不同培养条件对油茶根际解磷菌6-Y-09溶磷效果的影响

研究了不同碳源(葡萄糖、果糖、可溶性淀粉、蔗糖、麦芽糖和乳糖)、氮源(硝酸钾、硫酸铵、尿素和硝酸铵)、C/N(40∶1、20∶1、8∶1)、p H值(5.0、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0)及温度(24、26、28、30、32、34、36℃)对油茶根际解磷菌6-Y-09溶磷能力的影响。结果表明:以葡萄糖为唯一碳源时解磷菌6-Y-09表现出最强的解磷效果,溶磷量达201.51 mg/L;以尿素为唯一氮源时,解磷菌6-Y-09表现出最强的解磷效果,溶磷量达215.43 mg/L;解磷菌6-Y-09最佳C/N为20∶1,最佳p H值为7.0~7.5;另外,解磷菌6-Y-09在28~30℃时表现出最强的解磷效果。     

甘蔗根际土壤解磷细菌的筛选及培养条件优化

利用平板溶磷圈法和钼锑抗比色法,从甘蔗根际土壤筛选出2株溶磷能力较强的解磷细菌(N1-1-3和H4-3-1),并通过单因素试验和多因素正交试验对其进行培养条件优化。结果表明,N1-1-3菌株以乳糖为碳源、氯化铵为氮源、培养温度30℃、初始pH为6.5为最佳培养条件,溶磷量为190.57 mg/L;H4-3-1菌株以葡萄糖为碳源、硝酸钾为氮源、培养温度30℃、初始pH为7.5为最佳培养条件,溶磷量为167.82 mg/L。由于N1-1-3和H4-3-1解磷菌株溶磷能力较强,可作为盆栽试验或田间试验的应用材料。     

不同碳氮源对解磷菌K_3溶磷效果的影响

以磷酸盐生长培养基作为液体培养基,研究了不同碳源(可溶性淀粉、蔗糖、麦芽糖、乳糖、D-半乳糖、果糖和葡萄糖)、氮源(硫酸铵、尿素、硝酸铵和硝酸钾)及C/N(40∶1、20∶1和8∶1)对解磷菌K3溶解磷酸三钙的影响。结果表明:以葡萄糖为唯一碳源时解磷菌K3表现出最强的解磷效果,溶磷量达653.00μg.mL-1;可溶性淀粉为碳源时的解磷效果最差,溶磷量仅为4.83μg.mL-1。以NO3-为唯一氮源时,解磷菌K3的溶磷量仅为14.3μg.mL-1;酰胺态氮源时其溶磷量增加到460.0μg.mL-1;NH4+是解磷菌K3的最佳氮源,其解磷量为单一NO3-源的37倍。K3的溶磷量随着培养基中C/N的减小而增加,最佳C/N为8∶1。表明添加可溶性磷抑制了解磷菌K3的溶磷能力。     

盐碱化土壤中1株耐盐解磷放线菌的生物学特性

采用平板法进行菌种初筛和生物学特性研究,经筛选纯化得到1株高效解磷菌F1312,对该菌株的生物学特性在碳源、氮源、温度、p H值等方面进行了初步研究,并采用L9(34)正交试验设计对发酵条件进行了初步探讨。结果表明:经筛选所得的菌株F1312初步判断为放线菌;对F1312进行生物学测定,该菌株在所供4种碳源、氮源、p H值、温度条件下均能生长,其最适碳源为麦芽糖,最适氮源为酵母浸膏粉,最适p H值为7,最适温度为30℃;在发酵条件的优化组合试验中,F1312的最适解磷条件为:p H值=7,温度30℃,碳氮比20∶1,转速150 r/min。     

