来源和质量不同对山羊卵母细胞体外成熟率的影响

比较了卵母细胞级别对体外成熟率的影响,以及促卵泡素(FSH)处理山羊对卵母细胞采集的数量和质量的影响。结果表明:卵母细胞级别对体外成熟率有显著影响,不论是来源于FSH处理卵巢还是屠宰场卵巢,均是A、B级卵母细胞的成熟率高于C级卵母细胞,差异极显著(P<0.01)。但是A、B级卵母细胞之间差异不显著;卵巢来源对卵母细胞采集的数量和质量有显著影响,A、B级卵母细胞在获卵总数中所占的比例,平均每个卵巢获卵母细胞数及A、B级卵母细胞数,均是FSH处理卵巢高于屠宰场卵巢,差异显著(P<0.05);卵巢来源对卵母细胞体外成熟率有显著影响,来自于FSH处理卵巢的卵母细胞体外成熟率高于屠宰场卵巢(81.6%比67.6%),差异极显著(P<0.01)。     

受体卵母细胞来源和供体细胞类型对山羊体细胞核移植融合率的影响

以波尔山羊体细胞作为核供体进行核移植,比较受体卵母细胞来源以及不同供体细胞类型对核移植重构胚融合率的影响。结果:以体内成熟和FSH处理卵巢、屠宰场卵巢来源的体外成熟卵母细胞做核移植受体卵母细胞,重组卵的融合率分别为71.9%,78.4%,73.1%,三者之间差异不显著;以卵丘细胞和皮肤成纤维细胞做核供体,重组卵的融合率分别为77.1%,68.3%,二者之间差异显著。     

诱导幼龄绵羊卵泡发育的研究

为了稳定并提高幼龄绵羊卵泡的发育效率。本研究从激素处理方案、激素生产厂家、羔羊日龄、重复处理周期等4个方面进行了研究。结果表明：国产FSH剂量在60IU/只、120 IU和180 IU之间差异显著(P<0.05);国产FSH和加拿大生产的FSH对幼羔卵泡发育没有影响;5－9周龄羔羊的卵泡数和卵母细胞数显著高于4周龄和11周龄的羔羊(P<0.05);4-7周龄羔羊首次处理后间隔15~30天再次处理的卵泡数和卵母细胞数都没有差异(P>0.05),2次重复处理总卵泡数和卵母细胞数间也没有差异(P>0.05)。     

不同处理方法对波尔山羊胚胎移植效果的影响

为了提高波尔山羊繁殖力，应用两种处理方法对波尔山羊进行了同期发情及超数排卵研究。结果表明：两种处理方法（PG-FSH法与CIDR-FSH法）对波尔山羊的同期发情率无显著差异（P>0.05），波尔山羊同期发情率达到92.5%；CIDR-FSH法处理的供体卵巢上的平均黄体数及平均采卵数均显著高于（P<0.05）PG-FSH法，而两者的平均获胚数与平均可用胚数差异不显著（P>0.05），说明CIDR-FSH法对波尔山羊的超排处理效果要优于PG-FSH法。试验还表明，移胚数量对受体妊娠率无显著影响（P>0.05），而对受体产羔率有极显著（P<0.01）的影响。移植双胚可以提高受体的产羔率。     

