菊迪基氏菌生防菌解淀粉芽孢杆菌D2WM抑菌物质防治效果评价及药剂筛选

采用单因素试验方法优化生防菌解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)D2WM抑菌物质的提取效率,并对抑菌物质粗提取的储藏特性展开研究,同时利用市售药剂对菊迪基氏菌(Dickeya chrysanthemi)进行室内药剂筛选,对比生防菌剂与市售药剂的防治效果。结果表明,通过单因素优化提取生防菌解淀粉芽孢杆菌D2WM中的抑菌物质,发现最佳提取溶剂为正丁醇,有机溶剂与发酵液体积比为1∶7、提取时间为0.5 h;抑菌物质具有良好的热稳定性和紫外光照稳定性,在处理温度达100℃,紫外光照射12 h时,抑菌效果均没有显著性下降,抑菌圈仍有23 mm;当抑菌物质储存180 d后,抑菌圈大小仍有16.33 mm。生防菌解淀粉芽孢杆菌D2WM粗提物对黑腐果胶杆菌、胡萝卜软腐果胶杆菌、菊迪基氏菌、丁香假单胞菌和黄单胞菌等植物病原菌均有良好的抑菌效果。测定的19种药剂中对菊迪基氏菌有良好抑制作用的仅有新田秀才6号、中生菌素、噻霉酮和氯溴异氰尿酸4种;其中,以生防菌解淀粉芽孢杆菌D2WM粗提物作为对照药剂,发现其抑菌效果高于噻霉酮和氯溴异氰尿酸。     

马铃薯茄镰孢菌干腐病生防菌株的筛选、鉴定及其防效

以茄镰孢菌(Fusarium solani)为指示菌,利用平板对峙法从120株内生细菌中筛选出30株抑菌率高于70.00%的菌株,其中265ZY1、265ZY3和265XY6对茄镰孢菌具有较强的拮抗能力,其抑菌率分别为72.20%、73.00%和72.80%,按1∶1∶1复配的菌肥对马铃薯干腐病防效达79.75%,表明265ZY1、265ZY3和265XY6具有良好的抑菌防病作用,具有开发为马铃薯干腐病生防菌剂的潜力;经形态观察及16S rDNA基因序列分析,将265ZY1鉴定为死谷芽孢杆菌(Bacillus vallismortis),265ZY3鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),265XY6鉴定为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)。     

防治软腐病的魔芋内生细菌的筛选与鉴定

本研究采用相似生境分离方法分离魔芋内生细菌后经室内平板初筛、温室复筛试验筛选获得对魔芋软腐病具有良好防治效果的生防菌。研究共分离出127株内生细菌,经过多重筛选后获得3株抑菌效果较好的生防菌(M3,M2,1-7)。经培养性状、菌落形态观察、生理生化特性分析(Biolog系统)和16S r DNA序列分析等方法,将M3,M2,1-7分别鉴定为:枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)和成团泛生菌(Pantoea agglomerans)。这是将寄主植物内生细菌作为生防菌防治该病害的首次报道。     

水稻纹枯病生防菌的筛选与鉴定

从辽宁省、吉林省和黑龙江省多个地区采集水稻田土样。采用3点平板对峙培养法、菌丝生长速率法和菌核萌发抑制法,综合筛选对水稻纹枯病菌有生防作用的生防菌。结果表明:从土壤中分离获得的211株生防菌中筛选出抑菌活性较高的1株真菌JLF6-2和3株细菌JLN3-2、SYN6-3及JLN3-8。4株生防菌株抑菌圈分别为38.30mm、18.30mm、33.30mm和22.50mm;菌丝生长抑制率分别为77.30%、63.29%、80.35%和100%;菌核萌发抑制率分别为86.67%、83.33%、80.00%和61.35%。经离体试验于接种水稻纹枯病菌前后不同时间喷施供试生防菌发酵滤液,结果对水稻纹枯病均有较高的防治效果。在保护处理中,生防菌株的防效为59.65%~94.92%,其中JLN3-2在24h的防效为94.92%;在治疗处理中,生防菌株的防效为59.32%~74.58%,其中JLN3-2在8h的防效为74.58%。经形态特征、生理生化特性和分子生物学鉴定结果表明:菌株JLF6-2为比莱青霉(Penicillium bilaiae);JLN3-2为纺锤形赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus fusiformis);SYN6-3为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens);JLN3-8为侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)。     

