病料,进行沙门氏菌分离培养。根据培养特性、染色镜检、生化试验、PCR检测及血清学分型结果表明,分离菌株为印第安纳沙门氏菌。药敏试验表明,该菌对14种药物(耐药率77.78%)耐受,仅对厄他培南、阿米卡星敏感。本研究为鸡沙门氏菌的临床防控提供了试验依据。     

畜禽及环境中沙门氏菌的PCR快速检测与控制

本文运用PCR技术检测家畜及环境中的沙门氏菌,25种沙门氏菌均获得特异性扩增,3种非沙门氏菌检测结果为阴性。表明PCR技术具有快速简便、敏感高和特异性强等优点,值得在沙门氏菌的快速检测中推广应用。并简要介绍了沙门氏菌的相关控制措施。     

一株致种鸭瘸腿的肠炎沙门氏菌分离与鉴定

为探究育成期种鸭瘸腿的发生原因,采集病鸭的肝脏、关节进行病原分离,经沙门氏菌stn基因PCR、多重PCR及7对管家基因MLST分析等方法进行鉴定,并对分离菌进行生化试验、药敏试验和SPF鸭致病性试验。结果显示：4份肝脏及关节组织病毒检测为阴性、细菌检测为肠炎沙门氏菌阳性,PCR、MLST及生化试验结果确定分离了一株肠炎沙门氏菌;该分离菌对新霉素和多西环素药物较为敏感;SPF鸭致病性试验结果显示该分离菌具有较强的致病性,可复制出与临床表现一致的纤维素性心包炎、肝周炎症状,感染鸭瘸腿比例为100%,剖检有严重的腿肌干酪样物。研究首次报道了肠炎沙门氏菌感染可引起种鸭瘸腿和严重的纤维素性心包炎、肝周炎、腿肌干酪样物,为育成期种鸭瘸腿的防治提供参考。     

畜禽及环境中沙门氏菌的PCR快速检测与控制

本文运用PCR技术检测家畜及环境中的沙门氏菌,25种沙门氏菌均获得特异性扩增,3种非沙门氏菌检测结果为阴性。表明PCR技术具有快速简便、敏感高和特异性强等优点,值得在沙门氏菌的快速检测中推广应用。并简要介绍了沙门氏菌的相关控制措施。     

食源性沙门氏菌快速检测技术的应用研究

通过样品试验,得到优化的沙门氏菌检验方法,了解上海地区沙门氏菌 污染情况.在免疫胶体金技术、单抗直接ELISA、PCR法检测沙门氏菌的基础上,将 PCR法和单抗直接ELISA三种快速检测方法进行比较研究.用免疫胶体金技术、直接E LISA、PCR法对鸡蛋、水样、牛奶、猪肉、牛肉、虾仁等样品401份进行沙门氏菌检测,并与 常规国标方法对比,直接ELISA法的敏感性和特异性达100%和97.3%,免疫胶体金技术敏感 性和特异性达100%和95.3%,PCR法的敏感性和特异性均为100%.通过对样品的检测, 最终确定较优化的沙门氏菌检测程序.PCR法的特异性优于免疫胶体金技术和直接ELISA法.对大量样品检测,可采用免疫胶体金技术或直接ELISA法筛检,除去大量阴性样品,阳性样品用PCR法作进一步鉴定;需要确定血清型时则用国标法.     

犬腹泻病例沙门氏菌的分离与鉴定

对南京农业大学动物医院9例有腹泻症状的病犬采取直肠粪便进行沙门氏菌(Salmonella)的分离鉴定。通过生化鉴定和PCR扩增沙门氏菌invA基因,筛选出5株沙门氏菌菌株。对分离出的菌株进行血清型鉴定和对抗生素药物的敏感性试验。结果显示,5株分离菌株中4株属于B群鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium),1株属于D群伊斯特本沙门氏菌(S.eastbourne)。2个分离菌株仅对阿米卡星、头孢西丁、链霉素及头孢吡肟较为敏感。在动物致病性试验中,鼠伤寒沙门氏菌血清型的菌株的致病力则强于伊斯特本沙门氏菌。     

