链格孢菌蛋白激发子对棉花主要性状及相关酶变化的研究

 研究了链格孢菌蛋白激发子粗提蛋白液对棉花主要性状及相关酶变化的影响。结果表明,链格孢菌蛋白激发子诱导后,显著提高了棉花成铃数且不同程度提高了株高、铃重、衣指、子指和衣分,降低了铃壳重,促进棉花早熟,获得了较好的产量。以浸种处理的子、皮棉产量最高,分别达到3800.6 kg·hm^-2、1598.2 kg·hm^-2,比对照提高了22.15%、26.11%;从纤维品质来看,适时适度喷施棉株,纤维各个指标得到了明显的改善,尤以浸种＋现蕾期喷雾处理的综合值最高,比对照提高了6.1%;从生理生化活性来分析,链格孢菌蛋白激发子诱导后POD、NR、SOD活性及MDA含量均有不同程度的变化,POD、NR及SOD活性增强,而MDH活性降低。在此基础上对链格孢菌蛋白激发子诱导棉株生长及提高棉纤维品种的可能机制作了\{探讨。     

细极链格孢菌蛋白激发子诱导棉苗基因表达差减文库的构建及EST分析

利用细极链格孢菌蛋白激发子粗提蛋白液诱导棉花苗期相关基因表达,以清水喷施为对照样本,进行抑制差减杂交,构建棉花苗期基因表达文库.结果显示,插入片段的大小主要集中在200～1000 bp.随机选取150个克隆进行菌液PCR检测与测序,并将所测序列与Gen-Bank dbEST库进行比对,共得到104个单一序列.其中,78个EST与其它物种已知基因部分区域的同源性为48.54%～100%,占总EST的75%;6条EST序列能在数据库中检索到同源性序列,但其功能尚不清楚,占5.77%;10个EST能在数据库中发现为推测蛋白,占9.6%;10个EST在GenBank中没有查到对应的同源序列,可能是新基因,占9.6%.同时,将所得到的104条EST序列在WEGO网站上进行功能分类,通过Gene ontology确定具体EST的分子功能.其中,在生物途径分类中,与生理途径和细胞过程相关的EST最多,分别为48个和45个;在细胞组份功能分类中,与细胞相关的EST最多,达到44个;在分子功能分类中,催化功能与分子绑定相关的EST数量最多,分别达到了30个和28个.由此可见,细极链格孢菌蛋白激发子诱导棉苗时涉及到植物的生理生化的多条途径,受到多个基因的调控,可能包括抗病与防御蛋白、信号传导蛋白、转录因子、能量代谢相关蛋白、抗逆相关蛋白、细胞保护机制蛋白、功能未知及其它蛋白等相关蛋白.     

双向电泳联用质谱技术研究棉苗对细极链格孢菌蛋白激发子诱导的应答

 采用双向电泳和质谱技术分析了细极链格孢菌蛋白激发子对棉苗诱导的全蛋白质组,建立二者间的差异表达图谱,并对差异蛋白进行了鉴定及分析归类。结果表明,蛋白质分子质量在10～100 kD之间、等电点3～10范围内,每块胶分离到约600个蛋白质点。得到了大约53个差异蛋白点,其中有31个为上调蛋白,22个为下调蛋白。对PEAT诱导后表达量明显增加的 7个上调蛋白点用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)进行肽质量指纹谱的分析,并通过检索不同的数据库进行蛋白质鉴定与功能预测,获得了4个蛋白的肽质量指纹图谱,经数据库检索鉴定分析,GH-1、GH-3、GH-6推测为核酮糖1,5-二磷酸羧化酶基因家簇,GH-7推测为-S-腺苷一蛋氨酸合成酶。     

