新疆双峰驼抗血清中重链抗体的分离鉴定

【目的】初步探讨新疆双峰驼Camelus bactrianus免疫系统中缺失轻链的重链抗体(heavy chain antibody,HCAb)是否具有常规抗体的基本抗原结合功能。【方法】采用本实验室构建的丹毒丝菌表面蛋白A原核表达载体pGEX4T-1-spaA-N,进行诱导表达,纯化获得重组抗原GST-SpaA-N,免疫双峰驼制备抗血清,经Protein A和Protein G亲和层析从抗血清中分离重链抗体及常规抗体,Western blotting鉴定重链抗体的抗原结合特性,间接ELISA比较重链抗体与传统抗体的抗原结合活性。【结果】经过Protein A/G纯化得到了IgG2。对各组分进行分析初步表明重链抗体约占血清IgG的60%—80%。采用GST-SpaA-N免疫双峰驼可以诱导高滴度的IgG2型重链抗体,在5次免疫后,骆驼抗spaA-N特异的重链抗体IgG2多抗血清的效价为1﹕51200。Western blotting结果显示分离的多克隆重链抗体可特异结合SpaA天然抗原,且ELISA分析结果表明重链抗体与常规抗体具有相同的抗原结合活性。【结论】首次从双峰驼抗血清中成功分离获得具有与常规抗体相同生物学功能的多克隆重链抗体,提示重链抗体可能在骆驼免疫防御中发挥重要作用。     

新疆双峰驼纳米抗体噬菌体展示文库多样性的生物信息学分析

[目的]骆驼免疫系统中只存在重链抗体,其可变区VHH片段是最小的天然抗体片段.通过对双峰驼VHH基因进行序列分析,了解双峰驼VHH基因特征,分析VHH文库多样性组成.[方法]采用新疆双峰驼VHH特异引物扩增全部抗体基因片段,连接到M13噬菌粒载体上,与pⅢ蛋白融合表达在噬菌体表面,构建噬菌体展示文库.基因测序和菌落PCR方法,分析文库大小和阳性克隆插入率.NCBI-IgGBLAST工具对抗体序列进行IMGT编号命名,WebLogo工具分析抗体保守序列分布频率,MEGA6软件对VHH序列进行同源性比对和系统进化树构建.[结果]利用免疫的新疆双峰驼淋巴细胞,构建了库容量为1.4 ×109的VHH抗体噬菌体展示文库.对91个随机挑选的文库TG1单菌落进行PCR.结果表明该文库VHH阳性插入率为97;,DNA测序表明文库多样性为97.8;.对91个克隆DNA测序结果进一步分析表明,这些基因中除2个为常规VH抗体外,其余均为重链VHH抗体.根据抗体序列中的特征氨基酸分布,将91个抗体序列划分为7个亚群.[结论]构建的新疆双峰驼VHH文库多样性较好,生物信息学分析揭示出文库中多样性克隆的分布和特征,有助于新疆双峰驼纳米抗体噬菌体展示文库的进一步构建.     

骆驼重链抗体特异性多抗的制备及鉴定

目的:骆驼血清中除了常规抗体Ig G1,还存在两种天然缺失轻链的重链抗体Ig G2和Ig G3,其具有分子量小、稳定性强等优点,但由于缺乏有效的检测手段,使其研究和应用受到了一定的限制,因此制备针对骆驼重链抗体的多抗将具有一定应用前景。方法:本实验中,我们从骆驼抗凝血中分离骆驼血浆,经过Protein G/A Resin柱子对骆驼3种亚型抗体进行了分离和纯化。利用纯化的骆驼Ig G2对家兔进行3次免疫制备了针对骆驼重链抗体的多克隆抗体,并对其活性进行了鉴定。结果:SDS-PAGE凝胶电泳检测结果显示我们成功分离到了骆驼各亚型抗体。间接ELISA测定多抗效价为1:4 096,再通过间接ELISA和Western-blot方法测定多抗的特异性,结果显示制备的多克隆抗体与牛Ig G以及骆驼Ig G1无交叉反应,而与Ig G3抗体具有交叉反应性。结论:实验结果显示我们成功制备了骆驼重链抗体特异性多克隆抗体,将对骆驼抗体资源的开发、利用及对骆驼疾病的检测和研究提供有力支持。     

