猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株复合实时荧光定量RT-PCR鉴别方法的建立

根据GenBank中的猪瘟病毒强毒和弱毒株基因组序列设计了1对针对猪瘟病毒的通用引物和2条分别针对猪瘟病毒强毒和猪瘟兔化弱毒疫苗株的特异性TaqMan水解探针，建立了一种能区分猪瘟病毒强毒和兔化弱毒疫苗株的复合实时荧光定量RT—PCR检测方法。结果显示，该方法能将我国大陆流行的不同基因亚群的猪瘟病毒强毒株与猪瘟兔化弱毒疫苗株完全区分开来，而不与其他猪源病毒发生非特异反应，分别可检测到初始模板中41．8和81．5个拷贝的病毒RNA，与已建立的复合RT-套式PCR的敏感性相近，两种方法对152份样品检测的符合率达96．9％～100％。通过对8份猪瘟兔化细胞疫苗效价的检测，证实本方法与兔体反应热测定法有一定的相关性，可用于猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗的定量和鉴别检测。     

不同猪瘟病毒株在ST细胞上的增殖研究

在做荧光抗体检测病毒中和试验时,用不同毒株检测同一份血清样品经常出现不一样的效果。通过开展猪瘟病毒(兔化弱毒株)和猪瘟病毒(法国Thiveral株)在ST细胞上的增殖研究,掌握猪瘟活疫苗收获抗原的最佳时间,选择更好的毒株进行荧光抗体检测病毒中和试验。结果表明:猪瘟病毒(兔化弱毒株)增值效果差,猪瘟病毒(法国Thiveral株)繁殖速度很快,在接种后30 h就能达到10~(5.4)TCID_(50)/mL,55 h达到最高峰10~(6.0)TCID_(50)/mL,72 h后呈平稳状态。     

猪瘟病毒流行株与疫苗株主要抗原编码基因差异研究

从全国7个省市1200多份可疑猪瘟病料中分离出9个猪瘟病毒（HCV）野毒株，编号分别为HCV－01－09。将9株野毒分别通过PK15细胞分别通过PK15细胞传6代，测其毒价，并提纯做电镜观察，结果表明：毒价范围在10^2-10^7TCID50，电镜观察均可清晰地见到直径为25－70nm，略呈圆形的病毒颗粒，具有较完整的囊膜和纤突结构。从9株野毒中选取5株经猪瘟阴性猪各传3－4代，测其毒力、病原性、致死性，结果表明：各毒株在传代中其上述生物学特性上有变化和差别。用猪瘟兔化弱毒疫苗分别对这5株野毒做免疫保护相关性试验，结果证明：攻毒后的疫苗接种猪100％保护，而攻毒对照猪100％死亡，且对照猪在攻毒1周后便出现猪瘟野毒感染，而免疫猪在整个观察期均未见到野毒感染。用不同剂量的猪瘟兔化弱毒，表明猪瘟兔化弱毒不通过胎盘垂直感染仔猪。将猪瘟野毒株、石门系强毒株、兔化弱毒株及1982年分离的郑州野毒等毒株进行主要抗原编码基因差异研究，结果表明：猪瘟病毒可分2个基因组6个基因亚组，HCV－02、03、06、07等4个野毒株与国内的C株、石门强毒株、国外的C株、日本GPE株、ALD株、意大利Brescia株均属同一基困组，而HCV－08株及郑州株等2个野毒与法国的Alfor株同属另一个基因组。     

猪瘟兔化弱毒疫苗的研究概况

猪瘟病毒兔化弱毒株因其优良的免疫原性,成为我国至今唯一使用的猪瘟疫苗株。本文就猪瘟兔化弱毒株的生物学特性、猪瘟兔化弱毒组织疫苗和细胞疫苗的研制以及疫苗的应用进行了综述。     

