翘嘴红鲌PEPCK基因的克隆和序列分析

采用RT-PCR和RACE（Rapid Amplification of cDNA Ends）法,分离和克隆翘嘴红鲌（Erythroculter ilishaeformis）磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）基因的全序列,得到2 564bp[不含poly（A）]的全长cDNA,包括111bp5′非翻译区,1 911 bp阅读框以及含Poly（A）信号AATAAA的542 bp3＇非翻译区[不包括Poly（A）].阅读框共编码636个氨基酸,计算的分子量为69.65 kD.该序列含有PEPCK特有的结合草酰乙酯的结构域以及与GTP三磷酸链和Mg^2＋结合的激酶1和2基序.与其他鱼PEPCK的相似性高达83%～96%,和爪蟾、变形虫等其他动物的相似性为50%～69%.[中国水产科学,2006,13（3）：389 396]     

翘嘴红鲌小瓜虫病的防治

在进行翘嘴红鱼白鱼苗铒料配方的筛选实验中 ,实验鱼感染了小瓜虫 ,分别采用如下方法进行治疗 :1 .5ppm的亚甲蓝浸泡 4天 ;2 .3%的食盐溶液浸泡 3min ;3 .0 5ppm的福尔马林溶液浸泡 3min。 4 .0 1ppm的硝酸亚汞溶液长期浸泡 (1星期以上)。结果为 :亚甲蓝浸泡 4天 ,患病鱼无好转 ,第 3天开始逐渐死亡 ,4天内全部死亡 ;用食盐和福尔马林溶液浸泡 3min,患病鱼即全部死亡。对用以上 3种药物处理后的鱼体进行镜检 ,发现鱼体上的小瓜虫体无明显减少。用硝酸亚汞浸泡的鱼 ,治疗期间死亡 2尾 ,镜检鱼体上无虫体。结论是 :患小瓜虫病的翘嘴红鱼白 ,不宜用亚甲蓝、食盐或福尔马林 ,采用 0 1ppm的硝酸亚汞溶液长期浸泡较为有效     

饲料中脂肪含量对翘嘴红鲌幼鱼消化酶活性的影响

本文旨在研究不同饲料脂肪含量翘嘴红鲌消化酶的影响.以鱼粉和豆粕作为蛋白源,以鱼油为脂肪源.鱼油的添加水平分别为2%、4%、6%、8%、10%,设计出饲料脂肪含量分别为2.07%、4.28%、7.14%、9.26%、11.17%、15.32%的6种等蛋白(40%左右)、等能(16.21KJ/g左右)的饲料.对19.36±2.17g/尾的试验翘嘴红鲌进行60d的养殖,结果表明:饲料脂肪含量在7.14%时,试验翘嘴红鲌胃蛋白酶和肝胰蛋白酶活性均达最大,分别为1216.41U和1599.94U;此时,淀粉酶活性达到最大,胃、肠、肝胰淀粉酶活性分别为85.75U、115.29U和92.87U;肠、肝胰脂肪酶活性也达到最大,分别为752.13U和199.71U当饲料脂肪含量在9.26%时,试验鱼肠蛋白酶和胃脂肪酶活性达到最大,分别为1934.09U和391.29U.本试验中饲料脂肪含量为7.14%～9.26%时,能显著提高翘嘴红鲌消化酶活性,促进对饲料的消化利用率.     

翘嘴红鲌运输技术

在推广翘嘴红鲌人工养殖过程中,进行了多次运输试验,包括亲鱼、苗种和商品鱼等各阶段,运输成活率均达到或接近100%,探索出一套较为完善的运输技术。     

武湖翘嘴红鱼白年龄和生长的研究

报道了武湖翘嘴红鱼白的年龄生长特点。其渔获物中 2 和 3 龄个体占 5 7 1 % ,体长以 30 0～ 6 0 0mm为主 ,体长与鳞长之间呈直线相关 :L =6 .1 81 4 90 .4837R ,体重与体长呈指数函数相关 :W =2 .0 45×1 0 -6L3 .2 585,3 龄以前生长最快 ,生长指标高 ,体长和体重的相对增长率大 ,其生长规律符合VonBertalanffy方程 :L1=1 4 0 4.9(1 -e-0 .10 (t 0 .71) ) ,W1=3.6 2 9× 1 4(1 -e-0 .10 (t 0 .71) ) 3 .2 585,捕捞 3龄以上个体较为合理     

