梨权RAPD分析条件的优化

以黄花梨为试材，建立了梨树RAPD分析的优化反应条件，即25μL反应体系中含有Tris-HCl(pH9.0)10mmol/L,KCl50mmol/L,MgCl2.0mmol/L,dNTP200μmmol/L，模板DNA10ng,引物400μmol/L，TaqDNA200μmol/L，模板DNA10ng，引物400μmol/L，TaqDNA聚合酶1.5U。适宜的扩增程序为94℃120s，1个循环；94℃60s、37℃75s、72℃120s，45个循环；72℃10min,1个循环。     

利用正交设计优化辣椒的SRAP反应体系

以辣椒雄性不育保持系B-07LP为试材,利用正交设计L16(45)在5个水平上对影响辣椒SRAP反应体系稳定性的dNTP浓度、引物用量及Taq酶活性浓度梯度等外部条件进行了优化试验。在此基础上,通过单因素完全随机试验确定了辣椒SRAP关键反应因子的适宜浓度。其中引物浓度为0.4μmol/L、dNTP的适宜浓度为0.2 mmol/L及适宜的Taq酶活性浓度为0.3 U/μL,并对所建体系的稳定性进行了验证。     

芥蓝×甘蓝F2群体的2个RAPD标记转化为ERPAD标记的研究

在对芥蓝C100-12×甘蓝秋50-Y7杂交组合构建F2作图群体进行RAPD检测的基础上,分别对4个O12,R13,Q14,P17进行了延长1个碱基的研究,其中O12和P17能将部分特异RAPD标记转化为稳定性更强的ER-PAD标记,但对R13和Q14随机引物未找到相应的ERPAD标记。     

适合多品种番茄RAPD分子标记的引物研究

 由于番茄的遗传背景非常狭窄,实验采用两轮引物筛选,利用27个具有代表性的番茄供试材料,从200个引物中筛选出36个PCR扩增效果多态性丰富的引物,克服了以前一些引物在3～4个材料中具有多态性,但它们在用于大量材料的扩增中多态性差的缺点,为RAPD分子标记技术在番茄遗传研究中的广泛应用奠定了基础。     

濒危竹种小蓬竹（Drepanostachyum luodianense） RAPD PCR反应体系优化

为了建立小蓬竹（Drepanostachyum luodianense） RAPD PCR反应的最优体系,以小蓬竹基因组DNA为模板,对影响其RAPD扩增的dNTPs浓度、模板DNA浓度、Taq DNA聚合酶量、引物浓度、Mg2+浓度等重要参数进行了单因子和正交试验。试验得出小蓬竹RAPD最优反应体系为: 20 μL反应体系,10×PCR buffer为1/10体积,dNTPs为100 μmol·L-1,模板DNA量为30 ng,Taq DNA聚合酶为10 U,引物浓度为02 μmol·L-1,Mg2+浓度为15 mmol·L-1。优化后的RAPD PCR反应程序为: 94℃预变性5 min,然后进入35个循环,即94℃变性1 min,35℃退火30 s,72℃延伸90 s,循环完毕后于72℃延伸7 min,最后在4℃保持。     

椰子种质资源RAPD标记研究中的引物筛选

[目的]对椰子遗传多样性进行深入研究,为进一步开发利用椰子种质资源奠定基础。[方法]利用80个10碱基随机引物,对从中国海南、云南、广东、广西等椰子种植区所采集的67个椰子种质进行随机扩增,以筛选适合于对所有椰子品种进行RAPD分析的引物。[结果]共筛选出30条能扩增出条带清晰、明亮、具多态性且重复性好带型的有效引物。12个随机引物在所有样品中共扩增出340条带,即检测到340个椰子RAPD位点,其中307个位点为多态性位点,占总位点的90.3%。[结论]利用RAPD标记技术对椰子大量样品的系统分析,为椰子的品种鉴定、遗传育种及种质资源的保护与利用提供了依据和背景资料。     

RAPD标记稳定性的影响因素探析

结合近年来RAPD标记研究中存在的一些技术问题,详细分析了影响RAPD标记可重复性和稳定性的几种因素,包括引物的种类、长度、浓度,DNA的质量和浓度,扩增条件以及操作技术等。并结合研究工作,说明了在进行生物遗传分析时,必须进行RAPD方法的优化和标准化,才能够得到可靠、正确的结果。     

引物及RAPD标记数对芥菜变种聚类分析的影响

利用ＲＡＰＤ标记对１６个芥菜变种的遗传关系进行研究,并在ＵＰＧＡ聚类分析的基础上建立了亲缘关系系统树图和利用不同的引物数和不同的ＲＡＰＤ标记数对芥菜进行聚类分析。结果表明,聚类结果基本一致。即都可将１６个芥菜变种划分为３组：Ｃ组只有茎瘤芥１个变种,Ａ组和Ｂ组的变种数则略有差异。说明少至２种引物的扩增产物（２７个ＲＡＰＤ标记）也能基本反映１６个芥菜变种间的遗传关系。但随着引物数和ＲＡＰＤ标记数的减少,１６个芥菜变种间的平均遗传距离递减,即从１９种引物、２４０个ＲＡＰＤ标记的７．３４减少到２种引物、２７个ＲＡＰＤ标记的２．３４。而遗传距离的变小,使划分芥菜变种的亲缘关系更加困难。因此,在利用ＲＡＰＤ技术研究芥菜变种间的遗传关系时,有必要保证一定数量的引物和ＲＡＰＤ标记。     