蜡状芽孢杆菌CLY07菌株的解有机磷特性研究

通过改良的NBRIP培养基,研究从南方红豆杉根际分离筛选得到的解有机磷蜡状芽孢杆菌CLY07的解磷能力,同时探究培养基中卵磷脂添加量、碳源、氮源、碳氮比及环境条件(培养基p H、温度、装液量及盐度等)对该菌株解磷能力的影响。结果表明:蜡状芽孢杆菌CLY07的解磷效果在改良NBRIP培养基中明显优于蒙金娜有机磷培养基。改良NBRIP培养基以葡萄糖为碳源,硫酸铵为氮源,碳氮比为60∶1,卵磷脂添加量为0.20 g,在其余组分不变条件下,该菌株显示出较高的解磷能力。该菌株最佳的解磷环境条件为培养基p H 7.0,温度30℃,不含Na Cl,装液量为1/5。研究显示与蒙金娜有机磷培养基相比,改良的NBRIP培养基在一定程度上更适合于蜡状芽孢杆菌CLY07解磷特性的研究。此外,培养环境能够影响蜡状芽孢杆菌CLY07的解磷能力。     

油茶根际溶磷菌3-Y-08的筛选与鉴定

采用传统的微生物分离培养法,对油茶根际溶磷菌进行分离,筛选出6株溶磷细菌.利用透明圈法对油茶根际土壤中具有溶磷能力的细菌进行初筛;采用钼锑抗比色法测定发酵液的可溶性磷含量,对解磷菌株进行复筛,得出菌株3-Y-08的溶磷活性最强.根据进行菌落形态特征、生理生化特征、16S rDNA序列和系统发育分析等研究,初步鉴定菌株3-Y-08为巨大芽孢杆菌.     

一株苹果内生枯草芽孢杆菌BS10的发酵条件优化研究

以苹果内生枯草芽孢杆菌BS10为试验菌株进行发酵培养基的优化,通过单因素试验选出最佳的碳源和氮源,通过正交试验筛选出最佳C/N比,对p H值、发酵温度和接种量进行了研究。结果表明,碳源选用麦芽糊精,氮源选择豆饼粉,初始p H值7.5,温度33℃、接种量为4%为最佳发酵条件,发酵活菌数为1.03×1010cfu/m L,比原始配方提高了1.94倍。     

1株解磷菌株鉴定及影响其解磷能力因素

从盐碱土壤中筛选到1株解磷菌株,通过形态观察、分子遗传和进化树分析对菌株进行了鉴定;用钼锑抗比色法测定了不同碳源、氮源和初始pH对菌株解磷能力的影响。结果发现:菌株属于链霉菌属(Streptomyces)。用葡萄糖和(NH4)2SO4作为碳源和氮源,最高解磷量分别为326.5、341.1 mg·L^-1,发酵液的pH最低值分别为4.64和4.59。pH不同的条件下,当以水为对照组时,解磷菌的最高解磷能力随着培养基初始pH增加而显著增加,其中,初始pH为9时,菌株的最大解磷量最高。综上,解磷菌培养基最适宜的碳源为葡糖糖、氮源为(NH4)2SO4。     

枯草芽孢杆菌HL-1 解磷发酵条件的优化

通过液体培养的方法研究了解磷枯草芽孢杆菌HL-1在培养168 h内溶磷能力、活菌数及培养介质pH值的动态变化,并分别以培养基初始pH值、碳氮源种类及最佳碳源浓度为变量,设置单因素试验,探究不同培养条件对供试菌株溶磷能力的影响。结果表明院HL-1的溶磷能力与培养液的pH值之间呈极显著的负相关,其初始pH值为5.0,以10.0g/L的葡萄糖为碳源,硫酸铵为氮源的培养条件下显示出最高的溶磷活性,培养168h后的溶磷量为105.82 mg/L。试结果反映出微生物的溶磷能力受到培养环境中诸多因子的影响,优化各个因子的组合,可以在实验室条件下提高微生物的解磷效果,同时可为生物菌剂制备工艺的开发提供理论参考。     

盐碱地中溶磷真菌的筛选及培养条件优化

为缓解板结土壤中由于不溶性磷酸盐的积累过多对土壤造成的板结问题,从东北长期板结土壤中筛选出多株具有溶磷能力的溶磷真菌。通过解磷圈测量及钼蓝比色法对分别以磷酸钙、磷酸铝及磷酸铁为主的培养物中可溶性磷含量进行测定,获得了1株溶磷能力较大的菌株P10,其对磷酸钙、磷酸铝及磷酸铁的分解能力分别为250,13,31μg/m L,经分子生物学鉴定,该菌株为具疣蓝状菌(Vorte plave gljivice)。该菌的最佳碳源、氮源、p H及底物磷酸钙用量分别为蔗糖、大豆粉、p H 6.0及10 g/kg,优化后,可溶性磷含量达378μg/m L。     