不同超数排卵方案与供体牛月龄对高产荷斯坦奶牛体外性控胚胎生产效率的影响

旨在探讨激素处理方案、供体牛月龄对高产荷斯坦奶牛超数排卵效果和性控体外胚胎生产效率的影响,为建立稳定高效且适用于高产荷斯坦奶牛的超数排卵方案以及提高高产奶牛性控胚胎体外生产效率提供技术支持。实验共选取高产荷斯坦奶牛60头,随机分为3组,分别按照注射FSH两周采卵一次(bi-weekly,BW)、注射FSH一周采卵一次(once weekly,OW)与不注射激素(control,CON)进行OPUIVF体外性控胚胎生产,应用以上最佳方案进一步研究青年牛与经产牛在体外胚胎生产效率上是否存在差异。BW组的超排效果要优于OW组与CON组,BW组头均可用卵数(15.30±0.60)、可用卵占比(68.83%±1.92%)、头均A级卵数(9.86±0.38)与头均B级卵数(5.44±0.37)均显著高于OW组;BW组IVF早期胚胎体外发育优于OW组与CON组,其中BW组卵裂率(77.80%±1.08%)与头均胚胎数(5.11±0.27)均高于OW组与CON组且差异显著,BW组和CON组B级胚胎占比(13.95%±1.23%)均显著低于OW组;经产牛组头均卵子数(27.10±1.35)与头均胚胎数(...     

影响西门塔尔牛超数排卵效果的因素研究

为探讨影响西门塔尔牛超数排卵效果的因素,提高供体母牛利用率,加速胚胎移植技术产业化。以头均回收胚数和头均可用胚数为主要技术指标,在湖北和内蒙古乌拉盖进行超排试验,比较经产牛与青年牛、中科院产与加拿大产FSH两种不同超排方案及不同季节等因素对超排效果的影响。结果表明：（1）在农区,青年母牛的头均回收胚数和头均可用胚数分别为9.8、7.5枚,经产母牛分别为7.5、4.2枚,青年母牛显著高于经产母牛(P<0.05);在牧区,青年母牛头均回收胚数和可用胚数分别为10.3、8.4枚,经产母牛分别为8.0、5.5枚,青年母牛显著高于经产母牛 (P<0.05)。（2）在农区,使用中科院产FSH的头均回收胚数和可用胚数分别为8.0、4.8枚,使用加拿大产FSH分别为9.0、5.9枚,中科院产FSH与加拿大产FSH之间差异不显著(P>0.05);在牧区,使用中科院产FSH头均回收胚数和可用胚数分别为8.8、5.5枚,使用加拿大产FSH分别为9.5、6.5枚,中科院产FSH与加拿大产FSH之间差异亦不显著(P>0.05)。（3）在牧区,方案A(FSH+PG)的头均回收胚数和可用胚数分别为7.5、4.8枚,方案B(CIDR+E2+P4+FSH+PG)分别为10.5、8.0枚,方案B显著高于方案A (P<0.05);在农区,方案A的头均回收胚数和可用胚数分别为7.0、4.2枚,方案B分别为9.6、7.1枚,方案B亦显著高于方案A (P<0.05)。（4）在牧区,夏季的头均回收胚数和可用胚数分别为9.6、7.5枚,春季分别为6.0、3.5枚,夏季显著高于春季(P<0.05);在农区,春季的头均回收胚数和可用胚数分别为8.2、5.4枚,秋季分别为9.0、6.7枚,春季与秋季之间差异不显著(P>0.05)。结论：（1）青年母牛可作为供体牛的首选;（2）中科院产FSH能获得好的超排效果,且价格便宜,应为超排首选;（3）CIDR+E2+P4+FSH+PG法的超排效果优于FSH+PG法,前者为首选超排方案;（4）牧区应在夏季超排,农区应在春季和秋季超排。     

绵羊卵母细胞OPS玻璃化冷冻效果初报

比较了绵羊卵母细胞不同发育阶段对OPS玻璃化冷冻效果的影响,同时比较了程序化冷冻与OPS玻璃化冷冻的效果。结果显示:成熟培养0h(GV期)、16h、24h、26h的卵母细胞玻璃化冷冻、解冻后形态正常数差异不显著()P<0.05),培养24h卵母细胞冷冻保存后,分裂卵数、囊胚发育数与培养0h、16h、26h试验组差异显著(38.3%VS13.3%、26.7%、28.3%;11.7%VS0%、5.0%、8.3%,P<0.05),而培养16h、26h两个试验组之间差异不显著(P<0.05);程序化冷冻方法(参考胚胎程序化冷冻)、OPS玻璃化冷冻与不冷冻三组试验在形态正常数、分裂卵数和囊胚发育数上差异都极显著(20.0%VS54.1%、100%;6.7%VS37.5%、78.3%;0%VS11.4%、23.3%,P<0.01)。     

