小鼠卵母细胞去核时间对卵丘细胞核移植的影响

对超数排卵的小鼠分别在注射HCG后14~16,16~18,18~20和20~22h采小鼠卵母细胞用于核移植,观察小鼠卵母细胞的去核时间在体细胞核移植中的作用。结果显示,在注射hCG后14~16,16~18,18~20和20~22h,小鼠卵母细胞去核效率分别为80.09%(338/422),73.12%(283/387),55.02%(230/418)和48.74%(193/396);重构胚激活率分别为66.20%(190/287),75.43%(175/232),84.78%(156/184)和85.14%(126/148);重构胚的囊胚发育率分别为13.94%(40/287),7.33%(17/232),3.80%(7/184)和1.35%(2/148)。试验证实小鼠卵母细胞在注射hCG后14~16h进行去核较为适宜。     

小鼠卵母细胞去核方法的研究

用 McGrath 和 Solter 的去核方法和改进的胚胎染色体制备技术,研究小鼠卵母细胞去核的基本方法及吸出的胞质量和极体的有无对去核率的影响。实验表明:(1)小鼠卵母细胞透明带弹性很差,去核操作成功率仅53.8%;(2)制备卵母细胞染色体,无需用秋水仙素等处理,直接经2～3min 低渗处理便可使第2次减数发裂中期染色体充分展开;(3)小鼠卵母细胞去核时抽1/4胞质的染色体全部去除率(49%)和抽1/3胞质的(54%)差异未达到显著水平(P>0.05);(4)注射 HCG 后15～16h 获取的小鼠卵母细胞,只有1/3左右具有明显的第1极体;抽取无极体卵母细胞之卵周隙较大一侧的细胞质,去核率与见极体卵母细胞的无明显差异。     

小鼠卵母细胞快速去核方法的初步研究

目前,众多的去核方法中主要有几类：化学去核法、显微操作去核法、化学去核法-显微操作去核法相结合的方法,以及徒手切割法、离心去核法等。这些方法中有其优缺点,操作起来比较繁琐和不稳定。本实验的目的是从众多的去核方法中找出一种更适合小鼠卵母细胞去核的方法。     

哺乳动物卵母细胞去核方法的研究进展

随着"多莉"羊的诞生,体细胞克隆技术近年来发展迅速,并获得了一大批克隆动物.但克隆动物的效率仍然偏低,这与克隆技术各个环节的完善程度有关,卵母细胞的去核就是其中的重要环节之一.本文对近年来常见的几种卵母细胞去核方法作了详尽的论述,以期为该领域的科研工作者提供参考.     

昆明白小鼠卵母细胞去核研究

为了提高昆明白小鼠MⅡ期卵母细胞的去核效率及质量,该研究在不同条件下,比较了小鼠卵母细胞的去核效果:将小鼠MⅡ期卵母细胞放入含蔗糖浓度分别为0.01、0.02、0.03 g/mL的M2-液微滴中,在体式显微镜下观察显核效果以确定最佳浓度;将有清晰可见细胞核的卵母细胞放入含细胞松弛素B(Cytocha-lasin-B,CB)浓度分别为5、7.5、10μg/mL操作液中去核,显微镜下确定去核率。结果表明:操作液中加入蔗糖浓度为0.02g/mL时显核效果最好;去核时操作液中细胞松弛素B浓度为10μg/mL时去核死亡率最低。     

小鼠卵母细胞去核方法的初步研究

[目的]寻求既简单又有效的提高小鼠卵母细胞去核率的方法。[方法]分别采用3种不同的方法(盲吸法、点击法、负压-点压法),研究对MII期小鼠卵母细胞去核率的影响。[结果]结果表明,采用负压-点压法去核,其卵母细胞的去核率可达62.8%,与其他两种方法所获得的去核率差异显著(P<0.05)。[结论]负压-点压法是一种简单、有效的小鼠卵母细胞去核方法。     

挤压去核法和盲吸去核法在延边黄牛体细胞核移植中的对比研究

分别采用挤压去核法和盲吸去核法对延边黄牛卵母细胞进行去核处理,之后进行核移植,培养观察,比较两种去核方法对延边黄牛体细胞核移植效率的影响.挤压法的操作成功率和去核率明显高于盲吸法,盲吸法操作程序耗时比挤压法长,但是差异不显著.两种方法获得了相近的卵裂率和囊胚率,但挤压法构建的重组胚在囊胚数上高于盲吸法.挤压法在延边黄牛体细胞核移植上比盲吸法更有效.     