生防菌HFW217的鉴定及其对棉花枯萎病的防治效果

目的 研究生防菌HFW217的种类及其对棉花枯萎病的防治效果,为其生物防治提供材料。方法 采用16 SrDNA、rpoB基因序列和生理生化方法,对HFW217进行鉴定,通过温室和田间药效试验,测定HFW217对棉花枯萎病的防效。结果 菌株HFW217为革兰氏阳性菌、呈短杆状、有芽孢,其菌体的形态呈短杆状,具有一定的耐盐碱性,16S rDNA和rpoB基因序列与解淀粉芽孢杆菌Bacillus amloliquefaciens具有较高的同源性,经鉴定该菌是解淀粉芽孢杆菌B. amloliquefaciens。温室和田间对棉花枯萎病防治效果分别达到77.62%和73.18%,防效明显高于多菌灵。结论 菌株HFW217是解淀粉芽孢杆菌,该菌对棉花枯萎病的预防和治疗作用显著。     

解淀粉芽孢杆菌产酶特性及其抑制禾谷镰刀菌性能研究

[目的]深入了解生防菌发挥作用的方式。[方法]对从土壤中分离的解淀粉芽孢杆菌的产酶活性和生防菌功能展开研究，采用产生透明圈的方法检测解淀粉芽孢杆菌生产纤维素酶的功能，用牛津杯法检测解淀粉芽孢杆菌对植物致病菌禾谷镰刀菌的抑制作用。[结果]解淀粉芽孢杆菌能够产生分解纤维素的纤维素酶，纤维素酶活性可以达到26.86 U/mL,并且它能够抑制禾谷镰刀菌的生长，而且生长代谢产物浓度越浓抑制效果越明显，未经稀释的菌液抑菌效价可达到465 mm/mL。[结论]该研究为解淀粉芽孢杆菌的实际应用提供了理论基础和实践指导。     

生防菌解淀粉芽孢杆菌B15发酵液抗菌谱及安全性测试

解淀粉芽孢杆菌B15是来源于酿酒葡萄表面的生防菌,通过研究该菌株发酵液对23种植物病原菌的抑制效果,并以水稻为试验对象进行安全性测试.结果表明,生防菌解淀粉芽孢杆菌B15的发酵稀释液(浓度为10 CFU/mL)对23种植物病原菌的抑制率均在50％以上,对香菇烂筒病、苹果腐烂病、棉花炭疽病、花生褐斑病和黄瓜枯萎病5种病原真菌的抑制率在90％以上,计算可得EC50的范围为0.000～11.704个/mL,表明解淀粉芽孢杆菌B15具有广谱抗菌性.通过室内田间安全测试试验,验证了该菌株对作物的安全性,从而为该菌株生物农药的开发与应用提供数据支持.     

解淀粉芽孢杆菌对畜禽肠道有害菌、有益菌抑菌性能的研究初报

为了评估一株解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens,菌株编号YNAU 6172)对畜禽肠道主要有害菌(大肠杆菌K88、大肠杆菌K99、猪霍乱沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌)及肠道有益菌(罗伊氏乳酸杆菌、嗜热双歧杆菌)的抑制作用,采用牛津杯体外抑菌试验法,以抑菌圈直径值判定解淀粉芽孢杆菌对以上6个指示菌的抑制作用。结果显示:解淀粉芽孢杆菌对4个肠道有害菌的抑制作用均判定为不敏感,对肠道有益菌嗜热双歧杆菌判定也为不敏感,但对肠道有益菌罗伊氏乳酸杆菌的抑制作用为敏感。说明解淀粉芽孢杆菌作为饲用微生态制剂开发需进一步筛选和验证。     

香草兰生防细菌的筛选、分子鉴定及其抑菌机制的初步研究

通过平板对峙法从香草兰根际微生物中筛选出对香草兰根(茎)腐病菌(Fusarium oxysporum)、香草兰疫病菌(Phytophthora nicotianae)和香草兰细菌性软腐病菌(Erwinia carotovora)均有良好抑制效果的生防菌10株。通过16S r DNA序列比对及系统发育树分析,其中7株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus.amyloliquefaciens),2株为枯草芽孢杆菌(B.subtils),1株为甲基营养型芽孢杆菌(B.methylotrophicus)。提取脂肽类化合物进行抑菌分析,发现10株生防菌脂肽类提取物对香草兰根(茎)腐病菌和香草兰疫病菌均有良好的抑制效果,有4株的脂肽类粗提物对香草兰细菌性软腐病菌有强烈的抑制活性。对其中2个菌株脂肽类粗提物进行MALDI-TOF/TOF-MS检测,发现菌株VX2R11产生表面活性素(Surfactin)和伊枯草素A(Iturin A)2种脂肽类化合物,菌株VX2S02仅产生伊枯草素A,推测产生伊枯草素A是菌株VX2R11和VX2S02拮抗香草兰根(茎)腐病菌和疫病菌重要机制;产生表面活性素是菌株VX2R11拮抗香草兰细菌性软腐病菌的重要机制。     

