江苏部分地区禽致病性大肠杆菌分离株的生物学特征及耐药性研究

为了解江苏部分地区禽致病性大肠杆菌(APEC)的分子流行状况,从临床分离鉴定出120株APEC,并对分离株的血清型、种系发生型、毒力基因型和耐药性进行检测。血清型检测结果显示,在已定型的95株分离株中,最常见的血清型为O78,约占定型菌株比例为27.4%,其他主要血清型还有O18、O24和O88等。APEC分离株种系发生型以B2型和D型为主,分别占受试分离株的35.6%和28.5%,而A型和B1型分别占22.8%和13.1%。对已知的12种毒力基因的检测发现,铁摄取基因的检出率相对较高,如tonB(93.3%)、iutA(90.8%)、iroN(84.2%)和feoB(82.5%),其他受检基因fimH、iss、cvaC和traT的检出率也在70%以上,而hlyD、papC、irp-2和tsh基因在APEC菌株中的检出率低于30%。筛选40株分离株进行1日龄雏鸡致病力试验,确定出高致病株和低致病株分别占65%和35%。进一步分析发现高致病株比低致病株检出率高的毒力因子有iutA、tsh、iroN、irp-2、iss和cvaC(P0.05),提示这6种毒力基因可作为鉴别APEC毒力的靶标基因。APEC分离株大多呈现多重耐药,对受试的13种抗生素的耐药率均超过了50%,特别是对强力霉素、四环素、先锋IV、氨苄青霉素、磺胺异噁唑的耐药率甚至达到了80%以上。本研究丰富了APEC流行病学数据,为指导临床APEC菌株的鉴定和防控提供科学依据。     

福建省龙岩市禽致病性大肠杆菌的血清型、毒力因子及耐药研究

本研究对2015年分离自福建省龙岩市的139株禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)的血清型、毒力因子分布及耐药性等进行检测,并对血清型与耐药性、毒力因子分布和耐药性之间的相关性进行分析,以期为APEC的防控提供参考。对139株分离菌株的血清型检测结果表明,O1血清型(11株)、O2血清型(14株)和O78血清型(14株)占全部菌株的28%;对分离菌株毒力基因检测结果表明,4%和7.1%的菌株检测到papC基因和vat基因,14.3%和19.3%的菌株检测到aat A基因和cva/cvi基因。而iuc D(82%)、tsh(59%)、iss(55%)和irp2(44.6%)基因在分离菌株中具有较高的检出率;药敏实验结果表明,分离株存在多重耐药性,99%以上分离菌株对红霉素、克林霉素和利福平耐受,86%的分离菌株对10种以上抗生素耐受,57.3%的菌株对13种药物都耐受;对血清型、耐药性与致病性之间的分析结果表明,分离的O1、O2和O78血清型的菌株,其中50%的菌株是含有5种以上毒力基因的强毒株,且在分离的含有5种以上毒力基因的强毒株中,50%的菌株对13种抗生素耐受,90%的菌株对10种以上药物耐受。     

山东省部分地区禽源致病性大肠杆菌的血清流行病学调查与耐药性检测

为调查山东省禽源致病性大肠杆菌流行的血清型及耐药性,从山东部分地区的45家养禽场分离到致病性大肠杆菌96株,应用微量平板凝集试验进行了血清型鉴定,共鉴定出18种血清型,其中优势血清型6种,分别为O78、O2、O15、O18、O143、O88,占定型致病性菌株的64％。抗菌药物敏感性试验发现,96株大肠杆菌对20种药物有不同程度的耐药性。75％以上的菌株对氨苄青霉素、阿莫西林、土霉素等5种抗菌药耐药,50％以上的菌株对卡那霉素、多西环素、环丙沙星等7种抗菌药表现为耐药;所有分离株存在多重耐药现象,75％的受检菌对9种或9种以上的被测药物耐药。结果表明,O78、O2、O15、O18、O143、O886种血清型是山东省部分地区近年来禽源致病性大肠杆菌的优势血清型,且禽源致病性大肠杆菌的耐药现象严重,有必要加强耐药性检测,以指导兽医临床合理使用抗菌药物。     