细极链格孢菌Hog1 MAPK(酵母)同源基因AtHOG1的克隆与功能分析

为阐明高渗透压甘油激酶在链格孢菌中的功能,通过遗传学手段,构建了细极链格孢菌(Alternaria tenuissima)cDNA酵母表达文库,并对其进行筛选而获得细极链格孢菌高渗透压甘油蛋白激酶AtHOG1基因,该基因全长1 539 bp,编码355个氨基酸.AtHog1p含有MAPK保守的激酶激活区域"TGY",与来源于烟曲霉(Aspergillus fumigatus)AfOsm1p(XP-752664)、稻瘟菌(M.grisea)MG01822(XP-363896)及酿酒酵母(S.cerevisiae)ScHog1p(AAB67558)高度同源,相似性分别为94%,90%和80%.在高渗环境下,AtHOG1基因与ScHOG1基因功能相同.链格孢菌中存在HOG通路信号途径,AtHOG1基因可能与链格孢菌的逆境适应性调节密切相关.     

不同碳、氮源对甘蓝链格孢菌菌丝生长的影响

为探讨不同碳、氮源对甘蓝链格孢菌菌丝生长的影响,以从甘蓝品种W-14感病株上分离获得的菌种为供试材料,以该菌种在不同碳、氮源培养基上的菌落长势、直径、菌丝生长速率、生长指数、菌丝干重为测量指标,研究在基础培养基中添加13种常见氮源和6种常见碳源对甘蓝链格孢菌菌丝生长的作用,筛选出适宜该菌生长的营养物质。结果表明:在基础培养基中添加硝酸铵时,菌丝的生长速率及菌落直径较大,菌丝致密,其菌丝的生长指数最高为38.33,菌丝干重也较大;而在以淀粉为碳源的培养基上,菌丝的生长指数和菌丝干重最大,所以甘蓝链格孢菌菌丝生长的最佳氮源、碳源分别为硝酸铵和淀粉。     

二氧化硫和臭氧处理对链格孢菌生长的抑制能力

以二氧化硫和臭氧为杀菌剂,比较低浓度长时间处理和较高浓度短时间处理对链格孢菌的生长抑制能力,并比较气体处理后贮藏温度对链格孢菌生长的影响。结果表明,较低浓度长时间二氧化硫处理组的抑菌率显著高于臭氧处理组,当气体浓度均为20μL/L时,二氧化硫处理对链格孢菌的抑菌率为95%,比臭氧处理组的抑菌率提高了79%;而较高浓度短时间二氧化硫处理组对链格孢菌的抑菌率要低于臭氧处理组,当气体浓度均为400μL/L,二氧化硫处理组的抑菌率为7.56%,臭氧处理组的抑菌率为26.2%。而且,相同气体较低浓度长时间处理组的抑菌率均高于高浓度短时间处理组。在使用二氧化硫或臭氧较高浓度短时间处理后,25℃环境贮藏均有利于抑制链格孢菌的生长,在相同气体浓度条件下,臭氧处理组的抑菌率高于二氧化硫处理组。因此,采用较低浓度长时间二氧化硫(20μL/L处理5 d)处理可以有效抑制链格孢菌的生长。     

流相二氧化氯处理对苹果链格孢菌侵染的防治效果及贮藏品质的影响

为探究流相防腐剂对苹果链格孢菌侵染的防治效果及果实品质变化,采用平板法和刺伤接种法,测定80 mg·L-1和400 mg·L-1雾化二氧化氯对链格孢菌的抑制作用及对苹果果实品质的影响.结果表明:与对照组雾化无菌水处理相比,雾化二氧化氯处理苹果果实的病斑直径低于对照组(无菌水处理)果实;同时能够延缓采后苹果果实硬度、可溶性固形物、可滴定酸含量的下降速度,抑制丙二醛含量上升,提高防御物质总酚的含量与过氧化物酶、多酚氧化酶、苯丙氨酸解氨酶等防御酶的活性,因此短期内能够延缓苹果果实品质下降,且当雾化二氧化氯浓度为80 mg? L-1时,采后苹果果实的防腐保鲜效果最好.     

