水貂阿留申病毒实验室检测方法研究进展

水貂阿留申病是一种在世界范围内广泛流行的、严重危害水貂养殖业的病毒性免疫抑制性传染病。本文介绍了水貂阿留申病毒的分离与鉴定、血清学和分子生物学最新实验室检测方法研究进展,以期为防控本病提供参考。     

水貂阿留申病病毒研究进展

水貂阿留申病(Aleutian mink disease, AMD)是由水貂阿留申病病毒(Aleutian mink disease virus, AMDV)引起的水貂的重要传染性疾病之一,深入开展对AMDV的研究对于该病的防控有重要意义。AMDV基因组全长约为4.8 kb,主要编码2种结构蛋白和3种非结构蛋白,它们在病毒复制、增殖及致病过程中发挥重要作用。AMDV的复制依赖于代谢活跃的细胞,对于幼貂,病毒感染肺泡Ⅱ型细胞会造成急性致死性肺炎,感染巨噬细胞则会引起成年水貂患高丙种球蛋白血症和免疫复合物介导的肾小球肾炎等慢性进行性疾病。笔者从AMDV侵入细胞的受体途径、诱导细胞凋亡途径及病毒复制等方面对其致病机理进行阐述。AMDV在全世界范围内广泛流行,现有的检测方法主要分为血清学诊断方法和分子生物学诊断方法。目前,尚未开发出安全有效的针对AMDV的商品化疫苗,随着生物学技术的快速发展,在灭活疫苗、DNA疫苗和亚单位疫苗的研制上有所进展;抗病毒的新方法,如筛选AMDV耐受貂,提高水貂免疫力和靶向适配体技术为AMD的防控提供了新思路。文章从AMDV编码蛋白功能、病毒细胞嗜性与复制、临床表现...     

水貂阿留申病病毒分子生物学研究进展

水貂阿留申病病毒是一种在水貂中广泛存在的重要病原体.该病毒属阿留申病毒属,主要编码4种蛋白(结构蛋白VP1、VP2和非结构蛋白NS1、NS2).VP1蛋白在协助病毒产生感染性方面起着重要作用;VP2蛋白是该病毒的主要免疫原性抗原,能体外中和病毒;NS1和NS2对病毒在宿主细胞中的复制起重要的调节作用.该病毒的分子生物学诊断技术主要有核酸杂交技术、PCR和基因芯片检测技术.     

水貂阿留申病毒的分子生物学研究进展

从水貂阿留申病毒(ADV)基因组特点出发,就阿留申病毒的分子生物学研究进展作以简单综述。     

水貂阿留申病毒检测方法研究进展

水貂阿留申病是由水貂阿留申病毒引起的以浆细胞增多为主要特征的慢性、消耗性、病毒性传染病。主要侵害水貂的免疫系统,导致机体免疫系统紊乱引起的器官衰竭,病死率极高,严重损害了水貂养殖产业的经济利益,该病存在于绝大多数养殖水貂的国家和地区。目前,能有效预防该病的疫苗尚未研制成型,该病的防控已成为水貂养殖领域的世界性难题,在防控方面主要采取淘汰检疫阳性水貂的办法。论文主要针对目前该病在国内外检测方法的特点和流行情况进行阐述,以期为水貂阿留申病快速检测方法的建立及水貂阿留申病的有效防控提供参考。     

水貂阿留申病研究进展

水貂阿留申病(AD)是由阿留申病毒(ADV)引起的水貂的一种慢性、进行性传染病。本病以病毒持续性感染、典型的获得性免疫缺陷综合症为特征。本病于1956年首次报道,但直到1973年才分离到病毒,1977年才在细胞上培养病毒成功。此后,对本病的研究工作进展迅速,获得了对本病更为全面、详细、深入的认识。现将近年来对AD研究的进展情况介绍如下。     

