减毒鼠伤寒沙门菌活疫苗载体研究进展

活载体疫苗技术的发展促使产生了更多的疫苗设计新思路.沙门菌是一种肠道细菌,目前已通过基因突变的方法构建了许多种减毒株,如GID101、GID105、X4064、ZJⅢ、Ty800、X4632、X4550、X4072和X3730等,这些减毒株被突变掉了两个或两个以上的基因,然而其基因型和血清型仍很稳定,所以人们常将其用作基因疫苗的表达载体或运送载体.现在已有许多种细菌、病毒和寄生虫的减毒沙门菌活载体疫苗被研制成功.文章对沙门菌的减毒方法,减毒沙门菌的免疫机理以及其用途和作为疫苗载体的优缺点做了简述.     

小鼠感染猪源鼠伤寒沙门菌分离株的检测

小鼠对鼠伤寒沙门菌感染的检测分析有助于沙门菌致病机理的研究。从扬州市某屠宰场猪胴体表面采样分离出了一株沙门菌,通过生化鉴定及血清型分析,判断该菌株为鼠伤寒沙门菌。药物敏感性分析表明,该菌株对氨苄青霉素高度耐药,而对头孢类等药物敏感。动物试验结果表明,腹腔注射5×105CFU/只的剂量即可致死小鼠,1×104 CFU/只的剂量感染后,虽然不能致死小鼠,但能引起小鼠肝脏和脾脏的病理损伤和炎症反应,脏器系数升高,肝脏抗氧化系统紊乱;细菌在小鼠体内的定殖能力较强,4周以后肝脏和脾脏中仍能分离到;感染小鼠血清生化指标(ALT、AST、ALP、TP、ALB)异常,部分细胞因子(IFN-γ和TNF)升高。说明该菌株能诱导脾脏中T淋巴细胞的活化。通过以上分析,对该分离菌株的生物学特性有了初步的了解。     

沙门菌和大肠杆菌噬菌体对试验感染小鼠的保护作用

鉴于沙门菌、大肠杆菌对人和动物的危害及耐药菌株的不断增多,在评价沙门菌噬菌体SP3383、大肠杆菌噬菌体EP-SY体外杀菌活性及安全性的基础上,应用二者进行了预防和治疗宿主菌感染实验小鼠的保护作用研究。结果显示,SP3383和EP-SY分别在与宿主菌体外共培养的初始7 h和5 h使细菌数量明显减少;10~(12) PFU/只的噬菌体对离乳昆明小鼠是安全的;噬菌体SP3383、EP-SY可明显减轻宿主菌感染导致的小鼠空肠或十二指肠病变,显著降低宿主菌感染小鼠脾脏及空肠或十二指肠的荷菌量(P<0.05)。     

鼠李糖乳杆菌在发酵乳中的应用

发酵乳是益生菌的重要载体,可保护菌株免受环境影响。鼠李糖乳杆菌是目前国际上文献记载最多、应用最广的益生菌之一。该菌耐酸性强,可在人和动物肠道内定植,具有降低胆固醇、预防和治疗腹泻、排除毒素、预防龋齿和增强免疫力等作用。但鼠李糖乳杆菌在发酵乳制品中发挥的作用及功能的研究和资料相对匮乏。综述了鼠李糖乳杆菌在发酵乳中的作用特点,以期为进一步探索鼠李糖乳杆菌在发酵乳制品的研究和开发打下理论基础。     

乌苏里貉巴氏杆菌与鼠伤寒沙门氏杆菌混合感染的诊治

20 0 1年 8月初 ,我市某专业户饲养的乌苏里貉发生一种以体温升高、呼吸困难、呕吐、下痢和神经症状为主的爆发性疾病 ,饲养 2 17只 ,死亡 6 3只 ,死亡率近 30 %。我们接诊后通过临床检查和实验室检验等手段 ,确诊为多杀性巴氏杆菌和鼠伤寒沙门氏杆菌混合感染 ,并采取相应有效措施使病情得到控制 ,现将诊治情况报道如下。1　临床症状由于发病貉数量较多 ,其症状表现各不相同。病貉一般表现突然发病 ,精神沉郁 ,体温升高 (4 1～ 4 2℃ ) ,食欲减退或拒食 ,迅速消瘦 ,有的黏膜皮肤黄染 ,心跳加快 ,呼吸频数 ,咳嗽 ,呕吐 ,下痢 ,粪便液状或水状…     

CpxR对鼠伤寒沙门菌连接蛋白基因pmrD的调控作用

前期发现黏菌素对鼠伤寒沙门菌acrB和cpxR双缺失后的cpxR回补株JS△acrB△cpxR::kan/pcpxR(JS△△/pR)的MIC值较标准株JS显著下降了16倍,且JS△△/pR中PhoPQ和PmrAB之间的连接蛋白基因pmrD的表达量显著降低。为探索cpxR对pmrD的调控作用,本研究构建了pmrD的单基因过表达菌株JS△acrB△cpxR::kan/ppmrD(JS△△/pD),并用overlapping PCR扩增得到cpxR和pmrD的共表达基因cpxR-pmrD,构建了cpxR、pmrD共表达菌株JS△acrB△cpxR::kan/pcpxR-pmrD(JS△△/pRD)。用微量肉汤稀释法测定了黏菌素对各菌株的最小抑菌浓度(MICs),同时测定了各菌株在LB肉汤中的生长曲线和黏菌素的杀菌曲线。结果表明,成功构建了鼠伤寒沙门菌pmrD的单基因过表达菌株JS△△/pD和cpxR、pmrD共表达菌株JS△△/pRD。MIC结果显示,黏菌素对JS△△/pR的MIC值较JS显著下降(16倍),JS△△/pD的MIC值没有变化,而JS△△/pRD的MIC值显著上升(16倍)。生长曲线显示,JS△△/pR的生长活性最低,JS△△/pD、JS△△/pRD的生长活性均高于JS△△/pR。黏菌素的杀菌曲线显示,JS△△/pRD在不同浓度黏菌素中的存活率显著高于JS△△/pD。这些结果表明:在JS△△背景下,pmrD对菌株黏菌素敏感性的影响依赖于cpxR,cpxR对pmrD的调控具有双向性,即对生理表达的pmrD具有负调控作用,而对过表达的pmrD具有正调控作用。本试验为全面系统阐明cpxR或cpxR与acrB相互作用调控沙门菌敏感性的分子机制奠定基础。     

鹅源鼠伤寒沙门菌的分离鉴定及药敏试验

对临床送检疑似鼠伤寒沙门菌感染的病例进行细菌分离,利用沙门菌所具有的种属特异性的亲膜蛋白基因inv A做PCR鉴定,结合生化鉴定和血清型鉴定,并分析分离菌的耐药性。从4例病死鹅病料中共分离到4株细菌,经inv A PCR鉴定、生化特点和血清型鉴定确认为鼠伤寒沙门菌。药敏试验结果显示,4株分离菌对庆大霉素、诺氟沙星、头孢曲松等药物敏感性较强,但对多黏菌素B、多西环素耐药。其中,有2个分离株表现出多重耐药性。     

鸽源鼠伤寒沙门菌分离鉴定及药敏试验

从江苏省某肉鸽场发生的腹泻症状的死亡鸽中采集病料,分离出1株病原菌,通过PCR鉴定菌株,并进一步做药敏试验。结果表明,病原菌分离鉴定为鼠伤寒沙门菌,属于血清O4群,该菌对20种抗生素均敏感。     

减毒鼠伤寒沙门菌在雏鸡体内的安全性与免疫原性研究

通过鸡接种不同剂量的SL8132、SL8786、SL8132/pcDNA3s与SL8786/pcDNA3s,测定其致病力与免疫效果,检测了诱导乙肝表面抗体(抗-HBs)的动态变化.结果表明减毒鼠伤寒沙门菌原菌SL8132、SL8786接种后连续观察雏鸡10d,不同剂量组的感染均未引起死亡.接种后7周,肝脏、脾脏中已没有菌落,粪便中仅有极少量的菌落.口服减毒鼠伤寒沙门菌在完成抗原呈递后即被鸡体免疫系统所清除,未发现雏鸡出现明显毒副作用.SL8132/pcDNA3s与SL8786/pcDNA3s疫苗诱导的抗-HBs动态检测发现,抗-HBs在免疫后水平逐渐升高,到第8周最高,此后逐渐下降.原菌SL8132与SL8786与重组菌株SL8132/pcDNA3s与SL8786/pcDNA3s均具有良好的安全性与免疫原性.     

饲喂乳杆菌雏鸡对鸡白痢菌感染的影响

雏鸡饲喂乳杆菌培养物后,人工感染鸡白痢沙门氏菌,观察雏鸡盲肠主要正常菌群定植及雏鸡抵抗力情况。研究结果表明：人工感染鸡白痢沙门氏菌后,饲喂乳杆菌组同未饲喂乳杆菌组相比,雏鸡盲肠内正常菌群有一定变化,大肠杆菌数明显降低（Ｐ＜００１）,双歧杆菌和乳杆菌数明显增加（Ｐ＜００１）,而且死亡率降低２０％。     

Lactobacillus rhamnosus GG SpaC pilin subunit binds to the carbohydrate moieties of intestinal glycoconjugates

Lactobacillus rhamnosus GG (LGG) is a well‐established probiotic strain. The beneficial properties of this strain are partially dependent on its prolonged residence in the gastrointestinal tract, and are likely influenced by its adhesion to the intestinal mucosa. The pilin SpaC subunit, located within the Spa pili structure, is the most well studied LGG adhesion factor. However, the binding epitopes of SpaC remain largely unknown. The aim of this study was to evaluate the binding properties of SpaC to the carbohydrate moieties of intestinal glycoconjugates using a recombinant SpaC protein. In a competitive enzyme‐linked immunosorbent assay, SpaC binding was markedly reduced by addition of purified mucin and the mucin oligosaccharide fraction. Histochemical staining revealed that the binding of SpaC was drastically reduced by periodic acid treatment. Moreover, in the surface plasmon resonance‐based Biacore assay, SpaC bound strongly to the carbohydrate moieties containing β‐galactoside at the non‐reducing terminus of glycolipids. We here provide the first demonstration that SpaC binds to the oligosaccharide chains of mucins, and that the carbohydrate moieties containing β‐galactoside at the non‐reducing termini of glycoconjugates play a crucial role in this binding. Our results demonstrate the importance of carbohydrates of SpaC for mucus interactions.     

表达乳铁蛋白肽的猪源罗伊氏乳酸杆菌对断乳仔猪抗霍乱沙门菌感染的效果分析

旨在分析表达牛乳铁蛋白肽的重组猪源罗伊氏乳酸杆菌pPG-LFCA-E/LR-CO21作为饲用微生态制剂对仔猪促生长与抵抗猪霍乱沙门菌感染的作用。将该重组菌连续饲喂28日龄断乳仔猪21 d,并设立空菌组、对照组以及抗生素组。第21天时对断乳仔猪连续口服感染猪霍乱沙门菌3 d,并设置7 d的观察期;仔猪感染后采集试验组与对照组血清、肠黏液及肠组织。检测结果显示重组菌组仔猪平均日增重与免疫器官指数均显著提高（P<0.05）,料重比极显著降低（P<0.01）。感染猪霍乱沙门菌后,相对于对照组,重组菌组仔猪日增重提高,腹泻率降低;重组菌组仔猪血液中IgG以及肠黏液中IL-4、sIgA的量极显著提高（P<0.01）,IL-2、IL-12、IL-6的量显著降低（P<0.05）;重组菌组仔猪肠道紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-1的基因转录水平和TLR4、Myd88和MLCK的基因转录水平极显著提高（P<0.01）,仔猪肠道内猪霍乱沙门菌的数量极显著降低（P<0.01）;重组菌组与抗生素组无明显差异（P>0.05）。以上结果表明,表达牛乳铁蛋白肽的重组猪源罗伊氏乳酸杆菌pPG-LFCA-E/LR-CO21可以提高断乳仔猪的生长性能、促进肠道形态发育、增强肠道屏障功能,并且在一定程度上可以保护仔猪免受猪霍乱沙门菌的感染,表明重组菌作为微生态制剂替代断乳仔猪的饲用抗生素具有一定的应用前景。     

复方中草药与鼠李糖乳杆菌共发酵产物对鸡球虫的治疗效果研究

为探究复方中草药与鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus, L. rhamnosus)共发酵产物对鸡球虫病的治疗效果,本研究将复方中草药(青蒿、常山、白头翁、仙鹤草、槐花、黄芩、甘草)与L. rhamnosus共发酵12h,患球虫病雏鸡灌服共发酵产物,连续用药5日,观察雏鸡临床症状,并检测各组雏鸡的相对增重率,盲肠病变记分,盲肠病理切片,每克粪便卵囊值(OPG),并计算各组药物抗球虫指数(ACI)。结果显示,服用复方中药发酵制剂后的感染球虫的雏鸡体重显著上升,与对照组差异显著(P＜0.05)。此外,发酵产物可以明显减轻盲肠病理变化,同时可以降低受感染雏鸡卵囊的排出量。发酵产物组的ACI为130.59,达到中等抗球虫水平。复方中草药与L. rhamnosus共发酵提高了中药对鸡球虫病的治疗效果,为益生菌中药发酵治疗球虫病奠定基础。     

通过16S rDNA全序列分析及鉴定牛沙门氏菌

通过16S rDNA全序列的DNA同源性分析以及PCR-RFLP分析,对从山东某奶牛场送检的腹泻死亡的犊牛内脏中分离到的一株沙门氏菌进行了血清型鉴定,得到其系统发育树状图。系统发育树分析表明,该沙门氏菌菌株与GENEBANK上发表的27株沙门氏菌的16S rDNA同源性较高,为97~99%,该沙门氏菌菌株与鼠伤寒沙门氏菌LT2(Salmonellatyphimurium LT2)的同源性最高,达到了99.7%,表明该沙门氏菌菌株为鼠伤寒沙门氏菌。     

表达绿色荧光蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建与鉴定

应用DNA重组技术构建了表达绿色荧光蛋白（GFP）的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌。在体外稳定试验中，重组菌经LB固体及液体培养基连续传15代后，单个菌落和菌液均呈绿色；在体内稳定试验中，经ICR小鼠连续传代10次，从肝脏、脾脏中分离的细菌经LB固体培养仍为绿色，证明构建的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌是稳定的。SDS-PAGE结果显示，鼠伤寒沙门氏菌表达的GFP分子量约为27kD，这与预计的分子量大小一致。用免疫剂量的重组细菌接种BALB/C小鼠后，观察1个月未见有异常现象，同时剖栓后也未见脏吕有眼观病变。表达GFP的重组鼠伤寒沙门氏菌的构建为减毒沙门氏菌作为活载体的基因工程疫苗的研制提供一个优良模型，为研究沙门氏菌疫苗和沙门氏菌疾病的致病机理的提供了一个有力的工具，同时在相关疾病的免疫防制基础研究中亦有重要应用价值。     

黄芩素对感染鼠伤寒沙门氏菌小鼠的影响

试验研究黄芩素对感染鼠伤寒沙门氏菌(STM)小鼠的影响.将80只小鼠分为空白组、STM组、黄芩素+STM组和黄芩素组.结果 显示:STM使感染小鼠的存活率明显下降,小鼠血清中炎性因子水平明显增高,脏器指数降低,肝脏和脾脏组织呈现明显的病理改变.黄芩素可使感染STM小鼠的存活率明显升高,小鼠血清中炎性因子水平降低,脏器指...     

鼠李糖乳杆菌对Caco-2细胞抗氧化功能和细胞因子分泌的影响

本研究旨在探明鼠李糖乳杆菌(L rhamnosus)对Caco-2细胞抗氧化和非特异免疫功能的影响.Caco-2 细胞分别用PBS(A组)、E.coli K88(B组)和L.rhamnosus(C组)处理,以及先用L.rhamnosus预处理,再用E.coli K88处理(D组).结果表明,B组细胞上清的T-AOC浓度显著降低(P＜0.01),SOD活力显著提高(P＜0.01),C组与此相反,并且细胞裂解液中的SOD活性显著提高(P＜0.05).B组和C组不同程度地促进APRIL的分泌(P＜0.01),而抑制IL-8的产生(P＜0.01).B组也抑制IL-10的产生,但C组却显著促进其分泌(P＜0.01).与B组相比,D组APRIL显著减少(P＜0.01),但IL-8和IL-10都显著增加(P＜0.05,P＜0.01).结果提示,L.rhamnosus可提高Caco-2细胞的抗氧化能力,减轻炎症反应,具有保护作用和免疫佐剂的效果.     

灌胃和腹腔注射鼠李糖乳杆菌对妊娠期小鼠粪便菌群多样性的影响

【目的】研究灌胃和腹腔注射鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus,LGG)对妊娠期小鼠粪便菌群多样性的影响,为动物妊娠期生理及肠道健康提供理论依据。【方法】选择体重相近(23.33 g±1.55 g)、配种日期相同的SPF级妊娠昆明小鼠45只,随机分为3组,分别为对照组、试验Ⅰ组和试验Ⅱ组,每组15只。在相同饲养管理和饲粮营养水平下,从妊娠的第2天开始,对照组饲喂基础饲粮;试验Ⅰ组腹腔注射0.5 mL含有0.125 g LGG的灭菌生理盐水(连续14 d);试验Ⅱ组灌胃0.5 mL含有0.125 g LGG的灭菌生理盐水(连续18 d),试验期21 d。所有小鼠于临产前1 d解剖,采集大肠粪便样品,提取各组粪便样本的基因组DNA,PCR扩增后进行文库构建,对合格文库应用NovaSeq 6000测序平台进行测序,采用Uparse软件(v 7.0.1001)以97%的一致性将序列聚类成为操作分类单元(OTUs)并筛选代表序列。采用Mothur方法与SILVA 132的SSUrRNA数据库进行物种注释分析,并统计门、科和属水平上的群落组成。使用QIQME 1.7.0软件...     

Evaluation of immunogenicity and protective efficacy of adjuvanted Salmonella Typhimurium ghost vaccine against salmonellosis in chickens

Background: Salmonella Typhimurium, a non-host-adapted Gram-negative intracellular pathogen, is capable of infecting a variety of animal hosts and humans.

Objective: This study utilized the prime-booster immunization strategy using Salmonella Typhimurium–LTB (S. Typhimurium–LTB) ghost with the aim of inducing a robust immune response for the prevention of avian salmonellosis. In addition, the effect of Montanide^TM ISA 70VG adjuvant on S. Typhimurium–LTB ghost vaccination was investigated.

Animals and methods: A total of 75 chickens were divided into three groups (n=25) for intramuscular immunization: group A (non-immunized control injected with sterile PBS), group B (immunized with S. Typhimurium–LTB ghost), and group C (immunized with S. Typhimurium–LTB ghost plus Montanide^TM ISA70VG adjuvant).

Results: Compared with group A, the immunized chickens (groups B and C) exhibited increased titers of antigen specific plasma IgG and intestinal secretory IgA antibodies. In addition, group C showed enhanced induction of the humoral immune response compared to group B. The populations of splenic CD3+CD4+ and CD3+CD8+ T-cells increased significantly in both immunized groups. In addition, increased mRNA expression of the Th1 cytokines, IFN-γ, and IL-2 were observed in S. Typhimurium antigen-stimulated peripheral blood mononuclear cells from groups B and C chickens. Chickens from both vaccinated groups showed significant protection against virulent S. Typhimurium oral challenge compared to non-vaccinated chickens and a lower challenge strain count was recovered from the internal organs of group C.

Conclusions: Injection of S. Typhimurium-LTB ghost with or without Montanide^TM ISA70VG adjuvant is capable of inducing protective immunity against the virulent S. Typhimurium infection in chickens.