宠物源大肠杆菌的血清型和毒力基因及耐药性调查

为研究宠物源致病性大肠杆菌(Escherichia coli)的血清型、毒力基因和耐药性之间的相关性,本研究由健康和患病犬、猫直肠拭子样品中分离177株E.coli,并采用玻片凝集法鉴定其血清型,结果显示分离株中定型菌株135株,分别属于20个不同的血清型,其中O1、O2和O8为主要的流行血清型。PCR方法检测11种毒力相关基因,并采用琼脂稀释法测定分离菌株对14种抗菌药的敏感性,结果表明3个血清型的菌株拥有相似的耐药表型,但毒力基因谱不同。62%的分离菌株携带fimH基因,并且毒力基因组合iroN+hlyF、iroN+fimH和traT+sitA比较流行。55%的O1血清型携带fimH基因,并且多数耐受四环素、多西环素、头孢噻吩和庆大霉素;20.8%的O2血清型菌株携带traT和sitA基因;50%的O8血清型携带traT和fimH基因。3个血清型分离菌株多数对安普霉素和阿米卡星敏感。     

上海地区猪源大肠杆菌血清型及其毒力因子分布调查

对上海地区分离的199株猪源大肠杆菌分离株进行血清型鉴定和毒力因子检测,使用大肠杆菌标准抗O因子血清进行玻片凝集试验;采用普通和多重PCR方法,对分离株进行STa、STb、LT、Stx2e等4种肠毒素和K88、K99、987P、F18、F41等5种黏附素检测。结果:199株猪源大肠杆菌分离株有110株鉴定出血清型,占检测菌株的55.28%,覆盖了30种血清型,优势血清型为O8、O45、O64、O78、O138、O157、O163、O7+O8,占定型菌株的60%。共有32株大肠杆菌检测到毒力因子,阳性率为16.08%,检测出9种毒力因子。其中有21株单独检测到肠毒素,占65.63%,STa和STb+LT阳性的菌株分别为14和4;6株单独检测到黏附素,3株菌株K99阳性;5株同时检测到肠毒素和黏附素。在32株毒力基因阳性的大肠杆菌中,有15株血清型定型,覆盖7种血清型,其中O138、O7+O8与肠毒素STa相关,O8、O45与STb+LT相关。研究表明,上海地区猪源大肠杆菌分离株优势血清型至少覆盖了包括O8、O45、O64、O78、O138、O163等在内的8种血清型;大肠杆菌分离株以产肠毒素为主,主要毒力因子包括黏附素K99和肠毒素STa、STb+LT等。     

鸭源致病性大肠杆菌的血清型鉴定及其相关毒力基因分析

自规模化养鸭场患典型大肠杆菌败血症雏鸭分离的282株致病性大肠杆菌（E.coli）中鉴定出210株（包含37种血清型）,其中O93、O78、O92、O76占43.8%（92/210）为优势血清型,O46、O32＆O93混合型、O60＆O93混合型为首次从鸭群中分离到。应用PCR结合核酸序列测定对210株致病性E.coli（鸭大肠杆菌病分离株）和28株自健康雏鸭泄殖腔拭子分离的E.coli（临床健康鸭大肠杆菌分离株）进行包括强毒力岛（HPI）中的鼠疫菌素受体基因（fyuA）和铁调节蛋白基因（irp2）、Ⅰ型菌毛必需蛋白基因（fimC）、P型菌毛结构基因（papA）和血清耐受基因（iss）检测,结果表明：fyuAi、rp2、fimC、papA和iss基因在鸭大肠杆菌病分离株的携带率分别为41.0%、43.3%、92.9%、97.6%和96.7%,在临床健康鸭大肠杆菌分离株的携带率分别为21.4%、25.0%、92.9%、100%和92.9%,患病鸭和临床健康鸭大肠杆菌分离株iss、fimC和papA携带率差异不显著（P〉0.05）,但papA的携带率均显著高于其他宿主（鸡、猪和人）源E.coli;HPI毒力岛在鸭源E.coli中分布较广,其携带率表现为鸭大肠杆菌病分离株极显著高于临床健康鸭大肠杆菌分离株。HPI毒力岛的携带率与菌株的致病性呈明显的正相关,与O78等特定的血清型有一定的关系。鸭大肠杆菌病分离株有37.6%（79/210）同时携带fyuAi、rp2、fimCi、ss和papA基因,极显著高于健康鸭大肠杆菌分离株的14.3%（4/28）（P〈0.01）。     

动物性食品源大肠杆菌O血清型鉴定及其K88菌毛基因检测

本研究对河北省冀东地区农贸市场和超市采集的生猪肉、生鸡蛋和生羊肉等分离得到的20株大肠杆菌进行大肠杆菌血清型鉴定;并检测不同血清型大肠杆菌的K88菌毛基因。采用常规方法进行大肠杆菌的O血清型鉴定,用PCR方法检测K88菌毛基因。分离鉴定的20株大肠杆菌有7种血清型,包括O38、O78、O88、O11、O107、O91、O9,其中O38、O78为优势血清型菌,均占分离菌株的25%(5/20)。在分离的动物性食品源大肠杆菌中有30%(6/20)的菌株K88菌毛基因扩增呈阳性。结果表明,O78、O38为冀东地区动物性食品源大肠杆菌常见血清型,30%(6/20)的菌株K88菌毛基因扩增阳性。     