南湾水库翘嘴红鲌的生长及种群控制的研究

南湾水库的翘嘴红鱼白体长与体重实测值的关系呈幂指数关系,关系式为:W=0.0489L2.7274(r2=0.9739)。应用VonBertalanffy生长方程拟合其生长规律,体长与体重的生长不等速,其主要生物学参数为:L∞=98.8cm,W∞=7140.9g,体长的k=0.1662、t0=0.2638;体重的k=0.1038、t0=-0.1076,拐点年龄ti=5.3龄,拐点体长为57cm,体重为2049g。建议翘嘴红鱼白的捕捞年龄为2+,即体长为28cm、体重为500g以上,其适用网具的网目为90mm。     

翘嘴红鲌肝脏G6Pase催化亚基的克隆以及摄食和饲料中碳水化合物对其表达的影响

本文采用RT-PCR和RACE法分离、克隆了翘嘴红鲌G6Pase催化亚基基因全长cDNA,共1900 bp [不含poly(A)], 包括49 bp 5'非翻译区,1068 bp阅读框以及含Poly(A)信号AATAAA的778 bp 3'非翻译区[不包括Poly(A)].阅读框共编码355个氨基酸,分子量为39.89 ku.序列比对分析表明翘嘴红鲌G6Pase与斑马鱼G6Pase的相似性高达95%,与鼠、狗、人G6Pase的相似性为63%,和光滑爪蟾、金头鲷、河豚等G6Pase的相似性分别为69%、55%、76%,并具有G6Pase特有的3个保守基序.为了研究摄食以及饲料中碳水化合物对G6Pase的影响,使用实时定量RT-PCR分别测定了饲喂等能但不含碳水化合物和含23.98%碳水化合物的饲料的翘嘴红鲌肝脏G6Pase基因的表达水平,在使用上述饲料饲喂8周后,禁食48 h, 然后测定禁食和摄食后3、6、12、24 h G6Pase mRNA的表达量,结果显示摄食后12 h,两组G6Pase的表达明显增加,说明摄食影响G6Pase基因的表达,禁食和摄食后3～12 h,含糖组G6Pase基因的表达量为无糖组的2～4倍,这表明碳水化合物可以诱导G6Pase mRNA的表达.     

饲料脂肪对翘嘴红鲌生长、葡萄糖激酶和葡萄糖-6-磷酸酶活性与基因表达的影响

选用360尾翘嘴红鲌(Erythrocutler ilishaeformis Bleeker),体质量约40g。随机分成为2组,分别为高脂组(脂肪质量分数19.93%,碳水化合物质量分数14.45%)、低脂组(脂肪质量分数9.92%,碳水化合物质量分数12.38%),每组设3个重复,饲养8周。分别于摄食后0h、3h、6h、12h、24h测定血液指标、糖代谢酶葡萄糖激酶(Glucokinase,GK,E.C.2.7.1.1)以及葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase,G6Pase,E.C.3.1.3.9)活性及基因表达,并分析高脂肪与低脂肪水平日粮对翘嘴红鲌生长的影响。与低脂水平日粮相比,高脂水平日粮组血液甘油三酯水平和游离脂肪酸水平分别在摄食后3h、12h有增加现象,肝胰脏粗蛋白与脂肪含量有显著增加(P<0.05)。与低脂水平日粮相比,在摄食后3～12h高脂肪水平日粮组糖代谢酶GK的mRNA水平显著增加(P<0.05),但是日粮脂肪水平并不能显著影响GK活性(P>0.05)。在摄食后3～24h高脂肪水平日粮组糖代谢酶G6Pase的mRNA水平得到显著促进,并在摄食后24hG6Pase活性显著增加(P<0.05)。因此,摄食高脂肪水平日粮能增加肝胰脏粗蛋白与脂肪含量,造成翘嘴红鲌高血糖效应,诱导G6Pase酶活性及基因的表达,这可能是影响翘嘴红鲌碳水化合物利用的原因之一。     

兴凯湖翘嘴红鲌肌肉营养成分分析

采用国标生化分析方法对兴凯湖野生翘嘴红(Erythroculterilishaeformis)和养殖翘嘴红肌肉的营养成分(粗蛋白、粗脂肪、水分、灰分、氨基酸、脂肪酸及微量元素)进行分析。野生样品体重246.5～342.6g,采于2001年6月;养殖样品体重297.5～389.7g,采于2000年9月。结果表明,野生翘嘴红与养殖翘嘴红肌肉中的营养成分在组成上是一致的,在含量上存在着差异,野生翘嘴红肌肉中必需氨基酸含量以及微量元素K、Na、Mg、Se均高于养殖品种,但脂肪含量低于后者。     

翘嘴红鲌池塘精养试验

翘嘴红(Erythroculterilishaeformis)俗称白条,太湖白鱼、翘子,属肉食性,活动于水体的中上层,是长江流域优质经济鱼类之一。为了探索翘嘴红精养技术,笔者于2003年在河南省郑州市马寨良种养殖场开展了养殖试验,取得了初步成果。现将试验情况总结如下。1　试验材料与方     

翘嘴红肝脏G6Pase催化亚基的克隆以及摄食和饲料中碳水化合物对其表达的影响

采用RT-PCR和RACE法分离、克隆了翘嘴红G6Pase催化亚基基因全长cDNA,共1900 bp ［不含poly(A)］, 包括49 bp 5′非翻译区,1068 bp阅读框以及含Poly(A)信号AATAAA的778 bp 3′非翻译区［不包括Poly(A)］。阅读框共编码355个氨基酸,分子量为39.89 ku。序列比对分析表明翘嘴红G6Pase与斑马鱼G6Pase的相似性高达95%,与鼠、狗、人G6Pase的相似性为63%,和光滑爪蟾、金头鲷、河豚等G6Pase的相似性分别为69%、55%、76%,并具有G6Pase特有的3个保守基序。为了研究摄食以及饲料中碳水化合物对G6Pase的影响,使用实时定量RT-PCR分别测定了饲喂等能但不含碳水化合物和含23.98%碳水化合物的饲料的翘嘴红肝脏G6Pase基因的表达水平,在使用上述饲料饲喂8周后,禁食48 h, 然后测定禁食和摄食后3、6、12、24 h G6Pase mRNA的表达量,结果显示摄食后12 h,两组G6Pase的表达明显增加,说明摄食影响G6Pase基因的表达,禁食和摄食后3～12 h,含糖组G6Pase基因的表达量为无糖组的2～4倍,这表明碳水化合物可以诱导G6Pase mRNA的表达。图5参21 关键词：快速扩增cDNA末端;葡萄糖6磷酸酶;碳水化合物;翘嘴红;实时定量PCR E-mail:gexp@ffrc.cn     

不同温度对翘嘴红鲌幼鱼脂肪酶活性的影响

研究了不同温度条件下翘嘴红鲌(Erythroculter ilishaeformis)前肠、中肠、后肠和肝胰脏中脂肪酶活性的变化规律.结果显示,在设定的温度范围内,翘嘴红鲌消化道各段中脂肪酶的活性均随着温度的升高呈现先升后降的变化趋势;翘嘴红鲌肠道和肝胰脏中脂肪酶的最适温度均为40℃,而肠道中前肠、中肠、后肠中脂肪酶的最适温度分别为44℃、40℃和36℃;翘嘴红鲌脂肪酶活性存在器官特异性,在最适温度下,脂肪酶的活性为肝胰脏＞肠道,在肠道各段则有中肠≈前肠＞后肠,除中肠与前肠脂肪酶活性差异不显著外(P＞0.05),其余各部位之间差异显著(P＜0.05).研究表明,翘嘴红鲌幼鱼肝胰脏对饲料脂肪的消化起重要作用.     

翘嘴红鱼白人工繁殖及其夏花鱼种培育技术研究

对翘嘴红鱼白亲鱼的池塘驯化培育和人工繁殖技术以及夏花鱼种的培育技术进行了研究。在池塘对亲鱼进行人工培育,使其性腺发育达到成熟,经催产繁殖鱼苗获得成功,再对鱼苗进行池塘培育后获得夏花鱼种２１．５万尾。     

兴凯湖大白鱼人工繁殖及胚胎发育研究

2019年6月,通过人工催产获得兴凯湖大白鱼受精卵,系统地观察了胚胎发育的全过程。结果表明,在池塘养殖的条件下,人工养殖可获得成熟的亲鱼,人工催产获得的兴凯湖大白鱼的受精卵为圆球型,呈青灰色或黄绿色。平均卵直径为0.78 mm(0.65～1.02 mm),吸水后平均卵直径为4.02 mm。胚胎发育过程可分为23个阶段。在24.5～26.8℃范围内,受精42 min后开始第一次卵裂,受精10 h 45 min后开始形成器官。胚胎发育的总积温为486.98℃·h。     

翘嘴红鲌苗种繁育及成鱼养殖试验

2004～2005年进行了翘嘴红鲌人工繁殖、夏花与冬片鱼种培育、成鱼池塘与网箱养殖试验,取得较好效果。2004年：催产亲鱼25组,出苗340万尾；3口发花池经25天饲养共产夏花鱼种24.91万尾,平均体长3.0～3.3 cm；3口育种池经140天培育共产冬片鱼种6.38万尾,平均体长12.4～14.3 cm,利润2660～2937元/667m~2,投产比1：2.64～2.82。2005年：3口成鱼池共产商品鱼7445 kg,平均单产413.6 kg/667m~2,利润4546～6333元/667m~2,投产比1：2.15～2.53；4口网箱共产商品鱼2558kg,平均单产32.0 kg/m~2,利润352～413元/m~2,投产比1：2.01～1：2.03。     

