柑桔花粉超低温保存初探

为了进行人工辅助授粉和杂交授粉，通常需要早期采集和贮藏花粉。尤其是在杂交育种中，为解决亲本花期不遇和远距离杂交等问题，更需要保存有生活力的花粉。近年来，随着花粉原生质体分离以及花粉遗传转化研究工作的开展，花粉保存取得了新的进展，超低温贮藏已应用于植物的花粉保存。自从Knowlton1992年第一次报道花粉超低温保存以来，已进行了30多种植物花粉的超低温保存研究。刘燕等对26个不同类型梅花品种的花粉进行了超低温保存研究，检验了保存前后花粉的萌发率及格粉后的结实率，结果表明，     

不同保存方式对扁桃花粉保存效果的影响

采用干燥法和玻璃化法2种方法,对新疆莎车县扁桃品种晚丰18号花粉进行了超低温保存研究。结果表明:晚丰18号花粉最佳干燥方式为4℃硅胶干燥,适宜干燥时间为6⁸ h,干燥6h和8 h的花粉含水量分别为53.74%、52.74%,超低温保存后花粉萌发率为61.22%、63.77%,相对保存率为91.68%、97.13%;在室温(20±1)℃下以玻璃化液PVS2(30%甘油+15%乙二醇+15%二甲基亚砜+0.4 mol/L蔗糖)处理208 h,干燥6h和8 h的花粉含水量分别为53.74%、52.74%,超低温保存后花粉萌发率为61.22%、63.77%,相对保存率为91.68%、97.13%;在室温(20±1)℃下以玻璃化液PVS2(30%甘油+15%乙二醇+15%二甲基亚砜+0.4 mol/L蔗糖)处理20³0 min后,超低温保存的花粉萌发率最高,为40.88%30 min后,超低温保存的花粉萌发率最高,为40.88%⁴1.53%;不同解冻方式间花粉萌发率差异极显著,以35℃解冻70 s的萌发效果最好;干燥法保存效果较玻璃化法保存好,超低温保存时间对花粉萌发率无显著影响。     

罗汉果花粉超低温贮藏及其生活力测定

对罗汉果花粉在超低温保存条件下的花粉寿命以及罗汉果花粉的超低温保存技术程序进行了研究。结果表明:罗汉果超低温保存的程序为新鲜花粉经无水氯化钙脱水72 h(低于含水量30%)后密封保存在超低温冰箱(-86℃)。使用花粉前可采用水浴加热(38℃)方式化冻。授粉前使用MTT染色法即可快速鉴定花粉生活力。该花粉处理方式工艺简单,成本低,花粉成活率高,为罗汉果规模化种植推广及其喷雾授粉奠定了物质基础。     

瓜菜类植物花粉超低温保存研究进展

超低温保存是指在-80℃~-196℃甚至更低温度下保存生物材料的一种方法。花粉包含物种的所有基因类型,作为植物种质的重要形式,是种质保存和交换以及杂交育种的重要材料。花粉超低温保存广泛应用于瓜菜、农作物、果树、药用植物及园林植物等各类植物。花粉超低温保存能大大延长花粉的保存时间,为种质交换提供便利,同时能解决育种中花期不遇或异地授粉等问题,提高育种效率。阐述了花粉超低温保存的技术流程,对花粉保存效果的评价方法进行了总结,探讨了超低温保存的遗传稳定性,同时介绍了超低温保存机理的研究进展,以期为进一步研究瓜菜类植物花粉超低温保存提供参考。     

魔芋花粉的低温和超低温保存

利用干燥法和玻璃化法,魔芋花粉能够在4℃下保存1个月,－20℃下保存6个月;魔芋花粉经液氮超低温（－196℃）保存后,有明显的“冷刺激”现象,即保存花粉比新鲜花粉有更高的离体萌发率。     