禽优势血清型大肠杆菌部分相关毒力基因的检测

为研究禽大肠杆菌的致病性及相关生物特性,试验对湖北省各地方养殖场送检的病料,通过分离培养及生化鉴定,分离得到232株禽大肠杆菌。18个O因子血清鉴定结果显示,优势血清型为O_(20)(19)、O_(78)(27),这两种血清型菌株合计46株,占血清型定型菌株的25.99%(未定型菌株为55株)。对优势血清型禽大肠杆菌菌株进行毒力基因检测,结果表明fimH、iroD、iucD、estA和ibeA基因携带率分别为87.88%、57.58%、48.49%、36.37%、0%。研究结果为湖北地区大肠杆菌防控和疫苗的研制提供数据支撑,并为阐明大肠杆菌的致病机理奠定基础。     

陕西省部分禽源性大肠杆菌的外膜蛋白型

从陕西省部分优势血清型的禽源性大肠杆菌中提取外膜蛋白 (outer membrane protein,OMP) ,用 SDS- PAGE进行 OMP分型。 18株菌共产生了 3种 OMP型 ,其中 4株 O1菌株 ,4株 O2菌株 ,4株 O78菌株和 3株 O89菌株各属2个 OMP型 (OMP- 1,2型 ) ;3株 O75菌株属 3个 OMP型 (OMP- 1,2 ,3型 )。结果表明 ,陕西省分离的优势血清型禽源大肠杆菌具有多样性的 OMP型 ,且多种血清型间具有共同的 OMP型。     

产ESBLs禽源大肠杆菌毒力因子的调查与分析

为了获得产ESBLs和非产ESBLs菌株中毒力因子的携带情况,分析产ESBLs耐药菌株的毒力特性,为防治此类细菌性疾病提供依据。本试验采用CLSI标准方法和PCR方法分别检测青岛地区249株禽源大肠杆菌菌株的ESBLs和毒力基因。结果是83.13%的菌株产ESBLs;24种毒力基因均有检出;iutA、iroN、iss、iucA、sfa、fyuA、vat等7种毒力基因在产ESBLs菌株与非产ESBLs菌株中的检出率差异均有统计学意义。表明携带毒力因子的产ESBLs大肠杆菌菌株正在青岛地区流行和传播;毒力因子和耐药性之间具有一定相关关系,iutA、iroN、iss在产ESBLs禽源大肠杆菌中更加流行,而iucA、sfa、fyuA、vat在产ESBLs菌株中的流行率显著低于非产ESBLs菌株。     

鸭致病性大肠杆菌的分离鉴定及其生物学特性分析

鸭致病性大肠杆菌病是危害养鸭业的最为重要的细菌性传染病之一。本研究分离鉴定了65株鸭致病性大肠杆菌,并对其O血清型、耐药谱以及毒力相关基因进行了检测。结果表明：大肠杆菌O78,O2和O1为主要流行血清型,各占分离株的75％、11％和5％。对15种常规抗菌素或药物的药敏试验结果表明：100％的分离株对利福平和红霉素耐药;94％以上的分离株对头孢噻吩等10种抗菌素或药物耐受;70％以上的分离株对氯霉素、卡那霉素、庆大霉素、壮观霉素和头孢噻肟敏感。对14种可能的大肠杆菌毒力相关基因的检测结果表明：ompA、pfs和luxS三种基因高度保守,在分离菌株中的检出率为100％;iss、iuCD、tsh、fimC、cvaC和iroC基因的检出率达到72％以上,为重要的鸭致病性大肠杆菌毒力相关基因。     

引发禽类疾病的大肠杆菌进化机制需要重新界定

英国动物卫生研究所的科研人员对2株O78血清型禽致病性大肠杆菌(APEC)多位点序列类型(ST)-23菌株χ7122和IMT2155进行了序列测定,与一株O78血清型人源ST23产肠毒素大肠杆菌(ETEC)的序列进行了比较。遗传进化分析显示,与APECO1相比,APECO78菌株与人源ST23ETEC的遗传关系更近,这表明基于肠外或导致腹泻等对大肠杆菌致病类型进行的分型与菌株的遗传进化情况并不相符。APECST23菌株的附件基因组在O1血清型基因组毒力岛和保留毒力相关位点上保守性非常有限。为进一步了解基因组的多样性,     

