南宁市肉牛的Y染色体遗传多样性分析

[目的]为了探究广西南宁市肉牛的父系遗传背景与遗传组成。[方法]利用PCR扩增、限制性酶酶切和生物信息学方法,对南宁屠宰场的73头肉牛Y染色体USP9Y基因的遗传多态性进行分析。[结果]发现73头公牛USP9Y基因的PCR产物具有多态性,2头牛显示471 bp带型,71头牛显示552 bp带型。在71个552 bp带型中,有28个可以被SspI酶切成2条带(338 bp和215 bp),表明这28头牛为Y3单倍型组(38.36%),而其余43个不能被SspI酶切,表明这43头牛为Y2单倍型组(58.90%)。仅有2头牛的PCR产物为471 bp,表明这2头牛为Y1单倍型组(2.74%)。屠宰牛群的单倍型多样度为0.5122±0.0309,表明屠宰牛群的Y染色体遗传多样度较高。[结论]南宁市屠宰牛群的来源比较复杂,有普通牛(Y1与Y2单倍型组)和瘤牛(Y3单倍型组)2个父系起源。     

关岭牛Y染色体遗传多样性与父系起源研究

[目的]探究关岭牛Y染色体遗传多样性及父系起源。[方法]采用PCR扩增、限制性酶切和生物信息学方法,分析关岭牛Y-SNP(USP9Y基因)和2个Y-STRs标记(INRA189和BM861)的遗传多样性。[结果]发现32头关岭牛USP9Y基因的PCR产物均为552bp,其中4头牛的552bp片段不能被SspI酶切开,属于普通牛Y2单倍型组,占0.125,其余28头牛的PCR产物均可被酶切成两条带(215bp和338bp),属于瘤牛Y3单倍型组,占0.875。2个Y-STRs标记INRA189和BM861在关岭牛品种均表现多态性(88/104bp和156/158bp)。结合Y-SNP与Y-STRs的分型结果,界定关岭牛有2种Y染色体单倍型Y2-104-158和Y3-88-156,其Y染色体单倍型多样度为0.2258±0.0882,表明关岭牛父系遗传多样性很低。[结论]关岭牛具有普通牛Y2和瘤牛Y3两种父系起源,其中瘤牛占明显优势。     

日本和牛Y染色体USP9Y基因多态性与父系起源研究

【目的】为了分析日本和牛Y染色体USP9Y基因遗传多态性与父系起源。【方法】利用PCR扩增与限制性酶酶切方法。【结果】对8头日本和牛纯种及19头和秦F1代杂种牛进行Y染色体USP9Y基因多态性及父系起源研究,结果表明:日本和牛与其杂种牛都具有USP9Y基因多态性,USP9Y基因的PCR产物均显示471bp和552bp两种带型,其中552bp带型不能被SspI酶酶切,则这2种带型对应Y1和Y2两种普通牛单倍型组,表明日本和牛含有Y1和Y2两个父系支系,有2个普通牛父系起源。日本和牛和杂种牛单倍型多样度分别为0.5714±0.0945和0.1988±0.1121,提示日本和牛具有较高的父系遗传多样性。【结论】日本和牛具有较高的父系遗传多样性及2个普通牛父系起源。     

柴达木黄牛Y染色体单倍型组构成及父系起源——基于USP9Y基因多态性的分析

为从分子水平上探究柴达木黄牛的父系遗传多样性、起源及群体遗传结构,对62头柴达木黄牛公牛进行Y染色体USP9Y基因多态性分析。结果表明:柴达木黄牛USP9Y基因的PCR产物显示471 bp和552 bp 2种带型,其中552 bp带型不能被Ssp I酶酶切,这2种带型对应Y1和Y2 2种普通牛Y染色体单倍型组,表明柴达木黄牛含有Y1和Y2 2个父系支系,有2个普通牛父系起源。单倍型多样度为0.3369,说明柴达木黄牛具有较低的父系遗传多样性。     

西藏牛Y染色体USP9Y基因与mtDNA D-loop区遗传多态性研究

本研究旨在探究西藏牛的Y染色体与mtDNA D-loop区的遗传多态性和起源。采用PCR扩增和限制性内切酶酶切的方法测定30头西藏牛Y染色体USP9Y基因的多态性;采用PCR扩增和测序技术测定30头西藏牛的mtDNAD-loop区序列,利用生物信息学的方法对西藏牛44条D-loop序列(其中14条从Gen Bank下载)进行遗传多态性分析。对30头西藏牛USP9Y基因的PCR产物进行电泳,共检测到471 bp和552 bp 2个片段,且552 bp片段不能被限制性内切酶Ssp I切开,说明西藏牛具有普通牛Y1和Y2 2种单倍型组,其频率分别为0.067和0.933。通过对44条西藏牛mtDNA D-loop全序列进行比对,发现本研究测定的30条西藏牛mtDNA D-loop全序列中,有8条为牦牛序列,说明西藏牛群体中有牦牛的基因渗入。对36条西藏牛mtDNA D-loop全序列进行分析,共检测到62个变异位点,界定了21个mtDNA单倍型,单倍型多样度为0.956 0,核苷酸多样度为0.006 4,表明西藏牛具有丰富的母系遗传多态性。系统发育树显示,西藏牛具有普通牛和瘤牛混合母系起源,且普通牛的单倍型在西藏牛群体中占绝对优势(95.24%)。西藏牛具有丰富的母系遗传多态性,由2个普通牛父系单倍型组构成,应归于普通牛一类,且群体中存在牦牛和瘤牛的基因渗入现象。     

金川牦牛和中国西门塔尔牛肉品质差异研究

[目的]为从分子水平探究隆林黄牛的遗传多样性及父系起源。[方法]利用PCR测序及生物信息方法,对20头隆林黄牛公牛的2个Y-SNPs标记(UTY-19和ZFY-10)进行多态性检测。[结果]结果显示,20头隆林黄牛中有14头为Y3单倍型组(70%),有6头牛为Y2单倍型组(30%),Y染色体单倍型多样度为0.4421±0.0875,表明隆林牛具有丰富的Y染色体遗传多样性。[结论]隆林黄牛具有瘤牛和普通牛2个父系起源,以瘤牛父系起源为主。     

隆林黄牛Y-SNPs遗传多样性与起源研究

[目的]为从分子水平探究隆林黄牛的遗传多样性及父系起源。[方法]利用PCR测序及生物信息方法,对20头隆林黄牛公牛的2个Y-SNPs标记(UTY-19和ZFY-10)进行多态性检测。[结果]结果显示,20头隆林黄牛中有14头为Y3单倍型组(70%),有6头牛为Y2单倍型组(30%),Y染色体单倍型多样度为0.4421±0.0875,表明隆林牛具有丰富的Y染色体遗传多样性。[结论]隆林黄牛具有瘤牛和普通牛2个父系起源,以瘤牛父系起源为主。     

延边牛Y染色体遗传多样性与父系起源研究

[目的]为了研究延边牛Y染色体遗传多样性以及父系起源。[方法]采用PCR扩增、直接测序和生物信息学方法,分析延边牛的2个Y-SNPs标记(UTY19和ZFY10)和2个Y-STRs标记(INRA189和BM861)的遗传多样性。[结果]Y-SNPs标记检测发现延边牛有Y1和Y2单倍型组,2个Y-STRs标记在延边牛品种检测发现只有INRA189表现多态性(98bp/102bp/104bp)。结合Y-SNPs与Y-STRs的分型结果,确定延边牛有3种Y染色体单倍型Y1-98-158、Y2-102-158和Y2-104-158,所占频率分别为0.031、0.938和0.031,其Y染色体单倍型多样度为0.1230±0.0777,表明延边牛父系遗传多样性很低,父系遗传稳定。[结论]延边牛为普通牛父系起源,其中Y2单倍型组占明显优势。     

文山牛Y染色体遗传多样性与父系起源研究

[目的] 探究云南文山牛群体Y染色体遗传结构与血统来源，以期为该黄牛品种的资源保护与利用提供科学依据。[方法] 本研究采用PCR扩增和生物信息学方法，对55头文山牛Y-SNPs（UTY19和ZFY10）和Y-STRs（INRA189和BM861）遗传多样性进行系统研究。[结果] 55头文山牛均属于瘤牛Y3单倍型组，结合Y-SNPs和Y-STRs分型结果，发现文山牛中存在Y3-88-156和Y3-90-156两种Y染色体单倍型，Y染色体单倍型多样度为0.1684±0.0636。[结论] 云南文山牛只有瘤牛父系起源，其遗传血统稳定，纯合度高。     

昭通牛Y-SNPs和Y-STRs遗传多样性和父系起源研究

[目的]从分子水平分析昭通牛的遗传多样性、群体遗传结构及父系起源。[方法]利用PCR产物直接测序和荧光微卫星分型方法对24头昭通牛2个Y-SNPs标记（UTY-19和ZFY-10）和2个Y-STRs标记（INRA189和BM861）进行遗传多态性检测。[结果]发现昭通牛有Y2-90-158和Y3-88-156两种单倍型（Y-SNPs-INRA189-BM861）,频率分别为29.17%和70.83%,表明昭通牛有普通牛和瘤牛两种父系起源。Y染色体单倍型多样度为0.4312±0.0812,说明昭通牛的遗传多样性较高。[结论]昭通牛以瘤牛Y3单倍型组为主,具有南方黄牛特征,与其地理分布和气候及形态特征相一致。     

荷斯坦牛GHR基因多态与产奶性状关联分析

本研究采用PIRA-PCR和RFLP方法检测了1 145头中国荷斯坦牛生长激素受体基因(GHR)外显子8的F279Y多态位点及其与产奶性状的关联性.关联分析结果表明该突变位点与305天产奶量(P<0.01)、乳脂率(P<0.05)和乳蛋白率(P<0.01)关联显著.Bonferroni t检验多重比较结果显示:基因型TT和AT在305天产奶量和乳脂率上差异显著(P<0.05);基因型TT和AT在乳蛋白率上差异极显著(P<0.01);基因型TT和AA在乳蛋白率上差异显著(P<0.05).A等位基因对乳蛋白率的加性效应为-0.025 8%(P<0.01);产奶量和乳蛋白量的显性效应分别为-214.005(P<0.01)和-5.515 kg(P<0.05);乳脂率和乳蛋白率的等位基因替代效应分别为-0.047 5%(P<0.05)和-0.029%(P<0.01).因此,T等位基因是提高乳成份的优势等位基因,A等位基因是提高产奶量的优势等位基因.本研究表明GHR基因的F279Y突变可望应用于我国荷斯坦牛产奶性状的标记辅助选择育种.     

不同物种Y染色体特异基因产物的研究

根据牛Y染色体3个特异基因设计3对引物，分别对牛、牦牛、绵羊、山羊、猪、小鼠基因组进行PCR扩增。3对引物在牛和牦牛基因组中都得到了扩增产物，在绵羊的扩增中只检测到了1个性别决定基因的扩增产物，在其他物种中均没有检测到扩增产物。将其扩增产物进行克隆测序，并采用DNAMAN软件对测定序列进行比对分析，结果表明：3对引物的扩增结果在牦牛和牛的同源性分别达到了99％以上，性别决定基因的扩增产物在绵羊和牛间的同源性达到了94％。     

中国荷斯坦奶牛ABCG2基因外显子9多态性研究

本研究旨在寻找ABCG2基因上与产乳性状相关的多态位点,为提高产乳性状提供理论依据。本研究采用PCR-SSCP技术分析了ABCG2基因exon9的多态性。使用SAS9.0对多态性与产乳性状之间的相关性进行方差分析。研究结果表明,在exon9中存在A→G突变,导致氨基酸由酪氨酸突变为半胱氨酸。A、B 2个等位基因的频率分别为0.86和0.14;存在3种基因型:AA、AB和BB型,基因型频率分别为:0.73、0.26、0.01;多态信息含量为0.22。方差分析结果显示,3种基因型间5种产乳性能的差异不显著。Y367C与产乳性状的相关性不明显,由于突变前后氨基酸性质发生了改变,可能会对蛋白质的结构产生一定的影响。     

滩羊公羊特异性RAPD标记的研究

利用混合样本分析方法对滩羊进行了RAPD分析 ,筛选了 6 0种随机引物 ,结果发现OPB17 32 0这一扩增片段只出现在公羊的混合样中 ,进一步对 5 0只滩羊进行逐个检测 ,发现 2 1只公羊均出现了OPB17 32 0这一DNA片段 ,而 2 9只母羊无一出现此条片段 ,据此推断OPB17 32 0为滩羊公羊的特异性RAPD标记。这一发现为滩羊胚胎性别鉴定和Y染色体上基因的研究提供了新的方法和标记参考座位。     

秦川牛的染色体研究

对秦川牛(12♂,3♀)染色体的核型、G带、C带及Ag-NOR_s的研究表明:秦川牛品种内Y染色体存在多态现象,Y染色体有中、亚中和近端着丝点染色体。中和亚中着丝点Y染色体G带和C带与普通牛(Bos taurus)相同,近端着丝点Y染色体G带和C带与瘤牛(Bos indicus)相同。根据Y染色体多态性,讨论了秦川牛起源的多元性。统计了2002个细胞的Ag-NOR_s数目,每细胞Ag-NOR_s数变化范围3～10个,平均5.473±0.316。     