纳米硒、碘对鸡卵黄抗体产量的影响

本试验选取168只45周龄未接种大肠杆菌疫苗且体重及产蛋率相近的商品代尼克珊瑚粉产蛋鸡,采用均匀试验设计方法,设7个处理(包含1个基础对照组,1个疫苗对照组.除基础对照组外,其他各组均接种大肠杆菌疫苗,所用抗原为大肠杆菌为K88、K99、987p标准菌株),每个处理4个重复,每个重复6只鸡.研究了在日粮中添加纳米硒、碘对鸡蛋中抗猪大肠杆菌卵黄抗体产量的影响.结果表明:蛋鸡甘粮中添加纳米硒、碘能显著提高卵黄抗体产量(P＜0.05),且纳米硒起主要作用.纳米硒、碘添加量为2.12,4.00 mg/kg时,卵黄抗体浓度达到13.48 mg/mL,比基础对照组提高36.53％(P＜0.05),比疫苗对照组提高23.63％(P＜0.05).     

乌鳢免疫球蛋白M重链和免疫球蛋白轻链的克隆与特征分析

应用RACE-PCR方法克隆并鉴定了乌鳢免疫球蛋白M(i mmunoglobulin M,Ig M)重链(H)和免疫球蛋白轻链(L)全长cDNA。乌鳢IgH cDNA全长1 912个核苷酸(nt),包含1 797 nt的开放阅读框,编码598个氨基酸(aa)。IgH恒定区(CH)均包含1对保守的半胱氨酸残基形成链内二硫键,其中CH1区氨基末端存在保守的半胱氨酸残基与轻链形成链间二硫键,4个推测的N-糖基化位点(NXT和NXS)则分别位于CH1、CH2和CH4。序列比对发现乌鳢IgHCH1与CH2交界处氨基酸序列的插入使铰链区肽段较其他硬骨鱼IgH长,此外IgH CH4区羧基末端参与单体间聚合的半胱氨酸被赖氨酸替换,这反映乌鳢IgH分子结构的特异性。序列相似性比较显示乌鳢IgH与点带石斑鱼、黑鳍冰鱼、牙鲆、虹鳟的相似性依次为55%、50%、45%和36%,与斑马鱼类的相似性较低(为28%)。乌鳢IgL cDNA全长941 nt,包含729 nt的开放阅读框,编码242个aa。轻链可变区(VL)和恒定区(CL)均包含保守的半胱氨酸,形成链内和链间二硫键。序列比对分析表明乌鳢IgL与五条鰤和花狼IgL的相似性为78...     

磺胺二甲氧嘧啶免疫小鼠抗体重链可变区基因的克隆及序列分析

应用RT-PCR方法从磺胺二甲氧嘧啶免疫小鼠B细胞扩增和克隆抗SDM抗体VH基因。测序结果表明:抗SDM抗体VH基因为339 bp,编码113个氨基酸。用NCBI GenBank分析表明,抗SDM抗体VH基因符合小鼠抗体重链可变区特征,隶属于小鼠抗体重链SM7家族,由胚系基因VHSM7.a3.93-DSP2.9-JH1功能性重排形成。抗SDM抗体VH基因的克隆为抗SDM单链抗体的构建与表达奠定了基础。     

斜带石斑鱼IgZ重链基因的表达纯化和抗体制备

为获得斜带石斑鱼IgZ重链基因的多克隆抗体,成功构建了斜带石斑鱼免疫球蛋白IgZ重链重组蛋白表达质粒pQE30/IgZ,将其转化到大肠杆菌表达菌株M15中,确定了最佳诱导表达条件:IPTG 0.2 mmol/L,诱导温度30℃,诱导时间6h.所获得的IgZ重链重组蛋白经Ni-NTA亲和层析后,纯度达到85％以上;以纯化的IgZ重链重组蛋白为抗原免疫新西兰兔,制备出相应的多克隆抗体,经ELISA测定抗血清效价约为1:320 000.     

