一株鸡源志贺氏菌的分离、鉴定及耐药性分析

为了对鸡源志贺氏菌性腹泻进行快速准确的诊断和耐药性研究,试验对由贵州省动物疫病研究室提供的一株鸡源志贺氏菌进行进一步的分离、PCR鉴定及药敏试验。结果显示,经细菌分离培养、革兰氏染色及生化鉴定试验,该菌符合志贺氏菌的特点及其生化特性;PCR检测结果显示,针对志贺氏菌ipa H基因设计的一对引物可扩增出393 bp的目的条带,与预期大小一致,具有高度的特异性;对其耐药性的研究显示,该株志贺氏菌对参试的20种药物产生不同程度的耐药性。研究鸡源志贺氏菌的分离与鉴定中所结合的PCR方法具有快速、简单、特异性强的特点,能够迅速确定病原菌,并在药敏试验中发现了针对该菌敏感性较高、疗效更好的药物。结果为鸡源志贺氏菌耐药性的有关研究与临床用药提供了科学的参考依据。     

不同动物源志贺菌的分离鉴定及耐药性检测

采用常规法对青海省牦牛、藏羊、猪、鸡等4种动物新鲜粪便中志贺菌进行了分离鉴定,并检测其耐药性。结果显示,475份样品经分离培养、染色镜检、生化试验及血清型检测分离鉴定出72株志贺菌,平均分离率为15.16%(72/475)。血清学鉴定结果为,痢疾1~4型9株、痢疾1型25株、痢疾2型17株、痢疾5~8型15株、痢疾9~12型5株、宋氏2相1株。在刚果红琼脂培养基上27株为Crb+表型,45株为Crb-表型,与致死性试验无显著相关性。72株分离菌对15种抗生素的平均耐药率为28.15%。不同动物源菌株耐药性有较大差异,鸡源、猪源、羊源、牛源志贺菌耐药现象顺序由高到低。阿莫西林+头孢噻吩为主要耐药谱。氨基糖苷类抗生素(丁胺卡那)、喹诺酮类抗生素(氧氟沙星、环丙沙星)、头孢类抗生素(头孢他啶、头孢噻吩)可作为相关疾病的首选药物。     

奶牛乳房炎克雷伯氏菌的分离鉴定及药敏试验

为了深入了解我国部分地区奶牛乳房炎克雷伯氏菌的耐药情况,试验从内蒙古、河北、黑龙江、上海和山东等省市自治区的乳房炎病牛乳样中收集497份样品,分离克雷伯氏菌。采用染色镜检法、PCR法和微量肉汤稀释法鉴定克雷伯氏菌及检测其不同地点和不同时间的耐药性。结果表明:从497份样品中分离出46株克雷伯氏菌,分离率为9.26%;分离得到的克雷伯氏菌呈革兰氏染色阴性,为短粗状的杆菌;PCR扩增得到大小约为1 500 bp的目的片段;克雷伯氏菌对氨苄西林的耐药性最高,耐药率达到73.91%,其次为复方新诺明(45.65%),耐药率均高于40.00%,耐药率低于10.00%的药物有氧氟沙星(8.70%)、美罗培南(2.17%);河北与上海地区分离菌株耐药情况较严重,内蒙古地区分离菌株耐药情况相对较好;下半年克雷伯氏菌的多重耐药性较上半年严重。说明我国奶牛乳房炎克雷伯氏菌存在一定程度的耐药性,且不同地点、不同时间耐药性存在较大差异。     

南京地区仔猪源志贺菌分离鉴定与耐药性分析

为了分析南京地区仔猪源志贺菌血清型流行趋势与耐药性。采集南京地区养殖场中患腹泻仔猪的肛拭子、粪便等病料组织126份对志贺菌进行分离鉴定,采用人工感染试验、凝集试验和K-B药敏纸片法分别检测志贺菌的致病性、血清型分布及耐药性。结果显示,从126份病料组织中分离得到52株致病性志贺菌;分离52株致病性志贺菌属于4种血清型,福氏志贺菌1a和1b血清型为地区流行优势血清型,分别占致病菌株的30.1%、40.4%;分离52株致病性志贺菌对阿莫西林、氨苄西林、磺胺间甲氧嘧啶等9种药物耐药率在53.8%～98.1%;对头孢噻呋、头孢曲松、氟苯尼考等5种药物耐药率在9.6%～40.4%。说明该地区仔猪致泻性志贺菌以F1a血清型和F1b血清型为主,耐药性严重。本试验为该地区仔猪源致泻性志贺菌病的防控提供研究基础。     