1例鸡白痢沙门氏菌的分离鉴定与耐药性分析

为查明河南省新乡市某规模化蛋鸡场疑似沙门氏菌感染病例的病原,进而制定合理的治疗方案,本研究无菌采集疑似病雏鸡肠管样品,用革兰氏染色、培养特性观察、生化试验、PCR方法对其进行确诊,并进行病原回归试验,采用药敏纸片琼脂扩散法(K-B法)分析分离菌对19种常见抗生素的耐药性。结果显示,本试验成功分离了一株革兰氏阴性短杆菌,该分离菌符合鸡白痢沙门氏菌的培养特性和生化特性;PCR成功扩出invA基因,通过与GenBank数据库比对分析确定该细菌为鸡白痢沙门氏菌;用分离细菌株感染SPF鸡能复制出与自然感染一致的病例,说明鸡白痢沙门氏菌是造成本养鸡场雏鸡发病的主要病原;分离株具有较强的致病性和多重耐药性,对阿米卡星、苯唑青霉素、青霉素耐药,对复达欣、氨苄青霉素、头孢曲松等药物敏感,将敏感抗生素用于临床治疗效果明显。结合以上结果,本研究提出该病的具体防治措施,并取得了较好的效果,为鸡白痢沙门氏菌的分离鉴定及防治提供了参考,对鸡白痢沙门氏菌病病原的早期诊断和治疗具有重要临床意义。     

沙门氏菌PCR检测方法的建立

根据GenBank沙门氏菌侵袭蛋白A(invA)基因序列设计引物,扩增特异的202 bp核苷酸片段,经过优化PCR扩增条件,建立了沙门氏菌特异、敏感和快速的PCR检测方法。特异性试验结果表明,从沙门氏菌参考菌株中均能扩增出特异性的核苷酸片段,大肠杆菌、巴氏杆菌、金黄色葡萄菌、志贺氏菌、蜡样芽孢杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌的扩增结果均为阴性。敏感性试验结果表明,采用简便的直接煮沸裂解法制备样品DNA,该方法的敏感性可达2.43×103CFU/mL。     

动物源性沙门氏菌的分离及耐药性研究

为了掌握河南省动物源性沙门氏菌的分布及耐药情况,从具有代表性的屠宰场采集1820份猪盲肠内容物,经PCR初步筛选、分离纯化及鉴定,对菌株进行药敏试验。结果共分离沙门氏菌125株,分离率为6.9%;经药敏试验发现,沙门氏菌对四环素、多西环素、大观霉素、氨苄西林、磺胺异噁唑等抗生素耐药较为严重,对头孢噻呋、黏菌素、氧氟沙星等抗生素较为敏感。提示沙门氏菌存在较为严重的耐药现象,在畜禽生产上要谨慎使用抗生素。     

1例鸡白痢沙门氏菌的分离鉴定与耐药性分析

为查明河南省新乡市某规模化蛋鸡场疑似沙门氏菌感染病例的病原，进而制定合理的治疗方案，本研究无菌采集疑似病雏鸡肠管样品，用革兰氏染色、培养特性观察、生化试验、PCR方法对其进行确诊，并进行病原回归试验，采用药敏纸片琼脂扩散法（K-B法）分析分离菌对19种常见抗生素的耐药性。结果显示，本试验成功分离了一株革兰氏阴性短杆菌，该分离菌符合鸡白痢沙门氏菌的培养特性和生化特性；PCR成功扩出invA基因，通过与GenBank数据库比对分析确定该细菌为鸡白痢沙门氏菌；用分离细菌株感染SPF鸡能复制出与自然感染一致的病例，说明鸡白痢沙门氏菌是造成本养鸡场雏鸡发病的主要病原；分离株具有较强的致病性和多重耐药性，对阿米卡星、苯唑青霉素、青霉素耐药，对复达欣、氨苄青霉素、头孢曲松等药物敏感，将敏感抗生素用于临床治疗效果明显。结合以上结果，本研究提出该病的具体防治措施，并取得了较好的效果，为鸡白痢沙门氏菌的分离鉴定及防治提供了参考，对鸡白痢沙门氏菌病病原的早期诊断和治疗具有重要临床意义。     