卵泡颗粒细胞维持山羊卵母细胞减数分裂抑制状态的研究

通过在卵母细胞体外成熟过程中添加不同浓度的卵丘细胞或其外围壁层颗粒细胞进行共培养,对山羊卵母细胞成熟过程中卵泡颗粒细胞对卵母细胞减数分裂抑制作用及作用机制进行了探索.结果表明,成熟液中添加105和106个/mL卵丘细胞或外围壁层颗粒细胞的卵母细胞体外成熟率与对照组相比差异不显著(P>0.05),但添加5×106个/mL(41.2%)和107个/mL(24.6%)卵丘细胞或外围壁层颗粒细胞组的成熟率显著降低(P<0.05);添加5×106和107个/mL卵丘细胞组和颗粒细胞组卵丘不能正常扩展,卵母细胞核状态观察,停留在GV期;Rp-cAMP(Rp-cyclic adenosine monophosphothioate)膜渗透性cAMP对抗剂,诱导了107个/mL的卵丘细胞组(71.6%)和外围壁层颗粒细胞组(71.3%)的卵母细胞体外成熟率与对照组(72.O%)差异不显著(P>0.05).在山羊卵母细胞体外成熟过程中,添加一定浓度的卵丘细胞及其外层的颗粒细胞可以提高卵母细胞胞质内的cAMP的水平,抑制卵母细胞减数分裂的启动,使卵母细胞停留在GV期.     

外源性孕酮对牛卵母细胞体外核成熟的影响

了研究外源性孕酮对牛卵母细胞体外核成熟的作用,通过向成熟培养液中添加10 μg/mL FSH +10 μg/mL LH（对照组）和0 ng/mL、10 ng/mL、100 ng/mL、1000 ng/mL的外源性孕酮,对牛卵丘卵母细胞复合体进行体外成熟培养,在培养8 h后用醋酸地衣红染色观察各自的生发泡破裂率,然后在成熟22 h统计第一极体率,体外受精后7~8天统计囊胚率。结果表明,对照组卵母细胞的生发泡破裂率(75.0%)和极体率(79.6%)均明显高于添加不同浓度孕酮的各处理组(P<0.05),而囊胚率各组之间均无显著差异(P>0.05)。因此,外源性孕酮不能促进牛卵母细胞的核成熟,单独添加外源性孕酮不能起到与内源性孕酮相同的作用。     

卵巢质量及培养条件对郏县红牛卵泡卵母细胞体外成熟的影响

利用屠宰场采集的郏县红牛卵巢,研究卵巢质量及培养条件对卵母细胞体外成熟的影响。结果表明:A类卵巢平均获得的卵母细胞数(2.0枚)明显低于B类卵巢获得的卵母细胞数(5.4枚),从A类卵巢上获得的卵母细胞成熟率(55.00%)、卵裂率(37.50%)显著或极显著低于B类卵巢上获得的卵母细胞成熟率(80.00%)(p<0.05)、卵裂率(60.17%)(p<0.01);将随机分成三组的卵母细胞分别培养20h(Ⅰ组)、24h(Ⅱ组)、28h(Ⅲ组),三组成熟率(77.77%、78.57%、74.43%)之间无显著差异(p>0.05),但卵裂率Ⅰ组、Ⅱ组(51.79%、58.16%)明显高于Ⅲ组(36.98%)(p<0.05),Ⅰ组、Ⅱ组差异不显著(p>0.05);以M-199为基础液,比较单独添加ECS和FCS与激素配合的情况下,两种血清种类对卵母细胞成熟的影响,结果表明卵母细胞成熟率(73.33%、75.00%)、卵裂率(52.21%、54.35%)均无显著差异(p>0.05)。     