江苏及周边地区鸭致病性大肠杆菌血清型、毒力因子及耐药研究

本研究旨在明确江苏及周边地区鸭禽致病性大肠杆菌（avian pathogenic Escherichia coli,APEC）的血清型、毒力基因分布和耐药性之间的相关性,以期为APEC的防控提供依据。从江苏省及周边养鸭场分离了191株APEC,并对其中21株（每个养殖场选取1株）的O抗原血清型、毒力基因分布和耐药性进行检测。对21株APEC的血清型检测结果表明,O65血清型12株,占全部菌株的57.14%,O5、O28、O42、O87、O93、O138、O147血清型均为1株,其他血清型2株;毒力基因检测结果表明,5个毒力基因有较高的分布率,其中fimA基因的阳性率为100%,ECs3737、ECs3703、tsh和irp2基因的阳性率分别为90.5%、85.7%、57.1%和42.9%,含有5个毒力基因的菌株共有6株（28.57%）;药敏试验结果表明,21株APEC均存在多重耐药性,100%的分离菌株对恩诺沙星、强力霉素、万古霉素和红霉素耐药,85.71%的分离株对10种以上抗生素耐药,14.29%的菌株对21种药物都耐药;对血清型、毒力基因分布和耐药性之间的关系分析表明,含有4种以上毒力基因的菌株有13株,其中9株是O65血清型。在13株含有4种以上毒力基因的菌株中,耐15种药物以上的有9株（69.23%）,耐20种以上药物的有3株（23.08%）,表明含有4种以上毒力基因的菌株多重耐药现象严重。研究表明,江苏及周边地区鸭源大肠杆菌血清型复杂,携带多种毒力基因,耐药性严重。     

羊源大肠杆菌血清型鉴定、毒力基因检测及耐药性分析

为分析内蒙古扎兰屯地区羊源大肠杆菌血清型分布、毒力基因及耐药性流行情况,采集患羊鼻腔拭子150份,分离大肠杆菌,并采用O血清型玻板凝集试验、PCR法和K-B药敏纸片法对分离的大肠杆菌致病菌株进行血清型、毒力基因及耐药性检测。结果显示, 45株大肠杆菌致病菌株分属10种血清型,以O111、O127、 O38为流行的优势血清型,分别占致病菌株的26.7%、22.2%和17.8%;分离菌株毒力基因irp2、fyuA、hlyA、hlyE、Ler、eaeA、Ehly检出率在33.3%以上,其他毒力基因检出率在4.4%～14.3%之间;分离菌株对氨苄西林、阿莫西林、新霉素9种药物耐药率在53.3%以上,对其他药物的耐药率在13.3%～26.7%之间。研究表明,内蒙古扎兰屯地区羊源大肠杆菌血清型复杂,携带多种毒力基因,耐药性严重。     

江苏省部分地区鹅源致病性大肠杆菌的分离、鉴定和耐药性分析

从江苏盐城、高邮等地区临诊上具有典型大肠杆菌病病变的病、死白鹅中分离到大肠杆菌99株,通过玻板凝集和试管凝集试验,除8株未能定型、3株自凝外,测定出88个分离株的血清型,这些分离株覆盖了34个血清型,其中以O107、O9这两个血清型为主,占定型菌株的34%(30/88),为我国禽源大肠杆菌的常见血清型。同时将这些分离株进行了15种抗菌药物的敏感试验,结果显示:99株分离株无多黏菌素耐药性,除1株对丁胺卡那耐药,2株中度敏感,其它均对丁胺卡那敏感,同时所有菌株均对多黏菌素有不同程度的敏感,可指导临床用药。     

禽源致病性大肠杆菌的耐药性和毒力基因研究

为了解广东省佛山市禽源致病性大肠杆菌抗生素敏感性及其毒力因子携带情况,采集疑似禽大肠杆菌患病禽的肝脏和肺脏病料,用于禽源致病性大肠杆菌的分离培养、形态学观察、生化鉴定,并运用药敏片检测菌株对13种抗菌药的体外敏感性,采用PCR方法调查了9种毒力因子携带情况。结果显示:108株分离株的生化特性基本一致;所有菌株均具有5种以上的药物耐受性,95%以上对阿莫西林、氯霉素和头孢氨苄耐受,56.48%以上菌株对所检测的12种抗菌药耐受;分离株pap C和vat基因的检出率最低分别为2.78%和5.56%,分布率最高的基因为iuc D(74.07%)、iss(62.96%)、tsh(56.48%)和hly F(55.56%);耐药性和毒力之间的分析结果表明,25%的菌株是含有5种以上毒力基因的强毒株,强毒株中66.67%的菌株对12种抗菌药耐受。     