玉米根际溶磷菌Bucillus megaterium XS2的筛选鉴定与溶磷特性分析

为了充分挖掘土壤"磷库"资源,减少化学磷肥的施用量,减轻磷肥施用导致的农业面源污染问题,以PVK培养基为分离培养基从玉米根际土壤中分离到1株溶磷菌XS2,结合菌落形态特征、生理生化试验和16S r DNA方法对其进行分类鉴定;利用L25(53)正交设计试验,从碳源、氮源及p H对菌株XS2溶磷培养条件进行优化;利用优化后的PVK培养基测定了菌株XS2对多种难溶性磷源的溶解特点;采用高效液相色谱法分析了菌株XS2发酵液中有机酸的变化,对其溶磷机制进行初步分析。结果表明:溶磷菌株XS2为巨大芽孢杆菌(Bucillus megaterium)。正交试验结果表明:在以葡萄糖为碳源,硫酸铵为氮源,p H 5条件下溶磷量最高,为401.33 mg/L;菌株XS2对Ca3(PO4)2、Al3(PO4)2、Fe PO4和磷矿粉均有较好的溶解能力;发酵液中含有草酸、苹果酸、柠檬酸、乳酸、乙酸、琥珀酸和几种未知酸,其中有机酸的种类和含量随培养时间的变化而不同,柠檬酸、乳酸、乙酸和草酸可能是影响菌株溶磷的重要有机酸,试验获得了1株溶解难溶性磷的巨大芽孢杆菌XS2,它能够将多种难溶性磷转化为植物可利用的有效磷,从而增加土壤中的有效磷含量,提高作物产量,为从源头上解决磷肥施用导致的农业面源污染问题提供材料。     

盐碱化草坪土壤耐盐解磷真菌的筛选及解磷能力研究

采集草坪根际盐碱化土壤进行菌种筛选,并研究培养条件对菌株解磷效果的影响。试验结果表明,真菌菌株FL0908发酵液中的有效磷浓度为310.23 mg/L,真菌解磷圈直径与菌落直径比值(D/d)达到1.96。菌株FL0908在所供4种碳源条件下均能生长,不同碳源生长差异显著,最适碳源为葡萄糖,而在乳糖培养基上生长最差;对于所供4种氮源,在酵母浸膏上生长过于迅速,在亚硝酸钠条件下几乎不生长,最适氮源为酵母浸膏,硝酸钾次之;对于所供4种温度,真菌均可生长,最适温度为30℃;在所供的4种pH值条件下可正常生长,最适pH值为6。对于试验中发酵液条件的优化组合,最适解磷条件为:温度35℃,pH值7,碳氮比35∶1,转速130 r/min。     

磷矿区高效解磷菌的分离鉴定及其碱性磷酸酶的克隆表达

为了从磷矿区土壤分离高效溶磷菌,为开发施用于矿区复垦的高效微生物解磷菌肥提供试验基础,利用磷酸钙培养平板筛选磷矿区土壤中的解磷菌,采用PCR法扩增16S rDNA序列进行鉴定,探讨不同碳源、氮源、起始pH值和温度下菌株的生长情况,另外还进一步克隆表达该菌株的碱性磷酸酶。结果显示,经筛选得到1株高活性的解磷菌,16S rDNA鉴定其为成团泛生菌(Pantoea agglomerans);该菌株最佳碳源为甘油、氮源为NH4Cl类无机氮,起始pH值为9,培养温度为33℃;在最适培养条件下,有效溶磷量达到了287.48 mg/L;成功克隆了该菌株中的碱性磷酸酶基因,并在大肠杆菌中实现了异源表达,重组菌裂解液活性为原始菌株裂解液的32.77倍。分离得到的菌株及重组表达的碱性磷酸酶在矿区复垦、农业种植和工业上均具有广泛的应用前景。     