6株鸭源沙门氏菌的分离鉴定与药敏试验

沙门氏菌病是危害水禽业养殖业重要的细菌性传染病之一，为了解鸭源沙门氏菌的血清型、耐药性以及基因型特征的分布情况，试验对徐州地区发病鸭采用沙门氏菌PCR鉴定，对分离获得的沙门氏菌进行了生化、血清型鉴定，并进行药敏试验与脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型。研究结果表明，分离鉴定的6株沙门氏菌的优势血清型为鼠伤寒沙门氏菌，占50%;药敏试验结果表明，6株沙门氏菌分离株对克林霉素耐药性最高，其次是头孢吡肟、头孢拉定、庆大霉素、红霉素、复方新诺明、多黏菌素B,并且多重耐药性严重，达100%;对甲氧苄氨嘧啶、氯霉素、四环素较敏感。PFGE显示6株分离株基因型成多样性，相似度大于50%,具有流行相关性。     

21株禽源鼠伤寒沙门氏菌的分离鉴定及耐药性研究

为了对扬州地区沙门氏菌进行鉴定及耐药性分析,从临床采集具有沙门氏菌病典型特征的样本,通过分离培养、生化试验分离得到21株细菌均符合沙门氏菌的生化特性,利用沙门氏菌具有种属特异性的亲膜蛋白基因inv A做PCR鉴别分析,采用药敏纸片法对21株鼠伤寒沙门氏菌进行药敏试验。结果表明:21株分离菌都为沙门氏菌,血清型鉴定为鼠伤寒沙门氏菌;药敏试验结果为新霉素、丁胺卡那、卡那霉素的抑菌作用较强,所有受试菌株均对其敏感;14.28%的菌株对庆大霉素、妥布霉素和美洛西林耐药,19.05%的菌株对多黏菌素B耐药,23.81%的菌株对头孢曲松耐药,28.57%的菌株对多西环素耐药,42.86%的菌株对链霉素耐药,47.62%的菌株对复方新诺明耐药;10株鼠伤寒沙门氏菌分离株出现多重耐药性。     

2株鸽源沙门氏菌病原的分离鉴定及诊治分析

为探究引起山东两个规模化养鸽场种鸽死亡病原,本研究成功从两鸽场中各分离到一株革兰氏阴性菌,并进行纯化、PCR鉴定、药敏试验及血清型鉴定试验。结果显示,成功分离出的2株分离菌的16S rRNA片段测序确定均为沙门氏菌,两株沙门氏菌的药敏结果存在一定差异,但均对头孢类、氨基糖苷类及四环素类等敏感;分子血清分型试验结果表明2株分离菌均为鼠伤寒沙门氏菌。经治疗后死亡情况得到控制,该研究结果为鸽沙门氏菌病的流行及防治提供思路和参考。     

鸡白痢沙门氏菌病原的分离鉴定及耐药性分析

为鉴定新疆某些地区鸡白痢沙门氏菌主要流行株的流行现状和耐药情况,本研究采用平板凝集试验方法对有发病史的种鸡场进行现场检测,被检的750只鸡中,发现78例疑似鸡白痢沙门氏菌感染,运用沙门氏菌鉴别培养基、组织病理学观察和PCR方法进行确诊,并进行药敏试验。结果显示,疑似的78例鸡白痢沙门氏菌中有69例符合鸡白痢沙门氏菌的生化特性和病理学特点,PCR成功扩增出invA基因,分离率为9.2%,血清型诊断为D1型;其中分离菌对万古霉素和新霉素耐药性最高,耐药率分别为100.0%和81.2%,而对头孢曲松、克拉维酸和多黏菌素的敏感率达60.0%以上。本研究为养殖户和兽医工作者在净化鸡白痢沙门氏菌及临床用药方面提供参考。     

鸡肠炎沙门氏菌的分离鉴定与药敏试验

通过分离培养、染色镜检、特异性基因鉴定和动物致病性试验,对辽宁某规模化养鸡场疑似鸡沙门氏菌病的病鸡,采集肝脏和肠内容等病料进行病原学检测和鉴定分型,同时对所鉴定的菌株通过药物敏感试验筛选敏感药物。病原学鉴定结果确定所分离的病原为肠炎沙门氏菌;药敏试验结果表明,该菌株对头孢噻呋、恩诺沙星、氧氟沙星、沙拉沙星高度敏感,本试验结果为临床上对鸡沙门氏菌病的诊断和治疗提供了一定的参考依据。