水貂志贺氏菌分离鉴定及药物敏感性分析

试验旨在对吉林省某水貂养殖场送检的3只具有典型腹泻症状的病死水貂的小肠和肠内容物样品进行细菌分离鉴定及耐药情况分析,为临床治疗提供参考。通过细菌分离纯化和PCR方法对分离菌株进行鉴定,对BALB/c小鼠进行菌液注射来检测菌株的致病性。采用K-B药敏法检测菌株对常用药物的敏感性,并通过PCR方法检测其耐药基因和Ⅰ类整合子的携带情况。结果显示,分离得到3株志贺氏菌,致病性检测试验显示分离菌可引起小鼠腹泻。药物敏感性试验结果显示,3株志贺氏菌对氟喹诺酮类药物、头孢类药物、氟苯尼考和多黏菌素较敏感,对氨基糖苷类、四环素、氯霉素、青霉素、氨苄西林耐药。耐药基因检测结果显示,3株志贺氏菌共检测出7种耐药基因bla_TEM-1、aadA1、aac（3'）-Ⅱc、aac（6'）-Ⅰb、aph（3'）-Ⅶ、tet（M）、cat2及携带aadA1基因盒的Ⅰ类整合子。结果表明,分离的3株志贺氏菌均具有致病性,可引起小鼠腹泻,主要表现为多重耐药现象,携带的耐药基因呈多样性,为临床治疗带来巨大影响。     

抗菌肽对抗生素耐药菌株的抑菌活性研究

[目的]研究抗菌肽对抗生素耐药菌株的抑菌活性。[方法]利用抗性平板划线法从腹泻病牛血便中筛选分离出1株耐药菌,通过16S rDNA序列进行鉴定,采用琼脂孔穴扩散法通过梯度盐酸壮观霉素（spectinomycin,Spe⁺）、氨苄青霉素（ampicillin,Amp⁺）、硫酸卡那霉素（kanamycin,Kan⁺）和氯霉素（chloramphenicol,Cm⁺）试验确定该菌药敏特性,并利用1种抗菌肽制剂对该菌株进行药敏试验。[结果]经BLAST比对分析该菌16S rDNA序列,鉴定该耐药菌为科氏葡萄球菌（Staphylococcus cohnii）,此菌对Amp⁺敏感,但对试验中其他抗生素均有耐药性,各梯度抗菌肽对该耐药菌均具有明显的抑菌活性。[结论]抗菌肽能有效抑制耐药科氏葡萄球菌的生长,有望在畜牧生产中代替抗生素使用。     

临床分离鸡致病菌超广谱β-内酰胺酶的检测及药敏分析

用全自动微生物鉴定系统(VITEK-32)鉴定了临床分离鸡致病菌,并分别进行了超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的检测,并用试管两倍稀释法测定了各种抗生素对非产酶菌、产ESBLs菌的抗菌活性。结果表明,鉴定分离的33株致病菌有大肠埃希氏菌30株、阴沟肠杆菌1株、铜绿假单胞菌1株、法氏柠檬酸杆菌1株。在这些菌株中,首次从鸡中检测出法氏柠檬酸杆菌,所分离的33株致病菌中产ESBLs8株。产酶菌株对抗生素的耐药性严重,而抗生素与抑制剂联用能降低药物对细菌的最低抑菌浓度(MICs)。     

4个动物园灵长类动物肠道克雷伯氏菌的分离鉴定与药敏试验

从4个动物园的非人灵长类动物中采集了214份粪便样品,经过细菌分离培养、染色镜检和生化试验等分离鉴定出88株克雷伯氏菌,分离率为41.12%。按照美国临床实验室标准化委员会(CLSI)的判定标准,对分离到的88株克雷伯氏菌进行了22种抗生素药物的药敏试验,结果表明,88株均表现出不同的程度的耐药性,其中,耐药程度最高的是羧苄青霉素(耐药率为95.45%);敏感度最高的是阿米卡星(敏感率为77.27%)。88株克雷伯氏菌分离株均有较为严重的多重耐药性,耐8～15种抗菌药物的菌株最多,有64株,占分离菌株的72.73%;耐10种以上抗菌药物的菌株有63株,占分离菌株的71.59%。从不同动物园分离的克雷伯氏菌对22种抗生素的耐药情况来看,在所调查的4个动物园中,重庆某动物园(CQ)和北京某动物园(BJ)的克雷伯氏菌分离株间耐药率无差异(P>0.05);上海某野生动物园(SHW)和上海某动物园(SHZ)的克雷伯氏菌分离株间耐药率无差异(P>0.05);而北京某动物园(BJ)与上海某野生动物园(SHW)和上海某动物园(SHZ)的克雷伯氏菌分离株相比,其耐药率差异均极显著(P<0.01);重庆某动物园(CQ)与上海某野生动物园(SHW)和上海某动物园(SHZ)的克雷伯氏菌分离株相比,其耐药率差异均极显著(P<0.01)。     

大肠杆菌多重耐药调节基因AcrR和MarR突变

研究大肠杆菌多重耐药外输泵抑制基因AcrR和MarR突变对大肠杆菌多重耐药的调节机制。采用琼脂平板二倍稀释法测定环丙沙星、诺氟沙星、氯霉素、四环素、利福平、庆大霉素、大观霉素、阿米卡星、链霉素、阿莫西林等10种药物对临床分离的33株大肠杆菌和大肠埃希氏菌的标准菌株ATCC25922的最小抑菌浓度(MIC),从中筛选出7株多重耐药菌和2株相对敏感菌,并对这9株菌及标准菌ATCC25922的AcrR和MarR基因进行聚合酶链式反应(PCR)扩增并克隆后测序,分析DNA序列及氨基酸序列的突变情况。耐药菌和敏感菌均发现有部分菌株发生了不同程度的点突变。AcrR和MarR同时突变将更大限度的提高细菌的耐药性。     

中药与抗菌药物联用对猪源大肠杆菌耐药性的抑制作用

为了探讨中药与抗菌药物联用对大肠杆菌耐药性的作用效果,本研究对河南部分地区采集的样品(50份)进行分离鉴定、生化试验及致病性试验,对分离鉴定后的致病性猪大肠杆菌选用12种中药采用K-B法进行耐药性检测,将筛选出来的中药与抗生素进行中西联用对致病性大肠杆菌做体外抑菌试验,并分析中西药联用对大肠杆菌的抑制作用。结果显示,采集的50份样品有23株菌符合大肠杆菌的分离培养特性和生化特性,且23株菌均为致病性大肠杆菌;通过耐药性检测,23株试验菌株对测试的中药均有不同程度的耐药性,其中试验菌株对甘草耐药率最高(82.6%),其次为生地(78.2%),而对黄柏(17.3%)和白头翁(21.7%)耐药性较低,具有一定的敏感性;体外抑菌试验结果发现,中药与抗生素联用均有不同程度的抑菌效果,其中黄柏、白头翁与抗菌药物联用的抑菌效果最明显。以上结果说明中药与抗菌药物联用不仅可以抑制大肠杆菌的耐药性,还可以延缓大肠杆菌耐药性的产生。     

大肠杆菌多重耐药调节基区AcrR和MarR突变

研究大肠杆菌多重耐药外输泵抑制基因AcrR和MarR突变对大肠杆菌多重耐药的调节机制。采用琼脂平板二倍稀释法测定环丙沙星、诺氟沙星、氯霉素、四环素、利福平、庆大霉素、大观霉素、阿米卡星、链霉素、阿莫西林等10种药物对临床分离的33株大肠杆菌和大肠埃希氏菌的标准菌株ATCC25922的最小抑菌浓度（MIC），从中筛选出7株多重耐药菌和2株相对敏感菌，并对这9株菌及标准菌ATCC25922的AcrR和MarR基因进行聚合酶链式反应（PCR）扩增并克隆后测序，分析DNA序列及氨基酸序列的突变情况。耐药菌和敏感菌均发现有部分菌株发生了不同程度的点突变。AcrR和MarR同时突变将更大限度的提高细菌的耐药性。     

中药与抗菌药物联用对猪源大肠杆菌耐药性的抑制作用

为了探讨中药与抗菌药物联用对大肠杆菌耐药性的作用效果，本研究对河南部分地区采集的样品（50份）进行分离鉴定、生化试验及致病性试验，对分离鉴定后的致病性猪大肠杆菌选用12种中药采用K-B法进行耐药性检测，将筛选出来的中药与抗生素进行中西联用对致病性大肠杆菌做体外抑菌试验，并分析中西药联用对大肠杆菌的抑制作用。结果显示，采集的50份样品有23株菌符合大肠杆菌的分离培养特性和生化特性，且23株菌均为致病性大肠杆菌；通过耐药性检测，23株试验菌株对测试的中药均有不同程度的耐药性，其中试验菌株对甘草耐药率最高（82.6%），其次为生地（78.2%），而对黄柏（17.3%）和白头翁（21.7%）耐药性较低，具有一定的敏感性；体外抑菌试验结果发现，中药与抗生素联用均有不同程度的抑菌效果，其中黄柏、白头翁与抗菌药物联用的抑菌效果最明显。以上结果说明中药与抗菌药物联用不仅可以抑制大肠杆菌的耐药性，还可以延缓大肠杆菌耐药性的产生。     