马铃薯花粉的超低温保存研究

 ：对影响马铃薯花粉超低温保存效果的因素进行了研究。结果表明：冷冻前干燥处理18 h的花粉．保存后其生活力优于干燥处理12 h和24 h的花粉;用0~C (12 h)一一10~C (12 h)一一20~C (12 h)的逐步降温预冻处理,可大幅度提高在液氮中冰冻保存花粉的活力;保存后的花粉用一20~C (12 h)一4~C(12 h)一25℃ (12 h)逐步解冻效果最好,35～4J0℃直接解冻效果优于(25±2)℃直接解冻;超低温保存对花粉萌发表现出某些促进作用。     

枇杷野生种的种质资源离体保存初探

以枇杷属(Eriobotrya Lindl)植物的若干个野生种为试材,进行种质资源离体保存方法(花粉超低温保存、种子(成熟胚)常温限制生长法和超低温保存、茎尖培养和叶片培养)的初步研究.主要结果如下:①不同枇杷野生种类间的花粉生活力存在差异;液氮冷冻后花粉生活力与对照相比无明显降低;经干燥的花粉生活力高于未干燥的,含水量低处理的花粉生活力强.②添加或不添加生长调节剂的mMS培养基均较有利野生枇杷种子(胚)的萌发和芽苗生长;不添加生长调节剂的B5培养基有利野生枇杷种子(胚)的胚根萌发,而胚芽和芽苗生长均慢,适合作为限制生长的种质离体保存的培养基.③经过液氮处理的普通枇杷野生种子(成熟胚)均未能成活.④台湾枇杷茎尖培养启动较容易,启动率为72%;怒江枇杷茎尖极易褐变,培养成活率极低;台湾枇杷叶片可在含2,4-D的MS培养基上诱导出米黄色愈伤组织,适宜的2,4-D浓度为0.2 mg·L-1.     

不同保存温度对几个梨品种花粉生活力的影响

对5个梨品种的花粉进行了不同温度条件下的保存试验.结果表明:保存前花粉发芽率较高,随着室温保存时间的延长,花粉的发芽率迅速下降.60 d后,各品种梨的花粉发芽率降低到10%以下.红酥脆、满天红、黄金梨、奥冠红梨和台湾雪梨分别降为3.8%、3.7%、4.6%、5.8%、5.1%.因此,室温长期保存花粉效果较差.但若进行短时间(5～10 d)贮藏,其保存效果还是比较理想的.低温保存条件下,随着保存时间的延长,各品种梨花粉的生活力下降不太明显,4 ℃下和-20℃下保存60 d后,花粉的生活力仍然在74%和78%以上,而-20℃下保存的花粉生活力较4℃稍强,因此,在-20℃下较长时间保存梨花粉效果更为理想.     

苦瓜辐射花粉短期保存方法的初步研究

对4个苦瓜品种开花前1d的雄花进行了9种不同方式的短期保存,以探讨苦瓜辐射花粉短期保存方法。研究结果表明,高温、潮湿有利于花粉的散粉,低温、干燥不利花粉的散粉;在15℃,相对湿度43％条件下保存1d的花粉萌发率较高;而保存2～3d的花粉则以4℃,相对湿度为28％的条件为宜。苦瓜未经辐射处理及辐射后花粉的短期保存条件相同。     

西瓜花粉长期保存与授粉技术

<正>采用低温真空保存西瓜花粉技术,西瓜花粉保存186~223 d(天)后,花粉活力保持在50.0%~61.5%,不仅解决了西瓜花粉长期保存的瓶颈问题和西瓜早熟栽培坐果难的问题,而且提高了早春栽培西瓜的品质和效益。西瓜在自然条件下雄花开放几小时后花粉就失去生活力,国外曾对设施西瓜花粉长期保存与授粉技术进行了相关研究。Miyaji和Shirazawa于1977年报道,在温度5 ℃和相对湿度20%~40%的条     