神经肽Y对犊牛肝细胞PC mRNA丰度及其活性的影响

取单层培养72 h生长良好的犊牛肝细胞,采用单因素重复试验,分别添加0、50、100、200、500、1000 pg/ml的羊体外合成神经肽Y（neuropeptide Y,NPY）,每个处理3个重复（每重复2孔）,再培养12 h后分别提取RNA和制备细胞上清液。应用荧光定量PCR方法检测外源NPY 对肝细胞糖异生关键酶丙酮酸羧化酶（pyruvate carboxylase,PC）基因表达的影响,同时用比色法检测其对肝细胞PC活性的影响。结果表明,一定浓度的NPY显著促进了肝细胞PC mRNA表达,增强了PC活性。     

鲁西牛的染色体研究

研究了40头鲁西牛(♂37,♀3,2n=60)染色体的 G 带,R 带,C 带及Ag-NOR,着重分析了 y 染色体的形态及带型。在常规 Giemsa 染色的分裂相上,y染色体和小的常染色体形态相近。经常规—C 带连续染色,准确识别出 y 染色体之后测量了18条 y 染色体,臂比为3.19,属亚端着丝点染色体。y 染色体的着丝点区和短臂与常染色体的着丝点区和短臂在 G 带、C 带的带型上差别很大,表明构成它们 DNA的硷基成份有差别。统计的152个细胞的 Ag-NOR 中,平均每细胞 Ag-NOR 数为5.81±1.38,变化范围2—9。按染色体长度排列,NOR 位于2、3、4、11、22(或21)和28号常染色体末端。第22(或21)号染色体上存在 NOR 在其它牛种上尚未有过报道。     

曙红Y与马波沙星相互作用的分光光度法研究及应用

采用分光光度法研究了曙红Y与马波沙星的相互作用,并应用于样品测定。在10 mL容量瓶中依次加入1.00 mL曙红Y溶液、适量马波沙星标准溶液或待测液、1.0 mL 0.01%聚乙烯吡咯烷酮溶液,加0.1mol/L盐酸0.6 mL,用水稀释至刻度,摇匀,以水为参比立即进行光谱扫描或固定波长为536 nm进行吸光度测定。在约0.01mol/L盐酸中,曙红Y与马波沙星主要通过静电引力形成复合物。复合物最大吸收峰位于536 nm,比曙红Y本身红移20 nm。方法的线性范围为10.2～50.8 mg·L~(-1),检出限为3 mg·L~(-1)。回归方程为:A=0.0057c(mg·L~(-1))+0.4349,相关系数为0.9947。     

Does obestatin modulate the hypothalamic appetite‐regulating network in peripubertal sheep?

The participation of peripheral peptides in the processes regulating the food intake (energy homeostasis) at the central nervous system level remains unclear. This study focuses on the role of obestatin in neuronal activity within the hypothalamic appetite‐regulating network in ruminants. The animals (n = 28) were randomly divided into two groups. The sheep in the control group received intracerebroventricular infusions of the Ringer‐Locke solution, and the sheep in obestatin group were infused with obestatin (diluted in the Ringer‐Locke solution) at 25 μg per 120 μl/hr. The series of four 1‐hr infusions on 3 consecutive days were performed, and immediately after the experiment, the sheep were decapitated. Selected brain regions were fixed in situ for further immunohistochemical analysis, while the remaining ones were frozen for real‐time RT‐qPCR analysis. Obestatin infusion elicited changes in the neuropeptide Y (NPY) neuronal network in the hypothalamus. The results obtained show that exogenous obestatin evoked an increase in npy and agrpmRNA expression in the mediobasal hypothalamus (MBH), while the immunoreactivity for NPY was decreased in the arcuate and periventricular nuclei. The increase in cart and pomcmRNA expression in the MBH was also observed. Moreover, increased levels of gpr39 receptor and npy receptor 1 mRNA expression were evident in obestatin‐infused sheep. Based on these results, it can be concluded that obestatin plays a role in the modulation of appetite‐regulating network at the central level in sheep. The results obtained suggest that the underlying mechanism may involve the modification of the activity of NPY/AgRP and CART/α‐MSH neurons in the arcuate nucleus.