广西猪瘟流行毒株E2基因的序列分析

对从广西南宁和柳州分离的2株猪瘟病毒E2基因进行了测序。应用DNAstar序列分析软件对所测2个毒株GXNN、GXLZ的E2基因序列与猪瘟兔化弱毒株和石门(Shimen)株进行了比较分析。结果显示，GXNN、GXLZ株与猪瘟兔化弱毒株核苷酸序列的同源性分别为82．1％和82．6％，推导氨基酸序列的同源性分别为87．9％和88．7％；GXNN、GXLZ株与Shimen株核苷酸序列的同源性分别为83．6％和84．0％，推导氨基酸序列的同源性分别为89．3％和90．1％。GXNN、GXLZ株与猪瘟兔化弱毒株和Shimen株的核苷酸序列和氨基酸序列都有明显差异。     

用间接免疫荧光检测方法评价猪瘟兔化弱毒活疫苗效力的研究

为用体外试验方法评价猪瘟兔化弱毒活疫苗效力,以猪瘟病毒抗体（兔源）为一抗、荧光素标记羊抗兔IgG 为二抗,建立了CSFV兔化弱毒株的间接免疫荧光检测方法（ IFA）。特异性试验表明,用该IFA方法检测CSFV兔化弱毒株接种的RK细胞为阳性,而检测伪狂犬病毒、猪细小病毒病、牛病毒性腹泻/粘膜病毒接种的RK细胞均为阴性。 CSFV兔化弱毒株和活疫苗的兔体感染量（ RID）用兔体测定,半数组织感染量（ TCID50）用IFA测定,拟合RID与TCID50的线性回归方程,确定1RID/mL＝（ TCID50/0．1mL＋200）/12。     

RT-PCR法快速检测与鉴别诊断猪瘟病毒野毒株和三个兔化弱毒疫苗株的研究

基于猪瘟病毒基因组中富含T的插入序列建立起的简捷一步法RT-PCR技术,用于同步检测与鉴别野毒株和疫苗株。依据猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株3′NTR独立存在富含T的插入序列,设计特异性的扩增引物,使用简捷一步法RT-PCR或巢式PCR之后用琼脂糖凝胶电泳或多毛细管电泳方法进行分析,能检测到并且准确鉴别在临床标本中的古典猪瘟病毒野毒株和兔化猪瘟疫苗株。这些检测技术至少可用于3个兔化弱毒疫苗株LPC、HCLV和C-株的检测。野毒株RT-PCR检测限量是6.3TCID50/mL,巢式PCR检测限量是0.63TCID50/mL。在前一次研究中,在猪瘟兔化弱毒疫苗株的基因组的3′NTR发现有12～13nt的富含T的插入序列;本次研究中,在LPC/PRK和LPC/TS兔化疫苗株的基因组中发现2个长为42和36nt富含T的插入序列。这些长为12、36、42nt富含T的插入序列增加PCR片段的大小,有利于遗传标记对猪瘟病毒野毒型和不同兔化疫苗株间的快速检测和鉴别。     

猪瘟兔化组织灭活疫苗的研制

用猪瘟兔化弱毒株C株接种中国大白兔制备生产用毒种,将生产用毒种按一定比例稀释,接种乳兔,收集胴体及含毒组织,研磨打碎制成乳剂,经甲醛灭活后,按一定比例与蜂胶佐剂配比制成猪瘟兔化弱毒灭活疫苗。对制品的安全性和免疫原性进行了测定,27日龄仔猪4倍量接种（4mL）疫苗安全性良好,所有试验猪均可抗击石门系强毒的攻击。疫苗在2～8℃存放12个月,室温存放6个月,疫苗效力不变。     