小鼠体细胞核移植研究进展

哺乳动物体细胞核移植的研究是当今生命科学研究的热点之一。小鼠由于其繁殖周期短、材料来源比较容易,成为重要的模式动物。对小鼠体细胞核移植的国内外研究现状进行了综述,为进一步研究其他哺乳动物核移植提供了理论依据。     

化学辅助去核法对延边黄牛卵母细胞去核率及其重构胚发育率的影响

为提高延边黄牛体细胞克隆的效率,采用化学辅助去核法--化学诱导剂脱羰秋水仙碱(Demeeoleine,简称Deme)处理体外成熟的MⅡ期延边黄牛卵母细胞,经显微操作构建重构胚后观察发育情况.试验研究了,Deme的处理浓度、作用时间对延边黄牛卵母细胞去核效果及其重构胚发育的影响.结果显示:体外成熟的卵母细胞在0.2μg/mL、0.3 μg/mL、0.4 μg/mL的Deme溶液中处理45 min,显核率与去核率无显著差异,去核率达100%,但是0.2 μg/mL处理组的囊胚发育率显著高于其他处理组;45 min处理组的显核率显著高于30 min、60 min处理组,45 min处理组的囊胚率高于其他处理组;化学辅助去核法的囊胚率显著高于盲吸法.化学辅助去核能够准确定位去除细胞核,并提高了延边黄牛体细胞克隆的去核率及重构胚的体外发育率.     

化学激活对小鼠卵母细胞孤雌发育的影响

分别用不同浓度的氯化锶联合细胞松弛素、钙离子载体A23187和乙醇分别与6-二甲氨基嘌呤和细胞松弛素B刺激小鼠卵母细胞,比较卵母细胞的激活率和体外发育情况。结果表明,乙醇+6-DMAP+CB和A23187+6-DMAP+CB激活获得的激活率、桑囊胚率较高。     

热应激对小鼠卵母细胞和附植前胚胎及其生长内环境氧化损伤的影响

 【目的】研究热应激对机体（肝脏）以及生殖系统氧化、卵母细胞和附植前胚胎氧化及发育能力的影响,探讨热应激影响卵母细胞及附植前胚胎发育能力的机制。【方法】分别用总谷胱甘肽和微量丙二醛测定试剂盒检测热应激后小鼠卵母细胞、附植前胚胎和组织器官内总谷胱甘肽（total Glutathione,TGSH）、丙二醛（MDA）的含量,并且观察后续胚胎的发育情况。【结果】母体经35℃处理6和12 h后,其体内的卵母细胞（6 h）和发育至1～3 d的胚胎（桑椹胚前期,12h）的后续胚胎发育率显著降低,胚胎中TGSH含量下降（P＜0.01）、MDA含量升高（P＜0.01）,卵母细胞中二者的含量未有变化;发育至第4天、第5天的胚胎（桑椹胚和囊胚）中TGSH和MDA的含量及胚胎发育率均未有变化（P＞0.05）;发育至第1～5天的体外培养的胚胎分别经39℃处理12 h后,胚胎中TGSH和MDA及其发育率均未有变化（P＞0.05）;随着热应激温度升高和时间的延长,肝脏和输卵管中TGSH显著降低、MDA显著升高;当温度达到41℃时,卵巢和子宫中TGSH显著降低、MDA显著升高。【结论】桑椹胚以前的胚胎遭受母体热应激后,发育能力降低,这与热应激所诱导的氧化损伤密切相关,但是母体热应激后卵母细胞后续胚胎的发育能力降低与氧化损伤无关。体外培养的胚胎经39℃处理12 h后,对附植前胚胎氧化损伤和孵出率均无影响。     

小鼠胚胎电转外源物质条件的优化

旨在优化电转外源物质进入小鼠胚胎的条件,为电转CRISPR/Cas9系统进入小鼠胚胎进行基因编辑奠定基础。在不同的电转条件下分别将四甲基罗丹明标记的葡聚糖(Tetramethylrhodamine-labelled dextran)、带绿色荧光蛋白标记的质粒pLL3.7和体外转录的绿色荧光蛋白mRNA导入小鼠胚胎细胞,并进行培养,在荧光显微镜下观察胚胎发育状态,分析荧光染料进入胚胎及绿色荧光蛋白的表达情况。结果表明,高电压使胚胎成活率显著下降,低电压使电转效率显著下降。最适电压是110V,且小鼠胚胎2细胞期较1细胞期更适合电转。     

克服小鼠早期胚胎体外培养发育阻滞的研究

为探讨不同培养基及共培养对克服小鼠早期胚胎体外发育阻滞的影响,用不同成分组成的5种常用培养液对小鼠早期胚胎进行体外培养,后以KSOM作为基础培养基,KSOMFBS为对照,分别与小鼠输卵管上皮细胞(MOEC)和卵丘细胞(CC)进行共培养,观察从2细胞发育到4细胞的胚胎数和囊胚数的变化。结果发现5种培养液中从2-细胞发育到4-细胞的胚胎率为30.5%~43.5%,差异不显著。KSOM组囊胚率为40.9%,显著高于其他各组(27.9%~30.0%)。共培养后,各组中克服发育阻滞的胚胎数和囊胚数均有显著提高,其中添加胎牛血清组4细胞胚胎数和囊胚数显著高于不添加组,输卵管上皮细胞组显著高于卵丘细胞组。结果显示共培养对克服小鼠2-细胞发育阻滞作用明显,添加胎牛血清效果明显好于不添加,输卵管上皮细胞共培养效果好于卵丘细胞。     