金太阳杏花粉超低温保存方法研究

为探讨杏花粉种质保存的方法,进而为花粉培养、遗传转化和杂交育种提供材料,以杏品种金太阳的新鲜成熟花粉为试材,采用干燥法和玻璃化法2种超低温保存技术,对花粉干燥时间、解冻方式和贮藏时间等影响保存后花粉萌发率的有关因素进行研究。结果表明,干燥时间对金太阳杏花粉超低温保存后的萌发率有显著影响,其中干燥法宜在4℃下硅胶干燥8h、玻璃化法宜在(20±1)℃下以玻璃化液PVS2(体积分数15%二甲基亚枫+15%乙二醇+30%甘油+0.4mol/L蔗糖)处理60min;干燥法保存后分别以4℃2h、20℃30min和40℃70s等3种方式化冻,花粉萌发率无明显差别,而对玻璃化法则以40℃70s化冻后的花粉萌发率最高;以2种方法分别保存1、10、30、60d后花粉萌发率无显著变化。     

不同保存因子对早佳西瓜花粉活力的影响

研究了西瓜花粉低温保存及授粉技术，结果表明：早佳西瓜花粉在-18 ℃或-25 ℃的温度下，
真空保存186～223 d 仍有50% 以上的活力。花粉活力因花粉保存条件不同有较大差异，-25 ℃比-18 ℃
保存的时间长、活力高。保存花粉使用前应在25 ℃条件下放置30 min 激活活力，以取得较高的坐果率。
使用保存花粉授粉不影响西瓜品质。     

Cryopreservation of coriander (Coriandrum sativum L.) somatic embryos using sucrose preculture and air desiccation

An efficient protocol for cryopreservation of somatic embryos of Coriandrum sativum, an important spice and medicinal herb, was developed. The successful cryopreservation procedure utilized embryo clumps (ECs) comprised of 3–4 somatic embryos at the globular or heart-shape stage. These ECs were precultured for 3 days on medium supplemented with 100 g/L sucrose, desiccated under the current of sterile air for 100 min, then sealed in cryovials and plunged directly into liquid nitrogen. Preliminary incubation on sucrose-enriched medium (100 g/L) improved both desiccation- and cryo-tolerance of ECs compared to medium with normal sucrose content (30 g/L) and enhanced embryo formation after cryopreservation. The regrowth after cryopreservation and average number of new embryos developed from cryopreserved ECs were retained at the level of the untreated control (98% and 13 embryos per clump, respectively). Both normal and abnormal plants were produced from control and cryopreserved cultures, indicating that appearance of abnormalities was not related to cryopreservation. The regenerants with normal phenotype showed the same peaks of relative DNA content regardless of cryopreservation. The results suggest that simple desiccation method is effective for cryopreservation of coriander somatic embryos with subsequent regeneration.     

五叶草莓超低温保存及遗传稳定性分析

【目的】为了找出野生种质资源五叶草莓(Fragaria pentapylla)的超低温保存方法和分析超低温保存后五叶草莓的遗传信息稳定性,【方法】运用玻璃化法对五叶草莓离体茎尖超低温保存技术进行了研究,并采用AFLP和MSAP技术对其遗传稳定性作了探讨。【结果】结果表明,不同的低温锻炼时间、预培养时间、预处理时间、玻璃化溶液(PVS2)处理时间和液氮保存时间对五叶草莓超低温保存后成活率的影响各不相同,经优化后,低温锻炼3周,预培养3 d,预处理30 min,PVS2处理60 min时,超低温保存的最高成活率可达79.7%,液氮处理时间对成活率影响不明显;运用AFLP技术对超低温后成活生长120 d的材料及对照材料基因组DNA进行了分析,超低温前后带型一致,未发现明显差异片段;进一步用MSAP技术分析了超低温保存后成活的材料和对照材料DNA甲基化水平差异,结果表明超低温保存后五叶草莓DNA甲基化与去甲基化分别为5.70%和12.43%。【结论】玻璃化法超低温保存技术可以有效的保存五叶草莓种质资源,超低保存前后的五叶草莓基因组DNA没有发生多态性变化,但DNA甲基化水平降低。     