猪瘟兔化弱毒抗体对不同野毒株体内外中和保护试验的相关性研究

将猪瘟兔化弱毒疫苗阳性血清与猪瘟野毒株HeBZJK 1 9 5 、GZGD 1 9 5 、HeBHH 2 9 5 、BJXC 1 9 5 、HeNBY 1 9 6 、BJCY 1 9 6 、BJSY 2 9 6 、BGTX 3 9 6 、HeNXH 2 9 8 、FJFQ 1 9 9 、JL 1 9 4 和标准石门株在PK 1 5 单层细胞上进行中和试验 , 测定了猪瘟病毒抗体在体外对野毒株的中和作用能力。结果表明 , 阳性血清对HeBZJK 1 9 5 、GZGD 1 9 5 、BJSY 2 9 6 、JL 1 9 4 和石门株的中和效价为 1 ∶ 2 5 6 , 对BGTX 3 9 6 株为 1 ∶ 1 2 8 , 对HeBHH 2 9 5 、BJCY 1 9 6 、HeNXH 2 9 8株为 1 ∶ 6 4 , 对BJXC 1 9 5 株为 1 ∶ 1 6 , 对FJFQ 1 9 9 株为 1 ∶ 8 , 对HeNBY 1 9 6 株为 1 ∶ 4 。由此表明 , 对不同毒株血清中和效价不同。另外测定了猪体内免疫抗体与免疫保护力的关系。采用 1 头份猪瘟兔化弱毒疫苗主动免疫没有母源抗体的猪 , 免疫后 1 4 d和 1 9 2 d抗体滴度 < 1 ∶ 1 6 , 攻击野毒HeNXH 2 9 8 株 , 仔猪能够完全保护。采食初乳的 2 组仔猪 , 母源抗体滴度为 < 1 ∶ 1 6 ~ 1 ∶ 6 4 , 分别免疫 2 头份和 4 头份猪瘟兔化弱毒疫苗 ,     

猪瘟病毒野毒株与疫苗株E2基因双重TaqMan real-time PCR鉴别检测方法的建立

为建立猪瘟病毒(CSFV)野毒株和疫苗株快速定量鉴别检测方法,根据CSFV野毒株和疫苗株E2基因序列差异,设计了2对特异性引物及1条Taq Man探针,以含CSFV HB株和C-株E2基因的重组质粒p BS-E2C和p BS-E2作为标准品,建立了能同时检测CSFV野毒株和疫苗株的双重Taq Man real-time PCR鉴别检测方法。结果表明,建立的CSFV双重Taq Man real-time PCR标准曲线Ct值与1×101~1×106copies/μL之间的E2基因拷贝数呈良好的线性关系,灵敏度达10 copies/μL,且特异性和重复性很好。综上,本试验建立的Taq Man real-time PCR检测方法可用于CSFV野毒株和疫苗株的鉴别诊断及病原定量分析。     

湿法玉米粉和黄油对肉牛消化及瘤胃发酵性能的影响

文章旨在研究蒸汽压片玉米日粮中添加湿法玉米粉和黄油对肉牛干物质摄入量、消化及瘤胃发酵特性的影响。试验选择24头平均体重为(435±15)kg的肉牛,随机分为3组,每组4个重复,每个重复2头牛。试验共设计3种日粮,处理1组为蒸汽压片玉米型,处理2组为蒸汽压片型玉米日粮+25%湿法玉米粉,处理3组为蒸汽压片型玉米日粮+25%湿法玉米粉+3%黄油,试验进行21d。结果:处理3组较处理1组和处理2组显著提高了肉牛每千克体重干物质摄入量(P<0.05)。处理3组肉牛每千克体重有机物摄入量最高(P<0.05)。处理3组和处理1组较处理2组显著提高了中性洗涤纤维表观消化率(P<0.05)。与处理1组和处理2组相比,处理3组显著提高了瘤胃液稀释率和颗粒流动率(P<0.05),而周转时间显著低于处理3组(P<0.05)。处理2组较处理1组和处理3组显著提高了瘤胃pH(P<0.05)。处理1组和处理3组较处理2组显著提高了瘤胃总挥发性脂肪酸(VFA)含量以及异丁酸含量(P<0.05)。处理3组瘤胃丙酸含量最高(P<0.05),而乙酸与丁酸的比例最低(P<0.05)。综上所述,日粮添加黄油和湿法玉米粉可以提高肉牛的干物质摄入量,提高瘤胃液和颗粒饲料的流动速率及养分的表观消化率,同时提高瘤胃丙酸含量。     