一株马源宋内志贺菌的分离鉴定与耐药性分析

为鉴定马粪便中分离到的1株细菌种类,笔者结合形态学观察与序列分析鉴定细菌,采用PCR法检测分离其耐药基因,并使用药敏试验对分离菌进行耐药性分析。结果显示,分离菌株在MAC琼脂培养基和SS琼脂培养基上均呈半透明、光滑、边缘整齐的圆形小菌落,镜检可见分离菌呈两端钝圆的革兰阴性短菌;基于16S rDNA基因位点,分离菌的序列经比对后,与英国人源宋内志贺菌的序列同源性为100%,结合形态学观察结果,鉴定为宋内志贺菌;采用PCR法检测10种耐药基因,发现分离菌株携带4种耐药基因,分别为parC、gyrA、gyrB和blaCTX;采用9种药物对分离菌株进行药敏试验,发现分离菌株对氨苄西林、红霉素、庆大霉素、四环素等药物耐药,呈现多重耐药性;对头孢西丁、阿米卡星敏感。研究结果为志贺菌病的防治提供了基础参考。     

牛瘤胃乳酸菌的分离与鉴定

为分离筛选用于牛活菌制剂的乳酸菌菌株,本试验采用API 50CHL对从牛瘤胃中分离的60株乳酸菌进行生化鉴定,对鉴定出的菌株进行耐酸、耐碱、耐氧、生长温度、耐药和抑菌性测定。结果显示,经生化鉴定出的3株乳酸菌分别为嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)、发酵乳杆菌(L.fermentum)和乳明串珠菌(L.holzapfelii),分别命名为L1、L2和L3。其中,L1耐酸性最强,L2耐碱性最强,L1在37~40℃均生长良好且兼性厌氧;L1、L2、L3耐药率分别为80%、67%、53%;3株乳酸菌对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有不同程度的抑制作用;L1抑菌效果最好,抑菌直径为18.3mm和16.4mm。结果表明,L1、L2可作为抗性乳酸菌活菌制剂的候选菌株。     

宁夏地区羊源大肠埃希氏菌的分离鉴定及耐药性检测

为了解宁夏地区羊源大肠埃希氏菌的流行情况及对常用抗生素的耐药性,对采集于宁夏地区的108份病料进行大肠埃希氏菌的分离鉴定,采用微量肉汤稀释法测定16种抗菌药物对分离株的最小抑菌浓度(MIC).结果表明,在108份病料中共分离到58株大肠埃希氏菌,分离率达53.7％;分离菌株中耐药株共34株(58.6％),其中15株(4...     

实验小鼠粪便中致病性病原微生物检测与耐药性分析

为了分析实验小鼠粪便中致病性病原微生物分布与耐药性,本试验从某市的实验小鼠养殖基地采集粪便样品120份,采用常规的细菌鉴定方法、致病性试验、K-B药敏纸片法对采集的粪便样品进行细菌分离鉴定、致病性及耐药性进行检测与分析.结果显示,从120份样品中分离了25株致病性大肠杆菌、24株致病性沙门菌、20株致病性志贺菌;分离的24株致病性沙门菌对氨苄西林、阿莫西林、青霉素等10种药物的耐药率在50.0%以上,对其他药物耐药率在16.7%～37.5%之间;分离的20株致病性志贺菌对氨苄西林、阿莫西林、青霉素等10种药物耐药率在65.0%以上,对其他药物的耐药率在10.0%～35.0%之间;分离的25株致病性大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林、青霉素等9种药物耐药率在60.0%以上,对其他药物耐药率在12.0%～48.0%之间。说明了实验小鼠粪便中分离的大肠杆菌、沙门菌、志贺菌具有很强的致病性,且存在严重的耐药性。     

