应用反向间接血凝抑制试验诊断猪囊虫病的研究

<正> 近年来,国内外学者对猪囊虫病的免疫学诊断方法作了大量的研究,有些方法已在国内外一定范围内推广应用。但因囊虫抗原成分复杂,这些诊断方法均存在不同程度的假阳性反应,假阳性率约为1～10%。有些方法在现场应用时发现假阳性率更高。为了减少假阳性反应,许多学者对囊虫抗原进行分离纯化,其主要技术途径包括凝胶过滤、亲和层析等电聚焦和离子交换技术等等。囊虫粗抗原经分离纯化后,其特异性明显提高,但仍未彻底消除假阳性     

旋毛虫肌幼虫排泄/分泌物抗原的研究

为了研究在特定条件下经体外培养的旋毛虫肌幼虫排泄/分泌物(ES)抗原的特性,通过体外培养将所收集到的ES抗原经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、琼脂扩散试验进行分析。结果经SDS-PAGE分析出现了比较明显的2条蛋白带,其分子量为45 ku、49 ku;经琼脂扩散试验ES抗原与犬旋毛虫阳性血清出现了明显清晰的沉淀线,而与犬蛔虫阳性血清、犬绦虫阳性血清之间未出现沉淀线,ES抗原具有较强的特异性。表明研究结果为开展ES抗原的分子生物学的研究、分子生物学基因工程苗的研制打下了良好的基础。     

应用冻干纯锥虫粉制作间接血凝诊断液的诊断效果观察

多年来，许多学者应用间接血凝试验（简称ＩＨＡ）诊断锥虫病作了大量砍究工作［１－３］，初步认为是一种操作简便、敏感、特异的血清学诊断方法。但在抗原制作上，由于锥虫纯度不够，尚有一定的假阳性反应。为了提高抗原的特异性，减少假阳性反应，笔者在江西农大牧医系彭吉生、黎超士、项崇汉老师的指导下，采用省科学院用阴离子交换剂ＤＥＡＥ纤维素分离动物血液内纯净锥虫［４、５］，经冻干成粉用来制备ＩＨＡ诊断液（简称江液），进一步提高了抗原的特异性、敏感性和检出效果。１ 材料与方法１．１ 江液的制备１．１．１ 抗原浸出液…     

抗阪崎肠杆菌LPS单克隆抗体的制备及初步应用

为制备抗阪崎肠杆菌(ES)脂多糖(LPS)抗原单克隆抗体(MAb)及建立双抗夹心ELISA检测方法,本研究以热灭活的Es(ATCC51329)菌体抗原作为免疫原,ES菌体结合LPS作为筛选抗原,采用杂交瘤细胞技术筛选获得9株稳定分泌抗ES LPS特异性MAb的杂交瘤细胞株.采用改良的过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶(HRP)酶标抗体,并建立检测ES的双抗体夹心ELISA方法,该方法对ES ATCC51329具有良好的特异性,最低检测限可达103 cfu/mL,为食品中ES的检测提供特异性MAb及ELISA检测方法.     

马传贫琼扩试验方法的一点改进

在临床检验中,对马传染性贫血病琼脂扩散沉淀反应的试验方法做了一点改进,使标准阳性血清既能监测抗原和揭发弱阳性被检血清,又有监视琼脂扳,识别假阳性反应的作用。现行马传贫琼扩反应方法在临床检验中有时发现检出的弱阳性(接近被检血清孔的沉淀线向抗原侧弯转)血清不能重复而成为假阳性。为此,每次检出的弱阳性血清都要经过复试后才能确定。分析和验证出现假阳性反应的原因有三种:补底不确实;滴加抗原和血清时不小     

用氯仿处理待检抗原(猪胴体淋巴结抗原)的实验

过去我们用冻融、高速离心、加热、浓缩等方法处理胴体淋巴结的待检抗原做反向间接血凝实验,由于非特异性蛋白参与,往往出现自凝、假阳性反应等。影响实验结果的判定。有关资料认为,用氯仿处理猪胴体淋巴结抗原比较理想。据此我们对75份来自肉联厂的健康猪淋巴结抗原及8份人工发病猪(五号病)淋巴结抗原作了用氯仿处理的实验。反应结果清晰、易于观察、判定并提高了检出率。     

1992年美国西部禽病年会内容摘要

<正> 本次会议着重讨论了有关禽病诊断和防治技术的应用和疗效,主要是关于沙门氏菌肠炎和霉形体病,还介绍了一些病例报告,探讨如何提高诊断能力和弄清发病过程。霉形体病对本病的研究,已日益集中在如何鉴定和防治病原上。过去,鉴定鸡败血霉形体(MG)的血清学实验,包括血清平板凝集实验和HI,由于样品的非特异性和假阳性反应及检测时抗原的抗原性反应,都影响这两个实验的结果。     