西伯利亚鲟免疫球蛋白M重链区mRNA的组织分布和细菌感染后的表达

根据GenBank登录的西伯利亚鲟Acipernser baerii免疫球蛋白M重链区mRNA(IgHM mRNA)设计引物,进行SYBR green实时定量。结果表明:鲟的脑、鳃、性腺、心脏、后肠、肝脏、肌肉、脾脏8种组织中,IgHM mRNA在脾脏中表达最高,在肝脏和心脏中表达较少,在脑、鳃、性腺、后肠、肌肉5种组织中几乎不表达;在水温22.6²4.5℃时,按100 g体质量注射0.1 mL菌液,给体质量为(260.2±37.8)g的西伯利亚鲟注射浓度为2.0×107CFU/mL的维氏气单胞菌Aeromonas veronii,注射后40 h鱼开始死亡,62 h后停止死亡,注射后直至62 h时,处理组脾脏IgHM mRNA表达量一直处于对照组水平,93 h时处理组脾脏IgHM mRNA显著升高(P<0.05),为93 h对照组含量的3.7倍,说明机体已经开始特异性免疫应答。     

SiO2/PVDF阳离子膜的微观形态、力学和热稳定性能研究

以掺混法合成了SiO2/PVDF阳离子膜.采用强度测定仪、扫描电子显微镜(SEM)、透射电子显微镜(TEM)、差示扫描量热法(DSC)研究了不同二氧化硅纳米颗粒添加量的SiO2/PVDF阳离子膜的微观形态、机械稳定性和热稳定性.结果表明:随着纳米SiO2颗粒质量分数的增加,SiO2/PVDF阳离子膜的拉伸强度和断裂伸张率先增后降,当SiO2颗粒质量分数为PVDF的1.5％时,拉伸强度(26.2343N)和断裂伸张率(9.76％)最大.SiO2/PVDF阳离子膜的热稳定性温度最高可达300℃,阳离子膜微观断面结构变得更加致密,表面无明显相分离.     

新疆虫草与冬虫夏草中甘露醇、多糖和氨基酸的含量比较研究

为开发利用新疆虫草的药用价值提供理论依据 ,并与不同产地的冬虫夏草的含量进行比对.采用高碘酸钠比色法测定D-甘露醇含量、苯酚-硫酸法测定多糖含量;应用氨基酸自动分析仪分析虫草的氨基酸类型和含量.结果表明:3个产地的冬虫夏草中D-甘露醇的含量为78.5～115.2 μg/g,多糖的含量为2.24～3.59;;新疆虫草中D-甘露醇的含量为120.3 mg /g,多糖的含量为3.32;.3种冬虫夏草和新疆虫草中均含有18种氨基酸.新疆虫草中含有较丰富的D-甘露醇、多糖和氨基酸,为综合评价新疆虫草内在质量和开发新疆虫草提供了科学依据.     

小菜蛾肌球蛋白重链部分cDNA序列克隆、表达概况及分析

肌肉肌球蛋白重链在生物运动过程中具有至关重要的作用,但在昆虫中此类基因极少被报道。首次克隆和分析小菜蛾肌球蛋白重链部分cDNA序列,GenBank登录号为FJ462712,其长408个碱基,推测编码135个氨基酸。同源分析表明:此多肽序列与凤蝶、家蚕、果蝇的同源性分别为95%,93%,82%。半定量RT-PCR研究表明:小菜蛾MHC基因在不同的生长发育阶段的表达皆不相同,在老熟幼虫和成虫中的表达量显著高于低龄幼虫和蛹。为进一步鉴定小菜蛾肌球蛋白重链的生理特征提供基因序列信息。     

新疆城乡居民收入差距地区比较与趋势分析

新疆14个地州市的城乡居民收入差距显著,并受经济发展水平、地理自然气候条件和文化传统的影响较大。南疆地州城乡居民的收入差距相对较大,而北疆地州市城乡收入差距较小。总体上,新疆各地州市城乡居民收入差距呈不断扩大态势,尤其是南疆4地州城乡居民收入差距较大。据灰色预测的结果显示,2015年阿克苏地区、克州地区、喀什地区以及和田地区的城乡居民的绝对差额将会持续拉大,分别达到10882元、12870元、9811元和12743元。     

伊宁市不同规模奶牛养殖场水和饲料及原料乳中重金属水平检测与分析

为保障伊宁市周边原料乳生产安全,同时为原料乳重金属污染模型数据库建立提供基础依据。在伊宁市周边不同规模养殖场采集农区水样、玉米秸秆、混合精料和原料奶,检测其重金属水平,分析其富集规律。在采集农区水样、玉米秸秆、混合精料和原料奶样品中发现铅、镉、汞和砷水平均未超过国家容许最高标准,且按食物链富集规律递增。伊宁市原料乳生产中各环节重金属水平均未超过国家标准,且大型养殖场样品中重金属水平远低于养殖小区和散养户。     

欧洲鳗鲡免疫球蛋白M重链基因的原核表达与不同组织中表达变化的定量分析

通过RT-PCR技术从欧鳗(Anguilla anguilla)脾脏总RNA中获得了编码成熟免疫球蛋白(Ig)重链的基因序列(GenBank accession No.GQ249838),该序列长1 686 bp,编码562个氨基酸残基,分子质量为62.2 ku.将该基因片段与pET-his载体连接构建原核表达载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达,其表达产物经SDS-PAGE和Western-blotting分析表明新增的66 ku蛋白条带与预期值相符,且能够与兔抗欧鳗IgM血清发生强烈的特异性反应,证实了欧鳗免疫球蛋白重链(IgH)基因能够在大肠杆菌中以包涵体形式高效表达;利用荧光定量PCR检测了Ig基因在欧鳗背肌注射山羊IgG前后不同组织的表达水平,结果显示欧鳗在免疫前后其肾脏与脾脏Ig基因的表达量均明显高于其它组织,在鳃、肌肉中的表达量也较高,而在肝脏、心脏中的表达量较低.此外,对同一组织免疫前后的Ig基因表达量比较发现,除肝脏外,其它组织Ig基因表达水平在免疫后均上升,在鳃和肌肉中达到显著水平,而在脾脏中达到极湿著水平.     

新疆土地资源可持续利用问题剖析及对策探讨

新疆土地资源丰富,发展潜力很大,发展优势很强,但也存在许多问题:绿洲面积小,利用结构不合理,耕地质量差,水土不平衡,利用程度低,退化严重,规划不完善等,根据新疆土地详查资料,基于土地资源利用的现状特点,主要剖析了新疆土地资源可持续利用的障碍因素,并在此基础上提出了实现土地资源可持续利用的主要对策.     

新疆农民专业合作社发展现状·存在的问题及对策探析

在阐述新疆农民专业合作社发展现状的基础上,剖析了新疆农民专业合作社发展中存在的问题,提出了促进新疆农民专业合作社健康发展的对策建议：一是加大对合作社的宣传和教育,提高农民的认知水平和合作意识;二是加强内部管理,完善经营管理机制;三是落实完善各项扶持政策;四是强化服务体系建设,促进合作社快速发展。     

欧李钙、铁、锌、硒含量测定分析及生态适应性观察

[目的]观察大欧李引种新疆昌吉州后其生态适应性及钙、铁、锌、硒等人体有益元素含量及变化,为欧李在新疆推广与利用提供基础理论数据支持.[方法]对大欧李生态适应性常规记录观察;利用美国VARIAN公司VITSTA-PRO光谱仪对欧李果实中的钙、铁、和锌含量进行测定;利用北分瑞利的AF-640原子荧光光谱仪对样品中硒含量进行测定.[结果]学院试验田成活率100;,次年成活率高达95;,榆泉现代农业示范中心当年成活率90;;两种果形钙、铁、锌、硒含量差异极显著,两种果形钙平均含量267.28 mg/kg,铁平均含量8.63 mg/kg,锌1.13 mg/kg,硒平均含量0.01 mg/kg.[结论]大欧李适应新疆昌吉州寒、旱、盐碱、瘠薄试验田,可正常生长发育,钙、铁、锌及硒含量较一般水果高几倍甚至十几倍.     