絮凝剂产生菌的筛选及产生絮凝剂的影响因素研究

从活性污泥中分离出 6 3株菌株 ,培养、筛选得到具有絮凝活性的菌株 17株 ,其中 2株絮凝活性较高。研究了这 2株菌在不同培养时间的生长情况及其絮凝活性等 ,得出絮凝活性与菌生长量呈正相关关系。通过改变培养基的碳源、氮源、无机盐等因素 ,得出 2株絮凝活性较高的菌株产生絮凝剂的最佳条件 :真菌 IV- 2 1,以蔗糖为碳源 ,蛋白胨为氮源 ,Na Cl为无机盐 ,p H为 6 .0 ,培养温度为 30℃时 ,絮凝效果最好 ;细菌 I- 9,以葡萄糖为碳源 ,尿素为氮源 ,K2 HPO4 为无机盐 ,培养基初始 p H偏碱性 ,培养温度为 30℃时 ,絮凝效果最好。     

兼具抗病促生活性的溶磷聚磷菌XF1的分离、鉴定与特性分析

磷矿资源日渐枯竭和土壤无效磷素的活化是资源学和肥料学急需解决的重要问题。为了活化土壤磷库资源,解决磷肥大量使用所产生的面源污染问题,采用鉴别培养基从玉米根际土壤中筛选具有防病促生活性的溶磷聚磷菌;采用正交试验,从碳源、氮源及p H 3个方面对溶磷培养条件进行优化。理化和分子鉴定结果显示,分离获得的溶磷菌为Bucillus aryabhattai,命名为XF1;正交试验优化溶磷最佳条件是葡萄糖为碳源,硫酸铵为氮源,p H 5条件下溶磷量最高,达到891.6 mg/L;菌株XF1对Ca_3(PO_4)_2、Al3(PO_4)_2、FePO_4和磷矿粉均有溶解能力;镜检证明菌株XF1内含有poly-P,聚磷率达到21.93%;菌株XF1可产铁载体,抑制人参根腐、返魂草黑斑、禾谷镰孢、串珠镰孢生长;可产吲哚乙酸(IAA),在含色氨酸的培养液中,IAA的浓度达到86.31 mg/L;包裹菌株XF1的玉米种子生长平均株高2.67 cm,平均根长6.5 cm,平均须根数13个,均高于对照。菌株XF1具有较好的溶磷聚磷能力,兼具抗病促生活性,在微生物肥料的开发方面有潜在应用价值。     

影响甘蔗内生成团泛菌XD20生长和促生特性的因子分析

[目的]探讨环境因子对甘蔗内生成团泛菌(Pantoea agglomerans)XD20生长及促生特性的影响,为该菌的进一步开发应用提供参考.[方法]检测不同pH、氯化钠浓度、重金属、化学试剂及铁离子浓度、碳源、氨基酸及碳氮比对菌株XD20生长、嗜铁性能和溶磷性能的影响,并采用正交设计对碳源、氮源、氯化钠浓度进行优化筛选.[结果]菌株XD20适宜生长的pH在7左右,超过4%的氯化钠浓度会抑制其生长;菌株XD20具有一定的重金属耐受性,可在Mn7+、Cr6+浓度为5~400 mg/L范围内生长;以MSA作为基础培养基,当铁离子浓度为0~10μmol/L时,该菌的相对嗜铁量随铁离子浓度升高而升高,当铁离子浓度超过10μmol/L时,其相对嗜铁量含量呈降低趋势.以柠檬酸为碳源、脯氨酸为氮源、碳氮比为3:1时,有利于菌株XD20嗜铁素的分泌.不同碳源对菌株生长和溶磷性能的影响结果表明,有利于该菌生长的碳源排序为甘油>葡萄糖>柠檬酸>蔗糖>苹果酸;正交试验结果表明,供试菌株XD20生长量最大的碳源、氮源和氯化钠浓度分别为0.1%柠檬酸、0.5 g/L硫酸铵和4%氯化钠;影响供试菌溶磷能力的因子顺序为钠离子浓度>碳源>氮源,菌株XD20溶磷量最大时的培养条件与其生长量最大时的培养条件一致.[结论]甘蔗内生固氮菌株XD20具有较好的环境耐受性,铁离子浓度会影响其生长量和嗜铁量.以柠檬酸为碳源、脯氨酸为氮源、碳氮比为3:1时,有利于菌株XD20嗜铁素的分泌.0.1%柠檬酸、0.5 g/L硫酸铵和4%氯化钠的培养条件对其生长和溶磷特性的效果最好.     

一株巨大芽孢杆菌J1的生胞培养及优化

以巨大芽孢杆菌J1为材料,利用溶磷圈法测定了菌株的解磷能力,优化了菌株的最佳发酵条件、最适培养基。结果表明,此菌株溶磷效果明显;此菌株生长的最适培养时间为28 h,最适接种量为6.7%,最适pH值为8.5;最佳碳源为玉米粉与葡萄糖的复合碳源,最佳氮源为大豆粉与硫酸铵的复合氮源。摇瓶培养的接种量为6.7%,pH值为8.5,250 mL三角瓶中最适装液体积为30 mL,培养温度为30℃,培养时间为28 h,最适宜转速为180 r/min的摇瓶培养条件下,巨大芽孢杆菌活菌数各影响因素最佳组合为:玉米粉20 g/L,葡萄糖5 g/L,大豆粉7.5 g/L,硫酸铵0.33 g/L,各因子对巨大芽孢杆菌活菌数的影响由大到小依次为:硫酸铵浓度玉米粉浓度葡萄糖浓度大豆粉浓度。     

解磷菌株黑曲霉PSFM发酵条件优化研究

【目的】利用液体培养法探究不同碳源、氮源、无机盐和微量元素浓度以及发酵时间、温度、初始pH、转速、接种量等条件对解磷菌解磷特性的影响,获得解磷菌的最佳发酵培养基和培养条件。【方法】采用单因素及正交试验法,对一株分离自土壤的解磷真菌黑曲霉（Aspergillus niger）PSFM菌株的基础发酵培养基和发酵条件（发酵时间0～10 d、温度20～40℃、初始pH值3.0～11.0、接种量1%～11%、转速120～300 rpm）进行优化,测定其发酵液吸光度值,以解磷量的高低作为评价发酵培养基及发酵条件优劣的指标。【结果】分别在无机磷和有机磷液体培养基、简单培养基（SP）、NBRIY、NBRIP、NBRIYP培养基中培养6 d后,以无机磷液体培养基的PSFM菌株解磷能力最高,解磷量为526.42 mg/L。在12种不同碳源培养基中,PSFM均能正常生长,其解磷能力由大到小依次为：木糖＞葡萄糖＞乳糖＞蔗糖＞麦芽糖＞半乳糖＞山梨糖＞甘露糖＞果糖＞可溶性淀粉＞鼠李糖＞甘油。以硝酸钠、尿素、酵母浸膏、氯化铵、硝酸镁、硝酸铵、色氨酸、乙酸铵、牛肉浸膏、胰-蛋白胨、甘氨酸、酪氨酸、丙氨酸和精氨酸为氮源时,硫酸铵为唯一氮源的解磷效果最好,菌株PSFM发酵液中有效磷含量最高（990.31 mg/L）。菌株PSFM的解磷能力均随着最佳培养基中NaCl、KCl、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O和MnSO4·7H2O浓度的增加呈先提高后降低趋势,当其浓度分别为0.03%、0.01%、0.03%、0.001%、0.001%时,菌株PSFM的解磷能力均最强。在不同发酵条件下,以发酵6 d、温度28℃、初始pH 6.0、5%接种量、转速300 rpm的PSFM解磷能力最强,解磷量分别为599.24、528.23、603.69、530.57和731.48 mg/L。【结论】最适合PSFM菌株的基础发酵培养基为无机磷液体培养基,碳源为1.0%木糖,氮源为0.10%硫酸铵,最佳无机盐配方为：NaCl 0.10 g/L、KCl 0.70 g/L、MgSO4·7H2O 0.70 g/L、FeSO4·7H2O 0.01 g/L、MnSO4·7H2O 0.01 g/L;最佳培养条件为：温度28℃,初始pH 6.0,转速180 rpm,接种量5％,发酵时间为6 d。     