致狐狸肺炎大肠杆菌血清鉴定与毒力基因检测

为了确定狐狸肺炎源致病性大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)流行血清型与毒力基因的携带情况并分析其相关性,2016—2017年采集河北省部分地区患肺炎死亡的狐狸的肺脏、心血等组织142份中分离到了105株E.coli,且RT-PCR检测犬瘟热病毒为阴性,人工感染小鼠致病性试验结果显示105株分离菌株中77株为致病性E.coli。采用玻片凝集试验和PCR方法分别检测77株致病性E.coli血清型和毒力基因,结果显示:77株致病性E.coli有9种血清型,其中以O1、O8、O78、O12为流行的优势致病血清型,77株致病性E.coli携带14种不同毒力基因,以irp2、fyuA、papC、fimC、iucD^a、colv、hlyF、ompT 8种毒力基因检出率较高,在32.5%～98.7%之间,其余毒力基因检出率较低。狐狸肺炎源致病性E.coli的优势血清型携带的毒力基因较多,至少携带9种毒力基因,流行的优势血清型与毒力基因之间具有一定的相关性。狐狸肺炎源E.coli流行血清型代表株TS(O1)1、QH(O8)2、QH(O78)3、TS(O12)4均对狐狸很强的致病性。本试验为狐狸肺炎源致病性E.coli防控提供了参考依据。     

鸡源致病性大肠杆菌血清型鉴定及耐药性分析

为了了解山东、河北和河南等省部分地区养殖场鸡源致病性大肠杆菌的血清型及耐药性,试验采用细菌分离和生化鉴定方法对鸡大肠杆菌进行分离和鉴定,通过动物试验确定分离大肠杆菌的致病性,应用血清学方法和药敏试验对致病性大肠杆菌的血清型及耐药性进行研究。结果表明:分离鉴定的119株大肠杆菌中致病性菌株有110株,其中92株致病性菌株能够定型,分别属于15个血清型,有5株出现交叉凝集,O14、O35、O1、O2、O78、O88为优势血清型;分离鉴定的致病性大肠杆菌对环丙沙星、头孢噻肟、头孢哌酮等最敏感,对林可霉素、头孢克肟、卡那霉素、庆大霉素、红霉素的耐药率达60%以上。说明分离的致病性大肠杆菌血清型存在复杂性,对大部分临床常用药物产生了不同程度的耐药。     

河北禽源致病性大肠杆菌耐药性、毒力基因及超广谱β-内酰胺酶分析

以83株鸡源大肠杆菌河北省分离株为研究对象,通过药敏试验和PCR方法测定其毒力基因及超广谱β-内酰胺酶(Extended-spectrumβ-lactamase,ESBLs)基因的分布。药敏试验结果显示,83株大肠杆菌对头孢菌素药物耐药严重,其中青霉素最高,为100%,头孢拉定为77.1%,头孢曲松钠为61.4%,头孢噻肟为60.2%;PCR结果显示,69株(83.1%)产β-内酰胺酶,其中blaCTX、blaOXA、blaTEM、blaCMY和blaSHV的阳性率依次为70%、25%、17%、6%和0,说明河北地区致病性大肠杆菌产ESBLs主要为blaCTX、blaOXA,且有28株同时携带两种以上基因;毒力基因检测结果显示,83株鸡源大肠杆菌毒力基因阳性率由高到低为iro N(54株,65.06%)、iutA(51株,61.45%)、iss(37株,44.58%)、hly T(28株,33.73%)和omp T(9株,10.84%),iro N、iutA的阳性率均大于60%,说明二者是河北禽源致病性大肠杆菌致病力的关键所在;有17株未检测到所测毒力基因的存在,但临床也表现为败血症,可能涉及其他毒力基因,需进一步探讨。     

临沂市鸡源致病性大肠杆菌的优势血清型监测及其致病性试验

为了查清我市禽大肠杆菌的血清型及其致病性,对我市不同区域的23个规模化养鸡场及60个养鸡户的412份疑似大肠杆菌病病例进行了细菌分离,并对其进行了生化试验、致病性试验、血清学鉴定。结果:(1)412份病料中分离出了362株大肠杆菌,分离率为87.9%;⑵不同区域的鸡场流行的血清型有较大差异,在362个分离株中,除了27株未能定型、12株自凝外,共鉴定出323个分离株的O型血清型,占分离株的89.2%,这些定型菌株覆盖了36个血清型;(3)优势血清型为O1、O78、O18、O11、O88、O24,这6种血清型共占定型菌株的56.3%;⑷6种优势血清型均具有致病性,其中O1、O78、O18、O11、O24为高致病性菌株,O88为中致病性菌株。