幼羔超早期繁殖技术研究

幼羔超早期繁殖技术是集幼羔超排、活体采卵、体外受精、胚胎移植等技术为一体的胚胎生物技术体系。诱导羔羊卵泡发育技术（简称“幼羔超排”）是根据性成熟前幼龄母羔（1～2月龄）卵巢对生殖激素敏感,卵泡发育很少发生闭锁的特殊生理特点而发明的一项高效率生产羊卵母细胞的新技术。本文从幼羔超早期利用的意义,幼羔超排、幼羔卵母细胞体外受精和胚胎移植等方面综述了目前幼羔超早期利用技术的现状及发展前景。     

黄牛-奶牛IVF胚胎早期发育影响因素的研究

为了在实验室建立一套黄牛-奶牛IVF胚胎制备体系,为IVF胚胎的研究提供来源方便、制备简单的素材,本实验从黄牛-奶牛IVF胚胎制备过程中卵巢的处理方法、精子的处理方法及受精卵的培养方法等几个方面进行优化。结果表明：温度递增式洗涤卵巢(25℃、30℃、35℃、39℃),对卵母细胞起到一定的缓冲作用,获取A级COC_S的比例和卵母细胞的成熟率较直接用25℃和39℃生理盐水洗涤卵巢高且差异显著,但是卵裂率和囊胚率并没有显著差异;用移液器轻轻吹打精子后,显著提高卵母细胞的受精率和卵裂率;培养方法对黄牛-奶牛IVF胚胎的早期发育有一定的影响。研究结果提示,经过温度递增式的生理盐水梯度洗涤卵巢,以体外成熟的黄牛卵母细胞为受体、以高产奶牛冷冻精子经过移液器轻微反复吹打处理后进行体外受精,受精卵置五孔板中进行IVF胚胎的体外培养,可以获得发育至孵化囊胚的黄牛-奶牛IVF胚胎。     

EGF对牛卵母细胞体外成熟及胚胎发育的影响

在卵母细胞体外成熟液（含FSH）中分别添加10,30,50ng/ml表皮生长因子（EGF）,24h检查成熟率,并进行孤雌激活。结果表明：添加10ng/ml、30ng/ml EGF组牛卵母细胞成熟率较对照组（未添加EGF）无显著差异（79.8% vs 71.5% vs 70.4%,p>0.05）,但EGF添加至50ng/ml时牛卵母细胞第一极体排出率显著提高,达85.4%（P<0.01）;在实验1的基础上,比较培养液中添加10ng/ml、30ng/ml 、50ng/ml EGF对牛孤雌激活胚胎体外发育的影响,结果发现在培养液中添加EGF并不能显著提高牛卵母细胞体外孤雌发育囊胚率（P>0.05）,但可显著提高其囊胚孵化率（P<0.01）。     

奶牛性控胚胎体外生产的影响因素及控制措施

针对奶牛胚胎体外生产环节,对体外受精和培养等技术进行了研究,旨在建立奶牛性控胚胎体外生产技术体系。结果表明,卵母细胞外周卵丘细胞至少保持3层以上,在成熟基础液中添加10 ng/ml的EGF,利于核质成熟;在精子获能液中添加咖啡因降低精子的存活时间;牛胚胎前3 d用CR1aa+BSA培养,再用SOFaa+5%FBS培养,获得高的囊胚发育率,并且添加50 ng/ml IGF-I后胚胎的发育得到了很大的改善。利用性控精液进行体外受精,受精率有轻微下降,但对生产的胚胎发育质量无明显（P>0.05）影响,胚胎移植后受胎率为40%左右。     