水貂阿留申病研究进展

主要对国内外阿留申病毒的分子生物学进展及阿留申病的病理进行了综述。     

水貂阿留申病毒VP2蛋白Dot-ELISA检测方法的建立

为建立一种适合于基层快速检测水貂阿留申病毒(ADV)的检测方法,本研究将ADV的VP2基因经重叠延伸PCR法进行扩增后克隆至表达载体p GEX-4T-1中进行原核表达,将纯化的重组蛋白作为包被抗原建立了ADV的Dot-ELISA检测方法,并与对流免疫电泳(CIEP)作对照试验。结果表明,抗原最适包被浓度为20μg/m L,最适血清稀释度为1∶200,酶标二抗最适工作浓度为1∶2 000,血清和酶标抗体最适反应温度为37℃,反应时间为45 min~60 min。阻断试验和交叉试验显示与常见的貂病毒性肠炎和貂犬瘟热阳性血清无交叉反应,表明其具有良好的特异性。采用建立的Dot-ELISA和CIEP对78份临床血清样品进行检测,结果显示Dot-ELISA阳性检出率为84.6%,CIEP的阳性检出率为80.8%,敏感性高于CIEP,两者符合率为96.2%。本研究建立的Dot-ELISA检测方法简便、快速、灵敏、特异、重复性好,适合基层单位用于水貂阿留申病快速诊断和疫病普查。     

水貂阿留申病及其研究进展

<正> 水貂阿留申病是1956年由美国学者Hastsough与Gorham发现的。1962年经Karstad与Pridhan证实是由病毒引起的一种水貂的慢性传染病。该病特征是:潜伏期长,呈慢性经过,血液中丙种球蛋白异常增加,浆细胞增多,多发性动脉炎,血管球性肾炎和肝炎。因此,又称浆细胞增多症(瑞典、丹麦)或丙种球蛋白增多病。此病广泛流行于欧、美、亚洲二十多个国家。已成为当前影响养貂业持续发展的三大疫病之一。     

水貂阿留申病毒纳米PCR检测方法的建立与初步应用

为建立便捷、灵敏的水貂阿留申病病毒(AMDV)纳米PCR检测方法,根据AMDV NS1基因的保守序列设计一对特异性引物,对纳米PCR反应的退火温度、胶体金浓度进行了优化;测序检测扩增基因是否发生变异;对特异性和灵敏度进行了评估。结果表明,此纳米PCR的最佳退火温度为51℃,普通PCR为55℃;加入胶体金最佳浓度在0.2~0.8nmol·L-1,纳米PCR与普通PCR产物测序相似性大于99%。特异性检测表明该纳米PCR方法只扩增AMDV而不能扩增犬瘟热病毒和水貂肠炎细小病毒。在粪尿样品检测中该纳米PCR敏感性比普通PCR高10倍。检测40份临床样品,结果表明该方法比对流免疫电泳检测敏感性提高,从而为用粪、尿等低病毒样品检测水貂阿留申病提供了一种新的有效方法。     

水貂阿留申病的研究进展

水貂阿留申病(Aleutian disease of mink,ADM)是由水貂阿留申病细小病毒(Aleutian mink disease parvovirus,AD-MV)引起的一种慢性、进行性传染病,一直是危害世界养貂业健康发展最重要的疫病之一。到目前为止,还没有疫苗可成功用于ADM的预防,也没有特异有效的治疗方法,唯一可行的防治方法就是通过多次特异性检疫,淘汰病貂,净化貂群。笔者对阿留申病的病原学、发病机制、防治措施等方面进行概述,为临床防治水貂阿留申病提供了理论基础。     

水貂阿留申病毒结构蛋白与非结构蛋白的研究进展

水貂阿留申病毒(Aleutian mink disease virus,ADV)是一种主要侵染水貂的自主复制型细小病毒,是一种在水貂中广泛存在的重要病原体。病毒粒子的蛋白分为结构蛋白(VP1、VP2)和非结构蛋白(NS1、NS2)两类。VP1蛋白对病毒粒子产生感染性有重要作用;VP2蛋白是主要免疫功能区,能刺激机体产生中和抗体;NS1和NS2主要参与病毒的复制和基因的表达调节。文中对近年来国内外学者关于水貂阿留申病毒结构蛋白和非结构蛋白的研究情况进行归纳和总结。     