减少细胞质对激活小鼠卵母细胞体外发育的影响

 以溶液的表面张力为主要动力 ,辅以显微操作法去除一定量的卵母细胞胞质。测量了去除的细胞质体的直径 ,第一组为 38.6 4 μm ,第二组为 6 1.5 2 μm。小鼠卵母细胞的平均直径为 80 μm ,则第一组细胞质体占卵母细胞体积的 11.3% ,第二组细胞质体占卵母细胞体积的 4 5 .5 %。去除细胞质后两组卵母细胞均被氯化锶激活 ,其培养后卵裂率没有显著差异 (80 .0 %vs 77.9% ) ,两者都显著低于未经去质处理的激活卵母细胞和受精卵的卵裂率。两者的囊胚发育率虽没有显著差异 (37.3%vs 36 .8% ) ,但均显著低于未经去质处理的激活卵母细胞和受精卵的囊胚发育率 (4 8.3%和 73.3% )。去除 11.3%和 4 5 .5 %细胞质的卵母细胞孤雌激活胚、未经去质处理的激活卵母细胞和受精卵 ,体外培养的囊胚细胞数 (17.2 8± 7.16 ,11.5 0± 6 .83,2 1.86± 7.5 2 ,4 4 .6 7± 6 .86 ) ,各组间差异显著。     

小鼠卵母细胞体外成熟过程中wee 1和cdc 25基因的表达

已知 wee 1基因产物是成熟促进因子 ( maturation promoting factor,MPF)活性的负调节者〔7〕,而 cdc2 5基因产物是 MPF活性的正调节者〔2〕。后来在小鼠和人类的体细胞发现了cdc2 5的等效基因和 wee1基因〔3～ 6〕。但哺乳动物卵母细胞长期被阻滞在第一次成熟分裂的前期 ,是否因 MPF的活性受到 wee1基因产物的抑制 ,而促性腺激素等解除这种抑制是否由 cdc2 5基因表达所引起 ,目前尚未见报道。本试验目的在于研究小白鼠卵母细胞成熟过程中 wee1、cdc2 5基因的表达规律 ,为揭示哺乳动物卵母细胞成熟过程中分子生物学调控机理提供科学资料…     

柞蚕雄蛾粉降血糖效果的初步研究

研究了柞蚕雄蛾粉对实验鼠的降血糖效果。结果表明:用添加4%的柞蚕雄蛾粉饲料饲喂高血糖鼠7 d后,雄小鼠血糖值降低23.1%,达极显著水平(p<0.01);雌小鼠血糖值降低10.4%,达显著水平(p<0.05)。表明柞蚕雄蛾粉具有降血糖作用。     

玉米小斑病菌复壮培养基的筛选

选用7种培养基对出现退化的玉米小斑病菌进行复壮培养。结果显示：通过V8培养基和玉米苗浸汁培养基获得的复壮菌株,菌落形态表现为菌丝黑密粗壮,且生长速度（分别为6.46 mm/d和6.33 mm/d）、产孢量（分别为2.72×10^6个/mL和1.92×10^6个/mL）和致病力等均得到恢复与提高。复壮后的病毒粗提液,对C和N细胞质产生较强的专效性毒害,反映出对菌株复壮的高度有效性。     

转人血清白蛋白基因小鼠胚胎的体外培养

探讨了获取受精卵的时间、显微注射和培养液等因素对显微注射胚胎体外发育的影响。结果表明：在注射HCG后24～26h和18～22h时获得的受精卵的囊胚率分别为45％和20％,二者差异显著;注射胚和非注射胚卵裂率差异显著(56／80 VS 74／76),但显微注射对2-细胞以后阶段的发育没有显著影响;mWM1培养液和mWM2培养液都能有效克服受精卵体外发育阻断。mWM2培养液更支持早期转基因胚胎体外发育。     

Expression of HSP72 in Mouse Preimplantation Embryos with Heat Shock

The objective of the paper was to detect HSP72 expression and HSP72 gene sequence in heat shocked mouse preimplantation embryos and the effects of different thermo conditions on hatching rates of embryos. The mouse blastocysts cultured in vitro were heat treated at 40℃ and 38℃ for 1 h, 2 h and 3 h and then recovered at 370C for 3 h, 2 h and 1 h, respectively, to detect their HSP72 gene expression by using RT-PCR after the total R.NA extraction. The hatching rate of the blastocysts for different treated groups was recorded and the expression of liSP72 in the blastocysts was determined by Western blot. The results showed that all the groups of blastocysts, including the control, had the expression of HSP72 gene. The expression of HSP72 protein had the highest level in the embryos stressed at 38℃ for 2 h, and it was significantly higher than that in the control group. The expression of HSP72 in the groups of blastocysts treated at 40℃ was not significantly different from that in the control group. The embryos with induction of mild heat shock at 38℃ for 2 h, then subjected to heat shock at 40℃ for 2 h, had a significant higher （P〈0.05） hatching rate of 54.74% compared to 47.85% in the embryos treated directly at 40℃ for 2 h. The above results indicated that the mouse blastocysts were sensitive to heat shock and a mild heat shock induced HSP72 gene expression. Induction of HSP72 expression with mild heat shock helped embryos to tolerate more severe heat shocks.