棉花苗期根腐类病害生防细菌的筛选与鉴定

【目的】从新疆棉田中筛选对棉花苗期根腐类病害具有较强拮抗作用的生防细菌,为棉花苗期根腐类病害生物防治奠定基础。【方法】采用平板对峙法,测定实验室保存的多株生防细菌的抑菌能力,通过田间试验,验证其防治棉花苗期根腐类病害的效果。对生防细菌的16S rDNA基因序列与gyrA基因序列分别测序,通过BLAST在线比对,利用MEGA 7.0构建系统发育树,确定该生防菌株的分类地位。【结果】生防细菌TWt34、HWt34对棉花苗期根腐类病害(立枯病和红腐病)防治效果分别为76.74%和78.43%;在平板对峙对立枯丝核菌(Rhizoctonia solani) 和拟轮枝镰孢霉(Fusarium verticilliodes)的抑菌宽度分别为8.29和6.60 mm,具有较强拮抗作用,对尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)的抑菌宽度分别为7.70 和13.15 mm,也具有明显抑制作用。16S rDNA与gyrA基因序列鉴定表明生防菌菌株TWt34、HWt34同属于莫海威芽孢杆菌(Bacillus mojavensis)。【结论】筛选出的2株莫海威芽孢杆菌TWt34、HWt34对棉花4种主要病害的病原菌具有较强的抑制作用,能够有效防治2种棉花苗期根腐类病害(立枯病和红腐病)。     

几种生防细菌对尖孢镰刀菌的抑菌效果及其相互间包容性生长的快速检测

为明确几种生防细菌对茄子枯萎病菌和香蕉枯萎病菌的抑菌效果,采用平板对峙法进行抑菌试验。结果表明,JK2015菌对茄子枯萎病菌和香蕉枯萎病菌的抑菌效果最为明显,抑菌率分别为52.54%和70.45%;而巨大芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌对2种病原真菌均无明显的抑菌效果,抑菌率只有3.48%～7.25%;对2种病原菌的抑菌效果均为:JK2015菌胶冻样芽孢杆菌JK02菌JK01菌枯草芽孢杆菌解淀粉芽孢杆菌。同时,为了明确生防菌之间的生长是否相互影响,采用平板划线共培养,探索出一种快速检测方法,对它们之间包容性做出快速初筛,结果表明,JK01和JK02不能与枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌包容生长,枯草芽孢杆菌不能与胶冻样芽孢杆菌包容生长,而其余菌株间都可以包容生长。这些结果可为微生物混合菌剂及茄子和香蕉专用生物肥料的开发奠定基础。     

解淀粉芽孢杆菌1841的生物相容性和其发酵清液的理化性质测定

【目的】解淀粉芽孢杆菌1841是重要的生防菌,本试验初步摸索了其生物相容性和理化性质,为其制剂产品开发、应用和保存提供一定的理论基础。【方法】采用直接混合法和含药平板法测定助剂和杀菌剂对解淀粉芽孢杆菌1841菌体的影响;采用平皿法测定温度、紫外线、pH和金属离子对解淀粉芽孢杆菌1841发酵清液抑菌活性的影响。【结果】解淀粉芽孢杆菌1841对稻梨孢、核盘菌、灰霉菌、玉米尾孢和立枯丝核菌具有良好的抑菌活性,抑制率可达80%以上;填料硅藻土和膨润土、润湿剂W-2001等、分散剂木质素磺酸钠等以及壳聚糖与解淀粉芽孢杆菌1841相容性较好,可作为其制剂产品开发的助剂;大部分杀菌剂在中等浓度(100～1000 mg/L)或者低浓度(100 mg/L)下,与解淀粉芽孢杆菌1841都具有良好的相容性,可以考虑田间混用。井冈霉素、嘧菌酯、吡唑醚菌酯和咯菌腈可以与解淀粉芽孢杆菌1841开发生物-化学复配的农药产品;发酵清液经过80℃以下、紫外线90 min以下处理,pH3.0～9.0以及K~+、Na~+、Ca~(2+)和Mg~(2+)处理后,其抑菌活性与不处理相当,在其他处理下对其活性具有显著影响,但其相对抑菌活性依然较高。【结论】解淀粉芽孢杆菌1841具有广谱抑菌活性,很好的生物相容性和稳定性,具有开发成微生物农药的潜力。     

不同植物促生细菌对玉米生长的影响及其生长素分泌能力研究

本研究采用生防菌处理玉米种子后测定玉米鲜重、干重、株高等农艺性状指标,获得7株对玉米具有促生作用的生防细菌;利用Salkowski比色液对7株菌进行吲哚乙酸(IAA)分泌能力的定性及定量测定。结果显示:7株菌能不同程度的提高玉米鲜重、干重、株高等农艺性状指标;其中菌株解淀粉芽孢杆菌C3处理后,玉米鲜重、干重、株高等农艺性状指标提升最高,较对照分别提升了185%,215%,66%;7株菌均可分泌IAA,其中菌株解淀粉芽孢杆菌C3生长素分泌能力最强,为251.37 mg/m L。该研究是国内将解淀粉芽孢杆菌作为玉米促生细菌的首次报道。     

烟草根际细菌YF-6的分离筛选与生测

针对四川广元普安植烟田雨季烟草赤星病易发的现象，采集汉中新集、广元普安雨后烟草田地里的成熟期健壮植烟的根际土壤11份，对土壤样本进行细菌分离，得到81种形态、243株根际细菌；初筛选择出9株拮抗烟草赤星病菌的细菌，复筛选出1株拮抗效果最好的细菌YF-6；经鉴定，YF-6为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens；生测试验表明，YF-6 10倍稀释培养液（9×10⁶ mL^-1）可防止烟草赤星病菌侵染延安1号温室烟苗，且对烟苗有促进生长的作用。     

解淀粉芽孢杆菌在山茶叶中的定殖及对山茶灰斑病的防效

【目的】解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)是从山茶叶片内部分离得到的1株内生拮抗菌株,通过研究该菌株在山茶叶片表面和内部的定殖规律及其对山茶灰斑病的田间防治效果,为新型生防制剂的开发及山茶灰斑病的生物防治提供理论依据。【方法】采用抗生素标记法,结合比较标记菌株和非标记菌株的形态特征、拮抗能力、防病效果,筛选出最佳标记菌株;分别采用喷施和针刺法研究接种浓度、病原菌对生防菌在山茶叶表面及内部定殖动态的影响,并测定生防菌对山茶灰斑病的田间防治效果。【结果】从含500μg/mL链霉素抗性平板上得到最佳标记菌株,标记菌株与未标记菌株在形态特征、拮抗能力、防病效果方面均无明显差异。定殖试验表明,解淀粉芽孢杆菌能够高效定殖于山茶叶表面及内部,且叶表面的定殖较叶片内部更为高效、持久,其定殖量与接种浓度呈正相关,并在一定时间内维持相当数量,病原菌仅与叶表面定殖密切相关,与生防菌的叶内定殖无关。田间防治试验表明,生防菌解淀粉芽孢杆菌菌悬液对山茶灰斑病有显著生防效果,预先接种生防菌菌悬液后再接种病原菌的生防效果最好,防效为75.35%,先接种病原菌后喷施解淀粉芽孢杆菌菌悬液处理的防效为73.89%,同时接种生防菌菌悬液和病原菌时的防效最低,为72.95%。【结论】生防菌株B.amyloliquefaciens能够有效定殖于山茶叶片表面及内部,且对山茶灰斑病具有显著的生物防治效果。     

解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)D2WM发酵培养基优化及对蔬菜种子萌发的影响

为提高一株抗蔬菜软腐病菌菊迪基氏菌(Dickeya chrysanthemi)的生防菌解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens) D2WM的抑菌效果,首先对解淀粉芽孢杆菌D2WM发酵培养基进行单因素试验,确定最适碳源、氮源和无机盐,再通过Box-Behnken法设计3因素3水平试验确定最优发酵条件,在此基础上以种子萌发率、根长、芽长、鲜质量为指标,分析解淀粉芽孢杆菌D2WM发酵液对8种蔬菜种子萌发的影响。结果表明,解淀粉芽孢杆菌D2WM最优培养基配方为蔗糖28.25 g·L~(-1)、黄豆粉6.46 g·L~(-1)、七水硫酸镁0.04 g·L~(-1),优化后对菊迪基氏菌的抑菌率平均达到99.98%,比优化前提高了25.51%;该菌株可使娃娃菜、紫菜薹、榨菜、快菜、白菜、油麦菜、萝卜、莴苣的发芽率分别提高了21.7、16.7、1.7、6.7、10、10、1.7、13.3个百分点;除快菜和莴苣外,其他6种蔬菜的鲜质量都有所增加,但对莴苣的根系有促进作用;该菌株对娃娃菜的根长,以及对快菜、白菜和莴苣的芽长有抑制作用。     