UV-B辐射增强下施氮对大麦土壤微生物量碳、氮的影响

通过田间试验,研究了UV-B辐射增强下不同施氮量对大麦土壤微生物量碳、氮的影响。UV-B辐射设对照（CK）和增强（E）2水平,施氮量设高、中、低3水平,分别为30、150和300 kg N/ha。结果表明：与对照相比,无论施氮量高低,UV-B辐射增强对非根际土壤微生物量碳、氮含量有促进作用;除低氮外,UV-B辐射增强对根际土壤微生物量碳、氮含量有抑制作用。在一定UV-B辐射强度下,高施氮量会降低根际土壤微生物量氮和非根际土微生物量碳、氮含量。     

棉花尖孢镰刀菌绿色荧光蛋白的转化

棉花枯萎病是棉花的主要病害之一,严重威胁棉花产量和品质。绿色荧光蛋白(GFP)是发光水母(Aequorea victoria)体内的一种蛋白,作为报告基因拥有诸多优点,目前已被广泛应用于植物研究当中。为研究枯萎菌浸染棉花的过程及植病互作分子机理,本研究利用PEG介导的原生质体转化方法,将绿色荧光蛋白(GFP)基因转入到棉花枯萎病菌中,创制转报告基因株系。结果表明:转化子连续转接2代后仍能够稳定遗传,且荧光强度良好。经荧光共聚焦显微镜观察和PCR验证GFP基因已成功转入到菌株中,转化所得的菌株将为后续可视化检测和分析枯萎病菌对棉花的侵染等研究提供帮助。     

不同抗性品种对棉花黄萎病菌致病力的影响

 以1个海岛棉品种和15个陆地棉品种为分离寄主,采取单孢分离,共分离出67个黄萎病菌系。以抗性差异较大的海岛棉品种Pima90-53和陆地棉品种冀棉20、邯208和中棉所8号为鉴别寄主,采用苗期营养钵定量注菌液法对分离菌系进行了致病力鉴定。结果表明,同一地块田间不同品种所分离菌系的致病力类型并非单一类型,而是由致病力连续变化的多种致病力菌系类型组成;由不同品种分离出的菌系致病力存在差异,寄主品种的抗性与分离的黄萎病菌系的致病力无关,但不同基因型品种可能会影响不同致病力菌落的消长。     

牛乳蛋白酶解产物抗氧化活性的研究

研究牛乳蛋白经胃蛋白酶和木瓜蛋白酶分步水解后,其酶解产物中不同分子量肽片段的抗氧化活性。试验结果表明,分子量小于5ku的牛乳抗氧化肽活性最强;牛乳抗氧化肽(质量浓度为250μg/mL)对超氧自由基、DPPH·和羟自由基的清除率分别为42.9%,69.0%,83.6%,分别是VC的0.75,0.81,0.87倍;其还原能力为VC的1.11倍。牛乳抗氧化肽具有较强的体外抗氧化活性。     

花生蛋白酶解规律及酶解产物抗氧化活性的研究

以花生蛋白为原料,利用碱性蛋白酶酶解,研究了花生蛋白的酶解规律,同时研究了酶解产物在抗氧化能力、羟自由基(HO.)的清除能力和亚油酸自氧化法测定3种体系的抗氧化特性。结果表明,花生蛋白酶解过程中水解度随时间的变化表现为快速增加和平稳阶段,酶解产物在3种体系中都表现出较强的抗氧化能力。     

碱性蛋白酶对螺旋藻活性蛋白的酶解研究

螺旋藻中的藻蓝蛋白作为一种具有生物活性功能的天然藻蓝素蛋白,其理论研究和应用近年来得到广泛的重视。通过测定螺旋藻破碎后上清液中蛋白质含量及其活性藻蓝蛋白含量,建立了一种提取螺旋藻蛋白质较适的方法和条件,最高提取率达到94.6%,活性藻蓝蛋白的得率为9.87%。利用正交实验,对提取的胞内蛋白质采用pH—stat方法进行碱性蛋白酶的水解,确定了其最佳酶促水解条件,即pH值为7.0,酶底物比为2.2%,反应时间为160min,反应温度为50℃,此时水解度与htot之比为120.20%,N溶解指数为27.73%。该研究对螺旋藻蛋白中生物活性物质的开发奠定了基础。     