太湖翘嘴红鲌胚胎发育及胚后发育观察

对从太湖收集的野生翘嘴红鲌(Erythroculter ilishaeformis Bleeker)经人工繁殖获得子一代,并在池塘养殖条件下对其进行人工培育获得成熟亲鱼.于2005年6月,经人工催产、人工授精获得受精卵,对其胚胎及胚后发育全过程进行了系统观察.结果表明,池塘养殖条件下人工培育能获得成熟亲鱼,经人工催产所获得的翘嘴红鲌受精卵为圆球型,呈墨绿色、青灰色、黄色等3种颜色;平均卵径为0.9 mm(O.72～1.18 mm),吸水后平均卵径为1.2mm.翘嘴红鲌胚胎发育过程可分为19期,在水温23～25℃范围内,受精30 min后开始第1次卵裂,受精后9 h 20min开始形成器官,受精后约26 h仔鱼开始出膜,刚出膜的仔鱼全长为4.10-4.67 mm,胚胎发育总积温为619.82℃·h.翘嘴红鲌胚后发育过程可分为仔鱼和稚鱼2个阶段共15个发育期,在26～31℃水温下历时670 h,其中仔鱼阶段从鱼苗孵出到腹鳍形成期,稚鱼阶段从鳞片出现到鳞片形成期.对各发育时期外部形态特征进行了详细的描述.     

饲料蛋白对翘嘴红鲌蛋白质周转代谢的影响

选择健康的翘嘴红(体重12.84±0.60g)为试验鱼,以红鱼粉为蛋白源,配制5个蛋白水平(31.04%、35.51%、40.89%4、6.62%、50.33%)的等能、等必需氨基酸(EAA)平衡关联度的半精制饲料;又以豆粕替代鱼粉,大豆蛋白分别替代0、13.5%、27%、40.5%、54%的鱼粉蛋白,配制5个EAA关联度的等蛋白(40%)、等能(20MJ.kg-1)的半精制饲料,探讨饲料蛋白水平和大豆蛋白对鱼粉蛋白的替代对翘嘴红肌肉和肝胰脏蛋白质周转代谢的影响。8周饲养结果表明,饲料蛋白水平对翘嘴红的特定增重率(SGR)具有显著性影响(P<0.05),40.89%饲料蛋白组的SGR显著高于31.04%、35.51%饲料蛋白组(P<0.05),但与46.62%和50.33%饲料蛋白组没有显著性差异(P>0.05);饲料蛋白水平对白肌、肝胰脏蛋白质生长率具有相似的影响,40.89%饲料蛋白组的白肌、肝胰脏蛋白质生长率分别达到2.13%.d-1,显著高于31.04%和35.51%两组(P<0.05),但与46.62%和50.33%饲料蛋白组无显著性差异(P>0.05)。饲料蛋白水平的增加促进了翘嘴红的生长和蛋白质的合成。肌肉蛋白质合成率(Ks)、蛋白质降解率(Kd)随饲料蛋白水平的增加而增加(P<0.05),肌肉蛋白质的增加归因于蛋白质合成的增加较降解的增加更占优势,蛋白质的沉积率在适宜蛋白水平时最高。当大豆蛋白分别替代13.5%2、7.0%4、0.5%的鱼粉蛋白时,翘嘴红的SGR与对照组差异不显著(P>0.05),而且都显著高于54.0%替代组(P<0.05)。白肌蛋白质生长率(Kg)也显著受到大豆蛋白替代的影响(P<0.01),当饲料中大豆蛋白对鱼粉蛋白替代量为40.5%时,与对照组相比,Kg极显著下降(P<0.01)。随着饲料中大豆蛋白对鱼粉蛋白替代量的增加,白肌Ks随之降低,当饲料中大豆蛋白对鱼粉蛋白替代量达54%时,与对照组相比,肌肉Ks显著下降(P<0.05)。白肌Kd与白肌Ks的变化趋势相似(P<0.1),而PDE没有受到饲料中大豆蛋白对鱼粉蛋白替代的影响(P>0.05)。可见随着大豆蛋白对鱼粉蛋白替代量的提高,氨基酸平衡关联度逐渐降低,蛋白质合成逐渐降低(P<0.05),生长下降,饲料必须氨基酸平衡程度的变化没有改变蛋白质的沉积效率。