大豆油和黄油对羔羊生长性能、养分消化率及屠宰品质的影响

文章旨在研究不同脂肪原料(大豆油和黄油)对羔羊生长性能、养分消化率及屠宰品质的影响。试验选择均重(18.5±1.70)kg的公羊24只,随机分为3组,每组4个重复,每个重复2只羊,对照组饲喂以大麦为主的基础日粮(不加脂肪),黄油组和大豆油组分别在大麦型日粮中添加3.2%的黄油、大豆油,试验开展9周。黄油和大豆油组较对照组显著提高了酸性洗涤纤维摄入量(P <0.05),同时粗脂肪摄入量也显著高于对照组(P <0.05)。与对照组相比,大豆油和黄油组显著提高了羔羊日增重和末重(P <0.05)。日粮添加脂肪较对照组显著提高了羔羊总增重(P <0.05)。大豆油和黄油组较对照组显著提高了粗脂肪表观消化率(P <0.05)。日粮添加脂肪显著提高了N的摄入量(P <0.05)。黄油组较对照组显著提高了热屠体和冷屠体重(P <0.05),大豆油和黄油组较对照组显著提高了肝脏和肾脏脂肪重量(P <0.05)。黄油组较大豆油组显著提高了最长肌重量(P <0.05),对照组和黄油组较大豆油组显著提高了腰肌系水力(P <0.05)。结论 :大麦型日粮中添加3.2%大豆油和黄油可以提高羔羊日增重、末重和屠体重,对养分消化率和胴体品质有一定改善。     

β-葡聚糖对鱼类免疫调节作用的研究进展

为了维持鱼类健康并为养殖生产带来更好的效益,通常在养殖鱼类饲料中使用免疫增强剂作为饲料添加剂以提高鱼类的生产性能和疾病抵抗力。对多种鱼类的研究发现,饲喂β-葡聚糖能提高其免疫应答、对细菌与病毒的感染和环境压力的抵御力。因此,β-葡聚糖作为免疫增强剂在水产养殖中的应用在集约化养殖的今天显得至关重要。本文就β-葡聚糖的化学结构、β-葡聚糖调节鱼类免疫的机制以及影响β-葡聚糖生物活性的因素等方面进行综述,旨在为后续水产养殖中β-葡聚糖作为饲料添加剂的合理应用提供参考。     

八脉及其交会穴位在宠物临床上的应用

八脉有督脉、任脉、冲脉、带脉、阴维脉、阳维脉、阴跷脉、阳跷脉,是别行奇道的经脉,具有统摄经脉气血、协调阴阳的作用。任督二脉穴位主治范围广泛,六条奇经虽无本经专属经穴,但其纵横交叉于十二经脉之间,往往一脉通多经。运用比较针灸方法,借鉴中医临床的研究成果和成熟经验,找寻出对某些疾病有特效的奇经八脉穴位/交会穴位,可扩大正经的主治范围,提高针灸的施治效果,以更好地防治犬、猫疾病。     

拉萨河谷冬春季放牧与舍饲彭波半细毛羊牧草、血液及被毛矿物质含量

为分析拉萨河谷冬春季放牧与舍饲彭波半细毛羊采食牧草、血液及被毛中主要矿物质元素的含量,试验选用1.5岁左右彭波半细毛羊母羊60只,随机分为放牧组(GZ)和舍饲组(IF)进行试验。结果表明:试验所用牧草矿物质元素,除钼外其他元素含量均为绿麦草>冬季天然牧草。冬季天然牧草磷、镁、硫、铜、锰、锌和硒及绿麦草镁含量低于正常范围。(2)舍饲组血清钙(P=0.026)、硫(P=0.030)、铜(P=0.011)和钼(P=0.014)含量高于放牧组,镁(P=0.090)、铁(P=0.071)、锌(P=0.083)和碘(P=0.066)含量有增高的趋势;其被毛钙(P=0.003)、磷(P=0.006)、镁(P<0.001)、铁(P=0.022)、锰(P<0.001)和碘(P=0.012)含量均高于后者,铜含量有增高的趋势(P=0.068)。在血液和被毛中,放牧组血清铜、锰及被毛铜、锰和硒含量及舍饲组血锰及被毛锰、硒含量均低于推荐值。以上结果表明,拉萨河谷冬春季放牧彭波半细毛羊钙、铁、钼和碘充足,但磷、镁、硫、铜、锰、锌和硒缺乏或不足;舍饲(以谷物为主的精补料+绿麦草干草)能有效解决磷、镁、硫、铜、锌和硒的缺乏问题,但锰仍需补充。     