收获期对北方杂交粳稻和常规粳稻品质的影响

研究不同收获时期对北方杂交粳稻和常规粳稻米质性状的影响,为今后从栽培措施上改良杂交粳稻和常规粳稻的米质提供理论依据。以2个杂交粳稻和3个常规粳稻为试验材料,从齐穗后30d开始,每7d取样收获1次,共取样收获7次,风干后统一测定米质性状。结果表明,不同收获时期对杂交粳稻和常规粳稻的糙米率、精米率、整精米率影响显著,随着收获时期的延后,糙米率、精米率先逐渐增加,在齐穗后65d达到最大值后显著降低,整精米率在齐穗后65d之前波动较大,无明显规律性,齐穗后65d之后显著下降;杂交粳稻的垩白粒率、垩白度整体呈上升趋势,常规粳稻的垩白粒率、垩白度整体差异不显著,5个品种的白度值整体均呈上升趋势。不同收获时期对蛋白质和直链淀粉含量的影响大多未达显著水平。食味值除丰锦品种在不同收获时期间差异不显著外,其他4个品种随收获时期的推迟整体呈下降趋势,在0.05显著水平上有差异,在0.01显著水平上差异大多不显著。同一收获时期间比较,常规粳稻的加工品质（包括糙米率、精米率和整精米率）显著优于杂交粳稻,杂交粳稻的白度值显著优于常规粳稻。在垩白粒率和垩白度性状的表现上,杂交粳稻和常规粳稻间的差异未达显著水平。杂交粳稻和常规粳稻在直链淀粉含量、蛋白质含量和食味值间并无显著的差异,在最佳收获期上也无显著差异。若要改善加工品质,需适当延后收获,一般在齐穗后58d收获较好;若要改善外观品质,提高食味值,则需适当提前收获,在齐穗后30~37d收获较好。     

促卵泡素与促黄体素对猪卵母细胞体外成熟的影响

探讨了促性腺激素(FSH、LH)对猪卵母细胞体外成熟的影响,最终找到了其合理的使用剂量。在成熟液中添加LH浓度分别为1,5,10 IU/mL时,与没有添加FSH与LH的对照组(15.9%)相比,成熟率有显著提高,成熟率分别为49.1%,30.0%,36.3%。LH浓度为1 IU/mL的实验组成熟率最高,显著高于对照组(p<0.05);然后以成熟液中只添加1 IU/mL LH为对照组,实验组分别添加1,5,10 IU/mL FSH。试验结果表明:添加FSH浓度为5和10 IU/mL时其成熟率分别为40.1%,27.6%,低于对照组(49.0%)。添加FSH浓度为1 IU/mL时其成熟率(49.1%)高于对照组(49.0%),但差异不显著。两组试验同时得出,随着LH与FSH添加浓度逐渐增加,成熟率呈下降趋势。通过本试验结果得出,在体外成熟培养猪卵母细胞时,各添加1 IU/mL LH与FSH时,得到最佳的成熟效果。     

2种化学激活方法制备的小鼠孤雌胚胎早期发育指标比较研究

为了寻找一种更健康、更有效地制备孤雌胚胎的方法,进而从根本上提高哺乳动物孤雌胚胎、体外受精胚胎及核移植胚胎成活率并减少孤雌胚胎、核移植胚胎出生后发生潜在疾病与缺陷的几率。通过比较2种不同化学激活方法（试验组I：7%乙醇+2 mmol/L 6DMAP;试验组II：7%乙醇+2 mmol/L 6 DMAP+5 μg/mL CB）制备的小鼠孤雌胚胎由卵母细胞激活到发育至囊胚的时间、囊胚形态及囊胚细胞数目,初步研究了不同化学方法制备的小鼠孤雌胚胎在形态学及细胞水平上的差异性。结果表明：试验组I与试验组II相比,前者比后者卵裂率稍高,桑葚率、不同时间段的囊胚率稍低,但两组间数据差异不显著(64.9 vs73.7,P>0.1;31.7 vs28.8,P>0.1;8.7 vs5.5,P>0.1)。2种方法所得的孤雌囊胚在形态上相似,但是试验组II囊胚细胞数要比试验组I囊胚细胞数稍少(67vs50,P>0.1);两组囊胚的细胞数与受精囊胚相比没有显著差异(67vs50vs65,P>0.1)。选用的2种化学方法制备的小鼠孤雌胚胎,在由卵母细胞发育至囊胚的时间、囊胚形态及囊胚细胞数目方面没有显著差异。