多子小瓜虫感染后草鱼TLR信号通路基因 的表达动态

[目的]明确草鱼Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)信号通路基因在防御多子小瓜虫(Ichthyophthirius multifiliis)感染过程中的免疫作用,为有效防控鱼类多子小瓜虫感染提供理论参考.[方法]以多子小瓜虫感染草鱼后,采用实时荧光定量PCR检测分析在不同时间点(感染后6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d和7 d)草鱼部分TLRs基因(TLR1、TLR2、TLR4、TLR9、TLR20和TLR21)、接头蛋白基因(MyD88和TRIF)、信号转导分子(IRAK4和IRAK1)及细胞因子(IL-1β、TNF-α和IFN)在其皮肤和脾脏中的表达动态变化.[结果]草鱼感染多子小瓜虫后,TLR1、TLR2、TLR9、TLR20和TLR21基因在皮肤和脾脏中的表达主要呈上调趋势,TLR4基因在皮肤中主要呈上调表达,在脾脏中则主要呈下调表达;TLR信号通路接头蛋白基因MyD88和TRIF的表达变化趋势明显不同,其中,MyD88基因的表达在感染后第1~3 d均呈显著上调趋势(P<0.05,下同),而TRIF基因的表达在整个试验过程中绝大多数时间点与对照组无显著差异(P>0.05);IRAK4和IRAK1在皮肤和脾脏中的表达也主要呈上调趋势,但在脾脏中IRAK4在感染后第1 d和IRAK1在感染后第6 h的表达呈显著下调趋势;IL-1β和TNF-α在绝大多数时间点均显著上调,但IFN的表达基本没有变化.[结论]草鱼TLR信号通路中的部分TLRs基因(TL1、TLR2、TLR4、TLR9、TLR20和TLR21)、接头蛋白基因(MyD88)、信号转导分子(IRAK4和IRAK1)及下游细胞因子(IL-1β和TNF-α)均参与防御多子小瓜虫感染的免疫反应,尤其是在感染早期和中期发挥关键作用.     

基于HRM技术的草鱼抗小瓜虫nlrc3基因SNP标记开发及关联分析

为探究草鱼nlrc3基因的多态性和抗多子小瓜虫（Ichthyophthirius multifiliis）病之间的关联性,通过多子小瓜虫感染草鱼（Ctenopharyngodon idella）筛选出易感群体和抗病群体,并分析比较两个群体nlrc3基因的单核苷酸多态性（Single nucleotide polymorphism, SNP）位点,使用高分辨率熔解（High resolution melt, HRM）和Sanger测序技术验证SNP位点基因型,并将获得的SNP位点与草鱼抗病性状进行关联性分析。结果显示,从草鱼nlrc3基因中筛选得到了4个SNPs位点,有3个SNPs位点（SNP1、SNP3和SNP4）成功分型,其中SNP1和SNP3中分别含有AA、AG和AA、GG两种基因型,且与抗多子小瓜虫性状显著相关;倍型组合及其与抗病能力相关性分析显示,与其他二倍型相比,由SNP1的AG和SNP3的AA基因型组成的二倍型（D1）中100%为抗病个体,由SNP1的AG与SNP3的GG基因型组成的二倍型（D2）中95%为抗病个体,均为抗病优势基因型。研究表明,抗小瓜虫的草鱼全体中存在nl...     

多子小瓜虫病的研究现状与问题分析

小瓜虫病又叫白点病,是由多子小瓜虫(Ichthyophthirius multifilis)寄生在鱼体引起的,多子小瓜虫分布广泛,该病感染性强,且难治愈,常常给水产养殖业和观赏鱼业造成极大的损失,因此小瓜虫病一直是全球研究的热点。目前,国内对多子小瓜虫病的研究很多,但是也存在一些问题。对小瓜虫病的病理学特征、致病机理和防治方法的研究现状作一综述,并对存在的问题提出自己的见解。     

40 种中草药杀灭离体多子小瓜虫效果研究

研究了40种中草药不同浓度水提物对多子小瓜虫(Ichthyophthirius multifiliis)的离体杀灭效果,结果表明:夏枯草、仙鹤草和三七等18种中草药在浓度为50g/L时才能在4h内杀灭多子小瓜虫滋养体;药物浓度为10g/L时,槐花、皂角刺和毛冬青等13种中草药可杀灭滋养体;药物浓度为1g/L时,紫荆和鹅不食草即可杀灭滋养体;药物浓度为0.1g/L时,只有生姜能杀灭多子小瓜虫滋养体。生姜水提物对滋养体和幼虫的最低致死浓度分别为100、50mg/L,半数有效浓度分别为30.3、15.7mg/L,100mg/L可完全抑制包囊孵化。由此可见生姜是一种可有效杀灭多子小瓜虫的中草药。     