广东大宝山矿山下游地区稻田土壤的重金属污染状况的分析与评价

通过现场采样及室内测试，分析了广东大宝山地区稻田土壤的Cd、Zn、Pb和Cu的含量，运用单因子污染指数评价法和多因子污染指数评价法对大宝山矿山下游地区稻田土壤的污染状况进行评价。结果表明，大宝山矿山下游地区稻田土壤污染是以Cd和Cu为主的多金属复合污染，稻田土壤Cd、Zn、Ph和Cu的平均浓度分别为2．19、244．94、179．93mg·kg^-1和287．91mg·kg^-1，最大超标倍数分别为20．33、2．59、2．84和11．32。Cd、Zn、Pb和Cu的综合污染指数分别为15．07、2．03、2．07和8．98。相关分析结果表明，Cd、Zn、Pb和Cu主要来自酸件灌溉废水．     

渭北黄土高原苹果园土壤重金属空间分布及其累积性评价

通过对渭北黄土高原苹果园217个样点0～40cm土层土壤取样分析,采用地统计学和GIS相结合的方法,研究了苹果园土壤中Hg、Cd、Pb、As、Cr、Cu6种重金属的含量及其积累状况、空间结构及其分布特征,并根据绿色食品产地环境质量标准对苹果园土壤环境质量进行了评价。结果显示,渭北苹果园土壤中6种重金属已出现一定程度的累积,其累积程度依次为:Hg>Pb>Cd>As>Cu>Cr。各采样点Hg、Cd含量变异程度较大,变异系数在50%以上;而Pb、As、Cr、Cu各采样点含量差异较小,变异系数为19.10%～23.70%。6种重金属均表现为较强的空间相关性,其空间变异性主要由成土母质、气候、地形等结构性因素控制。其中随机因素对Cd的空间变异的影响程度相对较大,一定程度上消弱了结构性因素对Cd空间变异的主导作用,而Pb、Cr、Cu空间变异受随机因素的影响较弱,随机性因素对各重金属空间变异的影响程度依次为:Cd>As>Hg>Pb>Cr>Cu。重金属积累的单项评价指数均小于1,综合评价指数小于0.7,果园土壤环境质量完全满足绿色食品产地环境质量的要求,其中As的累积对绿色食品苹果生产可能有较大的潜在影响,应加以有效控制以防止其持续累积。     

广东沿海近江牡蛎重金属含量特征及其风险分析

根据1997—2010年对广东沿海近江牡蛎(Crassostrea rivularis)的监测结果,对近江牡蛎体重金属元素镉(Cd)、铜(Cu)、铅(Pb)、锌(Zn)的含量水平、空间分布和时间变化进行了分析讨论,并对近江牡蛎这一经济水产品种的食用安全性进行了风险评估。结果表明,近江牡蛎Cd、Cu、Pb、Zn的含量分别为(1.31±1.43)、(72.3±89.7)、(0.26±0.22)、(203±178)mg.kg-1,不同元素的含量与近江牡蛎对其累积能力有关。1997—2010年,广东沿海近江牡蛎体重金属Cu、Cd、Pb、Zn的含量总体呈下降趋势;空间分布特征为中部沿海重金属元素含量高于东部和西部沿海。风险分析结果显示,近江牡蛎体Pb、Cd的暴露量低于世界卫生组织/联合国粮食和农业组织(WHO/FAO)的食品添加剂联合专家委员会(JECFA)的推荐值,处于安全范围内。