保存条件对西瓜花粉生活力的影响

西瓜花为半日花,西瓜花粉的生活力在田间条件下开花几小时后即完全丧失。为了延长花粉的生活力,以二倍体西瓜B99品种为试材,研究了不同保存条件对西瓜花粉生活力的影响,结果表明:常温干燥条件下可延长花粉保存时间;低温(4℃)干燥(RH25%)条件下保存花粉,花粉生活力4d内降低较慢,4d后降低稍快,但到第9天仍有1/3以上的花粉具有生活力;前8d的坐果率可达到自然状态(用新鲜花粉授粉)的73%,这在实践中完全可以利用,尤其是对4、5d之内的短期保存更有利用价值。     

In vitro pollen germination in avocado (Persea americana Mill.): Optimization of the method and effect of temperature

An improved in vitro pollen germination method was developed for avocado (Persea americana Mill.). The effect of different concentrations of sucrose, polyethylene glycol (PEG), Mg and Ca on pollen germination was evaluated in order to determine the optimal pollen germination medium, i.e. that maximizing the percentage of pollen germination and minimizing the percentage of bursted pollen grains. Once the germination medium was optimized we used it to study the effect of temperature on in vitro pollen germination and tube growth in different cultivars from the three botanical varieties of avocado, that differ in their adaptation to environmental conditions. Significant differences in percentage of pollen germination and in pollen tube growth were observed among cultivars. These results could have implications not only for optimizing pollen management in avocado but also to select the best pollinizers for a particular cultivar.     

杏不同品种花粉量及花粉萌发特性的研究

以17个鲜食杏品种、4个仁用杏品种和4个杏李杂交品种为试材,对单个花药花粉量、花粉萌发率、花粉管长度进行测定,并观察统计了这25个杏品种的完全花比例,为杏主栽品种选择适宜授粉树。结果表明:不同杏品种间单个花药花粉量、花粉萌发率、花粉管长度和完全花比率差异显著;不同果实类型(鲜食、仁用和杏李杂交)间花粉量和完全花比例差异显著,花粉萌发率和花粉管长度则没有果实类型间的显著差异。花粉量与花粉萌发率和完全花比率之间无显著相关性,而与花粉管长度显著相关(r=0.417,P0.05);花粉萌发率与花粉管长度极显著正相关(r=0.691,P0.01),与完全花比率负相关但不显著。聚类分析发现,花粉量较多且花粉管生长状况较好的杏品种有"串枝红"、"沙金红"、"金太阳"和"胡安娜",适宜作为授粉树;花粉粒较少和花粉管生长状况较弱的有"恐龙蛋"、"味帝"和"苏联4号",而它们的完全花比例都很高,需要配置授粉树。     

PEG对胡萝卜花粉离体萌发的影响

研究了不同分子量的PEG（聚乙二醇）对胡萝卜花粉离体萌发的影响。试验结果表明,不同分子量的PEG对花粉离体萌发率的影响不同,PEG-6000较其他2种分子量的PEG促进花粉萌发的效果要好;3种分子量PEG的最适浓度不尽相同,其中PEG-6000促进胡萝卜花粉萌发的最佳浓度为100 g/L,而PEG-4000和PEG-10000促进胡萝卜花粉萌发的最佳浓度均150 g/L。     

番木瓜茎尖超低温保存过程中的细胞超微结构

 采用透射电子显微镜对番木瓜(Carica papaya L. ) 茎尖超低温保存过程中细胞超微结构变化进行观察。结果表明: 细胞在经过预培养、60% PVS₂ 预处理和PVS₂ 脱水处理, 细胞质壁分离程度逐渐加重,细胞的抗冻力增加。细胞严重伤害主要发生在液氮保存的降温及解冻的过程中, 一部分细胞的细胞壁、细胞膜以及细胞核膜均有不可逆的损伤, 可能是导致部分细胞致死的原因之一。也有部分细胞结构完整, 虽然细胞结构发生了变化, 但是程度不深, 是可逆的伤害, 在恢复培养3 d时可自动修复, 然后再生出植株。