施氮肥对盐胁迫下Bt棉生长和叶片Bt蛋白含量的影响

 以Bt棉品系K638为材料,在盆栽条件下研究了施氮肥对不同程度盐胁迫（土壤含盐量：0(CK)、0.15%(轻度胁迫)和0.3%（中度胁迫））下棉株生长、氮素吸收、Bt蛋白含量和Bt蛋白氮占全氮量比例的影响;同时,在水培条件下研究了不同形态氮素（硝态氮和铵态氮）对NaCl胁迫下Bt蛋白含量的效应。结果表明,氮肥与盐胁迫对棉叶Bt蛋白含量有显著的互作效应。非盐和低盐胁迫下,施氮肥促进了棉株生长（生物量分别提高了3.0和2.8倍）、Bt蛋白合成（分别提高41.0%和90.9%）和全N向Bt蛋白N的转化（分别提高9.3%和15.6%）;中度盐胁迫下,施氮肥虽也促进了棉株生长（1.4倍）,并提高了叶片全N含量（98.8%）和Bt蛋白含量（83.3%）,但并未提高Bt蛋白N占全N量的比例。无论盐胁迫与否,施NO₃^--N处理的生物量和叶片全氮含量都显著高于施NH₄⁺-N的处理,但由于盐胁迫下NO₃^--N降低了Bt蛋白N占全氮的比例（11.0%）,叶片Bt蛋白含量则略低于NH₄⁺-N处理。据此认为,盐胁迫下施氮肥通过促进棉株对N素的吸收积累并影响全氮转化为Bt蛋白的比例,进而影响Bt蛋白含量。     

中国部分棉区棉花轮纹斑病病原菌“种”的初步鉴定

从中国棉花主产区部分地区采集棉轮纹斑病叶,分离获得17个致病链格孢(Alternaria spp.)菌株。根据链格孢菌菌体和孢子形态学观察结果,结合ITS序列测定和分析结果,明确A1等16个菌株为链格孢菌(Alternaria alternata),A3菌株为大孢链格孢菌(Alternaria macrospore)。     

核桃蛋白酶解物体外抗氧化性研究

研究以中性蛋白酶对水剂法提油后的核桃粗蛋白进行的酶解,并以VC为对照,测定了核桃粗蛋白水解产物的体外抗氧化性。结果表明,核桃粗蛋白的水解度在底物用量为2.00g,酶用量为0.30g,pH值为7.0,温度为45℃,水解时间为4h的条件下有最大值。与VC相比,核桃粗蛋白酶解液对于ABTS+和·OH的清除率较高,对于DPPH·的清除率较低,对于O2-的清除能力不明显。核桃粗蛋白酶解液的抗氧化性与核桃粗蛋白的水解度没有明显的相关性。     

海马抗氧化活性肽制备工艺研究

旨在建立海马寡肽的制备工艺,探究寡肽的抗氧化活性。采用酶解法将海马原料制备成海马蛋白酶解肽,将游离氨基酸含量、DPPH·清除率及还原力作为考核指标,在获得制备海马酶解寡肽的最佳蛋白酶的基础上,选取酶添加量、pH、酶解温度及时间为因素,通过单因素和正交试验设计制备海马蛋白酶解肽,对其酶解工艺进行优化。最终获得海马抗氧化活性肽的最佳工艺条件为:风味蛋白酶添加量6000 U/g,酶解温度45℃,酶解时间9 h;在此工艺条件下,酶解产物的游离氨基酸含量为4.198 mg/m L,DPPH·清除率为92.758%,还原力为1.091。试验获得制备海马抗氧化活性肽最优酶解工艺,为进一步研发成保健食品提供坚实的基础。