水貂阿留申病毒TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法的建立与应用

为建立一种快速、敏感检测水貂阿留申病毒(AMDV)的方法,本研究根据AMDV的VP2基因保守区设计特异性引物和MGB探针,并优化检测反应条件,建立了AMDV的TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果显示,以重组质粒为标准品建立的标准曲线在1.0×10~2拷贝/μL~1.0×10~8拷贝/μL内具有良好的线性关系,相关系数(R~2)为0.998。该方法仅对AMDV的靶基因扩增呈阳性,而对猪细小病毒、犬细小病毒、水貂肠炎细小病毒等相关病毒检测结果均为阴性,特异性良好。该方法对AMDV检测的灵敏度为10拷贝/μL,为普通PCR灵敏度的100倍;组内和组间重复性试验表明该方法的组内和组间变异系数均小于2%,具有良好的重复性。应用建立方法和普通PCR方法分别对40份疑似临床组织病料样品进行检测,该方法检出率比普通PCR高约7.5%。本研究结果表明建立的AMDV TaqMan-MGB荧光定量PCR方法灵敏、快速、特异性强、重复性好,适用于对AMDV的快速定量检测。     

水貂阿留申病毒荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

根据水貂阿留申病毒（Aleutian mink disease virus,AMDV）基因序列（GenBank登录号：NC_001662.1）设计1对特异性引物,通过对荧光定量PCR反应条件的优化,建立了检测AMDV的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,该方法的灵敏度达10拷贝/μL,≥10²拷贝/μL具有良好的特异性和重复性。同时利用该方法对8份疑似AMDV血清进行检测,结果6份阳性,阳性率为75%。本研究为水貂阿留申病的鉴别诊断及净群根除奠定了技术基础。     

水貂阿留申病防制的研究进展

水貂阿留申病防制是水貂养殖领域的世界性难题。该病临床特征是全身性淋巴细胞增殖、血清γ－球蛋白增高、肾肿大、动脉性血管炎和肝炎、持续性毒血症。多年来,人们对水貂阿留申病防制的研究主要集中于对该病的诊断和淘汰,经历了碘凝集反应,对流免疫电泳技术两个主要阶段。近年来,通过研究阿留申病循环免疫复合物的测定、抗体消长规律、免疫机制、试用免疫接种,使最终攻破阿留申病防制难关出现曙光。     

水貂阿留申病诊断技术研究进展

水貂阿留申病是水貂养殖业的重要疫病,目前无疫苗预防,主要通过发展诊断技术,淘汰感染貂防控该病。论文总结了在貂场应用的基因与抗体检测技术,基因检测具有高灵敏度和特异性,能够检测到动物带毒感染,不同类型的基因检测技术对变异性强的阿留申病毒检测各有所长;抗体检测是水貂阿留申病的主要检测方式,研究者不断创新和改进原有技术,趋向对阿留申病的规模化精准检测,但单一的抗体检测方法淘汰感染貂具有局限性。论文通过对两类检测技术分析,建议采用基因与抗体的联合检测方法,从感染貂群中区分耐受貂或抗性貂,期望为国内高感染率貂场的检测和选种提供参考。     

水貂阿留申病防制的研究进展

水貂阿留申病防制是水貂养殖领域的世界性难题。该病临床特征是全身性淋巴细胞增殖、血清γ－球蛋白增高、肾肿大、动脉性血管炎和肝炎、持续性毒血症。多年来,人们对水貂阿留申病防制的研究主要集中于对该病的诊断和淘汰,经历了碘凝集反应,对流免疫电泳技术两个主要阶段。近年来,通过研究阿留申病循环免疫复合物的测定、抗体消长规律、免疫机制、试用免疫接种,使最终攻破阿留申病防制难关出现曙光。     