兰州市等五市奶业发展考察及建议

通过考察学习兰州市、银川市、呼和浩特市、太原市和西安市奶牛业发展现状,当地政府扶持奶牛业发展政策,奶牛养殖小区建设,奶牛产业化龙头企业培育,畜牧业结构调整及兴牧富民方面的新思路,新方法,提出西宁市发展奶牛业的对策和措施。     

黑毛和牛在内蒙古呼和浩特地区的繁育

黑毛和牛肉质在日本肉牛中占绝对优势，是世界闻名的独特肉牛品种。通过胚移在内蒙古呼和浩特繁育，表现良好，生长发育指标已达到日本国内品种标准。同黑白花奶牛杂交，其杂种经育肥，32月龄体重达624．8kg，屠宰率为56．3％，净肉率为49．9％；高档肉占净肉的11．6％，优质肉占净肉的22．7％，大理石花纹等级为1、2等级牛占76％。肉的品质均高于我国地方良种。     

我国牛源金黄色葡萄球菌耐药现状及药敏检测方法探讨

为调查我国牛源金黄色葡萄球菌的临床耐药现状,对2009年以来新疆、浙江、山东、内蒙古和上海五省区不同地方分离的120株金黄色葡萄球菌用纸片扩散法进行临床药敏试验。结果显示,新疆分离株对红霉素、克林霉素、青霉素、复方新诺明、多西环素、四环素耐药,22%的菌株对头孢西丁耐药,43%的对氯霉素耐药,64%的对环丙沙星耐药,58%的对庆大霉素耐药;其它4地区分离株耐药情况更为严重,除头孢西丁以外,对其它9种抗生素均耐药。对菌株的多重耐药情况分析发现,新疆分离株中对5种以上抗生素耐药的占86.1%,对10种抗生素完全耐药的占17.4%;而内地分离株的数据为100%和38.2%。此外,在试验中鉴定出33株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,新疆19株,占新疆菌株的22.1%,内地四地区14株,占内地分离株的41.2%。结合2005~2009年间发表的相关耐药数据的分析结果,研究显示,我国牛源金黄色葡萄球菌呈现多重耐药,且出现了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,并在不同地区分离株中占有一定的比例;研究还发现,新疆分离株与浙江、山东、内蒙古和上海四地分离株的耐药情况有较大差异。此外,在整理药敏试验资料时,发现在金黄色葡萄球菌药敏试验中,药物的选择没有遵循选药规则,试验操作不规范和试验结果的报告不规范等问题,对此提出一些探讨性建议,供试验人员参考。     

水貂脑膜炎奈瑟氏菌感染的诊断及药敏试验

为了对山东威海某发病水貂场的病死水貂进行病原学诊断,采用病原分离、生化试验、PCR扩增、基因序列比对等方法对分离细菌进行了鉴定,最终确定其病因为脑膜炎奈瑟氏菌感染。在此基础上进行了药敏试验,发现该脑膜炎奈瑟氏菌对所有检测药物均不敏感。     

水貂大肠埃希氏菌病的诊治试验

通过对患病水貂进行病理剖检,细菌纯培养,病毒检测,生化鉴定,确定是水貂大肠埃希氏菌病。再应用多种抗生素作药敏试验,筛选出了高度敏感的抗菌药。并对山东省威海地区水貂大肠埃希氏菌病的发生规律进行了探讨。