烘烤期烟叶霉烂病生防菌株的筛选与应用

【目的】探明烘烤期烟叶霉烂病生防功能菌株的种类及其防治效果，为高效、安全防治烟叶霉烂病，提高烟叶安全性提供理论依据。【方法】采用共培养方法，筛选能够明显抑制烟叶霉烂病病原菌米根霉生长的生防菌，制备不同浓度梯度的菌剂，研究其对烘烤期烟叶霉烂病的防治效果。【结果】从15株生防菌株中筛选出4株对米根霉有拮抗作用的生防菌，其抑菌圈直径(抑菌效果)为0.94～3.03 cm,表现为YWF-17-0001(解淀粉芽孢杆菌)>YWF-17-0011(枯草芽孢杆菌)>YWF-17-0005(胶质芽孢杆菌)>YWF-17-0006(解淀粉芽孢杆菌)。其中，菌株YWF-17-0001抑菌效果最好，抑菌圈直径达3.03 cm。菌株YWF-17-0001室内喷施浓度为10⁵ cfu/mL时对烟叶霉烂病的防治效果为95.14%,浓度为10⁷ cfu/mL时的防治效果达100%;烟叶烘烤前用YWF-17-0001菌液1.5×10⁵～1.5×10⁶ cfu/mL喷施或浸泡烟柄，对烟叶霉烂病的防治效果在98%以上...     

芹菜叶斑病病原菌的分离鉴定、生物学特性及其生防菌筛选

为了明确甘肃省定西市芹菜叶斑病的病原,开展了病原菌分离、形态学特征和分子生物学鉴定、生物学特性研究,并初步筛选了该病原菌的生防菌。确定病原菌Q1为细极链格孢(Alternaria tenuissima),该菌菌丝体生长最适碳源和氮源分别为玉米粉和硝酸钾,最适pH为7.5,最适温度为25℃;该菌孢子萌发最适温度为25℃、最适pH为7;光照有利于菌丝体生长,但对孢子萌发无影响;菌丝体和孢子的致死温度均为55℃处理10min。采用对峙法测定了蜡样芽胞杆菌(4-2-1)、贝莱斯芽孢杆菌(F3A)、甲基营养型芽孢杆菌(9-2-1)、解淀粉芽孢杆菌(SL1)及荧光假单胞菌(YG)5种生防细菌菌株对芹菜叶斑病菌Q1的拮抗效果,结果表明这5株生防菌对Q1菌株均具有拮抗作用,其中解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的抑菌率最高,达到69.80%。首次明确了定西市芹菜叶斑病是细极链格孢(A.tenuissima)引起的,解淀粉芽孢杆菌(SL1)具有生防潜力,研究结果为深入开展芹菜链格孢叶斑类病害的生物防治提供了理论依据和技术支撑。     

洋葱伯克氏菌无细胞培养物的生防及促生活性研究

为了防止洋葱伯克氏菌在农业环境中对人类的危害,采用离心和过滤的方法获得洋葱伯克氏菌无细胞培养物,并研究其在平板上对植物病原真菌的拮抗作用和对水稻的促生作用。结果表明：洋葱伯克氏菌对植物病原真菌具有明显的拮抗作用,其中菌株R。、R。,、R。R~o．R：．、R。、R28的抑菌效果显著,在这7株菌中R。表现出对灰霉菌的强烈抑制作用和对稻瘟菌的较强抑制作用,并且表现出明显的促生作用。     

解淀粉芽孢杆菌B15产脂肽的分离鉴定及抑菌机理

从葡萄表皮分离获得1株对霉菌具有明显抑制作用的解淀粉芽孢杆菌B15,对其发酵液经过酸沉、Sephadex LH-20层析柱,对抑菌脂肽的特性进行研究。结果发现,该菌株产脂肽对葡萄灰霉病菌有较好的抑制效果,60~100℃处理或p H值为2~10的脂肽对灰霉病菌的抑菌活性几乎没有影响;脂肽有效最低抑菌浓度为0.017 mg/m L。经高效液相色谱法(HPLC)和质谱分析发现,解淀粉芽孢杆菌B15产脂肽主要活性成分为iturin A、fengycin。