水貂血液阿留申病病毒及其抗体的检测与分析

为了确定鉴定阿留申病的适宜方法,尤其在阿留申病毒高感染貂场,本试验联合应用对流免疫电泳(CIEP)和PCR方法,对1个貂场连续2年于11¹2月间检测1次貂血液的阿留申病毒及其抗体。用CIEP检测产仔(断乳成活数≥5只/窝)母貂及其仔貂。通过比较貂群的检测结果来分析2种检测方法鉴别阿留申病貂的适用性。2次检测结果显示各貂群CIEP阳性率为60%12月间检测1次貂血液的阿留申病毒及其抗体。用CIEP检测产仔(断乳成活数≥5只/窝)母貂及其仔貂。通过比较貂群的检测结果来分析2种检测方法鉴别阿留申病貂的适用性。2次检测结果显示各貂群CIEP阳性率为60%⁹7%,PCR阳性率为20%97%,PCR阳性率为20%⁶3%,水貂的CIEP与PCR检测阳性结果不完全匹配。根据CIEP和PCR联合检测结果,貂群被分为4个群体CIEP+PCR+、CIEP-PCR-、CIEP-PCR+和CIEP+PCR-。2次检测的CIEP+PCR-貂在当年母貂中分别占48%、39%,在老母貂中分别占43%、77%,在公貂中分别占21%、51%。2次检测的CIEP+PCR-貂在貂群所占比例大,而CIEP-PCR-和CIEP-PCR+貂在貂群中所占比例小。公貂、老母貂经PCR阳性淘汰间隔1年再次检测,CIEP+PCR-貂在群体中比例明显提高。产仔263%,水貂的CIEP与PCR检测阳性结果不完全匹配。根据CIEP和PCR联合检测结果,貂群被分为4个群体CIEP+PCR+、CIEP-PCR-、CIEP-PCR+和CIEP+PCR-。2次检测的CIEP+PCR-貂在当年母貂中分别占48%、39%,在老母貂中分别占43%、77%,在公貂中分别占21%、51%。2次检测的CIEP+PCR-貂在貂群所占比例大,而CIEP-PCR-和CIEP-PCR+貂在貂群中所占比例小。公貂、老母貂经PCR阳性淘汰间隔1年再次检测,CIEP+PCR-貂在群体中比例明显提高。产仔2⁴年龄母貂有72%4年龄母貂有72%⁸0%CIEP+貂,而其60日龄仔貂仅有11%80%CIEP+貂,而其60日龄仔貂仅有11%¹6%CIEP+貂。结果分析指出,中国阿留申病病毒高感染率养殖貂群不适宜单纯采用CIEP检测淘汰阳性貂净化阿留申病。发现每年11至12月用CIEP和PCR联合检测貂血样,易检出CIEP+PCR-的潜在阿留申病毒感染康复貂。     

水貂阿留申病毒环介导等温扩增（LAMP）检测方法的建立

为建立一种简便、快速、特异的水貂阿留申病毒（ADV）检测方法,根据GenBank中已登录的ADV基因组序列,选择水貂阿留申病毒VP2基因作为靶基因,设计并合成5套环介导等温扩增（LAMP）反应所需的引物,通过试验筛选出最佳引物,并进行最佳引物的特异性及敏感性试验,建立了LAMP快速检测方法。试验结果表明,该方法比普通PCR方法灵敏性高10倍,与其他的水貂源病毒不发生非特异性反应,并且具有良好的重复性。利用建立的LAMP检测方法对30份临床样品的阳性检出率为6.7%。该方法简便快速,为水貂阿留申病的检测提供了新的发展方向,有望成为简易的常规检测手段,尤其适用于基层应用。     

水貂阿留申病

阿留申病是水貂特有的一种病程进展极为缓慢的传染病，发病率高，死亡率大，严重影响水貂繁殖机能，对养貂业危害极大。病的主要表现是浆细胞增多，血清中丙种球蛋白增高、持续性病毒血症、肾小球性肾炎，伴有母兽空怀显著增加和秋冬季节的大批死亡。长期以来本病被认为是一种遗传性疾病，1962年被证实为病毒性传染病。现世界各国均有发生。