豪猪源福氏志贺菌的分离鉴定及喹诺酮类耐药基因检测

为调查四川省某规模化豪猪养殖场中豪猪大面积腹泻死亡的原因,本研究采集病死豪猪的肠道内容物和肺脏等病料样品进行细菌的分离纯化,通过培养特性观察、革兰染色镜检、生化鉴定、16S rRNA基因的克隆测序进行鉴定,并对分离菌株进行致病性、耐药性分析,对其喹诺酮类耐药基因进行PCR检测并测序分析。结果显示,分离得到1株革兰阴性菌,该分离株符合福氏志贺菌的培养特性和生化特性,并且其16S rRNA基因序列与福氏志贺菌该基因序列的同源性为99%;对小鼠具有较强致病性;药敏试验结果显示分离株具有多重耐药性,仅对丁胺卡那敏感,对喹诺酮类、四环素类、头孢类、氨基糖苷类、青霉素类和氯霉素类药物均表现为耐药;分离株的DNA促旋酶Ⅱ和拓扑异构酶Ⅳ的喹诺酮耐药决定区均有突变,且携带有质粒介导的喹诺酮耐药基因qnr A和qnr S。本研究是国内首次关于豪猪源福氏志贺菌病的报道,为豪猪养殖中该细菌性疾病的诊断防治等相关研究提供参考。     

牛瘤胃乳酸菌的分离与鉴定

为分离筛选用于牛活菌制剂的乳酸菌菌株,试验采用API 50CHL对从牛瘤胃中分离的60株乳酸菌进行生化鉴定,对鉴定出的菌株进行耐酸耐碱、生长温度、耐氧、耐药和抑菌性测定。结果显示,经生化鉴定出的3株菌分别为嗜酸乳杆菌（L.acidophilus）、发酵乳杆菌（L.fermentum）和乳明串珠菌（L.holzapfelii）,分别命名为L1、L2和L3。其中,L1耐酸性最强,L2耐碱性最强,L1在37～40 ℃之间均生长良好且兼性厌氧;L1、L2、L3耐药率为60%～100%;3株乳酸菌对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有不同程度的抑制作用,其中L1抑菌效果最好,抑菌圈直径分别为18.30和16.40 mm。提示,L1、L2可作为抗性乳酸菌活菌制剂的候选菌株。     

天津地区2型猪链球菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解天津地区2型猪链球菌的流行及耐药情况,本研究收集该地区部分规模化养猪场疑似猪链球菌病病料317份,通过病原分离培养、染色特性观察、生化试验、PCR扩增等方法进行鉴定,并对分离菌进行致病性及药敏试验。结果从样品中分离鉴定出11株2型猪链球菌。对小鼠的致病力试验结果显示,应用0.5×10~8 CFU/mL的细菌攻击小鼠,11株2型猪链球菌分离株中有6株具有致死性,其中1株致死率较强,5株致死率较弱。药敏试验结果表明,11株分离菌对9种临床常见药物均表现出很强的耐药性,其中对阿米卡星、四环素和强力霉素耐药性最强,耐药率达到100.00%;且所有分离株均呈多重耐药,其中4个分离株为9重耐药,占36.36%(4/11)。本试验结果表明,天津地区存在2型猪链球菌感染情况,且对多种抗菌药均产生了耐药性,应引起养殖户的高度重视,在防制猪链球菌病时,应有针对性地合理、科学、规范用药和交替用药。     

貉源志贺菌分离鉴定、致病性及耐药性分析

为鉴定引起河北地区貉腹泻的志贺菌并分析其相关生物学特性，本研究对2017年～2019年采自河北地区养殖场中患腹泻病貉的肛拭子、粪便及病料样品共计193份进行细菌分离，并经生化特性及PCR鉴定。将分离的志贺菌以0.25 m L/只(108cfu/mL)感染小鼠分析分离菌对小鼠的致病性。采用玻板凝集试验、PCR分别检测分离志贺菌的血清型及相关毒力基因。通过K-B药敏纸片法和PCR分别检测分离菌的耐药性及相关耐药基因，采用SPSS18软件中的Fisher确切概率法分析分离菌耐药表型与耐药基因之间的相关性。结果显示，从193份腹泻病貉样品中共分离到83株志贺菌，其中65株对小鼠具有致病性，且以致小鼠死亡4只(30.1%)、5只(22.9%)的菌株为主；65株致病性志贺菌分属于9种血清型，以福氏志贺菌2a (23.1%,15/65)、3a (20.0%,13/65)和1b (18.5%,12/65)型为主要流行的血清型；65株致病性志贺菌毒力基因ipaH、ipa BCD、ial、sen、Sat、Set1A、Set1B、sigA检出率均在50.8%以上，其他毒力基因检出率在38.5%～40%，未检...