RAPD标记用于葡萄、苹果等7种果树的品种鉴定的研究

针对RAPD技术的特点及其实际应用中易出现稳定性的问题,本研究以葡萄、梅、杏、桃、李、苹果、梨七种果树的不同品种为试材,对RAPD技术在鉴定果树品种中的科学性进行了技术上的验证与分析。结果表明:理想的反应条件能够保证RAPD技术具有很好的稳定性,是适用于鉴定果树品种的简易与理想的DNA分子标记技术。不同长度的引物的RAPD技术在几种果树品种鉴定中体现出谱带清晰度以及数量等方面不同的特点。其中,碱基数为9、10与11的引物在杏、桃、李和梅上的多态性较高且谱带清晰,苹果、梨和葡萄更适合应用11个碱基的引物。     

苹果RAPD标记的引物筛选与RAPD校正

为筛选适宜苹果的RAPD引物，以苹果富士与舞姿的杂交后代为试材，依据RAPD校正方法、利用引物OPAl3构建了苹果的RAPD校正图谱；在520个RAPD引物中找出了扩增稳定、条带清晰的246个引物，其中扩增条带数在8个以上的有91个引物，可用于苹果的遗传分析。探讨了RAPD-PCR反应条件与RAPD校正的关系，RAPD校正能够提高RAPD-PCR的扩增能力。     

香蕉RAPD反应体系的建立

利用改良的CTAB方法从香蕉叶片中提取高质量的DNA。在参考一般RAPD分析反应程序的基础上，经过反复试验，确定适合香蕉PCR扩增程序为：94℃预变性 5min；94℃变性 1min；38℃退火 1min；72℃延伸 2min；变性ó延伸，循环45次；最后72℃延伸 2min。PCR扩增的体系（总体积25μL）为：模板DNA 20ng，dNTP 200μmol/L，10×PCR Buffer2.5μL，引物0.20μmol/L，Taq酶0.75U，ddH2O17.85μL。     

绣线菊属植物的DNA提取和RAPD引物筛选

以10种绣线菊属植物资源为材料,分别用SDS法、高盐低pH法及改良的CTAB法对幼嫩叶片进行DNA提取并进检测比较,利用经过检测的模板对RAPD引物进行筛选。结果表明：采用改良的CTAB法提取的DNA可以用于RAPD分析。对200条10碱基的RAPD引物进行了初筛和复筛,筛出了30条扩增多态性强、稳定性好的引物,作为全部基因组的扩增引物。     

山核桃基因组DNA提取及RAPD引物筛选

分别用SDS法、CTAB法、简易CTAB法及高盐低pH法提取山核桃干叶的基因组DNA并进行了检测比较.结果显示,SDS法更适合于山核桃基因组DNA的提取;对600条10碱基的随机引物进行了初筛和复筛,结果筛选出了20条扩增多态性强、稳定性好的引物,作为全部基因纽的扩增引物.     

亚麻RAPD的反应体系优化及引物筛选

对亚麻RAPD反应条件进行了优化：在25μL反应体系中,含10×Buffer,Mg^2＋（1mmol·L^-1）,Taq酶1U,Ge-nome DNA 50ng,dNTP0．25mmol·L^-1,RAPD primer 1．5／μmol·L^-1。PCR反应程序为：94℃预变性4min;94℃变性40s,37℃退火1min,72℃延伸90s。40个循环;72℃延伸10min。同时利用3个有代表性的亚麻品种从70条引物中筛选出12条多态性好、重复性高的引物,为亚麻的分子鉴定奠定了基础。     

青花菜RAPD扩增条件的优化

以青花菜(Brassica oleracea var italica)基因组DNA为材料,对RAPD(随机扩增多态技术)扩增反应的各种影响因子进行了优化和筛选,建立了适宜的RAPD扩增条件.即10μL PCR反应体积,1×Taq酶配套缓冲液(10 mmol/L Tris·HCl,pH值9.0,50 mmol/L KCl,0.1%Triton X-100),1.5 mmol/L MgCl2,1U Taq酶,16 ng模板DNA,16 pmol引物,dNTP 0.15 mmol/L,3 mg/mL BSA.青花菜RAPD反应体系的建立为青花菜种质资源鉴定和利用提供了可靠的技术支持.     

亚麻RAPD-PCR体系的优化及引物的筛选

[目的]优化亚麻RAPD反应条件,筛选亚麻RAPD引物。[方法]DNA条带扩增采用PCR技术,条带的分离采用琼脂糖凝胶电泳法,成像利用紫外成像系统。[结果]试验优化亚麻RAPD反应条件：25出反应体系中,含10×Buffer,Mg^2＋ （1mmol／L）,Taq酶1U,Genome DNA 50ng．dNTP 0．25mmol／L．RAPD primer1．5μmol／L。PER反应程序为：94℃预变性4min;97℃变性40s,37℃退火1min,72℃延伸90s,40个循环;72℃延伸10min。试验利用3个有代表性的亚麻品种从70条引物中筛选出12条多态性好,重复性高的引物。[结论]该试验筛选出12条引物,并优化了亚麻RAPD反应条件,为亚麻的分子鉴定奠定了基础。     

当归RAPD反应条件的优化

以当归DNA为模板,对影响当归RAPD扩增的重要参数进行了优化试验,以期建立当归RAPD反应的最适体系。通过正交法及单因素试验对RAPD反应条件进行优化,7个试验因子的最适条件为:模板DNA 0.5 ng/μL,引物0.8μmol/L,dNTPs 0.25 mmol/L,MgCl22.5 mmol/L,Taq酶0.8 U,退火温度36~37℃,循环次数40。