36种天然植物提取物抗多子小瓜虫活性研究

研究36种天然提取物对多子小瓜虫的体外和体内杀虫活性。利用水提法和醇提法制备36种天然植物的提取物,构建体外和体内杀小瓜虫药效模型,研究36种天然植物提取物抗小瓜虫的活性。实验结果表明,牛蒡子、小果博落回、丁香、博落回、大黄等7种天然植物提取物可100%杀灭小瓜虫的掠食体和包囊。其中,大黄乙醇提取物杀虫效果最佳,其浓度达到10.0 mg·L^-1时,可100%抑制小瓜虫包囊的分裂孵化;其浓度为5.0 mg·L^-1时,可100%杀灭小瓜虫掠食体。浸泡使用30.0 mg·L^-1大黄乙醇提取物后,草鱼鱼体感染小瓜虫的数量显著减少,存活率可达65.8%,而对照组存活率仅为30.0%。大黄乙醇提取物对多子小瓜虫具有较好的杀灭作用。     

多子小瓜虫HSP70基因ORF的克隆及表达分析

热激蛋白（ HSP）是生物适应环境温度变化的重要媒介分子,本试验中克隆了多子小瓜虫Ichthyoph-thirius multifiliis HSP70（Im HSP70）基因的ORF,采用荧光定量RT-PCR法,在水温为20、25、30℃的条件下检测了HSP70基因在多子小瓜虫幼虫、滋养体和包囊3个不同发育阶段的表达情况。结果表明：Im HSP70基因的ORF为1995 bp,预测编码为664 aa; Im HSP70蛋白的二级结构主要以α-螺旋和无规卷曲为主,空间构型包括N端ATPase功能域和C端多肽结合功能域;与其他物种HSP70蛋白序列进行同源性比较发现, Im HSP70与螅状独缩虫Carchesium polypinum HSP70的同源性最高,为78.08%; Im HSP70与分类地位同为纤毛门的螅状独缩虫、嗜热四膜虫Tetrahymena thermophila、变藓棘毛虫Sterkiella histriomuscorum的HSP70聚在一个分支;3种温度下幼虫的HSP70表达量均最低,20℃和25℃时, HSP70基因在滋养体中的表达量显著高于幼虫和包囊（P〈0.05）,而30℃时, HSP70基因在包囊中的表达量显著高于滋养体和幼虫（P〈0.05）;30℃时HSP70基因在包囊中的表达量显著高于25℃（P〈0.05）。研究表明,试验所用多子小瓜虫的HSP70基因在30℃时仍大量表达,且能感染试验鱼,推测该虫株为热带型多子小瓜虫, HSP70基因在多子小瓜虫对抗外界高温环境中可能发挥着重要的作用。     

多子小瓜虫HSP70基因ORF的克隆及表达分析

热激蛋白(HSP)是生物适应环境温度变化的重要媒介分子,本试验中克隆了多子小瓜虫Ichthyophthirius multifiliis HSP70(Im HSP70)基因的ORF,采用荧光定量RT-PCR法,在水温为20、25、30℃的条件下检测了HSP70基因在多子小瓜虫幼虫、滋养体和包囊3个不同发育阶段的表达情况。结果表明:Im HSP70基因的ORF为1995 bp,预测编码为664 aa;Im HSP70蛋白的二级结构主要以α-螺旋和无规卷曲为主,空间构型包括N端ATPase功能域和C端多肽结合功能域;与其他物种HSP70蛋白序列进行同源性比较发现,Im HSP70与螅状独缩虫Carchesium polypinum HSP70的同源性最高,为78.08%;Im HSP70与分类地位同为纤毛门的螅状独缩虫、嗜热四膜虫Tetrahymena thermophila、变藓棘毛虫Sterkiella histriomuscorum的HSP70聚在一个分支;3种温度下幼虫的HSP70表达量均最低,20℃和25℃时,HSP70基因在滋养体中的表达量显著高于幼虫和包囊(P<0.05),而30℃时,HSP70基因在包囊中的表达量显著高于滋养体和幼虫(P<0.05);30℃时HSP70基因在包囊中的表达量显著高于25℃(P<0.05)。研究表明,试验所用多子小瓜虫的HSP70基因在30℃时仍大量表达,且能感染试验鱼,推测该虫株为热带型多子小瓜虫,HSP70基因在多子小瓜虫对抗外界高温环境中可能发挥着重要的作用。     

鱼类小瓜虫病的综合防治措施

小瓜虫病是由多子小瓜虫寄生在各种淡水鱼体表和鳃引起的常见鱼病,死亡率极高,严重危害我国水产养殖业的健康发展。笔者结合多年的防治经验,从池塘、网箱这两种主要养殖模式探讨该病综合防治办法,提出合理措施供大家参考。     

草鱼外周血白细胞组成及其受胁迫和感染的影响

为了得到可反映草鱼（Ctenopharyngodon idellus）健康状况的血细胞指标的基础数据,对4 种不同质量规 格的草鱼进行白细胞分类计数研究,并观察草鱼在硫酸铜、敌百虫处理以及多子小瓜虫感染后白细胞组成的变化。 结果表明,1 000 g组和500 g组规格草鱼的淋巴细胞比例显著高于250 g组,1 000 g组和500 g组规格草鱼的中性 粒细胞比例显著低于60 g组和250 g组。硫酸铜处理组的淋巴细胞分类计数显著高于对照组;高浓度敌百虫处理组 草鱼的淋巴和血栓细胞分类计数显著高于对照组;多子小瓜虫感染组草鱼中性粒细胞分类计数极显著下降,淋巴细 胞分类计数显著上升。说明个体大小、理化胁迫因子和病原感染都会影响草鱼白细胞组成比例。     

中药治疗团头鲂小瓜虫病和车轮病的案例分析

小瓜虫病和车轮虫病均为重要的鱼类纤毛虫病。近年来对传统化学药物耐药的纤毛虫越来越多。本文介绍了用中药治疗团头鲂小瓜虫和车轮虫混合感染的过程,以期对类似病例治疗提供参考。     

大中华鳋感染引起草鱼鳃粘液成分的变化

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和明胶酶谱分析,对感染大中华鳋的草鱼与未感染大中华鳋的健康草鱼鳃粘液进行比较分析。结果表明：健康草鱼和感染大中华鳋的草鱼鳃粘液图谱中有2条带出现差异,感染大中华鳋的草鱼鳃粘液在32kD-34kD处具有蛋白酶活性,而未感染大中华鳋的草鱼鳃粘液在32kD-34kD处没有蛋白酶活性。     

草鱼体表粘液凝集素制备及其性质研究

以草鱼体表粘液凝集素为研究对象,经PBS提取粗提物后,通过离子交换层析DEAE-52对该凝集素进行初步纯化,得到一种具有凝集鸡血细胞的凝集素.该凝集素在20～40℃及pH 7～8条件下表现出较好的凝集活性,且凝集活性不依赖Ca2+的存在.依据凝血活性糖抑制试验结果,推测草鱼体表粘液凝集素可能为半乳糖结合凝集素.     

表面活性剂SDS对草鱼急性毒性效应的研究

为了研究阴离子表面活性剂对鱼类的急性毒性效应,设计了不同浓度的十二烷基硫酸钠(SDS)溶液对草鱼进行暴露实验并测定其体内各组织SOD活性。急性毒性测试表明,SDS对草鱼的48h、96hLC50分别为11．8mg／L和5．2mg／L。低浓度的SDS(小于0．2mg/L)暴露对草鱼的超氧化物歧化酶(SOD)活性有极显著诱导作用,但随着SDS浓度升高和暴露时间延长,草鱼各组织SOD活性均呈明显的下降趋势,提示SDS暴露所引起的酶活性变化与暴露浓度和暴露时间有一定的相关性。这些结果显示,阴离子表面活性剂SDS对草鱼抗氧化酶有毒性效应,SOD活性变化可以作为评价环境中有毒污染物的生物敏感性指标。     

中药复方对草鱼细菌性败血症的防治效果研究

[目的]研究五倍子、黄芩等中药组成的复方制剂防治草鱼细菌性败血症的有效性。[方法]采用不同浓度的中药复方（0、1．0％、2．0％、4．0％）饲喂草鱼,7d后用嗜水气单胞菌对草鱼进行攻毒。[结果]中药复方添加量为2．0％与4．0％时,对草鱼的防治效果最佳,防治率为80．7％,这2种剂量的药饵组与无药组的差异极显著（P〈0．01）。[结论]中药复方能有效防治草鱼细菌性败血症。     