排除BA-ELISA诊断牛副结核假阳性的方法探讨

BA-ELISA诊断牛副结核时,因出现亲和素非特异性吸附和成牛血清中普遍存在的非特异性抗体而干扰诊断结果。本文在这两方面进行了较为系统的探异,表明稀释液中加鸡血清和Tween-80,同时增加洗涤液中离子强度,能排除亲和素的非特异性吸附;血清经一定浓度的草分枝杆菌悬液吸收处理后,能排除非特异性抗体引起的假阳性反应。     

旋毛虫病免疫诊断抗原的筛选研究

本文报道了旋毛虫肌幼虫匀浆抗原(HO抗原),排泄-分泌物抗原(ES抗原),可溶性杆细胞颗粒相关抗原(S_3抗原),葡聚糖凝胶G200柱层第一峰(FP)和第二峰(SP)抗原,亲和层析提纯抗原(PAW)的制备及其用于ELISA和Dot-ELISA诊断旋毛虫病的价值。证实亲和层析堤纯抗原的特异性高、敏感性强,可用于旋毛虫病的免疫诊断和流行病学调查。     

囊虫病特异诊断方法的研究

应用间接ELISA对囊虫粗抗原、B抗原、用等电聚焦技术分离的抗原组分及特异McAb亲和层析抗原的特异性作了评价,结果均不理想。用McAb分析查明,在某些囊虫抗原分子上既有特异性抗原决定簇,又有非特异性决定簇。应用特异McAb以R-PIⅡ和Ⅰ-ELISA检测囊虫病人和猪的血清抗体,结果完全消除了假阳性反应;用R-PIⅡ微量法和Ⅰ-ELISA检测,病人血清的阳性率为87.36%(76/87)和89.66%(78/87),病猪血清的阳性率为89.32%(92/103)和86.41%(89/103);用R-PHI玻片法检测,病猪血清的阳性率为87.32%(90/103)。     

两种奶牛结核病检测方法的比较

本研究中采用常规皮内变态反应(TST)对广西南宁、柳州共计2 818头黑白花奶牛进行牛结核病检测,采用抗原特异性IFN-γ试验方法对PPD检测结果为阳性、可疑的牛以及部分阴性牛进行复检。将抗原特异性IFN-γ试验与TST检测结果相比,其敏感性为53.33%,特异性为70.49%,符合率为67.11%。本研究证实单独使用PPD皮内变态反应方法在牛结核病的诊断方面存在非特异性强等缺点,易造成假阳性牛的误杀;用抗原特异性IFN-γ试验对TST试验阳性和可疑牛进行复检可以提高特异性,该方法在临床上有重要应用价值。     

排降BA—ELISA诊断牛副结核假阳性的方法探讨

BA－ELISA诊断牛副结核时，因出现亲和素非特异性吸附和成牛血清中普遍存在的非特异性抗体而干扰诊断结果，本文在这两方面进行了较为系统的探异，表明稀释液中加鸡血清和Tween-80，同时增加洗涤液中加离子强度，能排除亲和素的非特异性吸附；血清经一定浓度的草分枝杆菌悬液吸收处理后，能排除非特异性抗体引起的假阳性反应。     

树突状细胞甘露糖受体在旋毛虫感染中的变化研究

应用流式细胞术(FCM)检测旋毛虫感染后小鼠肠系膜淋巴结(MLN)中树突状细胞(DC)上甘露糖受体(MR)的影响。培养小鼠骨髓源树突状细胞(BMDC)并负载旋毛虫排泄/分泌抗原(ES抗原),FCM检测BMDC上MR的变化情况。结果显示,感染第7天MLN中DC表面MR出现下调,但在14 d后出现上调,差异显著(P0.05)。体外实验发现,BMDC负载ES抗原后MR出现下调,直到第48小时出现上调,差异显著(P0.05)。本研究证明旋毛虫感染后可以引起树突状细胞上MR的变化,表明MR可能是ES抗原的识别受体。这为研制旋毛虫树突状细胞疫苗提供了支持,并对寄生虫免疫逃避机制的研究提供了思路。     

旋毛虫肌幼虫排泄／分泌物抗原的研究

为了研究在特定条件下经体外培养的肌旋毛虫幼虫排泄／分泌物（ES）抗原的特性,通过体外培养将所收集到的ES抗原经聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）、琼脂扩散试验进行分析。结果经SDS—PAGE分析出现了比较明显的2条蛋白带,其分子量为45ku、49ku;经琼脂扩散试验ES抗原与犬旋毛虫阳性血清出现了明显清晰的沉淀线,而与犬蛔虫阳性血清、犬绦虫阳性血清之间未出现沉淀线,ES抗原具有较强的特异性。表明研究结果为开展ES抗原的分子生物学的研究、分子生物学基因工程苗的研制打下了良好的基础。     