解磷菌株黑曲霉PSFM发酵条件优化研究

【目的】利用液体培养法探究不同碳源、氮源、无机盐和微量元素浓度以及发酵时间、温度、初始pH、转速、接种量等条件对解磷菌解磷特性的影响,获得解磷菌的最佳发酵培养基和培养条件。【方法】采用单因素及正交试验法,对一株分离自土壤的解磷真菌黑曲霉（Aspergillus niger）PSFM菌株的基础发酵培养基和发酵条件（发酵时间0～10d、温度20～40℃、初始pH值3.0～11.0、接种量1%～11%、转速120～300rpm）进行优化,测定其发酵液吸光度值,以解磷量的高低作为评价发酵培养基及发酵条件优劣的指标。【结果】分别在无机磷和有机磷液体培养基、简单培养基（SP）、NBRIY、NBRIP、NBRIYP培养基中培养6d后,以无机磷液体培养基的PSFM菌株解磷能力最高,解磷量为526.42mg/L。在12种不同碳源培养基中,PSFM均能正常生长,其解磷能力由大到小依次为：木糖〉葡萄糖〉乳糖〉蔗糖〉麦芽糖〉半乳糖〉山梨糖〉甘露糖〉果糖〉可溶性淀粉〉鼠李糖〉甘油。以硝酸钠、尿素、酵母浸膏、氯化铵、硝酸镁、硝酸铵、色氨酸、乙酸铵、牛肉浸膏、胰-蛋白胨、甘氨酸、酪氨酸、丙氨酸和精氨酸为氮源时,硫酸铵为唯一氮源的解磷效果最好,菌株PSFM发酵液中有效磷含量最高（990.31mg/L）。菌株PSFM的解磷能力均随着最佳培养基中NaCl、KCl、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O和MnSO4·7H2O浓度的增加呈先提高后降低趋势,当其浓度分别为0.03%、0.01%、0.03%、0.001%、0.001%时,菌株PSFM的解磷能力均最强。在不同发酵条件下,以发酵6d、温度28℃、初始pH6.0、5%接种量、转速300rpm的PSFM解磷能力最强,解磷量分别为599.24、528.23、603.69、530.57和731.48mg/L。【结论】最适合PSFM菌株的基础发酵培养基为无机磷液体培养基,碳源为1.0%木糖,氮源为0.10%硫酸铵,最佳无机盐配方为：NaCl0.10g/L、KCl0.70g/L、MgSO·47H2O 0.70g/L、FeSO4·7H2O 0.01g/L、MnSO·47H2O 0.01g/L;最佳培养条件为：温度28℃,初始pH6.0,转速180rpm,接种量5%,发酵时间为6d。     

新疆土壤中解磷菌的分离纯化与鉴定

从新疆昌吉市室外土壤中分离纯化出多种细菌,筛选出30株具有解磷效果的菌株。经PVK培养基平板初筛后发现,其中6株菌在平板上的透明溶磷圈较大,分别为A12,A14,A16,B1,B5,C5;经摇瓶复筛后发现,菌株B5的解磷效果最好,溶磷量为519.66 mg/L;16S r DNA序列测定鉴定B5为假单胞菌,并进一步经过生理生化测试,发现当初始pH值为7、盐浓度为0.5%、温度为27℃时,该菌株的溶磷量最高。试验结果表明,该菌株在以磷酸钙为磷源时解磷效果最好,溶磷量为523.45 mg/L;磷源为磷酸铁时溶磷效果较差,溶磷量为6.38 mg/L;该菌株对有机磷的溶磷量为24.85 mg/L,解磷菌株的溶磷效果较好。研究结果可为今后研究运用溶磷微生物来提高磷肥的利用率、进一步改善土壤环境奠定基础。