壳聚糖对草鱼生长及肌肉营养成分的影响

选择体重为70 g左右的健康草鱼450尾,随机分成5个处理组,分别为基础饲料组、抗生素组、添加0.25 %、0.50 %及1.00 %壳聚糖组,每个处理设3个重复,每个重复放养30尾[0]鱼,进行为期40 d的饲养试验.结果表明,壳聚糖能显著促进草鱼生长,增加草鱼背肌粗蛋白含量,减少粗脂肪含量,显著影响草鱼的投饵系数和内脏指数.与基础饲料组相比,添加0.25 %、0.50 %、1.00 %壳聚糖组草鱼的增重率分别增加56.6 %、72.8 %、65.5 %;背肌粗蛋白含量分别增加4.93 %、8.77 %、2.81%;添加0.25 %和0.50 %壳聚糖组投饵系数均下降8.4 %,但添加1.00 %壳聚糖组其投饵系数显著高于其他各组.综合考虑各项指标,在草鱼饲料中以添加0.50 %壳聚糖较为适宜.     

复合酶制剂对草鱼生长性能、饲料养分消化率及免疫力的影响

选用体重为(31.51±0.43)g的草鱼C tenopharyngodon idella360尾,随机分为4个处理组,每组设3个重复,每个重复放30尾鱼,分别添加不同梯度水平(0、300、600、900 mg/kg)的木聚糖酶、β-葡聚糖酶、淀粉酶、蛋白酶为主的复合酶制剂。结果表明:与对照组相比,饲料中添加600、900 mg/kg的复合酶制剂后,显著提高了草鱼的相对增重率、特定生长率、饵料转化效率等生长性能指标(P<0.05),同时也显著提高了草鱼对饲料中干物质、粗蛋白质、粗脂肪及粗纤维的表观消化率(P<0.05),但这二组之间差异不显著(P(0.05),而300 mg/kg一组与对照组差异不显著(P(0.05);鱼体的粗蛋白质、粗脂肪、粗灰分、水分等品质指标在4个处理组之间差异不显著(P(0.05);饲料中添加600、900 mg/kg的复合酶制剂后,显著提高了草鱼血液中白细胞的吞噬活性(P<0.05)和血清杀菌能力(P<0.01)。研究表明,饲料中添加复合酶制剂后,能显著提高草鱼对饲料中养分的消化率,从而提高草鱼的生长性能,增强草鱼的免疫力。     

复合酶制剂对草鱼生长性能、饲料养分消化率及免疫力的影响

选用体重为（31.51±0.43）g的草鱼C tenopharyngodon idella360尾,随机分为4个处理组,每组设3个重复,每个重复放30尾鱼,分别添加不同梯度水平（0、300、600、900 mg/kg）的木聚糖酶、β-葡聚糖酶、淀粉酶、蛋白酶为主的复合酶制剂。结果表明：与对照组相比,饲料中添加600、900 mg/kg的复合酶制剂后,显著提高了草鱼的相对增重率、特定生长率、饵料转化效率等生长性能指标（P〈0.05）,同时也显著提高了草鱼对饲料中干物质、粗蛋白质、粗脂肪及粗纤维的表观消化率（P〈0.05）,但这二组之间差异不显著（P〈0.05）,而300 mg/kg一组与对照组差异不显著（P〈0.05）;鱼体的粗蛋白质、粗脂肪、粗灰分、水分等品质指标在4个处理组之间差异不显著（P〈0.05）;饲料中添加600、900 mg/kg的复合酶制剂后,显著提高了草鱼血液中白细胞的吞噬活性（P〈0.05）和血清杀菌能力（P〈0.01）。研究表明,饲料中添加复合酶制剂后,能显著提高草鱼对饲料中养分的消化率,从而提高草鱼的生长性能,增强草鱼的免疫力。     

大豆抗原蛋白对草鱼肌肉营养成分的影响

以健康的初始体质量(50.66±0.26)g草鱼(Ctenopharyngodon idellus)为试验对象,在室内[(19±3)℃]单循环控温养殖系统中进行6周饲养试验,以鱼粉为对照组,β-伴大豆球蛋白的添加量为40 mg/g,大豆球蛋白的添加量为60 mg/g,配制成3种等氮(粗蛋白质量分数为30%)、等能(15.6 MJ/kg)的半精制饲料,探讨大豆主要抗原蛋白对草鱼肌肉主要营养成分的影响。结果表明:大豆主要抗原蛋白使草鱼肌肉中粗蛋白含量极显著下降(P0.01),对肌肉中水分、粗脂肪、粗灰分、氨基酸总量、必需氨基酸总量和鲜味氨基酸总量影响不显著(P0.05)。可见,在本试验条件下,草鱼配合饲料蛋白水平为30%时,在其配合饲料中分别添加β-伴大豆球蛋白(40 mg/g)和大豆球蛋白(60 mg/g)显著影响了草鱼肌肉中粗蛋白的含量。