牛结核病体外免疫诊断技术

牛分支杆菌感染的主要特征是引起 细胞免疫反应。现在牛结核病的诊断试验是 以T细胞反应机制为基础的。低敏感性的结 核血清学试验是不值得提倡的,血清学试验 最好作为细胞学试验的补充而不是替代。最 近,发现了牛结核γ干扰素试验是一种快速 的(24h)惟一使用全血的体外试验,该方法 在澳大利亚应用,结果表明,比传统的结核菌 素法诊断牛结核更敏感。假阳性反应的难题 归因于所使用的抗原制品间的交叉反应特 性,设动物对牛PPD和禽PPD的γ干扰素反 应作对照可解决假阳性的问题。虽然牛结核 特异性蛋白已确认并被分类,这些特异性蛋 白可能在血清学或细胞学诊断试验中使用, 但是它们可能因牛对牛分支杆菌感染的免疫 反应的遗传多样性而受到限制。     

青海牦牛新孢子虫病的血清学诊断

使用新孢子虫（Neopora caninum）的全虫体速殖子或来自速殖子的抗原出现一些无法避免的问题，由于这些抗原与它相近虫体T．gondii间存在交叉反应，容易产生假阳性。因此，需要建立一个可靠的、敏感的和特异性的诊断方法用来检测N．caninum的特异性抗体。在本研究中进行了ELISA诊断方法的建立，并且用纯化的重组抗原GST-NcSAGlt作为ELISA诊断抗原，进行了牦牛N．caninum抗体的检测。     

肌旋毛虫功能性抗原实验研究

本实验应用生化萃取技术和体外人工培养技术,制备了肌旋毛虫匀浆(HO)抗原和排泄—分泌物(ES)抗原,并对两种不同来源抗原的部分生化特性和免疫学特性进行了比较。HO抗原通过SephadexG—200又分为第一峰(FP)和第二峰(SP)。在5～20％的聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳和薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳上,ES和FP抗原出现许多条电泳区带。ES、FP和HO抗原对小鼠的保护力(肌幼虫减少率)分别为78％,76％和46％。     

牛结核体外免疫诊断技术

牛分支杆菌感染的主要特征是引起细胞内免疫反应。现在针对牛结核的诊断试验是以T细胞反应机制为基础的。低敏感性的结核血清学试验是不值得提倡的，血清学试验最好作为细胞学试验的补充而不是替代。最近，发现了牛结核r干扰素试验是一种快速的(24小时)惟一使用全血的体外试验，该方法在澳大利亚地区应用发现，该方法要比传统的结核菌素法诊断牛结核更敏感。假阳性反应的难题归因于所使用的抗原制品间的交叉反应特性，设动物对牛PPD和禽PPD的r干扰素反应作对照可解决假阳性的问题。虽然牛结核特异性蛋白已确认并被分类，这些特异性蛋白可能在血清学或细胞学诊断试验中使用，但是它们可能因牛对结核分支杆菌感染的免疫反应的遗传多样性而受到限制。     

几种旋毛虫抗原PAPS诊断液的效果比较试验

将几种旋毛虫抗原以同一浓度（0.6mg/mL）与PAPS微球交联,制成诊断试剂,进行旋毛虫阳性血清检测效果比较试验。结果显示,成虫、成虫ES、新生幼虫、肌幼虫B峰4川抗原均出现非特异性反应,而肌幼虫、肌幼虫ES、肌幼虫A峰抗原具有很高的敏感性,三者效价均达1:640。将此3种抗原所制得的诊断试剂对几种寄生虫阳性血清进行交叉试验,显示肌幼虫ES抗原对血吸虫、锥虫、弓形虫、肺吸虫、牛肝片吸虫、羊肝片吸虫阳性血清均不出现交叉反应,而肌幼虫A峰抗原、肌幼虫抗原对牛、羊肝片吸虫均出现交叉反应,对其他血清则不出现。表明肌幼虫ES抗原效果最佳,特异性最好,有很高的应用价值。     

纯结核菌素用于恒河猴结核检疫的适用浓度初探

在恒河猴检疫中,通常应用旧结核菌素(OT)原液,但因其纯度低,所以易出现假阳性反应.在人的结核菌感染及卡介苗接种效果观察中,已开始使用纯结核菌素(PPD),为将其应用于恒河猴检疫,我们利用10只OT阳性猴进行了PPD适用浓度的实验,现简报如下: